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INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGÍA
M. Paz
UMG-2014
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¿Qué es la microbiología?
Estudio de los organismos microscópicos3 palabras griegas: mikros (pequeño), bios (vida) y logos (ciencia)
estudio de la vida microscópica
Surgió como ciencia tras el descubrimiento y perfeccionamiento del microscopio.
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¿Qué son los microorganismos?
Organismos que no pueden ser observados a simple vista, al menos en parte de su ciclo.
Organismos que viven como células aisladas o entidades que contienen ácidos nucleicos capaces de replicarse, por lo menos en parte de su ciclo.
Incluidos: algas, hongos, protozoarios y bacterias
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Ramas de la Microbiología
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¿Cómo afectan nuestra vida?
En la industria: más de cien especies microbianas son usadas en la producción de sustancias que no pueden ser obtenidas de forma más fácil o más barata por otros medios.
Ventajas: tamaño, alta tasa metabólica, posibilidad de cultivarse a gran escala, estabilidad genética, etc.
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¿Cómo afectan nuestra vida?En la producción de alimentos: lácteosBiotecnología – alcohol– tintes y colorantes.– plásticos.– alimentos – endulcorantes– Industria farmacéutica: antibióticos,
hormonas (insulina y GH), factores de crecimiento, interferón, eritropoyetina, etc.
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Pero también son una amenaza…
Diversos tipos de microorganismos son causantes de enfermedades y abundan casi en cualquier lugar por lo que permanentemente estamos expuestos a un contagio.
Causan impacto económico cuando enferman animales y plantas que nos sirven como fuente de alimento.
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Epidemias
Descritas a lo largo de toda la historia de la humanidad.
Atribuidas en la antigüedad a hechizos o magia.
SIN EXPLICACIÓN HASTA EL SIGLO XVII.
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Anton van Leeuwenhoek (1632-1723)
Sus primeros dibujos fueron publicados en 1684
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Robert Hooke (1635-1702)
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Lazzaro Spallanzani (1729-1799)
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Robert Koch (1843-1910) Iniciador de la bacteriología médica moderna. Estudió botánica, física y matemáticas y MEDICINA.Otros intereses: arqueología, antropología, las enfermedades ocupacionales, como el envenenamiento por plomo, y la bacteriología.
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Postulados de Koch
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Louis Pasteur (1822-1895)
Químico y biólogo francés fundador de la microbiología.Comenzó investigando los procesos de fermentación del vino y la cerveza y descubrió la existencia de las bacterias que interferían en este proceso. En 1861 introdujo los términos de aeróbico y anaeróbico.Introdujo el término “virus” sin hacer distinción y “vacuna” en honor a JennerDesarrolló vacunas que consiguieron salvar miles de vidas: cólera aviar, antrax y rabia
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Ferdinand Julius Cohn (1828-1898)
Considerado fundador de la microbiología moderna y padre de la bacteriología.
En 1872 propuso la clasificación de las bacterias: género, especie y variedades.
Describió otros microorganismos patógenos transmitidos por agua contaminada, distintos al V. cholerae
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Otros eventos importantes del siglo XIX
1878: Joseph Lister publica sus estudios sobre la fermentación de la leche Bacterium lactis1879: Albert Neisser identifica al agente causal de la gonorrea 1880: Alphonse Laverin encuentra al parásito de la malaria en glóbulos rojos.1881: Paul Erlich utiliza el azul de metileno
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Siglo XXAerobiosis y anaerobiosisEn 1938: invención del microscopio electrónico: virusTécnicas moleculares: secuenciación del ácido desoxirribonucleico (ADN). Descubrimiento de los priones por Stanley Prusiner y su equipo en 1982 ha abierto una vía de estudio dentro de la microbiología (simples proteínas desprovistas de material genético)En 1988 Kary Mullis utiliza la enzima de Thermus aquaticus para estabilizar la PCR (premio Nobel en 1993)
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Alexander Fleming (1881-1955)
Descubrió que algunas colonias crecidas de S. aureus eran destruidas por el crecimiento del hongo Penicillium
Realizó la extracción del compuesto activo: penicilina
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Karl Woese (1928-
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Por análisis de rARN 16S
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Stanley B. Prusiner 1997
California, EEUU
Descubrimiento de los “priones”
Enfermedad de las “vacas locas” y enf. Creutzfeldt-Jakob.
Prion = proteína + infección
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Barry J. Marshall & J. Robin Warren (2005)
La úlcera péptica: proceso infeccioso
Helicobacter pylori
Autoinoculación (1984)
Demostraron el tratamiento exitoso con antimicrobianos.
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Harald zur Hausen (2008)
Descubrimiento en la causa de cáncer cervical por el Virus del Papiloma Humano
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Francoise Barré-Sinnousi & Luc Montagnier(2008)
Descubrimiento del Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH)
Cultivo de VLA en 1983 en el Instituto Pasteur después llamado VIH.
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1987
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Microscopios
Ojo humano 0.2 mm.
Microscopio óptico, resolución máxima 0.2 micras (1 µm = 0.001 mm = 10-6 m).
Microscopio electrónico, resolución máxima 0.5nm (1 nm = 10-9 m)
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Microscopios
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Microscopios
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Ejemplo: Staphylococcus aureus
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Datos de Guatemala
Tasa de mortalidad: 4,8 por 1.000 hab.
Causas principales de mortalidad (ambos sexos): neumonía y diarrea.
Seis grandes grupos de causas:• enfermedades transmisibles 13%• tumores 7%• enfermedades del aparato circulatorio 12%• afecciones perinatales 8%• causas externas 13% • otras 47%. Datos INE
Guatemala
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Mortalidad en Guatemala
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En 2013 se reportó una tasa de 34 (la tercera más alta en Latinoamérica
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Mortalidad en Guatemala
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Causas bacterianas importantes de mortalidad
Tuberculosis
Tétanos
Cólera
Tos ferina
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Taxonomía Microbiana: Las Bacterias
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Siglo XIX
Reino Plantae: – algas (inmóviles y fotosintéticas) – hongos (inmóviles y no fotosintéticos),
Reino Animalia– Infusorios (microorganismos móviles)
organismos perfectos: dotados de todos los sistemas orgánicos presentes en seres superiores.
Divididos en metazoos, protozoos y bacterias
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Cambios históricos
Haeckel (1866): introdujo reino Protista– Seres vivos sencillos, fotosintéticos y/o móviles– Protozoos, algas, hongos y bacterias.
Copeland (1938): introdujo reino Monera– Separa a las bacterias.
Margulis (1969): introdujo reino Fungi y reino Protoctista (m.o. eucariotas y parientes macroscópicos: mohos mucosos no hongos).Woese (1977): ARQUEOBACTERIAS Y EUBACTERIAS
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El árbol filogenético universal
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Árbol filogenético
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Las bacterias forman el conjunto de los procariotas: ADN libre en el citoplasma y no incluido en un núcleo. Reino Monera.
LUCA: “last universal common ancestor”
procariotas
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Procariotasorganización celular material genético (cromosoma circular de ADN de doble hebra) inmerso en el citoplasmaReplicación: fisión binariacarecen de orgánulos rodeados de membrana Ribosomas: coeficiente de sedimentación de 70SCitoplasma envuelto por una membrana celularPared celular de peptidoglicano, excepto las arqueas.
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TAMAÑO: célula eucariota vrs célula procariota
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Tamaños
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cocos bacilos espiroquetas
FORMAS DE LAS BACTERIAS
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Formas1. Cocos: (células más o menos esféricas);2. Bacilos: (en forma de bastón, alargados), que a su vez pueden tener
varios aspectos: cilíndricos fusiformes en forma de mazo, etc. Según los tipos de extremos, éstos pueden ser:
redondeados (lo más frecuente), cuadrados, biselados, afilados. 3. Espirilos: al igual que los bacilos, tienen un eje más largo que otro,
pero dicho eje no es recto, sino que sigue una forma de espiral, con una o más de una vuelta de hélice.
4. Vibrios: proyectada su imagen sobre el plano tienen forma de coma, pero en el espacio suelen corresponder a una forma espiral con menos de una vuelta de hélice.
Otros tipos de formas: filamentos, ramificados o no anillos casi cerrados formas con
prolongaciones (con prostecas)
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Formas
cocos
espiroquetas
bacilos
vibrios
filamentosas
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Superficie vs. volumen• En una célula esférica: cuanto menor sea el radio (r)
mayor será la razón S/V lo que significa que el pequeño tamaño de las bacterias permite mayor contacto directo con el medio ambiente inmediato que las rodea
• reciben las influencias ambientales de forma inmediata.
• condiciona una alta tasa de crecimiento.
• La velocidad de entrada de nutrientes y la de salida de productos de desecho es inversamente proporcional al tamaño de la célula, y a su vez, estas tasas de transporte afectan directamente a la tasa metabólica.
• Por lo tanto, en general, las bacterias crecen (se multiplican) de forma rápida.
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Superficie vs. volumen
Tamaño pequeño intercambio más eficiente, permite mayor velocidad metabólica
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Agrupaciones
Las bacterias normalmente se multiplican por fisión transversal binaria. En muchas especies, las células hijas resultantes de un evento de división por fisión tienden a dispersarse por separado al medio, debido a la actuación de fuerzas físicas (movimiento browniano). Esto hace que al observar al microscopio una población de estas bacterias veamos mayoritariamente células aisladas. Diplococos y diplobacilos: agrupaciones pares
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AgrupacionesSi la tendencia a permanecer unidas es mayor y por más tiempo, nos encontramos con varias posibilidades, dependiendo del número de planos de división y de la relación entre ellos: – Estreptococos o estreptobacilos
Si existe más de un plano de división, en el caso de cocos podemos encontrar tres posibilidades: – dos planos perpendiculares: tétradas o múltiplos – tres planos ortogonales: sarcinas (paquetes cúbicos) – muchos planos de división: estafilococos (racimos
irregulares).
Bacilos: en empalizada, en V o L, “letras chinas”.
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Estructura celular
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Pared celular
Bacteria: – Gram positivo– Gram negativo– Sin pared
Archaea: – Diversas estructuras– Sin pared
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Funciones de la pared
Rigidez (mantener la forma, evitar la lisis).Comunicación con el medio exterior.Puede estar involucrada en patogenicidad (LPS)Barrera para algunas moléculas. Espacio periplásmico (enzimas de transporte, hidrolíticas, etc.)
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Formación de protoplastos
Mediante procedimientos de laboratorio se puede lograr eliminar total o parcialmente la pared celular bacteriana.
Se denominan protoplastos las células bacterianas a las que se ha desprovisto totalmente de pared celular, mientras que esferoplastos son aquellas células bacterianas que poseen restos de pared.
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Formación de Protoplastos
Alta concentración de solutos
Lisozima -- proteína que rompe el enlace glicosídico 1-4 en el peptidoglicano
Baja concentración de solutos
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Gram + Gram-Bacteria
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Estructura del Peptidoglicano
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Pared Celular Gram Positivo
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Otros compuestos químicos característicos de la pared de Gram+
Ácidos Teicoicos– Polímero de alcohol (ribitol
o glicerol)
Ácidos Teicurónicos
Ácidos Lipoteicoicos– Polímero de 16 a 40
unidades de glicerol unido a un glicolípido
Ácidos Micólicos
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Membrana Externa de Gram Negativos
Porinas - proteínas que permiten el pasaje de moléculas pequeñas a través de la membrana
- específicas e inespecíficas
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Lipopolisacárido (LPS)
• Lípido A (NAG-P + grupos acilos) • Núcleo del polisacárido
– contiene KDO (cetodesoxioctonato) y otros carbohidratos (ramnosa, ácido galacturónico)
– usualmente específico de especies • O-antígeno
– número de repeticiones variables – también contiene carbohidratos – específico de cepa
• A menudo tóxico para animales - endotoxina• Crea superficies densamente hidrofílicas
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Funciones del Periplasma (E. coli)
• Proteínas de periplasma de E. coli• Proteínas de unión para aminoácidos • histidina, arginina
• Enzimas de biosíntesis • Ensamblado de mureína• Enzimas de degradación de polímeros• proteasas
• Enzimas detoxificantes • Beta-lactamasas: penicilinasa
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Algunas bacterias no poseen pared
• Mycoplasma
• Membrana celular más gruesa• pueden tener esteroles y
lipoglicanos.• Pleomórficos
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Pared celular de Archaea
No contiene peptidoglicanoPuede ser de– pseudopeptidoglicano (pseudomureína) tiñe
G+– pseudomureína cubierta de proteína, tiñe G+– monocapa superficial de proteína o
glicoproteína, sin pseudomureína (halófilos, metanogénicos y termoacidófilos) tiñe G -
Existen Archaea sin pared
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Pseudopeptidoglicano de Archaea
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Funciones de la pared
Rigidez y resistencia osmótica (mantener la forma, evitar la lisis).Comunicación con el medio exterior.Puede estar involucrada en patogenicidad (LPS)Barrera para algunas moléculas (porinas en gram negativos). Espacio periplásmico (enzimas de transporte, hidrolíticas, etc.)
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Estructura: Bicapa fosfolipídica con proteínas
embebidas; puede contener también hopanoides de estructura similar al colesterol.
En Archaea, éteres de alcohol isoprenoide, algunas forman monocapas.
La membrana celular
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Estructura de la Membrana Citoplasmática
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Membrana citoplásmica
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Los lípidos en Bacteria y Archaea tienen diferentes enlaces químicos
Ester - Bacteria Eter - Archaea
Isopreno
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Funciones de Membrana Citoplasmática
Barrera de Permeabilidad– sólo moléculas pequeñas, sin carga, hidrofóbicas,
pueden atravesar la membrana por difusión.Ancla de Proteínas – transporte, generación de energía, quimiotaxis
Generación de fuerza proton motriz En fotótrofas: Estructuras intracitoplasmáticas, soportan
el aparato fotosintético(Vesículas y túbulos)Síntesis de pared y estructuras extracelulares.
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Membrana citoplasmática de E. coli
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Estructura celular procariota - ADN
No tiene núcleo. El ADN está en el citoplasma– “nucleoide”: zona que ocupa el ADN
Es haploide. – Genoma es una única molécula de ADN de doble cadena,
circular.
El genoma contiene 1 - 6 x 106 pares de bases (bp) – procariotas de vida libre: 1000-5000 genes
No contiene histonas (proteínas para empaquetamiento de ADN).
Puede contener otros elementos genéticos no genómicos: plásmidos y genomas fágicos.
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Procariotas
No tienen membrana nuclear
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ADN Cromosómico
–No hay procesamiento del ARNm
–La transcripción está ligada a la traducción.
–ADN circular cerrado
–Superenrrollado.
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Citoplasma
Proteínas (enzimas, complejos enzimáticos, estructurales)Ribosomas (70S: 55 proteínas, rARN 5S, 16S, 23S)- polisomasmARN, tARNOtras macromoléculas, solutosSin estructura visible al microscopioNo tienen citoesqueleto.
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Estructuras características
Estructuras con funciones específicas.
No todos los microorganismos las tienen.
Son características de género y especie (taxonomía)
Ejemplos: – fimbrias, flagelo, pili, endospora, cápsula, inclusiones
citoplasmáticas
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Fimbrias – Pili-Pelos-Flecos L
Fimbria - filamento proteico corto, involucrado en funciones de adhesión a superficies.
Pelos ordinarios: adhesión
Pelo sexual - unión a célula receptora durante la conjugación.
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Flagelos
Más de 40 genes involucradosLa energía la proporciona la fuerza protomotriz
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Sólo detectados por técnicas de tinción específicas
Flagelos
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Barra 0,5 micras
Anaerobaculum mobile sp. Flagelo insertado lateralmente
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Endosporas
Resistencia al calor, radiación, desecación.
Producidas principalmente por los géneros Bacillus y Clostridium
Permite la supervivencia en ambientes desfavorables
ADN protegido por ácido dipicolínico y proteínas.
Luego de la activación por stress, la disponibilidad de nutrientes dispara la germinación y el crecimiento
La localización de la espora en la célula puede ser usada para su identificación
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Estructura de la espora
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Formación de esporas
A- ADN se duplica y enrolla alrededor del eje central (filamento axial)
B- Uno de los cromosomas se rodea de membrana plasmática.C- el protoplasto es rodeado por la célula madreD- se sintetizan las cubiertas de la espora.E- se elimina agua, se forma estructura resistente al calor.F- se libera la espora por lisis de la célula madre.
DIPICOLINATO DE CALCIO EN EL CENTRO DE LA ESPORA
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Inclusiones citoplasmáticas
Algunas bacterias tienen estructuras internas–gránulos de almacenamiento -
polifosfato,azufre, polihidroxibutirato (PHBs)
–vesículas de gas – flotación–Carboxisomas, clorosomas.
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Gránulos de polihidroxibutirato (PHBs)
vesículas de gas
flotación
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Cubiertas extracelularesGlicocáliz: Material externo a la pared celular: polímero de carbohidratos o péptidos– HOMO Y HETEROPOLÍMEROS – Cápsulas – Capas mucilaginosas – Capa S: Subunidades proteicas o glicoproteicas.
G+, G- y Archaea
Funciones– Protección– Adhesión
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Glicocálix
Tinción negativa
Microscopía electrónica
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Diferencia entre la estructura celular de Bacteria, Archaea y Eucarya
Propiedad Bacteria Eucarya Archaea
Membrana nuclear
NO SI NO
Organelos NO SI NO
Tamaño ribosoma
70S 80S 70S
Peptidoglicano en la pared
SI NO NO
Esteroles en membrana
NO (hopanoides)
SI SI
Lípidos de membrana
Ester unidos a glicerol
Ester unido a glicerol
Eter, ramificados
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