IQS- CROMA PNT-A-xxxx 1 R-96

---- ---------~---------------------------------------416

Coeticiente de variacioacuten = Q ~( x - x) 2 In-I 12 ~

Media = X= LX j In

Xi == m~dida i-eacutesima

X = media de las medidas

n = nuacutemero de medidas n JBLlOTf AS FFF e ME

bull Linealidad

Se refiere al rango lineal de concentraciones que pueden ser medidas por el cromatoacutegrafo

Se r~presenta el aacuterea de pico (mv min) frente a la masa en ng y se ajusta la ecuacioacuten de una

recta por el meacutetodo de miacutenimos cuadrados se calcula el coeficiente de determinacioacuten (r)

como el indicador de la linealidad en la respuesta del detector el coeficiente de

determinacioacuten es la r~lhcioacuten entre la varianza explicada y la varianza total

Tambieacuten se establece la ecuacioacuten de regresioacuten que relaciona la variable independiente

(concentracioacuten o masa) con la respuesta del detector (aacuterea o altura de pico)

Respuesta = a + b(masa o concentracioacuten)

a = ordenada en el oriacutegen

b= pendiente de la recta

bull Factores de respuesta

Es la respuesta ohtenida altura () uacuterea por unidad de masa inyectad (1 representar los

tactores de respucsta frcnk ( la maSl inyectarla se pueckn obtener los liacutemites inferior y

upcrior ti 1 rang() 1 i I1cI

IQS-CROMA PNT-A-xxxx 1 R-96

516

F = repiacute(f1 III1IS(I

F Factor de respuesta

Se calculan los factores de respuesta y su valor medio para el caacutelculo de la media se

eliminan los puntos que tengan factores de respuesta aberrantes usando el criterio descrito

en la parte experimental y se toman como liacutemites de aceptacioacuten de los valores de F j su

promedio plusmn10 Finalmente para determinar el rango lineal se representan los valores de

los factores de respuesta acotados por sus liacutemites de aceptacioacuten frente a la masa inyectada

El margeacuten de la linealidad estaacute determinado por las masas que no sobrepasen los liacutemiks de

aceptacioacuten de F i

-Liacutemite de deteccioacuten (LO)

Es la miacutenima cantidad de sustancia que puede ser detectada por el sistema de deteccioacuten del

instrumento para calcularlo se miden en el cromatograma correspondiente a la mayor

dilucioacuten (menor concentracioacuten) el ruido y la altura de un pico de soluto que equivalga entre

tres n) y diez (lO) veces el ruido y se aplica la ecuacioacuten

LO = 11 x C iexcl

LO = Liacutemite de deteccioacuten I

R = Altura del ruido (mv)

h = Altura (mv) dd pico de solulo de concentracioacuten e (ngl ~L)

El valor del LD se dehe multiplicar por el volumen inyectado (~tf ) para expresarlo en ng

IQS-CROMA PNT-A-xxxx I R-96

6 16

-Liacutemite de luantiticacioacuten (Le)

Es la menor concentracioacuten () antidad de analito que se puede detclminar con precisioacuten y

exactitud iacutelceptahles hajo las condiciones experimentales establecidas para cakularlo se

miden en IIn cromatogrhma correspondiente a una dilucioacuten superior (baja concentracioacuten) el

ruido y la altura de un pico de soluto que equivalga aproximadamente a diez (10) veces el

ruido y se aplica la ecuacioacuten

Le = I~( xC

Le = Liacutemite de cuantificacioacuten

R = Altura del ruido (mv)

h = Altura (mv) del pico de soluto de loncentracioacuten e (ng 111)

El valor de Le se dehe multiplicar por el volumen inyectado (~lL) para expresarlo en ng I

INSTRUMENTOS Y EQUIPOS

Balanza analiacutetica con precisioacuten de plusmn O I mg Columna Merck LichrosplH r lOO RP-IS (5I1m)(125 x 4 mm)

Cromatoacutegrafo de HPLC con deteccioacuten UV

Sistema de integracioacuten cromatograacutefica y tratamiento de datos Gynkosoft

Jeringa de inyeccioacuten de vidrio para [IIgtIC de lOO ~LI

IQS-CROMA PNT-A-xxxx 1 R-96

7116

REACTIVOS Y PATRONES

Acetonitrilo (C1I 1CN) calidad HPLC

Agua U~~O) calidad MilliQ

Naftaleno Quimicamente puro PROBUS

Bifenilo reactivo puro CARLO ERI3A

Fluoreno Elaborado por FEROSA (purisimo)

Fenantreno rahricado por IE ROS A (puro -99)

Antraceno Para siacutentesis MI IHK

PI~OCEDIM IENTO

l PreparaciOacuten de patrones

11 Preparacioacuten del patroacuten madre (PI)

Se pesan (con precisiuacuten de plusmn 01 mg) las siguientes cantidades de los reactivos cuyas

calidades se descrihicron con anterioridad

Naftaleno 1000 mg

Bifenilo 250 mg

Fluoreno ~O() mg

Fenantreno 100 mg

Antraceno 50 rng

Se enrasan ~stas cantidades en matraz olum~trico a lOO mi con Acetonitrilo P1

Lsta soluciuacuten al igual que el restu de patnlllcs (hhe guardarse el1 un recipiente oscuro

perfectamente tapado y el1 un sitio a hmperatura amhiente protegido de la luz

IQS-CROMA PNT-A-xxxx I R-96

816

12 Preparacioacuten de la mezcla de prueba (P2)

A partir de PI se prepara P2 100 mI de PI tomado con pipeta volumeacutetrica de dohle aforo

se diJuye a 100 mI con una mezcla de eH CN-H 20 (7030 vv) en un matraz volumeacutetrico

La mtzda de enrase se prepara comhinando 70 voluacutemenes de Acetonitrilo con 30 voluacutemenes

de Agua

13 Preparaciuacuten del patruacuten de linealidad (P3)

A partir de PI se prepara P3 5()() mi de PI tomados con pipeta volumeacutetrica de doole aforo

se diluyen a 100 mI con una mezcla de CH 1CN-H 20 (7030 vv) en un matraz volumeacutelrico

14 Pnparaciuacuten de los patrones del rango lineal (P4 aPIO)

Estos patrones se preparan a partir de P3

P4 Tomar 2000 mi de P3 con pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 5000 mI con

una mezcla de CH CN-I-120 (70 30 vv) en un matraz v gtIumeacutetrico I() mgL en Antraceno

P5 Tomar 15()() mI de P3 COIl pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 5000 mI con

una mezcla de eH iexclCN-1120 (703() vv) en un matraz volullIeacutetrico 75 mgL en Anlraccno

P6 T llilr IO()O mI dc P3 con pipeta volumarica le doble aforo y cnrasar a 5000 mi con

una mezcla de (11 eN-IV) (70J() vv) en un matraz volumeacutetrico ) mgL en Antwccno

IQS-CROMA PNT-A-xxxx 1 R-96

916

Los siguientes patrones se preparan asiacute

P7 Tomar 500 mi de P6 con pipda volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 5000 mi con

una mezcla de eHCN-li 20 (7030 vv) en un matraz volumeacutetrico 050 mgL en Antraceno

P8 Tomar 500 mi de P7 con pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 5000 mi eon

una mezcla ele CI-ICN-H 20 (7(UO vv) en un matraz volumeacutetrico 005 mgL en Antracenn

P9 tomar 500 mi de P8 con pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 1000 mI con una

mezcla oc CH 1CN-H 20 (7010 vv) en un matraz volumeacutetrico 0(l25 mgL en Antraceno

PlO Tomar 500 mI de P9 eon pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 1000 mi con

una mezcla de CH 1CN-11 20 (70 30 vv) en un matraz volumeacutetrico 00125 mgL en

Antraceno

Continuar haciendo diluciones de esta manera hasta que sea necesario es decir hasta que se

alcance el liacutemite de deteccioacuten del instrumento

2 Condiciones cromat()~[aacutelicas

Volumen ele inyeccioacuten 20 pL Columna Merck Lichrospher 100 IP-IX (S ~lm)( 125 -lt 4 mm)

Temperatura de columna 35 e Deteccioacuten UV A -=-= 254 nm

Composicioacuten de la fase muacutevil ACeonitrilo-Agua (7( lO vv)

Flujo de fase moacutevil 1(JO mlmin

Presioacuten Variable seguacuten cllquipu [gtehc estar alrededor dc SS Bars

IQS-CROMA PNT-A-xxxx 1 R-96

IOfl6

3 Condiciones ele inteiexclracioacuten

Las condiciones de integracioacuten cromatograacutefica del sistema de tratamiento de datos

(Gynkosoft) se indican en los anexos 1 y 2 especialmente en lo que se refiere al DET-file

(integracioacuten) y al PRM-Iile (infonne) 1 Tambieacuten en el anexo n 3 que indica las condiciones

de integracioacuten ckl ruido del cromatoacutegrafo

4 AulicaciUacuten ele la mezcla de prueba (P2) Medida de la repetibilidad

Aplicacioacuten de los patrones de linealidad (P4 en aclelanE1 Medida de LD y Le

Para arlicar la mezcla de prueba y los patrones de linealidad es necesario llevar a cabo las

siguientes operacionesi

Colocar en los recipientes de solvlntes ele las dos liacuteneas a usar agua MilliQ (que se cambia

cada diacutea) y Acetonitriacutelo grado HPLC desgasificar los solventes de la fase moacutevil en caso de

que el cromatoacutegra1o no cuente con desgasificador incorporado La desgasiftcacioacuten puede

efectuarse con Ilclio o en un bailO de ultrasonidos

bull Poner en marcha el instrumento bombas detector y otros elementos con que cuente el

cromatoacutegra1o

bull Fijar la longitud de onda de deteccioacuten

bull Abrir la purga y purgar dos liacuteneas asi

Una de ellas con agua MiacutelliQ (1()((~) de agua a traveacutes de la liacutenea) hasta que la presioacuten se

estabilice y se evidencie qll- sale agua por la salida de la purga otra liacutenea con ACeonitrilo

(O() de Acctonitrilo en la liacute1l~middotI) hasta que se cstabilicl la presioacuten y se note ql1l~ sal

Aeetonitrilo por la salida de lil purga

Cerrar la purga

IQS-CROllA PNT-Aacute-xxxx 1 R-96

1116

- Verificar que el buck de inyeccioacuten es el adecuado Limpiar el inyector primero con 500

mI de Agua MilliQ y luego con 500 mI de Acctollitriln para ello usar una jaillga de

pluacutestico de IOno mI

-Instalar la columna indicada y fijar la temperatura de trabajo

Establecer las condiciones adecuadas de composicioacuten de fase moacutevil y aumentar el flujo de la

misma desde 000 mllmin hasta 100 mlmin aumentando 010 mllmin cada vez y dejar que

la presioacuten se estabilice despueacutes de cada incremento

Esperar a que el instrumento esteacute estable en lo que hace referencia a la temperatura al flujo

de la fase moacutevil ya b presioacuten

bull Establecer las condiciones del sistema de integracioacuten y tratamiento de datos Gynkosoft (ver

anexos)

- Realizar una inyeccioacuten de fase moacutevil con una jeringa de vidrio para IlPLC de 1 00 ~l L a fin

de determinar el ruido del cromatoacutegrafo con las condiciones de integracioacuten del anexo n J

- Hacer miacutenimo seis (6) inyecciones sucesivas de la mezcla de prueba (P2) bajo las

condiciones de integracioacuten del anexo n 1 con el fin de determinar la repetibilidad del

sistema

I

bull Efectuar inyecciones uacutenicas y sucesivas de los patrones de linealidad (P4 en adelante) hasta

alcalllar el Ilimite de deteccioacuten de los instrumentos con el fin ele ddcrminar ~u rango lineal

(icnerar los informeS tal como se establecen en el anexo n 2

IQS-CROMA PNT-A-xxxx 1 R-96

516

F = repiacute(f1 III1IS(I

F Factor de respuesta

Se calculan los factores de respuesta y su valor medio para el caacutelculo de la media se

eliminan los puntos que tengan factores de respuesta aberrantes usando el criterio descrito

en la parte experimental y se toman como liacutemites de aceptacioacuten de los valores de F j su

promedio plusmn10 Finalmente para determinar el rango lineal se representan los valores de

los factores de respuesta acotados por sus liacutemites de aceptacioacuten frente a la masa inyectada

El margeacuten de la linealidad estaacute determinado por las masas que no sobrepasen los liacutemiks de

aceptacioacuten de F i

-Liacutemite de deteccioacuten (LO)

Es la miacutenima cantidad de sustancia que puede ser detectada por el sistema de deteccioacuten del

instrumento para calcularlo se miden en el cromatograma correspondiente a la mayor

dilucioacuten (menor concentracioacuten) el ruido y la altura de un pico de soluto que equivalga entre

tres n) y diez (lO) veces el ruido y se aplica la ecuacioacuten

LO = 11 x C iexcl

LO = Liacutemite de deteccioacuten I

R = Altura del ruido (mv)

h = Altura (mv) dd pico de solulo de concentracioacuten e (ngl ~L)

El valor del LD se dehe multiplicar por el volumen inyectado (~tf ) para expresarlo en ng

IQS-CROMA PNT-A-xxxx I R-96

6 16

-Liacutemite de luantiticacioacuten (Le)

Es la menor concentracioacuten () antidad de analito que se puede detclminar con precisioacuten y

exactitud iacutelceptahles hajo las condiciones experimentales establecidas para cakularlo se

miden en IIn cromatogrhma correspondiente a una dilucioacuten superior (baja concentracioacuten) el

ruido y la altura de un pico de soluto que equivalga aproximadamente a diez (10) veces el

ruido y se aplica la ecuacioacuten

Le = I~( xC

Le = Liacutemite de cuantificacioacuten

R = Altura del ruido (mv)

h = Altura (mv) del pico de soluto de loncentracioacuten e (ng 111)

El valor de Le se dehe multiplicar por el volumen inyectado (~lL) para expresarlo en ng I

INSTRUMENTOS Y EQUIPOS

Balanza analiacutetica con precisioacuten de plusmn O I mg Columna Merck LichrosplH r lOO RP-IS (5I1m)(125 x 4 mm)

Cromatoacutegrafo de HPLC con deteccioacuten UV

Sistema de integracioacuten cromatograacutefica y tratamiento de datos Gynkosoft

Jeringa de inyeccioacuten de vidrio para [IIgtIC de lOO ~LI

IQS-CROMA PNT-A-xxxx 1 R-96

7116

REACTIVOS Y PATRONES

Acetonitrilo (C1I 1CN) calidad HPLC

Agua U~~O) calidad MilliQ

Naftaleno Quimicamente puro PROBUS

Bifenilo reactivo puro CARLO ERI3A

Fluoreno Elaborado por FEROSA (purisimo)

Fenantreno rahricado por IE ROS A (puro -99)

Antraceno Para siacutentesis MI IHK

PI~OCEDIM IENTO

l PreparaciOacuten de patrones

11 Preparacioacuten del patroacuten madre (PI)

Se pesan (con precisiuacuten de plusmn 01 mg) las siguientes cantidades de los reactivos cuyas

calidades se descrihicron con anterioridad

Naftaleno 1000 mg

Bifenilo 250 mg

Fluoreno ~O() mg

Fenantreno 100 mg

Antraceno 50 rng

Se enrasan ~stas cantidades en matraz olum~trico a lOO mi con Acetonitrilo P1

Lsta soluciuacuten al igual que el restu de patnlllcs (hhe guardarse el1 un recipiente oscuro

perfectamente tapado y el1 un sitio a hmperatura amhiente protegido de la luz

IQS-CROMA PNT-A-xxxx I R-96

816

12 Preparacioacuten de la mezcla de prueba (P2)

A partir de PI se prepara P2 100 mI de PI tomado con pipeta volumeacutetrica de dohle aforo

se diJuye a 100 mI con una mezcla de eH CN-H 20 (7030 vv) en un matraz volumeacutetrico

La mtzda de enrase se prepara comhinando 70 voluacutemenes de Acetonitrilo con 30 voluacutemenes

de Agua

13 Preparaciuacuten del patruacuten de linealidad (P3)

A partir de PI se prepara P3 5()() mi de PI tomados con pipeta volumeacutetrica de doole aforo

se diluyen a 100 mI con una mezcla de CH 1CN-H 20 (7030 vv) en un matraz volumeacutelrico

14 Pnparaciuacuten de los patrones del rango lineal (P4 aPIO)

Estos patrones se preparan a partir de P3

P4 Tomar 2000 mi de P3 con pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 5000 mI con

una mezcla de CH CN-I-120 (70 30 vv) en un matraz v gtIumeacutetrico I() mgL en Antraceno

P5 Tomar 15()() mI de P3 COIl pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 5000 mI con

una mezcla de eH iexclCN-1120 (703() vv) en un matraz volullIeacutetrico 75 mgL en Anlraccno

P6 T llilr IO()O mI dc P3 con pipeta volumarica le doble aforo y cnrasar a 5000 mi con

una mezcla de (11 eN-IV) (70J() vv) en un matraz volumeacutetrico ) mgL en Antwccno

IQS-CROMA PNT-A-xxxx 1 R-96

916

Los siguientes patrones se preparan asiacute

P7 Tomar 500 mi de P6 con pipda volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 5000 mi con

una mezcla de eHCN-li 20 (7030 vv) en un matraz volumeacutetrico 050 mgL en Antraceno

P8 Tomar 500 mi de P7 con pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 5000 mi eon

una mezcla ele CI-ICN-H 20 (7(UO vv) en un matraz volumeacutetrico 005 mgL en Antracenn

P9 tomar 500 mi de P8 con pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 1000 mI con una

mezcla oc CH 1CN-H 20 (7010 vv) en un matraz volumeacutetrico 0(l25 mgL en Antraceno

PlO Tomar 500 mI de P9 eon pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 1000 mi con

una mezcla de CH 1CN-11 20 (70 30 vv) en un matraz volumeacutetrico 00125 mgL en

Antraceno

Continuar haciendo diluciones de esta manera hasta que sea necesario es decir hasta que se

alcance el liacutemite de deteccioacuten del instrumento

2 Condiciones cromat()~[aacutelicas

Volumen ele inyeccioacuten 20 pL Columna Merck Lichrospher 100 IP-IX (S ~lm)( 125 -lt 4 mm)

Temperatura de columna 35 e Deteccioacuten UV A -=-= 254 nm

Composicioacuten de la fase muacutevil ACeonitrilo-Agua (7( lO vv)

Flujo de fase moacutevil 1(JO mlmin

Presioacuten Variable seguacuten cllquipu [gtehc estar alrededor dc SS Bars

IQS-CROMA PNT-A-xxxx 1 R-96

IOfl6

3 Condiciones ele inteiexclracioacuten

Las condiciones de integracioacuten cromatograacutefica del sistema de tratamiento de datos

(Gynkosoft) se indican en los anexos 1 y 2 especialmente en lo que se refiere al DET-file

(integracioacuten) y al PRM-Iile (infonne) 1 Tambieacuten en el anexo n 3 que indica las condiciones

de integracioacuten ckl ruido del cromatoacutegrafo

4 AulicaciUacuten ele la mezcla de prueba (P2) Medida de la repetibilidad

Aplicacioacuten de los patrones de linealidad (P4 en aclelanE1 Medida de LD y Le

Para arlicar la mezcla de prueba y los patrones de linealidad es necesario llevar a cabo las

siguientes operacionesi

Colocar en los recipientes de solvlntes ele las dos liacuteneas a usar agua MilliQ (que se cambia

cada diacutea) y Acetonitriacutelo grado HPLC desgasificar los solventes de la fase moacutevil en caso de

que el cromatoacutegra1o no cuente con desgasificador incorporado La desgasiftcacioacuten puede

efectuarse con Ilclio o en un bailO de ultrasonidos

bull Poner en marcha el instrumento bombas detector y otros elementos con que cuente el

cromatoacutegra1o

bull Fijar la longitud de onda de deteccioacuten

bull Abrir la purga y purgar dos liacuteneas asi

Una de ellas con agua MiacutelliQ (1()((~) de agua a traveacutes de la liacutenea) hasta que la presioacuten se

estabilice y se evidencie qll- sale agua por la salida de la purga otra liacutenea con ACeonitrilo

(O() de Acctonitrilo en la liacute1l~middotI) hasta que se cstabilicl la presioacuten y se note ql1l~ sal

Aeetonitrilo por la salida de lil purga

Cerrar la purga

IQS-CROllA PNT-Aacute-xxxx 1 R-96

1116

- Verificar que el buck de inyeccioacuten es el adecuado Limpiar el inyector primero con 500

mI de Agua MilliQ y luego con 500 mI de Acctollitriln para ello usar una jaillga de

pluacutestico de IOno mI

-Instalar la columna indicada y fijar la temperatura de trabajo

Establecer las condiciones adecuadas de composicioacuten de fase moacutevil y aumentar el flujo de la

misma desde 000 mllmin hasta 100 mlmin aumentando 010 mllmin cada vez y dejar que

la presioacuten se estabilice despueacutes de cada incremento

Esperar a que el instrumento esteacute estable en lo que hace referencia a la temperatura al flujo

de la fase moacutevil ya b presioacuten

bull Establecer las condiciones del sistema de integracioacuten y tratamiento de datos Gynkosoft (ver

anexos)

- Realizar una inyeccioacuten de fase moacutevil con una jeringa de vidrio para IlPLC de 1 00 ~l L a fin

de determinar el ruido del cromatoacutegrafo con las condiciones de integracioacuten del anexo n J

- Hacer miacutenimo seis (6) inyecciones sucesivas de la mezcla de prueba (P2) bajo las

condiciones de integracioacuten del anexo n 1 con el fin de determinar la repetibilidad del

sistema

I

bull Efectuar inyecciones uacutenicas y sucesivas de los patrones de linealidad (P4 en adelante) hasta

alcalllar el Ilimite de deteccioacuten de los instrumentos con el fin ele ddcrminar ~u rango lineal

(icnerar los informeS tal como se establecen en el anexo n 2

IQS-CROMA PNT-A-xxxx I R-96

6 16

-Liacutemite de luantiticacioacuten (Le)

Es la menor concentracioacuten () antidad de analito que se puede detclminar con precisioacuten y

exactitud iacutelceptahles hajo las condiciones experimentales establecidas para cakularlo se

miden en IIn cromatogrhma correspondiente a una dilucioacuten superior (baja concentracioacuten) el

ruido y la altura de un pico de soluto que equivalga aproximadamente a diez (10) veces el

ruido y se aplica la ecuacioacuten

Le = I~( xC

Le = Liacutemite de cuantificacioacuten

R = Altura del ruido (mv)

h = Altura (mv) del pico de soluto de loncentracioacuten e (ng 111)

El valor de Le se dehe multiplicar por el volumen inyectado (~lL) para expresarlo en ng I

INSTRUMENTOS Y EQUIPOS

Balanza analiacutetica con precisioacuten de plusmn O I mg Columna Merck LichrosplH r lOO RP-IS (5I1m)(125 x 4 mm)

Cromatoacutegrafo de HPLC con deteccioacuten UV

Sistema de integracioacuten cromatograacutefica y tratamiento de datos Gynkosoft

Jeringa de inyeccioacuten de vidrio para [IIgtIC de lOO ~LI

IQS-CROMA PNT-A-xxxx 1 R-96

7116

REACTIVOS Y PATRONES

Acetonitrilo (C1I 1CN) calidad HPLC

Agua U~~O) calidad MilliQ

Naftaleno Quimicamente puro PROBUS

Bifenilo reactivo puro CARLO ERI3A

Fluoreno Elaborado por FEROSA (purisimo)

Fenantreno rahricado por IE ROS A (puro -99)

Antraceno Para siacutentesis MI IHK

PI~OCEDIM IENTO

l PreparaciOacuten de patrones

11 Preparacioacuten del patroacuten madre (PI)

Se pesan (con precisiuacuten de plusmn 01 mg) las siguientes cantidades de los reactivos cuyas

calidades se descrihicron con anterioridad

Naftaleno 1000 mg

Bifenilo 250 mg

Fluoreno ~O() mg

Fenantreno 100 mg

Antraceno 50 rng

Se enrasan ~stas cantidades en matraz olum~trico a lOO mi con Acetonitrilo P1

Lsta soluciuacuten al igual que el restu de patnlllcs (hhe guardarse el1 un recipiente oscuro

perfectamente tapado y el1 un sitio a hmperatura amhiente protegido de la luz

IQS-CROMA PNT-A-xxxx I R-96

816

12 Preparacioacuten de la mezcla de prueba (P2)

A partir de PI se prepara P2 100 mI de PI tomado con pipeta volumeacutetrica de dohle aforo

se diJuye a 100 mI con una mezcla de eH CN-H 20 (7030 vv) en un matraz volumeacutetrico

La mtzda de enrase se prepara comhinando 70 voluacutemenes de Acetonitrilo con 30 voluacutemenes

de Agua

13 Preparaciuacuten del patruacuten de linealidad (P3)

A partir de PI se prepara P3 5()() mi de PI tomados con pipeta volumeacutetrica de doole aforo

se diluyen a 100 mI con una mezcla de CH 1CN-H 20 (7030 vv) en un matraz volumeacutelrico

14 Pnparaciuacuten de los patrones del rango lineal (P4 aPIO)

Estos patrones se preparan a partir de P3

P4 Tomar 2000 mi de P3 con pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 5000 mI con

una mezcla de CH CN-I-120 (70 30 vv) en un matraz v gtIumeacutetrico I() mgL en Antraceno

P5 Tomar 15()() mI de P3 COIl pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 5000 mI con

una mezcla de eH iexclCN-1120 (703() vv) en un matraz volullIeacutetrico 75 mgL en Anlraccno

P6 T llilr IO()O mI dc P3 con pipeta volumarica le doble aforo y cnrasar a 5000 mi con

una mezcla de (11 eN-IV) (70J() vv) en un matraz volumeacutetrico ) mgL en Antwccno

IQS-CROMA PNT-A-xxxx 1 R-96

916

Los siguientes patrones se preparan asiacute

P7 Tomar 500 mi de P6 con pipda volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 5000 mi con

una mezcla de eHCN-li 20 (7030 vv) en un matraz volumeacutetrico 050 mgL en Antraceno

P8 Tomar 500 mi de P7 con pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 5000 mi eon

una mezcla ele CI-ICN-H 20 (7(UO vv) en un matraz volumeacutetrico 005 mgL en Antracenn

P9 tomar 500 mi de P8 con pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 1000 mI con una

mezcla oc CH 1CN-H 20 (7010 vv) en un matraz volumeacutetrico 0(l25 mgL en Antraceno

PlO Tomar 500 mI de P9 eon pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 1000 mi con

una mezcla de CH 1CN-11 20 (70 30 vv) en un matraz volumeacutetrico 00125 mgL en

Antraceno

Continuar haciendo diluciones de esta manera hasta que sea necesario es decir hasta que se

alcance el liacutemite de deteccioacuten del instrumento

2 Condiciones cromat()~[aacutelicas

Volumen ele inyeccioacuten 20 pL Columna Merck Lichrospher 100 IP-IX (S ~lm)( 125 -lt 4 mm)

Temperatura de columna 35 e Deteccioacuten UV A -=-= 254 nm

Composicioacuten de la fase muacutevil ACeonitrilo-Agua (7( lO vv)

Flujo de fase moacutevil 1(JO mlmin

Presioacuten Variable seguacuten cllquipu [gtehc estar alrededor dc SS Bars

IQS-CROMA PNT-A-xxxx 1 R-96

IOfl6

3 Condiciones ele inteiexclracioacuten

Las condiciones de integracioacuten cromatograacutefica del sistema de tratamiento de datos

(Gynkosoft) se indican en los anexos 1 y 2 especialmente en lo que se refiere al DET-file

(integracioacuten) y al PRM-Iile (infonne) 1 Tambieacuten en el anexo n 3 que indica las condiciones

de integracioacuten ckl ruido del cromatoacutegrafo

4 AulicaciUacuten ele la mezcla de prueba (P2) Medida de la repetibilidad

Aplicacioacuten de los patrones de linealidad (P4 en aclelanE1 Medida de LD y Le

Para arlicar la mezcla de prueba y los patrones de linealidad es necesario llevar a cabo las

siguientes operacionesi

Colocar en los recipientes de solvlntes ele las dos liacuteneas a usar agua MilliQ (que se cambia

cada diacutea) y Acetonitriacutelo grado HPLC desgasificar los solventes de la fase moacutevil en caso de

que el cromatoacutegra1o no cuente con desgasificador incorporado La desgasiftcacioacuten puede

efectuarse con Ilclio o en un bailO de ultrasonidos

bull Poner en marcha el instrumento bombas detector y otros elementos con que cuente el

cromatoacutegra1o

bull Fijar la longitud de onda de deteccioacuten

bull Abrir la purga y purgar dos liacuteneas asi

Una de ellas con agua MiacutelliQ (1()((~) de agua a traveacutes de la liacutenea) hasta que la presioacuten se

estabilice y se evidencie qll- sale agua por la salida de la purga otra liacutenea con ACeonitrilo

(O() de Acctonitrilo en la liacute1l~middotI) hasta que se cstabilicl la presioacuten y se note ql1l~ sal

Aeetonitrilo por la salida de lil purga

Cerrar la purga

IQS-CROllA PNT-Aacute-xxxx 1 R-96

1116

- Verificar que el buck de inyeccioacuten es el adecuado Limpiar el inyector primero con 500

mI de Agua MilliQ y luego con 500 mI de Acctollitriln para ello usar una jaillga de

pluacutestico de IOno mI

-Instalar la columna indicada y fijar la temperatura de trabajo

Establecer las condiciones adecuadas de composicioacuten de fase moacutevil y aumentar el flujo de la

misma desde 000 mllmin hasta 100 mlmin aumentando 010 mllmin cada vez y dejar que

la presioacuten se estabilice despueacutes de cada incremento

Esperar a que el instrumento esteacute estable en lo que hace referencia a la temperatura al flujo

de la fase moacutevil ya b presioacuten

bull Establecer las condiciones del sistema de integracioacuten y tratamiento de datos Gynkosoft (ver

anexos)

- Realizar una inyeccioacuten de fase moacutevil con una jeringa de vidrio para IlPLC de 1 00 ~l L a fin

de determinar el ruido del cromatoacutegrafo con las condiciones de integracioacuten del anexo n J

- Hacer miacutenimo seis (6) inyecciones sucesivas de la mezcla de prueba (P2) bajo las

condiciones de integracioacuten del anexo n 1 con el fin de determinar la repetibilidad del

sistema

I

bull Efectuar inyecciones uacutenicas y sucesivas de los patrones de linealidad (P4 en adelante) hasta

alcalllar el Ilimite de deteccioacuten de los instrumentos con el fin ele ddcrminar ~u rango lineal

(icnerar los informeS tal como se establecen en el anexo n 2

IQS-CROMA PNT-A-xxxx 1 R-96

7116

REACTIVOS Y PATRONES

Acetonitrilo (C1I 1CN) calidad HPLC

Agua U~~O) calidad MilliQ

Naftaleno Quimicamente puro PROBUS

Bifenilo reactivo puro CARLO ERI3A

Fluoreno Elaborado por FEROSA (purisimo)

Fenantreno rahricado por IE ROS A (puro -99)

Antraceno Para siacutentesis MI IHK

PI~OCEDIM IENTO

l PreparaciOacuten de patrones

11 Preparacioacuten del patroacuten madre (PI)

Se pesan (con precisiuacuten de plusmn 01 mg) las siguientes cantidades de los reactivos cuyas

calidades se descrihicron con anterioridad

Naftaleno 1000 mg

Bifenilo 250 mg

Fluoreno ~O() mg

Fenantreno 100 mg

Antraceno 50 rng

Se enrasan ~stas cantidades en matraz olum~trico a lOO mi con Acetonitrilo P1

Lsta soluciuacuten al igual que el restu de patnlllcs (hhe guardarse el1 un recipiente oscuro

perfectamente tapado y el1 un sitio a hmperatura amhiente protegido de la luz

IQS-CROMA PNT-A-xxxx I R-96

816

12 Preparacioacuten de la mezcla de prueba (P2)

A partir de PI se prepara P2 100 mI de PI tomado con pipeta volumeacutetrica de dohle aforo

se diJuye a 100 mI con una mezcla de eH CN-H 20 (7030 vv) en un matraz volumeacutetrico

La mtzda de enrase se prepara comhinando 70 voluacutemenes de Acetonitrilo con 30 voluacutemenes

de Agua

13 Preparaciuacuten del patruacuten de linealidad (P3)

A partir de PI se prepara P3 5()() mi de PI tomados con pipeta volumeacutetrica de doole aforo

se diluyen a 100 mI con una mezcla de CH 1CN-H 20 (7030 vv) en un matraz volumeacutelrico

14 Pnparaciuacuten de los patrones del rango lineal (P4 aPIO)

Estos patrones se preparan a partir de P3

P4 Tomar 2000 mi de P3 con pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 5000 mI con

una mezcla de CH CN-I-120 (70 30 vv) en un matraz v gtIumeacutetrico I() mgL en Antraceno

P5 Tomar 15()() mI de P3 COIl pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 5000 mI con

una mezcla de eH iexclCN-1120 (703() vv) en un matraz volullIeacutetrico 75 mgL en Anlraccno

P6 T llilr IO()O mI dc P3 con pipeta volumarica le doble aforo y cnrasar a 5000 mi con

una mezcla de (11 eN-IV) (70J() vv) en un matraz volumeacutetrico ) mgL en Antwccno

IQS-CROMA PNT-A-xxxx 1 R-96

916

Los siguientes patrones se preparan asiacute

P7 Tomar 500 mi de P6 con pipda volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 5000 mi con

una mezcla de eHCN-li 20 (7030 vv) en un matraz volumeacutetrico 050 mgL en Antraceno

P8 Tomar 500 mi de P7 con pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 5000 mi eon

una mezcla ele CI-ICN-H 20 (7(UO vv) en un matraz volumeacutetrico 005 mgL en Antracenn

P9 tomar 500 mi de P8 con pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 1000 mI con una

mezcla oc CH 1CN-H 20 (7010 vv) en un matraz volumeacutetrico 0(l25 mgL en Antraceno

PlO Tomar 500 mI de P9 eon pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 1000 mi con

una mezcla de CH 1CN-11 20 (70 30 vv) en un matraz volumeacutetrico 00125 mgL en

Antraceno

Continuar haciendo diluciones de esta manera hasta que sea necesario es decir hasta que se

alcance el liacutemite de deteccioacuten del instrumento

2 Condiciones cromat()~[aacutelicas

Volumen ele inyeccioacuten 20 pL Columna Merck Lichrospher 100 IP-IX (S ~lm)( 125 -lt 4 mm)

Temperatura de columna 35 e Deteccioacuten UV A -=-= 254 nm

Composicioacuten de la fase muacutevil ACeonitrilo-Agua (7( lO vv)

Flujo de fase moacutevil 1(JO mlmin

Presioacuten Variable seguacuten cllquipu [gtehc estar alrededor dc SS Bars

IQS-CROMA PNT-A-xxxx 1 R-96

IOfl6

3 Condiciones ele inteiexclracioacuten

Las condiciones de integracioacuten cromatograacutefica del sistema de tratamiento de datos

(Gynkosoft) se indican en los anexos 1 y 2 especialmente en lo que se refiere al DET-file

(integracioacuten) y al PRM-Iile (infonne) 1 Tambieacuten en el anexo n 3 que indica las condiciones

de integracioacuten ckl ruido del cromatoacutegrafo

4 AulicaciUacuten ele la mezcla de prueba (P2) Medida de la repetibilidad

Aplicacioacuten de los patrones de linealidad (P4 en aclelanE1 Medida de LD y Le

Para arlicar la mezcla de prueba y los patrones de linealidad es necesario llevar a cabo las

siguientes operacionesi

Colocar en los recipientes de solvlntes ele las dos liacuteneas a usar agua MilliQ (que se cambia

cada diacutea) y Acetonitriacutelo grado HPLC desgasificar los solventes de la fase moacutevil en caso de

que el cromatoacutegra1o no cuente con desgasificador incorporado La desgasiftcacioacuten puede

efectuarse con Ilclio o en un bailO de ultrasonidos

bull Poner en marcha el instrumento bombas detector y otros elementos con que cuente el

cromatoacutegra1o

bull Fijar la longitud de onda de deteccioacuten

bull Abrir la purga y purgar dos liacuteneas asi

Una de ellas con agua MiacutelliQ (1()((~) de agua a traveacutes de la liacutenea) hasta que la presioacuten se

estabilice y se evidencie qll- sale agua por la salida de la purga otra liacutenea con ACeonitrilo

(O() de Acctonitrilo en la liacute1l~middotI) hasta que se cstabilicl la presioacuten y se note ql1l~ sal

Aeetonitrilo por la salida de lil purga

Cerrar la purga

IQS-CROllA PNT-Aacute-xxxx 1 R-96

1116

- Verificar que el buck de inyeccioacuten es el adecuado Limpiar el inyector primero con 500

mI de Agua MilliQ y luego con 500 mI de Acctollitriln para ello usar una jaillga de

pluacutestico de IOno mI

-Instalar la columna indicada y fijar la temperatura de trabajo

Establecer las condiciones adecuadas de composicioacuten de fase moacutevil y aumentar el flujo de la

misma desde 000 mllmin hasta 100 mlmin aumentando 010 mllmin cada vez y dejar que

la presioacuten se estabilice despueacutes de cada incremento

Esperar a que el instrumento esteacute estable en lo que hace referencia a la temperatura al flujo

de la fase moacutevil ya b presioacuten

bull Establecer las condiciones del sistema de integracioacuten y tratamiento de datos Gynkosoft (ver

anexos)

- Realizar una inyeccioacuten de fase moacutevil con una jeringa de vidrio para IlPLC de 1 00 ~l L a fin

de determinar el ruido del cromatoacutegrafo con las condiciones de integracioacuten del anexo n J

- Hacer miacutenimo seis (6) inyecciones sucesivas de la mezcla de prueba (P2) bajo las

condiciones de integracioacuten del anexo n 1 con el fin de determinar la repetibilidad del

sistema

I

bull Efectuar inyecciones uacutenicas y sucesivas de los patrones de linealidad (P4 en adelante) hasta

alcalllar el Ilimite de deteccioacuten de los instrumentos con el fin ele ddcrminar ~u rango lineal

(icnerar los informeS tal como se establecen en el anexo n 2

IQS-CROMA PNT-A-xxxx I R-96

816

12 Preparacioacuten de la mezcla de prueba (P2)

A partir de PI se prepara P2 100 mI de PI tomado con pipeta volumeacutetrica de dohle aforo

se diJuye a 100 mI con una mezcla de eH CN-H 20 (7030 vv) en un matraz volumeacutetrico

La mtzda de enrase se prepara comhinando 70 voluacutemenes de Acetonitrilo con 30 voluacutemenes

de Agua

13 Preparaciuacuten del patruacuten de linealidad (P3)

A partir de PI se prepara P3 5()() mi de PI tomados con pipeta volumeacutetrica de doole aforo

se diluyen a 100 mI con una mezcla de CH 1CN-H 20 (7030 vv) en un matraz volumeacutelrico

14 Pnparaciuacuten de los patrones del rango lineal (P4 aPIO)

Estos patrones se preparan a partir de P3

P4 Tomar 2000 mi de P3 con pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 5000 mI con

una mezcla de CH CN-I-120 (70 30 vv) en un matraz v gtIumeacutetrico I() mgL en Antraceno

P5 Tomar 15()() mI de P3 COIl pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 5000 mI con

una mezcla de eH iexclCN-1120 (703() vv) en un matraz volullIeacutetrico 75 mgL en Anlraccno

P6 T llilr IO()O mI dc P3 con pipeta volumarica le doble aforo y cnrasar a 5000 mi con

una mezcla de (11 eN-IV) (70J() vv) en un matraz volumeacutetrico ) mgL en Antwccno

IQS-CROMA PNT-A-xxxx 1 R-96

916

Los siguientes patrones se preparan asiacute

P7 Tomar 500 mi de P6 con pipda volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 5000 mi con

una mezcla de eHCN-li 20 (7030 vv) en un matraz volumeacutetrico 050 mgL en Antraceno

P8 Tomar 500 mi de P7 con pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 5000 mi eon

una mezcla ele CI-ICN-H 20 (7(UO vv) en un matraz volumeacutetrico 005 mgL en Antracenn

P9 tomar 500 mi de P8 con pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 1000 mI con una

mezcla oc CH 1CN-H 20 (7010 vv) en un matraz volumeacutetrico 0(l25 mgL en Antraceno

PlO Tomar 500 mI de P9 eon pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 1000 mi con

una mezcla de CH 1CN-11 20 (70 30 vv) en un matraz volumeacutetrico 00125 mgL en

Antraceno

Continuar haciendo diluciones de esta manera hasta que sea necesario es decir hasta que se

alcance el liacutemite de deteccioacuten del instrumento

2 Condiciones cromat()~[aacutelicas

Volumen ele inyeccioacuten 20 pL Columna Merck Lichrospher 100 IP-IX (S ~lm)( 125 -lt 4 mm)

Temperatura de columna 35 e Deteccioacuten UV A -=-= 254 nm

Composicioacuten de la fase muacutevil ACeonitrilo-Agua (7( lO vv)

Flujo de fase moacutevil 1(JO mlmin

Presioacuten Variable seguacuten cllquipu [gtehc estar alrededor dc SS Bars

IQS-CROMA PNT-A-xxxx 1 R-96

IOfl6

3 Condiciones ele inteiexclracioacuten

Las condiciones de integracioacuten cromatograacutefica del sistema de tratamiento de datos

(Gynkosoft) se indican en los anexos 1 y 2 especialmente en lo que se refiere al DET-file

(integracioacuten) y al PRM-Iile (infonne) 1 Tambieacuten en el anexo n 3 que indica las condiciones

de integracioacuten ckl ruido del cromatoacutegrafo

4 AulicaciUacuten ele la mezcla de prueba (P2) Medida de la repetibilidad

Aplicacioacuten de los patrones de linealidad (P4 en aclelanE1 Medida de LD y Le

Para arlicar la mezcla de prueba y los patrones de linealidad es necesario llevar a cabo las

siguientes operacionesi

Colocar en los recipientes de solvlntes ele las dos liacuteneas a usar agua MilliQ (que se cambia

cada diacutea) y Acetonitriacutelo grado HPLC desgasificar los solventes de la fase moacutevil en caso de

que el cromatoacutegra1o no cuente con desgasificador incorporado La desgasiftcacioacuten puede

efectuarse con Ilclio o en un bailO de ultrasonidos

bull Poner en marcha el instrumento bombas detector y otros elementos con que cuente el

cromatoacutegra1o

bull Fijar la longitud de onda de deteccioacuten

bull Abrir la purga y purgar dos liacuteneas asi

Una de ellas con agua MiacutelliQ (1()((~) de agua a traveacutes de la liacutenea) hasta que la presioacuten se

estabilice y se evidencie qll- sale agua por la salida de la purga otra liacutenea con ACeonitrilo

(O() de Acctonitrilo en la liacute1l~middotI) hasta que se cstabilicl la presioacuten y se note ql1l~ sal

Aeetonitrilo por la salida de lil purga

Cerrar la purga

IQS-CROllA PNT-Aacute-xxxx 1 R-96

1116

- Verificar que el buck de inyeccioacuten es el adecuado Limpiar el inyector primero con 500

mI de Agua MilliQ y luego con 500 mI de Acctollitriln para ello usar una jaillga de

pluacutestico de IOno mI

-Instalar la columna indicada y fijar la temperatura de trabajo

Establecer las condiciones adecuadas de composicioacuten de fase moacutevil y aumentar el flujo de la

misma desde 000 mllmin hasta 100 mlmin aumentando 010 mllmin cada vez y dejar que

la presioacuten se estabilice despueacutes de cada incremento

Esperar a que el instrumento esteacute estable en lo que hace referencia a la temperatura al flujo

de la fase moacutevil ya b presioacuten

bull Establecer las condiciones del sistema de integracioacuten y tratamiento de datos Gynkosoft (ver

anexos)

- Realizar una inyeccioacuten de fase moacutevil con una jeringa de vidrio para IlPLC de 1 00 ~l L a fin

de determinar el ruido del cromatoacutegrafo con las condiciones de integracioacuten del anexo n J

- Hacer miacutenimo seis (6) inyecciones sucesivas de la mezcla de prueba (P2) bajo las

condiciones de integracioacuten del anexo n 1 con el fin de determinar la repetibilidad del

sistema

I

bull Efectuar inyecciones uacutenicas y sucesivas de los patrones de linealidad (P4 en adelante) hasta

alcalllar el Ilimite de deteccioacuten de los instrumentos con el fin ele ddcrminar ~u rango lineal

(icnerar los informeS tal como se establecen en el anexo n 2

IQS-CROMA PNT-A-xxxx 1 R-96

916

Los siguientes patrones se preparan asiacute

P7 Tomar 500 mi de P6 con pipda volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 5000 mi con

una mezcla de eHCN-li 20 (7030 vv) en un matraz volumeacutetrico 050 mgL en Antraceno

P8 Tomar 500 mi de P7 con pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 5000 mi eon

una mezcla ele CI-ICN-H 20 (7(UO vv) en un matraz volumeacutetrico 005 mgL en Antracenn

P9 tomar 500 mi de P8 con pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 1000 mI con una

mezcla oc CH 1CN-H 20 (7010 vv) en un matraz volumeacutetrico 0(l25 mgL en Antraceno

PlO Tomar 500 mI de P9 eon pipeta volumeacutetrica de doble aforo y enrasar a 1000 mi con

una mezcla de CH 1CN-11 20 (70 30 vv) en un matraz volumeacutetrico 00125 mgL en

Antraceno

Continuar haciendo diluciones de esta manera hasta que sea necesario es decir hasta que se

alcance el liacutemite de deteccioacuten del instrumento

2 Condiciones cromat()~[aacutelicas

Volumen ele inyeccioacuten 20 pL Columna Merck Lichrospher 100 IP-IX (S ~lm)( 125 -lt 4 mm)

Temperatura de columna 35 e Deteccioacuten UV A -=-= 254 nm

Composicioacuten de la fase muacutevil ACeonitrilo-Agua (7( lO vv)

Flujo de fase moacutevil 1(JO mlmin

Presioacuten Variable seguacuten cllquipu [gtehc estar alrededor dc SS Bars

IQS-CROMA PNT-A-xxxx 1 R-96

IOfl6

3 Condiciones ele inteiexclracioacuten

Las condiciones de integracioacuten cromatograacutefica del sistema de tratamiento de datos

(Gynkosoft) se indican en los anexos 1 y 2 especialmente en lo que se refiere al DET-file

(integracioacuten) y al PRM-Iile (infonne) 1 Tambieacuten en el anexo n 3 que indica las condiciones

de integracioacuten ckl ruido del cromatoacutegrafo

4 AulicaciUacuten ele la mezcla de prueba (P2) Medida de la repetibilidad

Aplicacioacuten de los patrones de linealidad (P4 en aclelanE1 Medida de LD y Le

Para arlicar la mezcla de prueba y los patrones de linealidad es necesario llevar a cabo las

siguientes operacionesi

Colocar en los recipientes de solvlntes ele las dos liacuteneas a usar agua MilliQ (que se cambia

cada diacutea) y Acetonitriacutelo grado HPLC desgasificar los solventes de la fase moacutevil en caso de

que el cromatoacutegra1o no cuente con desgasificador incorporado La desgasiftcacioacuten puede

efectuarse con Ilclio o en un bailO de ultrasonidos

bull Poner en marcha el instrumento bombas detector y otros elementos con que cuente el

cromatoacutegra1o

bull Fijar la longitud de onda de deteccioacuten

bull Abrir la purga y purgar dos liacuteneas asi

Una de ellas con agua MiacutelliQ (1()((~) de agua a traveacutes de la liacutenea) hasta que la presioacuten se

estabilice y se evidencie qll- sale agua por la salida de la purga otra liacutenea con ACeonitrilo

(O() de Acctonitrilo en la liacute1l~middotI) hasta que se cstabilicl la presioacuten y se note ql1l~ sal

Aeetonitrilo por la salida de lil purga

Cerrar la purga

IQS-CROllA PNT-Aacute-xxxx 1 R-96

1116

- Verificar que el buck de inyeccioacuten es el adecuado Limpiar el inyector primero con 500

mI de Agua MilliQ y luego con 500 mI de Acctollitriln para ello usar una jaillga de

pluacutestico de IOno mI

-Instalar la columna indicada y fijar la temperatura de trabajo

Establecer las condiciones adecuadas de composicioacuten de fase moacutevil y aumentar el flujo de la

misma desde 000 mllmin hasta 100 mlmin aumentando 010 mllmin cada vez y dejar que

la presioacuten se estabilice despueacutes de cada incremento

Esperar a que el instrumento esteacute estable en lo que hace referencia a la temperatura al flujo

de la fase moacutevil ya b presioacuten

bull Establecer las condiciones del sistema de integracioacuten y tratamiento de datos Gynkosoft (ver

anexos)

- Realizar una inyeccioacuten de fase moacutevil con una jeringa de vidrio para IlPLC de 1 00 ~l L a fin

de determinar el ruido del cromatoacutegrafo con las condiciones de integracioacuten del anexo n J

- Hacer miacutenimo seis (6) inyecciones sucesivas de la mezcla de prueba (P2) bajo las

condiciones de integracioacuten del anexo n 1 con el fin de determinar la repetibilidad del

sistema

I

bull Efectuar inyecciones uacutenicas y sucesivas de los patrones de linealidad (P4 en adelante) hasta

alcalllar el Ilimite de deteccioacuten de los instrumentos con el fin ele ddcrminar ~u rango lineal

(icnerar los informeS tal como se establecen en el anexo n 2

IQS-CROMA PNT-A-xxxx 1 R-96

IOfl6

3 Condiciones ele inteiexclracioacuten

Las condiciones de integracioacuten cromatograacutefica del sistema de tratamiento de datos

(Gynkosoft) se indican en los anexos 1 y 2 especialmente en lo que se refiere al DET-file

(integracioacuten) y al PRM-Iile (infonne) 1 Tambieacuten en el anexo n 3 que indica las condiciones

de integracioacuten ckl ruido del cromatoacutegrafo

4 AulicaciUacuten ele la mezcla de prueba (P2) Medida de la repetibilidad

Aplicacioacuten de los patrones de linealidad (P4 en aclelanE1 Medida de LD y Le

Para arlicar la mezcla de prueba y los patrones de linealidad es necesario llevar a cabo las

siguientes operacionesi

Colocar en los recipientes de solvlntes ele las dos liacuteneas a usar agua MilliQ (que se cambia

cada diacutea) y Acetonitriacutelo grado HPLC desgasificar los solventes de la fase moacutevil en caso de

que el cromatoacutegra1o no cuente con desgasificador incorporado La desgasiftcacioacuten puede

efectuarse con Ilclio o en un bailO de ultrasonidos

bull Poner en marcha el instrumento bombas detector y otros elementos con que cuente el

cromatoacutegra1o

bull Fijar la longitud de onda de deteccioacuten

bull Abrir la purga y purgar dos liacuteneas asi

Una de ellas con agua MiacutelliQ (1()((~) de agua a traveacutes de la liacutenea) hasta que la presioacuten se

estabilice y se evidencie qll- sale agua por la salida de la purga otra liacutenea con ACeonitrilo

(O() de Acctonitrilo en la liacute1l~middotI) hasta que se cstabilicl la presioacuten y se note ql1l~ sal

Aeetonitrilo por la salida de lil purga

Cerrar la purga

IQS-CROllA PNT-Aacute-xxxx 1 R-96

1116

- Verificar que el buck de inyeccioacuten es el adecuado Limpiar el inyector primero con 500

mI de Agua MilliQ y luego con 500 mI de Acctollitriln para ello usar una jaillga de

pluacutestico de IOno mI

-Instalar la columna indicada y fijar la temperatura de trabajo

Establecer las condiciones adecuadas de composicioacuten de fase moacutevil y aumentar el flujo de la

misma desde 000 mllmin hasta 100 mlmin aumentando 010 mllmin cada vez y dejar que

la presioacuten se estabilice despueacutes de cada incremento

Esperar a que el instrumento esteacute estable en lo que hace referencia a la temperatura al flujo

de la fase moacutevil ya b presioacuten

bull Establecer las condiciones del sistema de integracioacuten y tratamiento de datos Gynkosoft (ver

anexos)

- Realizar una inyeccioacuten de fase moacutevil con una jeringa de vidrio para IlPLC de 1 00 ~l L a fin

de determinar el ruido del cromatoacutegrafo con las condiciones de integracioacuten del anexo n J

- Hacer miacutenimo seis (6) inyecciones sucesivas de la mezcla de prueba (P2) bajo las

condiciones de integracioacuten del anexo n 1 con el fin de determinar la repetibilidad del

sistema

I

bull Efectuar inyecciones uacutenicas y sucesivas de los patrones de linealidad (P4 en adelante) hasta

alcalllar el Ilimite de deteccioacuten de los instrumentos con el fin ele ddcrminar ~u rango lineal

(icnerar los informeS tal como se establecen en el anexo n 2

IQS-CROllA PNT-Aacute-xxxx 1 R-96

1116

- Verificar que el buck de inyeccioacuten es el adecuado Limpiar el inyector primero con 500

mI de Agua MilliQ y luego con 500 mI de Acctollitriln para ello usar una jaillga de

pluacutestico de IOno mI

-Instalar la columna indicada y fijar la temperatura de trabajo

Establecer las condiciones adecuadas de composicioacuten de fase moacutevil y aumentar el flujo de la

misma desde 000 mllmin hasta 100 mlmin aumentando 010 mllmin cada vez y dejar que

la presioacuten se estabilice despueacutes de cada incremento

Esperar a que el instrumento esteacute estable en lo que hace referencia a la temperatura al flujo

de la fase moacutevil ya b presioacuten

bull Establecer las condiciones del sistema de integracioacuten y tratamiento de datos Gynkosoft (ver

anexos)

- Realizar una inyeccioacuten de fase moacutevil con una jeringa de vidrio para IlPLC de 1 00 ~l L a fin

de determinar el ruido del cromatoacutegrafo con las condiciones de integracioacuten del anexo n J

- Hacer miacutenimo seis (6) inyecciones sucesivas de la mezcla de prueba (P2) bajo las

condiciones de integracioacuten del anexo n 1 con el fin de determinar la repetibilidad del

sistema

I

bull Efectuar inyecciones uacutenicas y sucesivas de los patrones de linealidad (P4 en adelante) hasta

alcalllar el Ilimite de deteccioacuten de los instrumentos con el fin ele ddcrminar ~u rango lineal

(icnerar los informeS tal como se establecen en el anexo n 2

IQS-CROMA PNT-A-xxxx 1 R-96

12 1 ()

El software de integraciuacuten suministra un infoacuterme que ademaacutes del cromntograma incluyr los

valores de los siguientes paraacutemetros para cada pico

n del pico

Tiempo de retencioacuten (min)

Nombre del pico

1 ipo de pico seguacuten la integracioacuten

Area de pico (mv min)

Altura de pico (mv)

Anchura de pico a la mitad (k la altura (min)

Nuacutemero de platos teoacutericos por columna

Resoluci(lIl I

Asimetriacutea de pico

r~ s necesario tambil1l calcular la r~lacioacuten sentildeallruido para cada pico del cromatograma esta

nlacioacuten se obtiene dividiendo la altura del pico eromatograacutetico de un soluto de la mezcla de

prueba (en mv) entre la altura dd ruido (en mv) el ruido se mide integrando los picos del

cromatograma debidos a uscilaciones de la liacutenea hase entre el minuto () yel minuto 10 de la

elucioacuten que se realizoacute con fase moacutevil

IQS-CROMA PNT-A-xxxx 1 R-96

131oacute

OBSERVACIONES

la verificacioacuten del buen funcionamiento del cromatoacutegrafo se logra comparando el perfil del

cromatograma obtenido al aplicar la mezcla de prueba (P2) con aquel considerado como

estaacutendar para el equipo asiacute mismo con la comparacioacuten de la relacioacuten sentildealruido para cada

pico con aquella considerada adecuada para el instrumento y ademaacutes con la comprobacioacuten

de que los valores de los paraacutemetros dados en el informe se asemejan a aquellos propios del

cromatoacutegrafo

Finalmente es indispensable el caacutelculo de la repetibilidad del equipo como tambieacuten del

rango lineal ( a partir de la graacutefica de los factores de respuesta) del liacutemite ele deteccioacuten y del

liacutemite de cuantificacioacuten para cada sustancia del patroacuten de prueba estos paraacutemetros se

calculan y se expresan tal como estaacute determinado en el apartado de definiciones

ANEXOS

n01 Archivo DET (integracioacuten) del Gynkosoft

n2 Archivo PRM (infonne) del Gynkosoll

n3 Archivo OET (integracioacuten) del ruido del instrumento

n4 Cromatograma de la mezcla de prueba

nS Cromatograma del liacutemite de cuantificacioacuten

n6 Cromatograma del ruido dd cromatoacutegrafo

n7 Representacioacuten de los factores de respuesta para el I3ifenilo en el HP-I 050

Archivo DET (integracioacuten de los picos) del sistema de tratamiento de

datos

Number of entries 5 File t it le DETHP

No Time Parameter Name Parameter Value

1 0000 Minimum Area 00000002 0000 Minimum Width 00000003 0000 Minimum Height 10000004 0000 Inhibit Integration On5 3000 Inhibit Integration Off

Archivo PRM (informe) del sistema de tratamiento de datos

File title testPRMHPI050

Signal name Time window from Signal window from Report unidentified peaks Dead time Relative area threshold

AD-5 0000 to 10000 [min]AUTO to AUTO On 00 min 00

~chivo iexcljET (integracioacuten del ruido) del sistema de tratamiento de datosJ

Number of entries 5 File title DETHP

No Time Parameter Name Parameter Value

1 2 3 4 5middot

0000 0000 0000 0000

10000

Minimum Area Minimum Width Minimum HeightInhibit IntegrationInhibit Integration

0000000 0000000 0000000 On Off

Cromatograma de la mezcla de prueba del test de verificacioacuten

325 ~-------------------------------------------------------------mV

200

100

AD-5 254 nm

I

1------------- ----1 U U v --------------J min

25 +-----~----_----~----~_----_----~----~----_r----~-----~ 00 10 20 30 40 50 60 70 80 90 10 O

Cromatogram~ del liacutemite de cuantificacioacuten

5020 ~---------------------------------------~--------------------~~ AD-5

5000 254 nm

4950

4900

4840 +-----~----_----~----__----_----_----~----_r----~----~ mln

00 10 20 30 40 50 60 70 80 9 O 10 O

Cromatograma del ruido del instrumento

49000 -------------------------------------------------------------~ mV AD-5 254 nm

48900

48750

4B600

48500 +-____~--~_r----~----~------_----_----~----~----_--m~in~1 00 1Jl 20 30 10 50 60 70 80 9 O 10 O

- - __ - --shy

FACTORES DE RESPUESTA

factores de respuesta

04 r-------------------------------------~

03

02 I 01 i~~nl_H_ ____iexcl

O ~~L-__~~~~~__~~~~~~__~~_=~~

10 100 1000 masa (ng)

CromatOgrafo LIquido HP-1050 Hmite deteccioacuten = 0423 ng limite cuantificacioacuten = 1411 ng

- -1- ------------------------------shy

Graacutefica de factores de respuesta para el Bifenilo

IINIVfSIDAO t lACIONAL DE COLOMBIA

ANEXO Ndeg3 PNT de aplicacioacuten del test de columnas de HPLC (fase

inversa) - -- _ - - - --------- ---shy

~ ~~--------~-------------------------------------

1 PNT-i-xxxx IR-96IQS-CROMi

oplicaciuacuten de un lesl para columlleacutels (k cromalografia liacutequida IIPI e

I (ras~ inwrsa)

1113

FECHA 240696 REDACTADO POR Jair (laviria rango

fECHA 190796 REVISADO POR D R rranccsc Broto Puig

FECI lA APROBADO POR

PERSONAS CON COPIA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBI

J bull- IIEP Q

iexclIQS-CROMA PNT-A-xxxx I R-96

iacutetlliexclO Aplicacioacuten de un test r ara columnas de cromatografia liacutequida HPLC

I (fase inversa)

21 3

FUNOAMENTO

Aplicacioacuten de un test que comprende solutos neutros aacutecidos y baacutesicos para columnas de I

cromatografla H PC (fase inversa) que perm i ta clasi licarlas compararlas y veri ricar su

estaco en un momento determinado por medio de la observacioacuten de paraacutemetros tales como

Nuacutemero de platos teoacutericos (N) asimetriacutea de pico (s) factor de capacidad (k) selectividad (

ex) y altura de plato reducida (h) El test debe tambieacuten dar la posihilidad de decidir cuales

columnas son equivalentes entre siacute y escoger la columna adecuada para cada tipo de aacutenaacuteli ~ is

REFERENCIA

Fichas teacutecnicas de las casas comerciales que acompantildean a las columnas

DEFINICIONES

bull N Iacutelmero de platos teuacutericos (N l

t j Tiempo de retencioacuten dd snluto (tiempo que transcurre desde el momento de la inyecciuacuten

hasta el instante de la c1ucioacuten del compuesto)

V Jigt Anchura clel pico cromatograacutelico medida a la mitad de la altura

IQS-CROMA PNT-A-xxxx lR-96

VD

bull Asimltriacutea de pico ()

s = 1+1gt 2x II

ordf y h se miden al 5 ele la altura de pico y son las anchuras del pico a mano izquierda y a

mano derecha respectivamente de la pcrpendicular trazada desde el miexclximo del pico

bull Factor de capacidad (k)

k= r-rl ((1

t 1( Tiempo de retencioacuten de un soluto retenido por el relleno de la columna

t Tiempo muerto del sistema tiempo al cual se eluye un componente no retenido

bull Altura de plato reducida (h)

h = 1L1

H Altura de un plato teoacuterico LN siendo N el nuacutemero de platos y L la longitud de la

columna

d Oiaacutemetro de partiacutecula del relkno de la columna

bull sdcctividad (a)

Fartnr (Il capac idad dc l Sllllltu B k lI

k iexcl Factor de capacidad del sol lito A

LI soluto A elllye antes que el n

IQS-CROMA PNT-A-xxxx 1 R-96

131oacute

OBSERVACIONES

la verificacioacuten del buen funcionamiento del cromatoacutegrafo se logra comparando el perfil del

cromatograma obtenido al aplicar la mezcla de prueba (P2) con aquel considerado como

estaacutendar para el equipo asiacute mismo con la comparacioacuten de la relacioacuten sentildealruido para cada

pico con aquella considerada adecuada para el instrumento y ademaacutes con la comprobacioacuten

de que los valores de los paraacutemetros dados en el informe se asemejan a aquellos propios del

cromatoacutegrafo

Finalmente es indispensable el caacutelculo de la repetibilidad del equipo como tambieacuten del

rango lineal ( a partir de la graacutefica de los factores de respuesta) del liacutemite ele deteccioacuten y del

liacutemite de cuantificacioacuten para cada sustancia del patroacuten de prueba estos paraacutemetros se

calculan y se expresan tal como estaacute determinado en el apartado de definiciones

ANEXOS

n01 Archivo DET (integracioacuten) del Gynkosoft

n2 Archivo PRM (infonne) del Gynkosoll

n3 Archivo OET (integracioacuten) del ruido del instrumento

n4 Cromatograma de la mezcla de prueba

nS Cromatograma del liacutemite de cuantificacioacuten

n6 Cromatograma del ruido dd cromatoacutegrafo

n7 Representacioacuten de los factores de respuesta para el I3ifenilo en el HP-I 050

Archivo DET (integracioacuten de los picos) del sistema de tratamiento de

datos

Number of entries 5 File t it le DETHP

No Time Parameter Name Parameter Value

1 0000 Minimum Area 00000002 0000 Minimum Width 00000003 0000 Minimum Height 10000004 0000 Inhibit Integration On5 3000 Inhibit Integration Off

Archivo PRM (informe) del sistema de tratamiento de datos

File title testPRMHPI050

Signal name Time window from Signal window from Report unidentified peaks Dead time Relative area threshold

AD-5 0000 to 10000 [min]AUTO to AUTO On 00 min 00

~chivo iexcljET (integracioacuten del ruido) del sistema de tratamiento de datosJ

Number of entries 5 File title DETHP

No Time Parameter Name Parameter Value

1 2 3 4 5middot

0000 0000 0000 0000

10000

Minimum Area Minimum Width Minimum HeightInhibit IntegrationInhibit Integration

0000000 0000000 0000000 On Off

Cromatograma de la mezcla de prueba del test de verificacioacuten

325 ~-------------------------------------------------------------mV

200

100

AD-5 254 nm

I

1------------- ----1 U U v --------------J min

25 +-----~----_----~----~_----_----~----~----_r----~-----~ 00 10 20 30 40 50 60 70 80 90 10 O

Cromatogram~ del liacutemite de cuantificacioacuten

5020 ~---------------------------------------~--------------------~~ AD-5

5000 254 nm

4950

4900

4840 +-----~----_----~----__----_----_----~----_r----~----~ mln

00 10 20 30 40 50 60 70 80 9 O 10 O

Cromatograma del ruido del instrumento

49000 -------------------------------------------------------------~ mV AD-5 254 nm

48900

48750

4B600

48500 +-____~--~_r----~----~------_----_----~----~----_--m~in~1 00 1Jl 20 30 10 50 60 70 80 9 O 10 O

- - __ - --shy

FACTORES DE RESPUESTA

factores de respuesta

04 r-------------------------------------~

03

02 I 01 i~~nl_H_ ____iexcl

O ~~L-__~~~~~__~~~~~~__~~_=~~

10 100 1000 masa (ng)

CromatOgrafo LIquido HP-1050 Hmite deteccioacuten = 0423 ng limite cuantificacioacuten = 1411 ng

- -1- ------------------------------shy

Graacutefica de factores de respuesta para el Bifenilo

IINIVfSIDAO t lACIONAL DE COLOMBIA

ANEXO Ndeg3 PNT de aplicacioacuten del test de columnas de HPLC (fase

inversa) - -- _ - - - --------- ---shy

~ ~~--------~-------------------------------------

1 PNT-i-xxxx IR-96IQS-CROMi

oplicaciuacuten de un lesl para columlleacutels (k cromalografia liacutequida IIPI e

I (ras~ inwrsa)

1113

FECHA 240696 REDACTADO POR Jair (laviria rango

fECHA 190796 REVISADO POR D R rranccsc Broto Puig

FECI lA APROBADO POR

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J bull- IIEP Q

iexclIQS-CROMA PNT-A-xxxx I R-96

iacutetlliexclO Aplicacioacuten de un test r ara columnas de cromatografia liacutequida HPLC

I (fase inversa)

21 3

FUNOAMENTO

Aplicacioacuten de un test que comprende solutos neutros aacutecidos y baacutesicos para columnas de I

cromatografla H PC (fase inversa) que perm i ta clasi licarlas compararlas y veri ricar su

estaco en un momento determinado por medio de la observacioacuten de paraacutemetros tales como

Nuacutemero de platos teoacutericos (N) asimetriacutea de pico (s) factor de capacidad (k) selectividad (

ex) y altura de plato reducida (h) El test debe tambieacuten dar la posihilidad de decidir cuales

columnas son equivalentes entre siacute y escoger la columna adecuada para cada tipo de aacutenaacuteli ~ is

REFERENCIA

Fichas teacutecnicas de las casas comerciales que acompantildean a las columnas

DEFINICIONES

bull N Iacutelmero de platos teuacutericos (N l

t j Tiempo de retencioacuten dd snluto (tiempo que transcurre desde el momento de la inyecciuacuten

hasta el instante de la c1ucioacuten del compuesto)

V Jigt Anchura clel pico cromatograacutelico medida a la mitad de la altura

IQS-CROMA PNT-A-xxxx lR-96

VD

bull Asimltriacutea de pico ()

s = 1+1gt 2x II

ordf y h se miden al 5 ele la altura de pico y son las anchuras del pico a mano izquierda y a

mano derecha respectivamente de la pcrpendicular trazada desde el miexclximo del pico

bull Factor de capacidad (k)

k= r-rl ((1

t 1( Tiempo de retencioacuten de un soluto retenido por el relleno de la columna

t Tiempo muerto del sistema tiempo al cual se eluye un componente no retenido

bull Altura de plato reducida (h)

h = 1L1

H Altura de un plato teoacuterico LN siendo N el nuacutemero de platos y L la longitud de la

columna

d Oiaacutemetro de partiacutecula del relkno de la columna

bull sdcctividad (a)

Fartnr (Il capac idad dc l Sllllltu B k lI

k iexcl Factor de capacidad del sol lito A

LI soluto A elllye antes que el n

Archivo DET (integracioacuten de los picos) del sistema de tratamiento de

datos

Number of entries 5 File t it le DETHP

No Time Parameter Name Parameter Value

1 0000 Minimum Area 00000002 0000 Minimum Width 00000003 0000 Minimum Height 10000004 0000 Inhibit Integration On5 3000 Inhibit Integration Off

Archivo PRM (informe) del sistema de tratamiento de datos

File title testPRMHPI050

Signal name Time window from Signal window from Report unidentified peaks Dead time Relative area threshold

AD-5 0000 to 10000 [min]AUTO to AUTO On 00 min 00

~chivo iexcljET (integracioacuten del ruido) del sistema de tratamiento de datosJ

Number of entries 5 File title DETHP

No Time Parameter Name Parameter Value

1 2 3 4 5middot

0000 0000 0000 0000

10000

Minimum Area Minimum Width Minimum HeightInhibit IntegrationInhibit Integration

0000000 0000000 0000000 On Off

Cromatograma de la mezcla de prueba del test de verificacioacuten

325 ~-------------------------------------------------------------mV

200

100

AD-5 254 nm

I

1------------- ----1 U U v --------------J min

25 +-----~----_----~----~_----_----~----~----_r----~-----~ 00 10 20 30 40 50 60 70 80 90 10 O

Cromatogram~ del liacutemite de cuantificacioacuten

5020 ~---------------------------------------~--------------------~~ AD-5

5000 254 nm

4950

4900

4840 +-----~----_----~----__----_----_----~----_r----~----~ mln

00 10 20 30 40 50 60 70 80 9 O 10 O

Cromatograma del ruido del instrumento

49000 -------------------------------------------------------------~ mV AD-5 254 nm

48900

48750

4B600

48500 +-____~--~_r----~----~------_----_----~----~----_--m~in~1 00 1Jl 20 30 10 50 60 70 80 9 O 10 O

- - __ - --shy

FACTORES DE RESPUESTA

factores de respuesta

04 r-------------------------------------~

03

02 I 01 i~~nl_H_ ____iexcl

O ~~L-__~~~~~__~~~~~~__~~_=~~

10 100 1000 masa (ng)

CromatOgrafo LIquido HP-1050 Hmite deteccioacuten = 0423 ng limite cuantificacioacuten = 1411 ng

- -1- ------------------------------shy

Graacutefica de factores de respuesta para el Bifenilo

IINIVfSIDAO t lACIONAL DE COLOMBIA

ANEXO Ndeg3 PNT de aplicacioacuten del test de columnas de HPLC (fase

inversa) - -- _ - - - --------- ---shy

~ ~~--------~-------------------------------------

1 PNT-i-xxxx IR-96IQS-CROMi

oplicaciuacuten de un lesl para columlleacutels (k cromalografia liacutequida IIPI e

I (ras~ inwrsa)

1113

FECHA 240696 REDACTADO POR Jair (laviria rango

fECHA 190796 REVISADO POR D R rranccsc Broto Puig

FECI lA APROBADO POR

PERSONAS CON COPIA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBI

J bull- IIEP Q

iexclIQS-CROMA PNT-A-xxxx I R-96

iacutetlliexclO Aplicacioacuten de un test r ara columnas de cromatografia liacutequida HPLC

I (fase inversa)

21 3

FUNOAMENTO

Aplicacioacuten de un test que comprende solutos neutros aacutecidos y baacutesicos para columnas de I

cromatografla H PC (fase inversa) que perm i ta clasi licarlas compararlas y veri ricar su

estaco en un momento determinado por medio de la observacioacuten de paraacutemetros tales como

Nuacutemero de platos teoacutericos (N) asimetriacutea de pico (s) factor de capacidad (k) selectividad (

ex) y altura de plato reducida (h) El test debe tambieacuten dar la posihilidad de decidir cuales

columnas son equivalentes entre siacute y escoger la columna adecuada para cada tipo de aacutenaacuteli ~ is

REFERENCIA

Fichas teacutecnicas de las casas comerciales que acompantildean a las columnas

DEFINICIONES

bull N Iacutelmero de platos teuacutericos (N l

t j Tiempo de retencioacuten dd snluto (tiempo que transcurre desde el momento de la inyecciuacuten

hasta el instante de la c1ucioacuten del compuesto)

V Jigt Anchura clel pico cromatograacutelico medida a la mitad de la altura

IQS-CROMA PNT-A-xxxx lR-96

VD

bull Asimltriacutea de pico ()

s = 1+1gt 2x II

ordf y h se miden al 5 ele la altura de pico y son las anchuras del pico a mano izquierda y a

mano derecha respectivamente de la pcrpendicular trazada desde el miexclximo del pico

bull Factor de capacidad (k)

k= r-rl ((1

t 1( Tiempo de retencioacuten de un soluto retenido por el relleno de la columna

t Tiempo muerto del sistema tiempo al cual se eluye un componente no retenido

bull Altura de plato reducida (h)

h = 1L1

H Altura de un plato teoacuterico LN siendo N el nuacutemero de platos y L la longitud de la

columna

d Oiaacutemetro de partiacutecula del relkno de la columna

bull sdcctividad (a)

Fartnr (Il capac idad dc l Sllllltu B k lI

k iexcl Factor de capacidad del sol lito A

LI soluto A elllye antes que el n

Cromatograma de la mezcla de prueba del test de verificacioacuten

325 ~-------------------------------------------------------------mV

200

100

AD-5 254 nm

I

1------------- ----1 U U v --------------J min

25 +-----~----_----~----~_----_----~----~----_r----~-----~ 00 10 20 30 40 50 60 70 80 90 10 O

Cromatogram~ del liacutemite de cuantificacioacuten

5020 ~---------------------------------------~--------------------~~ AD-5

5000 254 nm

4950

4900

4840 +-----~----_----~----__----_----_----~----_r----~----~ mln

00 10 20 30 40 50 60 70 80 9 O 10 O

Cromatograma del ruido del instrumento

49000 -------------------------------------------------------------~ mV AD-5 254 nm

48900

48750

4B600

48500 +-____~--~_r----~----~------_----_----~----~----_--m~in~1 00 1Jl 20 30 10 50 60 70 80 9 O 10 O

- - __ - --shy

FACTORES DE RESPUESTA

factores de respuesta

04 r-------------------------------------~

03

02 I 01 i~~nl_H_ ____iexcl

O ~~L-__~~~~~__~~~~~~__~~_=~~

10 100 1000 masa (ng)

CromatOgrafo LIquido HP-1050 Hmite deteccioacuten = 0423 ng limite cuantificacioacuten = 1411 ng

- -1- ------------------------------shy

Graacutefica de factores de respuesta para el Bifenilo

IINIVfSIDAO t lACIONAL DE COLOMBIA

ANEXO Ndeg3 PNT de aplicacioacuten del test de columnas de HPLC (fase

inversa) - -- _ - - - --------- ---shy

~ ~~--------~-------------------------------------

1 PNT-i-xxxx IR-96IQS-CROMi

oplicaciuacuten de un lesl para columlleacutels (k cromalografia liacutequida IIPI e

I (ras~ inwrsa)

1113

FECHA 240696 REDACTADO POR Jair (laviria rango

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FECI lA APROBADO POR

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBI

J bull- IIEP Q

iexclIQS-CROMA PNT-A-xxxx I R-96

iacutetlliexclO Aplicacioacuten de un test r ara columnas de cromatografia liacutequida HPLC

I (fase inversa)

21 3

FUNOAMENTO

Aplicacioacuten de un test que comprende solutos neutros aacutecidos y baacutesicos para columnas de I

cromatografla H PC (fase inversa) que perm i ta clasi licarlas compararlas y veri ricar su

estaco en un momento determinado por medio de la observacioacuten de paraacutemetros tales como

Nuacutemero de platos teoacutericos (N) asimetriacutea de pico (s) factor de capacidad (k) selectividad (

ex) y altura de plato reducida (h) El test debe tambieacuten dar la posihilidad de decidir cuales

columnas son equivalentes entre siacute y escoger la columna adecuada para cada tipo de aacutenaacuteli ~ is

REFERENCIA

Fichas teacutecnicas de las casas comerciales que acompantildean a las columnas

DEFINICIONES

bull N Iacutelmero de platos teuacutericos (N l

t j Tiempo de retencioacuten dd snluto (tiempo que transcurre desde el momento de la inyecciuacuten

hasta el instante de la c1ucioacuten del compuesto)

V Jigt Anchura clel pico cromatograacutelico medida a la mitad de la altura

IQS-CROMA PNT-A-xxxx lR-96

VD

bull Asimltriacutea de pico ()

s = 1+1gt 2x II

ordf y h se miden al 5 ele la altura de pico y son las anchuras del pico a mano izquierda y a

mano derecha respectivamente de la pcrpendicular trazada desde el miexclximo del pico

bull Factor de capacidad (k)

k= r-rl ((1

t 1( Tiempo de retencioacuten de un soluto retenido por el relleno de la columna

t Tiempo muerto del sistema tiempo al cual se eluye un componente no retenido

bull Altura de plato reducida (h)

h = 1L1

H Altura de un plato teoacuterico LN siendo N el nuacutemero de platos y L la longitud de la

columna

d Oiaacutemetro de partiacutecula del relkno de la columna

bull sdcctividad (a)

Fartnr (Il capac idad dc l Sllllltu B k lI

k iexcl Factor de capacidad del sol lito A

LI soluto A elllye antes que el n

- - __ - --shy

FACTORES DE RESPUESTA

factores de respuesta

04 r-------------------------------------~

03

02 I 01 i~~nl_H_ ____iexcl

O ~~L-__~~~~~__~~~~~~__~~_=~~

10 100 1000 masa (ng)

CromatOgrafo LIquido HP-1050 Hmite deteccioacuten = 0423 ng limite cuantificacioacuten = 1411 ng

- -1- ------------------------------shy

Graacutefica de factores de respuesta para el Bifenilo

IINIVfSIDAO t lACIONAL DE COLOMBIA

ANEXO Ndeg3 PNT de aplicacioacuten del test de columnas de HPLC (fase

inversa) - -- _ - - - --------- ---shy

~ ~~--------~-------------------------------------

1 PNT-i-xxxx IR-96IQS-CROMi

oplicaciuacuten de un lesl para columlleacutels (k cromalografia liacutequida IIPI e

I (ras~ inwrsa)

1113

FECHA 240696 REDACTADO POR Jair (laviria rango

fECHA 190796 REVISADO POR D R rranccsc Broto Puig

FECI lA APROBADO POR

PERSONAS CON COPIA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBI

J bull- IIEP Q

iexclIQS-CROMA PNT-A-xxxx I R-96

iacutetlliexclO Aplicacioacuten de un test r ara columnas de cromatografia liacutequida HPLC

I (fase inversa)

21 3

FUNOAMENTO

Aplicacioacuten de un test que comprende solutos neutros aacutecidos y baacutesicos para columnas de I

cromatografla H PC (fase inversa) que perm i ta clasi licarlas compararlas y veri ricar su

estaco en un momento determinado por medio de la observacioacuten de paraacutemetros tales como

Nuacutemero de platos teoacutericos (N) asimetriacutea de pico (s) factor de capacidad (k) selectividad (

ex) y altura de plato reducida (h) El test debe tambieacuten dar la posihilidad de decidir cuales

columnas son equivalentes entre siacute y escoger la columna adecuada para cada tipo de aacutenaacuteli ~ is

REFERENCIA

Fichas teacutecnicas de las casas comerciales que acompantildean a las columnas

DEFINICIONES

bull N Iacutelmero de platos teuacutericos (N l

t j Tiempo de retencioacuten dd snluto (tiempo que transcurre desde el momento de la inyecciuacuten

hasta el instante de la c1ucioacuten del compuesto)

V Jigt Anchura clel pico cromatograacutelico medida a la mitad de la altura

IQS-CROMA PNT-A-xxxx lR-96

VD

bull Asimltriacutea de pico ()

s = 1+1gt 2x II

ordf y h se miden al 5 ele la altura de pico y son las anchuras del pico a mano izquierda y a

mano derecha respectivamente de la pcrpendicular trazada desde el miexclximo del pico

bull Factor de capacidad (k)

k= r-rl ((1

t 1( Tiempo de retencioacuten de un soluto retenido por el relleno de la columna

t Tiempo muerto del sistema tiempo al cual se eluye un componente no retenido

bull Altura de plato reducida (h)

h = 1L1

H Altura de un plato teoacuterico LN siendo N el nuacutemero de platos y L la longitud de la

columna

d Oiaacutemetro de partiacutecula del relkno de la columna

bull sdcctividad (a)

Fartnr (Il capac idad dc l Sllllltu B k lI

k iexcl Factor de capacidad del sol lito A

LI soluto A elllye antes que el n

ANEXO Ndeg3 PNT de aplicacioacuten del test de columnas de HPLC (fase

inversa) - -- _ - - - --------- ---shy

~ ~~--------~-------------------------------------

1 PNT-i-xxxx IR-96IQS-CROMi

oplicaciuacuten de un lesl para columlleacutels (k cromalografia liacutequida IIPI e

I (ras~ inwrsa)

1113

FECHA 240696 REDACTADO POR Jair (laviria rango

fECHA 190796 REVISADO POR D R rranccsc Broto Puig

FECI lA APROBADO POR

PERSONAS CON COPIA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBI

J bull- IIEP Q

iexclIQS-CROMA PNT-A-xxxx I R-96

iacutetlliexclO Aplicacioacuten de un test r ara columnas de cromatografia liacutequida HPLC

I (fase inversa)

21 3

FUNOAMENTO

Aplicacioacuten de un test que comprende solutos neutros aacutecidos y baacutesicos para columnas de I

cromatografla H PC (fase inversa) que perm i ta clasi licarlas compararlas y veri ricar su

estaco en un momento determinado por medio de la observacioacuten de paraacutemetros tales como

Nuacutemero de platos teoacutericos (N) asimetriacutea de pico (s) factor de capacidad (k) selectividad (

ex) y altura de plato reducida (h) El test debe tambieacuten dar la posihilidad de decidir cuales

columnas son equivalentes entre siacute y escoger la columna adecuada para cada tipo de aacutenaacuteli ~ is

REFERENCIA

Fichas teacutecnicas de las casas comerciales que acompantildean a las columnas

DEFINICIONES

bull N Iacutelmero de platos teuacutericos (N l

t j Tiempo de retencioacuten dd snluto (tiempo que transcurre desde el momento de la inyecciuacuten

hasta el instante de la c1ucioacuten del compuesto)

V Jigt Anchura clel pico cromatograacutelico medida a la mitad de la altura

IQS-CROMA PNT-A-xxxx lR-96

VD

bull Asimltriacutea de pico ()

s = 1+1gt 2x II

ordf y h se miden al 5 ele la altura de pico y son las anchuras del pico a mano izquierda y a

mano derecha respectivamente de la pcrpendicular trazada desde el miexclximo del pico

bull Factor de capacidad (k)

k= r-rl ((1

t 1( Tiempo de retencioacuten de un soluto retenido por el relleno de la columna

t Tiempo muerto del sistema tiempo al cual se eluye un componente no retenido

bull Altura de plato reducida (h)

h = 1L1

H Altura de un plato teoacuterico LN siendo N el nuacutemero de platos y L la longitud de la

columna

d Oiaacutemetro de partiacutecula del relkno de la columna

bull sdcctividad (a)

Fartnr (Il capac idad dc l Sllllltu B k lI

k iexcl Factor de capacidad del sol lito A

LI soluto A elllye antes que el n

~ ~~--------~-------------------------------------

1 PNT-i-xxxx IR-96IQS-CROMi

oplicaciuacuten de un lesl para columlleacutels (k cromalografia liacutequida IIPI e

I (ras~ inwrsa)

1113

FECHA 240696 REDACTADO POR Jair (laviria rango

fECHA 190796 REVISADO POR D R rranccsc Broto Puig

FECI lA APROBADO POR

PERSONAS CON COPIA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBI

J bull- IIEP Q

iexclIQS-CROMA PNT-A-xxxx I R-96

iacutetlliexclO Aplicacioacuten de un test r ara columnas de cromatografia liacutequida HPLC

I (fase inversa)

21 3

FUNOAMENTO

Aplicacioacuten de un test que comprende solutos neutros aacutecidos y baacutesicos para columnas de I

cromatografla H PC (fase inversa) que perm i ta clasi licarlas compararlas y veri ricar su

estaco en un momento determinado por medio de la observacioacuten de paraacutemetros tales como

Nuacutemero de platos teoacutericos (N) asimetriacutea de pico (s) factor de capacidad (k) selectividad (

ex) y altura de plato reducida (h) El test debe tambieacuten dar la posihilidad de decidir cuales

columnas son equivalentes entre siacute y escoger la columna adecuada para cada tipo de aacutenaacuteli ~ is

REFERENCIA

Fichas teacutecnicas de las casas comerciales que acompantildean a las columnas

DEFINICIONES

bull N Iacutelmero de platos teuacutericos (N l

t j Tiempo de retencioacuten dd snluto (tiempo que transcurre desde el momento de la inyecciuacuten

hasta el instante de la c1ucioacuten del compuesto)

V Jigt Anchura clel pico cromatograacutelico medida a la mitad de la altura

IQS-CROMA PNT-A-xxxx lR-96

VD

bull Asimltriacutea de pico ()

s = 1+1gt 2x II

ordf y h se miden al 5 ele la altura de pico y son las anchuras del pico a mano izquierda y a

mano derecha respectivamente de la pcrpendicular trazada desde el miexclximo del pico

bull Factor de capacidad (k)

k= r-rl ((1

t 1( Tiempo de retencioacuten de un soluto retenido por el relleno de la columna

t Tiempo muerto del sistema tiempo al cual se eluye un componente no retenido

bull Altura de plato reducida (h)

h = 1L1

H Altura de un plato teoacuterico LN siendo N el nuacutemero de platos y L la longitud de la

columna

d Oiaacutemetro de partiacutecula del relkno de la columna

bull sdcctividad (a)

Fartnr (Il capac idad dc l Sllllltu B k lI

k iexcl Factor de capacidad del sol lito A

LI soluto A elllye antes que el n

iexclIQS-CROMA PNT-A-xxxx I R-96

iacutetlliexclO Aplicacioacuten de un test r ara columnas de cromatografia liacutequida HPLC

I (fase inversa)

21 3

FUNOAMENTO

Aplicacioacuten de un test que comprende solutos neutros aacutecidos y baacutesicos para columnas de I

cromatografla H PC (fase inversa) que perm i ta clasi licarlas compararlas y veri ricar su

estaco en un momento determinado por medio de la observacioacuten de paraacutemetros tales como

Nuacutemero de platos teoacutericos (N) asimetriacutea de pico (s) factor de capacidad (k) selectividad (

ex) y altura de plato reducida (h) El test debe tambieacuten dar la posihilidad de decidir cuales

columnas son equivalentes entre siacute y escoger la columna adecuada para cada tipo de aacutenaacuteli ~ is

REFERENCIA

Fichas teacutecnicas de las casas comerciales que acompantildean a las columnas

DEFINICIONES

bull N Iacutelmero de platos teuacutericos (N l

t j Tiempo de retencioacuten dd snluto (tiempo que transcurre desde el momento de la inyecciuacuten

hasta el instante de la c1ucioacuten del compuesto)

V Jigt Anchura clel pico cromatograacutelico medida a la mitad de la altura

IQS-CROMA PNT-A-xxxx lR-96

VD

bull Asimltriacutea de pico ()

s = 1+1gt 2x II

ordf y h se miden al 5 ele la altura de pico y son las anchuras del pico a mano izquierda y a

mano derecha respectivamente de la pcrpendicular trazada desde el miexclximo del pico

bull Factor de capacidad (k)

k= r-rl ((1

t 1( Tiempo de retencioacuten de un soluto retenido por el relleno de la columna

t Tiempo muerto del sistema tiempo al cual se eluye un componente no retenido

bull Altura de plato reducida (h)

h = 1L1

H Altura de un plato teoacuterico LN siendo N el nuacutemero de platos y L la longitud de la

columna

d Oiaacutemetro de partiacutecula del relkno de la columna

bull sdcctividad (a)

Fartnr (Il capac idad dc l Sllllltu B k lI

k iexcl Factor de capacidad del sol lito A

LI soluto A elllye antes que el n

IQS-CROMA PNT-A-xxxx lR-96

VD

bull Asimltriacutea de pico ()

s = 1+1gt 2x II

ordf y h se miden al 5 ele la altura de pico y son las anchuras del pico a mano izquierda y a

mano derecha respectivamente de la pcrpendicular trazada desde el miexclximo del pico

bull Factor de capacidad (k)

k= r-rl ((1

t 1( Tiempo de retencioacuten de un soluto retenido por el relleno de la columna

t Tiempo muerto del sistema tiempo al cual se eluye un componente no retenido

bull Altura de plato reducida (h)

h = 1L1

H Altura de un plato teoacuterico LN siendo N el nuacutemero de platos y L la longitud de la

columna

d Oiaacutemetro de partiacutecula del relkno de la columna

bull sdcctividad (a)

Fartnr (Il capac idad dc l Sllllltu B k lI

k iexcl Factor de capacidad del sol lito A

LI soluto A elllye antes que el n