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  • IQS- CROMA PNT-A-xxxx 1 R-96

    ---- ... ---------~---------------------------------------4/16

    Coeticiente de variacin = .!Q!.!. {~( x . - x) 2 In-I } 1{2 ~ , .

    Media = X= LX j In

    Xi == m~dida i-sima.

    X =: media de las medidas.

    n = nmero de medidas. n JBLlOTf AS " \ "FFF" e. ME"":

    Linealidad.

    Se refiere al rango lineal de concentraciones que pueden ser medidas por el cromatgrafo.

    Se r~presenta el rea de pico (mv .min) frente a la masa en ng y se ajusta la ecuacin de una

    recta por el mtodo de mnimos cuadrados; se calcula el coeficiente de determinacin (r)

    como el indicador de la linealidad en la respuesta del detector; el coeficiente de

    determinacin es la r~lhcin entre la varianza explicada y la varianza total.

    Tambin se establece la ecuacin de regresin que relaciona la variable independiente

    (concentracin o masa) con la respuesta del detector (rea o altura de pico).

    Respuesta = a + b(masa o concentracin)

    a = ordenada en el orgen.

    b= pendiente de la recta .

    Factores de respuesta .

    Es la respuesta ohtenida, altura () rea , por unidad de masa inyectad"; (\1 representar los

    tactores de respucsta frcnk (\ la maS;l inyectarla se pueckn obtener los lmites inferior y

    : upcrior ti 1 rang() 1 i I1c;,I .

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    F. = re,\p"".'(f1 { III1IS(I

    F; :; Factor de respuesta .

    Se calculan los factores de respuesta y su valor medio; para el clculo de la media, se

    eliminan los puntos que tengan factores de respuesta aberrantes, usando el criterio descrito

    en la parte experimental, y se toman como lmites de aceptacin de los valores de F j, su

    promedio 10%. Finalmente, para determinar el rango lineal se representan los valores de los factores de respuesta, acotados por sus lmites de aceptacin, frente a la masa inyectada.

    El margn de la linealidad est determinado por las masas que no sobrepasen los lmiks de

    aceptacin de F i .

    -Lmite de deteccin (LO).

    Es la mnima cantidad de sustancia que puede ser detectada por el sistema de deteccin del

    instrumento; para calcularlo, se miden, en el cromatograma correspondiente a la mayor

    dilucin (menor concentracin), el ruido y la altura de un pico de soluto que equivalga entre

    tres n) y diez (lO) veces el ruido, y se aplica la ecuacin :

    LO = 1/1 x C /

    LO = Lmite de deteccin. I

    R = Altura del ruido (mv). h = Altura (mv) dd pico de solulo de concentracin e (ngl ~L).

    El valor del LD se dehe multiplicar por el volumen inyectado (~tf . ), para expresarlo en ng.

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    -Lmite de l:uantiticacin (Le).

    Es la menor concentracin () \:antidad de analito que se puede detclminar con precisin y

    exactitud lceptahles hajo las condiciones experimentales establecidas; para cakularlo, se

    miden, en IIn cromatogrhma correspondiente a una dilucin superior (baja concentracin), el

    ruido y la altura de un pico de soluto que equivalga aproximadamente a diez (10) veces el

    ruido, y se aplica la ecuacin:

    Le = I~/( xC

    Le = Lmite de cuantificacin.

    R = Altura del ruido (mv). h = Altura (mv) del pico de soluto de l:oncentracin e (ng/ 111.) .

    El valor de Le se dehe multiplicar por el volumen inyectado (~lL), para expresarlo en ng. I

    INSTRUMENTOS Y EQUIPOS.

    Balanza analtica con precisin de O. I mg. Columna Merck LichrosplH.: r lOO RP-IS (5I1m).(125 x 4 mm).

    Cromatgrafo de HPLC con deteccin UV.

    Sistema de integracin cromatogrfica y tratamiento de datos Gynkosoft.

    Jeringa de inyeccin de vidrio para [II>I.C de lOO ~LI ..

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    REACTIVOS Y PATRONES.

    Acetonitrilo (C1I 1C'N) calidad HPLC'.

    Agua U~~O) calidad Milli.Q.

    Naftaleno: Quimicamente puro. PROBUS.

    Bifenilo: reactivo puro. CARLO ERI3A.

    Fluoreno : Elaborado por F.E.R.O.S.A. (purisimo).

    Fenantreno : rahricado por I'.E. R.O.S .A. (puro -99%).

    Antraceno : Para sntesis . MI ': IH'K.

    PI~OCEDIM I.ENTO.

    l . Preparacin de patrones.

    1.1 Preparacin del patrn madre (PI).

    Se pesan (con precisin de 0.1 mg) las siguientes cantidades de los reactivos cuyas

    calidades se descrihicron con anterioridad:

    Naftaleno : 1000 mg.

    Bifenilo: 250 mg.

    Fluoreno: ~O() mg.

    Fenantreno: 100 mg.

    Antraceno: 50 rng.

    Se enrasan ~stas cantidades , en matraz \'olum~trico. a lOO mi con Acetonitrilo: P1

    Lsta solucin, al igual que el restu de patnlllcs, (h.:he guardarse el1 un recipiente oscuro ,

    perfectamente tapado y el1 un s,itio a h,'mperatura amhiente protegido de la luz.

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    1.2. Preparacin de la mezcla de prueba (P2).

    A partir de PI se prepara P2: 1.00 mI de PI, tomado con pipeta volumtrica de dohle aforo,

    se diJuye a 100 mI con una mezcla de eH \CN-H 20 (70:30 v/v) en un matraz volumtrico.

    La mt:zda de enrase se prepara comhinando 70 volmenes de Acetonitrilo con 30 volmenes

    de Agua.

    1.3 Preparacin del patrn de linealidad (P3).

    A partir de PI se prepara P3: 5.()() mi de PI, tomados con pipeta volumtrica de doole aforo.

    se diluyen a 100 mI con una mezcla de CH 1CN-H 20 (70:30 v/v) en un matraz volumlrico.

    1.4 Pn:paracin de los patrones del rango lineal (P4 aPIO).

    Estos patrones se preparan a partir de P3.

    P4: Tomar 20.00 mi de P3 con pipeta volumtrica de doble aforo y enrasar a 50.00 mI con

    una mezcla de CH ,CN-I-120 (70 :30 v/v) en un matraz v >Iumtrico. I() mg/L en Antraceno.

    P5: Tomar 15.()() mI de P3 COIl pipeta volumtrica de doble aforo y enrasar a 50.00 mI con

    una mezcla de eH C'N-1120 (70:3() v/v) en un matraz volullItrico. 7.5 mg/L en Anlraccno.

    P6: T !llilr IO.()O mI dc P3 con pipeta volumarica le doble aforo y cnrasar a 50.00 mi con

    una mezcla de ('11 ,eN-IV) (70:J() v/v) en un matraz volumtrico. :) mg/L en Antwccno.

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    Los siguientes patrones se preparan as:

    P7: Tomar 5.00 mi de P6 con pipda volumtrica de doble aforo y enrasar a 50.00 mi con

    una mezcla de eH,CN-li 20 (70:30 v/v) en un matraz volumtrico. 0.50 mg/L en Antraceno.

    P8: Tomar 5.00 mi de P7 con pipeta volumtrica de doble aforo y enrasar a 50.00 mi eon

    una mezcla ele CI-I,CN-H 20 (7(UO v/v) en un matraz volumtrico. 0.05 mg/L en Antracenn.

    P9: tomar 5.00 mi de P8 con pipeta volumtrica de doble aforo y enrasar a 10.00 mI con una

    mezcla oc CH 1CN-H 20 (70:10 v/v) en un matraz volumtrico. 0.(l25 mg/L en Antraceno. \

    PlO: Tomar 5.00 mI de P9 eon pipeta volumtrica de doble aforo y enrasar a 10.00 mi con

    una mezcla de CH 1CN-11 20 (70 :30 v/v) en un matraz volumtrico. 0.0125 mg/L en

    Antraceno.

    Continuar haciendo diluciones de esta manera hasta que sea necesario, es decir hasta que se

    alcance el lmite de deteccin del instrumento.

    2. Condiciones cromat()~[licas .

    Volumen ele inyeccin: 20 pL. Columna: Merck Lichrospher 100 I{P-IX (S ~lm).( 125 :-< 4 mm).

    Temperatura de columna : 35 "e. Deteccin UV; A -=-= 254 nm .

    Composicin de la fase mvil: ACe!onitrilo-Agua (7(} ::lO v/v).

    Flujo de fase mvil : 1.(JO ml/min.

    Presin: Variable segn cll:quipu; [>ehc estar alrededor dc SS Bars.

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    IOfl6

    3. Condiciones ele inte;racin.

    Las condiciones de integracin cromatogrfica del sistema de tratamiento de datos

    (Gynkosoft), se indican en los anexos 1 y 2 {especialmente en lo que se refiere al DET-file

    (integracin) y al PRM-Iile (infonne) 1; Tambin en el anexo n" 3 que indica las condiciones

    de integracin ckl ruido del cromatgrafo.

    4. Aulicacin ele la mezcla de prueba (P2): Medida de la repetibilidad.

    Aplicacin de los patrones de linealidad (P4 en aclelanE1: Medida de LD y Le.

    Para arlicar la mezcla de prueba y los patrones de linealidad, es necesario llevar a cabo las

    siguientes operacionesi

    .Colocar en los recipientes de solvl:ntes ele las dos lneas a usar, agua Milli.Q (que se cambia

    cada da) y Acetonitrlo grado HPLC; desgasificar los solventes de la fase mvil en caso de

    que el cromatgra1"o no cuente con desgasificador incorporado. La desgasiftcacin puede

    efectuarse con Ilclio o en un bailO de ultrasonidos.

    Poner en marcha el instrumento: bombas, detector y otros elementos con que cuente el

    cromatgra1'o .

    Fijar la longitud de onda de deteccin .

    Abrir la purga y purgar dos lneas. asi:

    Una de ellas con agua Mlli.Q (1()(}(~/;) de agua a travs de la lnea) hasta que la presin se

    estabilice y se evidencie qll-': sale agua por la salida de la purga: otra lnea con ACe!onitrilo

    (!O()% de Acctonitrilo en la l\1l~I) hasta que se cstabilicl! la presin y se note ql1l~ sal\!

    Aeetonitrilo por la salida de lil purga .

    Cerrar la purga.

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    - Verificar que el buck de inyeccin es el adecuado. Limpiar el inyector, primero con 5.00

    mI de Agua Milli.Q y luego con 5.00 mI de Acctollitriln; para ello usar una jaillga de

    plstico de IO.no mI.

    -Instalar 'la columna indicada y fijar la temperatura de trabajo.

    Establecer las condiciones adecuadas de composicin de fase mvil y aumentar el flujo de la

    misma desde 0.00 mllmin hasta 1.00 ml/min, aumentando 0.10 mllmin cada vez y dejar que

    la presin se estabilice despus de cada incremento.

    Esperar a que el instrumento est estable, en lo q