isolasi senyawa flavonoid ekstrak daun jambu biji

7/28/2019 Isolasi Senyawa Flavonoid Ekstrak Daun Jambu Biji

1/50

1

ISOLASI SENYAWA FLAVONOID EKSTRAK DAUN JAMBU

BIJI (Psidium guajava L)

Disusun Dalam Rangka Memenuhi Tugas Mata Kuliah PKL

Disusun Oleh :

Nama : Ela Nurlela As

N I M : G.20.10.0019

DEPARTEMEN FARMASI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS MATHLAUL ANWAR

BANTEN

2013


2/50

2

LEMBAR PENGESAHAN

ISOLASI SENYAWA FLAVONOID EKSTRAK DAUN JAMBU

BIJI (Psidium guajava L)

Disusun Dalam Rangka Memenuhi Tugas Mata Kuliah PKL

Disusun Oleh :


N I M : G.20.10.0019

Mengetahui,

Dosen Pembimbing

(Agus Kurniawan,S.Si)

ii


3/50

3

ABSTRACT

Isolation of flavonoids compounds contained in the leaves of Guava(Psidium guajava) is done by maceration using solvents methanol, andextracted the partition with n-hexane solvent. Concentrated methanolextract was chromatographed using a column with a mobile phase n-hexane: ethyl acetate (80:20 v / v) and the stationary phase silica gel 60 G(E.Merck). Compounds obtained purified, amorphous-shaped, brown asmuch as 60 mg. This compound was identified by using infraredspectroscopy (FT-IR), proton nuclear magnetic resonance spectroscopy(1H-NMR) and UV-Visible spectroscopy. Data from the results of thespectrum it can be concluded that the compound is a flavonoid compound.

iii


4/50

4

INTISARI

Isolasi senyawa flavonoida yang terkandung di dalam daun JambuBiji (Psidium guajava) dilakukan dengan cara maserasi denganmenggunakan pelarut metanol, dan diekstraksi partisi dengan pelarut n-heksana. Ekstrak pekat metanol dikromatografi kolom denganmenggunakan fasa gerak n-heksana : etil asetat (80:20 v/v) dan fasa diamsilika gel 60 G (E.Merck). Senyawa yang diperoleh dimurnikan, berbentukamorf, berwarna coklat sebanyak 60 mg. Senyawa ini diidentifikasidengan menggunakan spektroskopi inframerah (FT-IR), spektroskopiresonansi magnetik inti proton (1H-NMR) dan spektroskopi UV-Visible.Data dari hasil spektrum tersebut dapat disimpulkan bahwa senyawatersebut adalah senyawa flavonoid.

iv
http://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpghttp://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpghttp://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpghttp://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpg


5/50

5

PRAKATA

Puji dan syukur marillah kita panjatkan kehadirat Allah SWT, yang

dengan karunianya penyusun dapat menyelesaikan Laporan Field Trip.

Penyusunan Laporan Field Trip ini disusun sebagai salah satu

tugas untuk memenuhi tugas mata kuliah Field Trip di Fakultas MIPA

Universitas Mathlaul Anwar Banten. Yang bersumber dari kegiatan PKL

(Praktek Kerja Lapangan) atau Field Trip.

Penyusun telah mendapatkan bantuan dan bimbingan baik pada

saat penelitian dilapangan juga ketika pembuatan laporan PKL atau Field

Trip ini. Oleh karena itu penyusun mengucapkan terima kasih kepada :

1. Ibu Mujijah, S.Si, M,Sc Selaku Dekan Fakultas MIPA UNMA

BANTEN.

2. Bapak Agus Kurniawan, S.Si Selaku Pembimbing Fakultas MIPA

UNMA BANTEN.

3. Semua pihak yang telah membantu terselesaikannya laporan PKL

atau Field Trip ini.4. Orang tua yang telah mendukung dan membantu baik dari segi

moril maupun materi dalam pembuatan laporan ini.

Akhir kata semoga laporan PKL atau Field Trip ini dapat

bermanfaat khususnya buat penyusun dan memberi sumbangan bagi

dunia ilmu pengetahuan, juga menambah motivasi untuk melakukan

penelitian lebih lanjut.

Pandeglang, Maret 2013

Penyusun,

Ela Nurlela As

v


6/50

6

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL ............................................................................i

LEMBAR PENGESAHAN..................................................................ii

ABSTRACT.........................................................................................iii

INTISARI.............................................................................................iv

PRAKATA ..........................................................................................v

DAFTAR ISI........................................................................................vi

DAFTAR GAMBAR............................................................................viii

DAFTAR TABEL.................................................................................ix

BAB I PENDAHULUAN

A. Latar Belakang ..................................................................1

B. Permasalahan ...................................................................3

C. Tujuan Penelitian ..............................................................3

D. Manfaat Penelitian ............................................................3

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

A. Jambu Biji (Psidium guajava L).........................................4

B. Senyawa Flavonoid...........................................................7

C. Teknik Pemisahan.............................................................16

D. Teknik Spektroskopi..........................................................19

BAB III METODE PENELITIAN

A. Waktu Dan Tempat ...........................................................24

B. Alat dan Bahan .................................................................24

C. Tahapan Penelitian ..........................................................24

D. Rancangan Percobaan dan Analisis Data........................24

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil Penelitian..................................................................29

B. Pembahasan......................................................................31

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan.........................................................................34

B. Saran..................................................................................34

vi


7/50

7

DAFTAR PUSTAKA ..........................................................................35

LAMPIRAN

vii


8/50

8

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1. Jambu Biji (Psidium guajava)............................................4

Gambar 2 Diagram Alir Penelitian......................................................28

viii
http://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpghttp://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpg


9/50

9

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 1 Ciri spektrum golongan flavonoid utama...............................20

Tabel 2 pita absorpsi UV dari flavonoid..............................................21

ix


10/50

1

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Berkembangnya prinsip back to nature dewasa ini, meningkatkan

kecenderungan manusia untuk memanfaatkan bahan alam terutama yang

berasal dari tumbuh-tumbuhan sebagai obat bagi kesehatannya.

Kecenderungan ini meningkat karena beberapa alasan, antara lain

kearifan tradisional yaitu pengetahuan turun temurun tentang

pemanfaatan tumbuhan obat untuk mengatasi penyakit, lebih aman untuk

dikonsumsi dengan efek samping yang lebih kecil dibandingkan obat-

obatan modern yang diproduksi secara kimia sintetik, juga seiring dengan

krisis ekonomi yang melanda Indonesia beberapa tahun belakangan ini,

menyebabkan harga obat-obatan modern tidak terjangkau oleh

masyarakat umum, karena bahan baku obat-obatan, bahan pembantu dan

teknologi hampir semuanya berasal dari luar negeri.

Hasil penelitian menunjukkan bahwa senyawa-senyawa fitokimia

yang terdapat di dalam tanaman sangat bermanfaat bagi kesehatan.

Kadar fitokimia di dalam tanaman umumnya sangat rendah, tetapi

senyawa ini tetap saja dibutuhkan, misalnya sebagai pemberi warna daun,

buah dan bunga, pemberi aroma serta pencegah kerusakan akibat bakteri

atau virus. Fitokimia amat beragam jenisnya, beberapa diantaranya

sudah mulai dikenal oleh masyarakat. Misalnya -karoten, kurkumin,

gingerol, asam elegat, isoflavon, antosianin, kuersetin dan flavonoid.

Jenis sayuran maupun buahbuahan yang berwarna biasanya memiliki

kandungan fitokimia yang tinggi.

Kanker atau tumor ganas merupakan salah satu penyakit yang

sampai saat ini masih belum dapat secara tuntas ditanggulangi oleh ilmu

kedokteran dan masih merupakan penyakit yang sangat ditakuti oleh

masyarakat. Dewasa ini telah banyak berkembang penelitian-penelitian

untuk mencari obat yang dapat mencegah dan mengobati kanker.

1


11/50

2

Pengobatan secara modern baik berupa kemoterapi, radioterapi dan

operasi memerlukan biaya pengobatan yang tidak sedikit, sehingga

banyak yang mencobamencari pengobatan alternatif lain dengan

memanfaatkan tumbuhan obat.

Berbagai macam tumbuhan telah digunakan oleh masyarakat

sebagai ramuan penyembuh kanker, diantaranya tumbuhan tapak dara,

tabat barito, teh hijau, temu putih, keladi tikus, sambiloto, sambung nyawa

dan daun dewa serta banyak lagi tumbuhan lainnya. Melalui berbagai

penelitian yang disarikan oleh Zee-Cheng dari Pusat Medik Universitas

Kansas diketahui senyawa bioaktif yang berperan sebagai antikanker

adalah peptida, oligosakarida, alkaloid, dan polifenol (Winarno 2003).

Polifenol meliputi beberapa golongan senyawa, salah satu diantaranya

adalah golongan flavonoid.

Banyak penelitian yang membuktikan bahwa beberapa senyawa

golongan flavonoid yang diperoleh dari tumbuh-tumbuhan mempunyai

kandungan bioaktivitas yang berpotensi sebagai obat, diantaranya dapat

membantu mencegah kanker dengan menghambat pertumbuhan sel-sel

kanker pada jaringan tubuh yang dikenainya, seperti mirisetin, kuersetin,

luteolin, apigenin, rutin, kaemferol, dan antosianin (Miller 1996; Madhaviet

al. 1998; Katsubeet al. 2003; Knekt et al. 2002; Yoshie 2002; Abdel-Aal

ESM dan P Hucl. 2003; Zhang et al. 2005; dan Liuet al. 2005).

Flavonoida merupakan salah satu golongan fenol alam yang

terbesar. Menurut perkiraan, kira-kira 2% dari seluruh karbon yang

difotosintesis oleh tumbuhan diubah menjadi flavonoida atau senyawa

yang berkaitan erat dengannya. (Markham, 1988). Flavonoida adalah

senyawa yang mengandung C15 terdiri atas dua inti fenolat yang

dihubungkan dengan tiga satuan karbon. (Sastrohamidjojo, 1996).

Flavonoida yang terdapat di dalam tumbuhan dapat digunakan sebagai

pelindung tubuh manusia dari radikal bebas dan dapat mengurangi resiko

penyakit kanker dan peradangan. (Nessa, 2003). Salah satu contoh


12/50

3

flavonoida adalah antosianin yang berperan dalam pewarnaan bunga-

bunga (biru, ungu dan merah). (Manitto, 1992)

Khusus daun Jambu Biji (Psidium guajava) penelitian yang pernah

dilakukan berkisar pada khasiatnya sebagai anti diare. Disamping itu,

jambu biji mempunyai khasiat sebagai anti inflamasi, anti mutagenik, anti

mikroba dan analgesik. Beberepa senyawa kimia yang terkandung dalam

jambu biji antara lain, polifenol, karoten, flavonoid dan tannin.

Berdasarkan hal tersebut peneliti tertarik untuk mengadakan

penelitian yang berjudul Isolasi Senyawa Flavonoid Ekstrak Daun Jambu

Biji (Psidium guajava L).

B. Permasalahan

Berdasarkan latar belakang diatas maka dirumuskan masalah yaitu

1. Bagaimana menentukan kadar senyawa flavonoid pada daun

Jambu Biji (Psidium guajava)?

2. Berapa besar kandungan senyawa flavonoid pada daun Jambu

Biji (Psidium guajava)?

C. Tujuan Penelitian

Penelitian ini bertujuan :

1. Untuk mengetahui kadar senyawa flavonoid pada daun Jambu

Biji (Psidium guajava).

2. Untuk mengetahui seberapa besar kandungan senyawa flavonoid

pada daun Jambu Biji (Psidium guajava).

D. Manfaat Penelitian

Penelitian ini diharapkan dapat memberikan manfaat yaitu :

1. Memberikan informasi ilmiah tentang kadar senyawa flavonoid

yang terkandung pada daun Jambu Biji (Psidium guajava).

2. Bagi mahasiswa, terarahnya kemampuan, kreativitas dan keahlian

di bidang kefarmasian
http://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpghttp://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpghttp://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpghttp://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpghttp://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpghttp://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpghttp://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpghttp://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpghttp://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpghttp://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpghttp://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpghttp://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpghttp://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpghttp://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpghttp://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpghttp://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpg


13/50

4

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

A. Jambu Biji (Psidium guajava L)

1. Taksonomi Tanaman Jambu Biji

Kingdom : Plantae

Divisi : Spermatophyta

Sub divisi : Angiospermae

Kelas : Dicotyledonae

Ordo : Myrtales

Familia : Myrtaceae

Genus : Psidium

Spesies : Psidium guajava L. (Arief ,2010).

Gambar 1. Jambu Biji(Psidium guajava)

2. Morfologi

Jambu Biji (Psidium guajava) banyak tersebar di Asia Tenggara

termasuk Indonesia, sampai Asia Selatan, India dan Srilangka. Jambu biji

termasuk tanaman perdu dan memiliki banyak cabang dan ranting; batang

pohonnya keras. Permukaan kulit luar pohon jambu biji berwarna coklat

dan licin. Apabila kulit kayu jambu biji tersebut dikelupas, akan terlihat

permukaan batang kayunya basah. Bentuk daunnya umumnya bercorak

bulat telur dengan ukuran yang agak besar. Bunganya kecil-kecil

4
http://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpghttp://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpghttp://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpghttp://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpghttp://khasiat.files.wordpress.com/2009/01/jambu1.jpg


14/50

5

berwarna putih dan muncul dari balik ketiak daun. Tanaman ini dapat

tumbuh subur di daerah dataran rendah sampai pada ketinggian 1200

meter diatas permukaan laut. Pada umur 2-3 tahun jambu biji sudah mulai

berbuah. Bijinya banyak dan terdapat pada daging buahnya.

Jambu biji ini akrab juga dengan nama Psidium guajava

(Inggris/Belanda), Jambu klutuk, Bayawas, tetokal, Tokal (Jawa); Jambu

klutuk, Jambu Batu (Sunda), Jambu bender (Madura). (11January 2006).

3. Kandungan Kimia

Buah, daun, dan kulit batang pohon jambu biji mengandung tanin,

sedang pada bunganya tidak banyak mengandung tanin. Daun jambu biji

juga mengandung zat lain kecuali tannin, seperti minyak atsiri, asam

ursolat, asam psidiolat, asam kratogolat, asam oleanolat, asam guajaverin

dan vitamin. Kandungan buah jambu biji (dalam 100 gr), yaitu Kalori 49

kal; Vitamin A 25 SI; Vitamin B1 0,02 mg; Vitamin C 87 mg; Kalsium 14

mg; Hidrat Arang 12,2 gram; Fosfor 28 mg; Besi 1,1 mg; Protein 0,9 mg;

Lemak 0,3 gram; dan Air 86 gram. ( IPTEKnet, 15 Januari, 2007).

Daun jambu biji mengandung total minyak 6% dan minyak atsiri

0,365% [Burkill, 1997], 3,15% resin, 8,5% tannin, dan lain-lain. Komposisi

utama minyak atsiri yaitu -pinene, -pinene limonene, men- thol, terpenyl

acetate, isopropyl alco- hol, longicyclene, caryophyllene, - bisabolene,

caryophyllene oxide,- copanene, farnesene, humulene, selinene,

cardinene and curcumene [Zakaria, 1994]. Minyak atsiri dari daun jambu

biji juga mengandung nerolidiol,-sitosterol, ursolic, crategolic, dan

guayavolic acids. Selain itu juga mengandung minyak atsiri yang kaya

akan cineol dan empat triterpenic acids sebaik ketiga jenis fla-

vonoid yaitu; quercetin, 3-L-4-4- arabinofuranoside (avicularin) dan 3-L-4-

pyranoside dengan aktivitas anti bakteri yang tinggi (Oliver-Bever, 1986).

4. Manfaat

Pada jambu biji mengandung tannin, yang menimbulkan rasa sepat

pada buah yang berfungsi untuk memperlancar sistem pencernaan,

sirkulasi darah, dan berguna untuk menyerang virus. Jambu biji juga
http://www.iptek.net.id/ind/pd_tanobat/view.php?id=134http://www.iptek.net.id/ind/pd_tanobat/view.php?id=134


15/50

6

mengandung kalium yang berfungsi meningkatkan keteraturan denyut

jantung, mengaktifkan kontraksi otot, mengatur pengiriman zat-zat gizi

lainnya ke sel-sel tubuh, mengendalikan keseimbangan cairan pada

jaringan dan sel tubuh serta menurunkan kadar kolesterol total dan

trigliserida darah, serta menurunkan tekanan darah tinggi (hipertensi).

Menurut Dr. James Cerda dengan memakan jambu biji 0,5 1 kg /hari

selama 4 minggu resiko terkena penyakit jantung dapat berkurang

sebesar 16 %.

Dalam jambu biji juga ditemukan likopen yaitu zat nirgizi potensial

lain selain serat. Likopen adalah karatenoid (pigmen penting dalam

tanaman) yang terdapat dalam darah (0,5 mol per liter darah) serta

memiliki aktivitas anti oksidan. Riset-riset epidemologis likopen pada studi

yang dilakukan peneliti Itali, mencakup 2.706 kasus kanker rongga mulut,

tekek, kerongkongan, lambung, usus besar dan dubur, jika mengkonsumsi

likopen yang meningkat, khususnya pada jambu biji yang daging buahnya

berwarna merah, berbiji banyak dan berasa manis mempunyai efek

memberikan perlindungan pada tubuh dari beberapa jenis kanker.

Disamping manfaat jambu biji untuk menjaga kesehatan jantung

dan pembuluh darah serta mencegah munculnya kanker, memperkuat

daya tahan tubuh terhadap serangan penyakit, meningkatkan kesehatan

gusi, gigi dan pembuluh kapiler serta membantu penyerapan zat besi dan

penyembuhan luka. Jambu biji juga berkhasiat anti radang, anti diare dan

menghentikan pendarahan, misalnya pada penderita demam berdarah

dengue (DHF).

Khusus daun jambu biji, penelitian yang pernah dilakukan

umumnya khasiatnya sebagai antidiare. Di samping itu, jambu biji

mempunyai khasiat sebagai anti-inflamasi, antimutagenik, antimikroba dan

analgesik. Beberapa senyawa kimia yang terkandung dalam jambu biji

antara lain polifenol, karoten, flavonoid dan tannin


16/50

7

B. Senyawa Flavonoid

Senyawa-senyawa flavonoid adalah senyawa-senyawa polifenol

yang mempunyai 15 atom karbon, terdiri dari dua cincin benzena yang

dihubungkan menjadi satu oleh rantai linier yang terdiri dari tiga atom

karbon. Senyawa-senyawa flavonoid adalah senyawa 1,3 diaril propana,

senyawa isoflavonoid adalah senyawa 1,2 diaril propana, sedangkan

senyawa-senyawa neoflavonoid adalah 1,1 diaril propana.

Istilah flavonoid diberikan pada suatu golongan besar senyawa

yang berasal dari kelompok senyawa yang paling umum, yaitu senyawa

flavon; suatu jembatan oksigen terdapat diantara cincin A dalam

kedudukan orto, dan atom karbon benzil yang terletak disebelah cincin B.

Senyawa heterosoklik ini, pada tingkat oksidasi yang berbeda terdapat

dalam kebanyakan tumbuhan. Flavon adalah bentuk yang mempunyai

cincin C dengan tingkat oksidasi paling rendah dan dianggap sebagai

struktur induk dalam nomenklatur kelompok senyawa-senyawa ini.

(Manitto, 1981)

Senyawa flavonoid sebenarnya terdapat pada semua bagian

tumbuhan termasuk daun, akar, kayu, kulit, tepung sari, bunga, buah, dan

biji. Kebanyakan flavonoid ini berada di dalam tumbuh-tumbuhan, kecuali

alga. Namun ada juga flavonoid yng terdapat pada hewan, misalnya

dalam kelenjar bau berang-berang dan sekresi lebah. Dalam sayap kupu -

kupu dengan anggapan bahwa flavonoid berasal dari tumbuh-tumbuhan

yang menjadi makanan hewan tersebut dan tidak dibiosintesis di dalam

tubuh mereka. Penyebaran jenis flavonoid pada golongan tumbuhan yang

tersebar yaitu angiospermae, klorofita, fungi, briofita. (Markham, 1988)

1. Struktur dasar senyawa flavonoid

Senyawa flavonoid adalah senyawa yang mengandung C15 terdiri

atas dua inti fenolat yang dihubungkan dengan tiga satuan karbon.

Struktur dasar flavonoid dapat digambarkan sebagai berikut :


17/50

8

Kerangka dasar senyawa flavonoid

Cincin A adalah karakteristik phloroglusinol atau bentuk resorsinol

tersubstitusi.

Namun sering terhidroksilasi lebih lanjut :

Cincin B adalah karakteristik 4-, 3,4-, 3,4,5- terhidroksilasi

R = R = H, R = OH R = H, R = R = OH R = R = R = OH (juga, R = R =

R = H) (Sastrohamidjojo, 1996)

2. Klasifikasi Senyawa Flavonoid

Flavonoid mengandung sistem aromatik yang terkonjugasi

sehingga menunjukkan pita serapan kuat pada daerah spektrum sinar

ultraviolet dan spektrum sinar tampak, umumnya dalam tumbuhan terikat

pada gula yang disebut dengan glikosida.(Harborne, 1996)


18/50

9

Pada flavonoida O-glikosida, satu gugus hidroksil flavonoid (atau

lebih) terikat pada satu gula (lebih) dengan ikatan yang tahan asam.

Glukosa merupakan gula yang paling umum terlibat dan gula lain yang

sering juga terdapat adalah galaktosa, ramnosa, silosa, arabinosa, dan

rutinosa. Waktu yang diperlukan untuk memutuskan suatu gula dari suatu

flavonoid O-glukosida dengan hidrolisis asam ditentukan oleh sifat gula

tersebut.

Pada flavonoid C-glikosida, gula terikat pada atom karbon flavonoid

dan dalam hal ini gula tersebut terikat langsung pada inti benzena dengan

suatu ikatan karbon-karbon yang tahan asam. Gula yang terikat pada

atom C hanya ditemukan pada atom C nomor 6 dan 8 dalam inti flavonoid,

misalnya pada orientin. (Markham, 1988)

Menurut Robinson (1995), flavonoid dapat dikelompokkan

berdasarkan keragaman pada rantai C3 yaitu :

a) Flavonol

Flavonol paling sering terdapat sebagai glikosida, biasanya 3-

glikosida, dan aglikon flavonol yang umum yaitu kamferol, kuersetin, dan

mirisetin yang berkhasiat sebagai antioksidan dan antiimflamasi. Flavonol

lain yang terdapat di alam bebas kebanyakan merupakan variasi struktur

sederhana dari flavonol. Larutan flavonol dalam suasana basa dioksidasi

oleh udara tetapi tidak begitu cepat sehingga penggunaan basa pada

pengerjaannya masih dapat dilakukan.

Struktur flavonol

b) Flavon

Flavon berbeda dengan flavonol dimana pada flavon tidak

terdapat gugusan 3-hidroksi. Hal ini mempunyai serapan UV-nya,


19/50

10

gerakan kromatografi, serta reaksi warnanya. Flavon terdapat juga

sebagai glikosidanya lebih sedikit daripada jenis glikosida pada flavonol.

Flavon yang paling umum dijumpai adalah apigenin dan luteolin. Luteolin

merupakan zat warna yang pertama kali dipakai di Eropa. Jenis yang

paling umum adalah 7-glukosida dan terdapat juga flavon yang terikat

pada gula melalui ikatan karbon-karbon. Contohnya luteolin 8-C-glikosida.

Flavon dianggap sebagai induk dalam nomenklatur kelompok senyawa

flavonoid.

Struktur flavon

c) Isoflavon

Isoflavon merupakan isomer flavon, tetapi jumlahnya sangat sedikit

dan sebagai fitoaleksin yaitu senyawa pelindung yang terbentuk dalam

tumbuhan sebagai pertahanan terhadap serangan penyakit. Isoflavon

sukar dicirikan karena reaksinya tidak khas dengan pereaksi warna

manapun. Beberapa isoflavon (misalnya daidzein) memberikan warna biru

muda cemerlang dengan sinar UV bila diuapi amonia, tetapi kebanyakan

yang lain tampak sebagai bercak lembayung yang pudar dengan amonia

berubah menjadi coklat.

Struktur Isoflavon


20/50

11

d) Flavanon

Flavanon terdistribusi luas di alam. Flavanon terdapat di dalam

kayu, daun dan bunga. Flavanon glikosida merupakan konstituen utama

dari tanaman genus prenus dan buah jeruk; dua glikosida yang paling

lazim adalah neringenin dan hesperitin, terdapat dalam buah anggur dan

jeruk.

Struktur Flavanon

e) Flavanonol

Senyawa ini berkhasiat sebagai antioksidan dan hanya terdapat

sedikit sekali jika dibandingkan dengan flavonoid lain. Sebagian besar

senyawa ini diabaikan karena konsentrasinya rendah dan tidak berwarna.

Struktur Flavanonol

f) Katekin

Katekin terdapat pada seluruh dunia tumbuhan, terutama pada

tumbuhan berkayu. Senyawa ini mudah diperoleh dalam jumlah besar dari

ekstrak kental Uncaria gambir dan daun teh kering yang mengandung

kira-kira 30% senyawa ini. Katekin berkhasiat sebagai antioksidan.

Struktur Katekin


21/50

12

g) Leukoantosianidin

Leukoantosianidin merupakan senyawa tan warna, terutama

terdapat pada tumbuhan berkayu. Senyawa ini jarang terdapat sebagai

glikosida, contohnya melaksidin, apiferol.

Struktur Leukoantosianidin

h) Antosianin

Antosianin merupakan pewarna yang paling penting dan paling

tersebar luas dalam tumbuhan. Pigmen yang berwarna kuat dan larut

dalam air ini adalah penyebab hampir semua warna merah jambu, merah

marak , ungu, dan biru dalam daun, bunga, dan buah pada tumbuhan

tinggi. Secara kimia semua antosianin merupakan turunan suatu struktur

aromatik tunggal yaitu sianidin, dan semuanya terbentuk dari pigmen

sianidin ini dengan penambahan atau pengurangan gugus hidroksil atau

dengan metilasi atau glikosilasi.

Struktur Antosianin

i) Khalkon

Khalkon adalah pigmen fenol kuning yang berwarna coklat kuat

dengan sinar UV bila dikromatografi kertas. Aglikon flavon dapat

dibedakan dari glikosidanya, karena hanya pigmen dalam bentuk glikosida

yang dapat bergerak pada kromatografi kertas dalam pengembang air.

(Harborne, 1996)


22/50

13

Struktur Khalkon

j) Auron

Auron berupa pigmen kuning emas yang terdapat dalam bunga

tertentu dan briofita. Dalam larutan basa senyawa ini berwarna merah ros

dan tampak pada kromatografi kertas berupa bercak kuning, dengan sinarultraviolet warna kuning kuat berubah menjadi merah jingga bila diberi uap

amonia. (Robinson, 1995)

Struktur Auron

3. Metoda isolasi senyawa flavonoid

a. Metoda Isolasi Senyawa Flavonoid oleh Chowdhurry

Pada metoda ini, daun tumbuhan dikeringkan terlebih dahulu

sebanyak 100 gram. Lalu diekstraksi dengan Petroleum Eter (60-80 oC)

dalam alat soklet selama 10 jam.

Selanjutnya diekstraksi dengan Benzena selama 10 jam. Ekstrak

Benzena diuapkan pelarutnya, menghasilkan semipadat berwarna coklat.

Lalu dilarutkan dalam Eter dan dipisahkan dalam suasana asam, basa

dan netral. Fraksi pertama (ada empat macam) masing-masing 50 ml

dielusi dengan Benzena memberikan residu padat dengan titik lebur 151-

152 oC.

Kristalisasi dengan Metanol menghasilkan senyawa flavonoid (I),

kristal tidak berwarna dengan titik lebur 156 oC. Penelitian ini juga

dilakukan oleh Prof. Dreyer, L., D., dengan melakukan pengukuran titik

lebur, kromatografi lapis tipis dengan Spektrum Infra Merah. Dari fraksi


23/50

14

lima sampai delapan masing-masing dilarutkan dengan Benzena lalu

menghasilkan zat padat berwarna kuning terang dengan titik lebur 191-

193 oC. Kristalisasi dilakukan dengan Metanol menghasilkan Hibiscetin

Hepta Metil Eter, titik lebur 196-197 oC, kristal berwarna kuning sebanyak

50 gram. (Chowdhurry, 1971)

b. Metoda Isolasi Senyawa Flavonoid oleh Joshi

Daun tumbuhan yang telah dikeringkan diekstraksi dengan n-

heksana, lalu ekstrak n-heksana dikromatografi kolom dengan fasa diam

alumina, menghasilkan kristal dengan titik lebur 125-126 oC sebanyak

0,1%. Diidentifikasi, ekotin C23H26O10. (Joshi, 1969)

c. Metoda Isolasi Senyawa Flavonoid oleh Dreyer, L.D

Dalam metoda ini, daun diekstraksi dengan Aseton, kemudian

pelarut dievaporasi dan diperoleh ekstrak pekat. Ektrak pekat yang

diperoleh dikromatografi kolom dengan menggunakan alumina sebagai

fasa diam dan Benzena sebagai fasa gerak hingga dihasilkan residu. Lalu

direkristalisasi dengan campuran Etil asetat : n-heksana dan dilanjutkan

dengan Metanol. Diperoleh kristal kuning terang, diidentifikasi sebagai

3,3`,4`,5,5`,6,7-hepta metoksi flavon dengan titik lebur 156-157oC.

(Dreyer, 1968)


24/50

15

d. Metoda Isolasi Senyawa Flavonoid oleh Harborne

Dalam metoda ini, daun yang segar dimaserasi dengan MeOH, lalu

disaring. Ekstrak MeOH dipekatkan dengan rotari evaporator. Lalu ekstrak

pekat yang dihasilkan, diasamkan dengan H2SO4 2M, didiamkan, lalu

diesktraksi dengan Kloroform. Lapisan Kloroform diambil, lalu diuapkan,

sehingga dihasilkan ekstrak polar pertengahan (Terpenoida atau senyawa

Fenol). (Harborne, 1996)

4. Sifat kelarutan flavonoid

Aglikon flavonoida adalah polifenol dan karena itu mempunyai sifat

kimia senyawa fenol, yaitu bersifat agak asam sehingga dapat larut dalam

basa. Tetapi harus diingat, bila dibiarkan dalam larutan basa, dan

disamping itu terdapat oksigen, banyak yang akan terurai. Karena

mempunyai sejumlah gugus hidroksil, atau suatu gula,flavonoida

merupakan senyawa polar, maka umumnya flavonoid cukup larut dalam

pelarut polar seperti Etanol (EtOH), Metanol (MeOH), Butanol (BuOH),

Aseton, Dimetilsulfoksida (DMSO), Dimetilformamida (DMF), Air dan lain-

lain.

Adanya gula yang terikat pada flavonoid (bentuk yang umum

ditemukan) cenderung menyebabkan flavonoid lebih mudah larut dalam

air dan dengan demikian campuran pelarut yang disebut diatas dengan air

merupakan pelarut yang lebih baik untuk glikosida. Sebaliknya, aglikon

yang kurang polar seperti isoflavon, flavanon dan flavon serta flavonol

yang termetoksilasi cenderung lebih mudah larut dalam pelarut seperti

Eter dan Kloroform.


25/50

16

C. Teknik Pemisahan

Tujuan dari teknik pemisahan adalah untuk memisahkan komponen

yang akan ditentukan berada dalam keadaan murni, tidak tercampur

dengan komponen-komponen lainnya. Ada 2 jenis teknik pemisahan:

1. Pemisahan kimia adalah suatu teknik pemisahan yang berdasarkan

adanya perbedaan yang besar dari sifat-sifat fisika komponen dalam

campuran yang akan dipisahkan.

2. Pemisahan fisika adalah suatu teknik pemisahan yang didasarkan

pada perbedaan-perbedaan kecil dari sifat-sifat fisik antara senyawa-

senyawa yang termasuk dalam suatu golongan. (Muldja, 1995)

1. Kromatografi

Kromatografi merupakan suatu cara pemisahan fisik dengan unsur-

unsur yang akan dipisahkan terdistribusikan antara dua fasa, satu dari

fasa-fasa ini membentuk lapisan stasioner denagn luas permukaan yang

besar dan yang lainnya merupakan cairan yang merembes lewat.

Fasa stasioner mungkin suatu zat padat atau suatu cairan dan fasa

yang bergerak mungkin suatu cairan atau suatu gas. (Underwood, 1981).

Cara-cara kromatografi dapat digolongkan sesuai dengan sifat sifat dari

fasa diam, yang dapat berupa zat padat atau zat cair. Jika fasa diam

berupa zat padat disebut kromatografi serapan, jika berupa zat cair

disebut kromatografi partisi. Karena fasa gerak dapat berupa zat cair atau

gas maka ada empat macam sistem kromatografi yaitu:

a) Fasa gerak cairfasa diam padat (kromatografi serapan):

kromatografi lapis tipis

kromatografi penukar ion

b) Fasa gerak gasfasa diam padat, yakni kromatografi gas padat

c) Fasa gerak cairfasa diam cair (kromatografi partisi), yakni

kromatografi kertas.

d) Fasa gerak gasfasa diam zat cair, yakni :

kromatografi gascair


26/50

17

kromatografi kolom kapiler

Semua pemisahan dengan kromatografi tergantung pada kenyataanbahwa senyawa senyawa yang dipisahkan terdistribusi diantara fasa

gerak dan fasa diam dalam perbandingan yang sangat berbeda beda

dari satu senyawa terhadap senyawa yang lain (Sastrohamidjojo, 1991).

a. Kromatografi lapis tipis

Kromatografi Lapis Tipis pada plat berlapis yang berukuran lebih

besar, biasanya 5x20 cm, 10x20 cm, atau 20x20 cm. Biasanya

memerlukan waktu pengembangan 30 menit sampai satu jam. Pada

hakikatnya KLT melibatkan dua fase yaitu fase diam atau sifat lapisan,

dan fase gerak atau campuran pelarut pengembang. Fase diam dapat

berupa serbuk halus yang berfungsi sebagai permukaan penyerap atau

penyangga untuk lapisan zat cair. Fase gerak dapat berupa hampir segala

macam pelarut atau campuran pelarut. (Sudjadi, 1986).

Pemisahan senyawa dengan Kromatografi Lapis Tipis seperti

senyawa organik alam dan senyawa organik sintetik dapat dilakukan

dalam beberapa menit dengan alat yang harganya tidak terlalu mahal.

Jumlah cuplikan beberapa mikrogram atau sebanyak 5 g dapat ditangani.

Kelebihan KLT yang lain ialah pemakaian jumlah pelarut dan jumlah

cuplikan yang sedikit. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) merupakan salah

satu metode pemisahan yang cukup sederhana yaitu dengan

menggunakan plat kaca yang dilapisi silika gel dengan menggunakan

pelarut tertentu. (Gritter,1991).

Nilai utama Kromatografi Lapis Tipis pada penelitian senyawa

flavonoid ialah sebagai cara analisis cepat yang memerlukan bahan

sangat sedikit. Menurut Markham, Kromatografi Lapis Tipis terutama

berguna untuk tujuan berikut:

Mencari pelarut untuk kromatografi kolom

Analisis fraksi yang diperoleh dari kromatografi kolom

Identifikasi flavonoid secara ko-kromatografi.


27/50

18

Isolasi flavonoid murni skala kecil

Penyerap dan pengembang yang digunakan umumnya samadengan penyerap dan pengembang pada kromatografi kolom dan

kromatografi kertas. (Markham, 1988).

b. Kromatografi kolom

Kromatografi cair yang dilakukan dalam kolom besar merupakan

metode kromatografi terbaik untuk pemisahan dalam jumlah besar (lebih

dari 1 g). Pada kromatografi kolom, campuran yang akan dipisahkan

diletakkan berupa pita pada bagian atas kolom penyerap yang berada

dalam tabung kaca, tabung logam, dan tabung plastik. Pelarut atau fasa

gerak dibiarkan mengalir melalui kolom karena aliran yang disebabkan

oleh gaya berat atau didorong dengan tekanan. Pita senyawa linarut

bergerak melalui kolom dengan laju yang berbeda, memisah, dan

dikumpulkan berupa fraksi ketika keluar dari atas kolom (Gritter, 1991).

Dengan menggunakan cara ini, skala isolasi flavonoida dapat

ditingkatkan hampir ke skala industri. Pada dasarnya, cara ini meliputi

penempatan campuran flavonoida (berupa larutan) diatas kolom yang

berisi serbuk penyerap (seperti selulose, silika atau poliamida), dilanjutkan

dengan elusi beruntun setiap komponen memakai pelarut yang cocok.

Kolom hanya berupa tabung kaca yang dilengkapi dengan keran pada

salah satu ujung. (Markham, 1988).

c. Harga Rf (Retension Factor)

Mengidentifikasi noda-noda dalam lapisan tipis lazim menggunakan

harga Rf yang diidentifikasikan sebagai perbandingan antara jarak

perambatan suatu zat dengan jarak perambatan pelarut yang dihitung dari

titik penotolan pelarut zat. Jarak yang ditempuh oleh tiap bercak dari titik

penotolan diukur dari pusat bercak. Untuk mengidentifikasi suatu

senyawa, maka harga Rf senyawa tersebut dapat dibandingkan dengan

harga Rf senyawa pembanding.


28/50

19

2. Ekstraksi

Ekstraksi dapat dilakukan dengn metoda maserasi, sokletasi, dan

perkolasi. Sebelum ekstraksi dilakukan, biasanya serbuk tumbuhan

dikeringkan lalu dihaluskan dengan derajat kehalusan tertentu, kemudian

diekstraksi dengan salah satu cara di atas. Ekstraksi dengan metoda

sokletasi dapat dilakukan secara bertingkat dengan berbagai pelarut

berdasarkan kepolarannya, misalnya n-heksana, Eter, Benzena,

Kloroform, Etil asetat, Etanol, Metanol, dan Air.

Ekstraksi dianggap selesai bila tetesan terakhir memberikan reaksi

negatif terhadap senyawa yang diekstraksi. Untuk mendapatkan larutan

ekstrak yang pekat biasanya pelarut ekstrak diuapkan dengan

menggunakan alat rotari evaporator. (Harborne, 1996)

D. Teknik Spektroskopi

Teknik spektroskopi adalah salah satu teknik analisis kimia-fisika

yang mengamati tentang interaksi atom atau molekul dengan radiasi

elektromagnetik. Ada dua macam instrumen pada teknik spektroskopi

yaitu spektrometer dan spektrofotometer. Instrumen yang memakai

monokromator celah tetap pada bidang fokus disebut sebagai

spektrometer. Apabila spektrometer tersebut dilengkapi dengan detektor

yang bersifat fotoelektrik maka disebut spektrofotometer (Muldja, 1955).

Informasi Spektroskopi Inframerah menunjukkan tipe tipe dari adanya

gugus fungsi dalam satu molekul dan Resonansi Magnetik Inti yang

memberikan informasi tentang bilangan dari setiap tipe dari atom hidrogen

dan juga memberikan informasi yang menyatakan tentang lingkungan dari

setiap tipe dari atom hidrogen.

Kombinasinya dan data yang ada kadang kadang menentukan

struktur yang lengkap dari molekul yang tidak diketahui. (Pavia, 1979).

1. Spektrometri ultra violet


29/50

20

Serapan molekul di dalam derah ultra ungu dan terlihat dari

spektrum bergantung pada struktur ultra elektronik dari molekul.

Penyerapan sejumlah energi, menghasilkan percepatan dari elektron

dalam orbital tingkat dasar ke orbital yang berenergi lebih tinggi di dalam

keadaan tereskitasi (Silverstein, 1986).

Ciri spektrum golongan flavonoid utama dapat ditunjukkan sebagai

berikut:

Tabel 1 Ciri spektrum golongan flavonoid utama

Spektrum Flavonoid biasanya ditentukan dalam larutan dengan

pelarut Metanol (MeOH) atau Etanol (EtOH). Spektrum khas terdiri atas

dua maksimal pada rentang 240-285 nm (pita II) dan 300-550 nm (pita I).

Kedudukan yang tepat dan kekuatan nisbi maksima tersebut memberikan

informasi yang berharga mengenai sifat flavonoida dan pola

oksigenasinya. Ciri khas spektrum tersebut ialah kekuatan nisbi yang

rendah pada pita I dalam dihidroflavon, dihidroflavonol, dan isoflavon serta

kedudukan pita I pada spektrum khalkon, auron dan antosianin yang

terdapat pada panjang gelombang yang tinggi.


30/50

21

Tabel 2 pita absorpsi UV dari flavonoid

2. Spektrofotometri infra merah (FT-IR)

Spektrum inframerah suatu molekul adalah hasil transisi antara

tingkat energi getaran yang berlainan. Pancaran inframerah yang

kerapatannya kurang dari 100 cm -1(panjang gelombang lebih daripada


31/50

22

100 m) diserap oleh sebuah molekul organik dan diubah menjadi putaran

energi molekul.

Penyerapan ini tercantum, namun spektrum getaran terlihat bukan

sebagai garis garis melainkan berupa pita pita. Hal ini disebabkan

perubahan energi getaran tunggal selalu disertai sejumlah perubahan

energi putaran (Silverstein, 1986).

Dalam molekul sederhana beratom dua atau beratom tiga tidak

sukar untuk menentukan jumlah dan jenis vibrasinya dan menghubungkan

vibrasi-vibrasi tersebut dengan energi serapan. Tetapi untuk molekul-

molekul beratom banyak, analisis jumlah dan jenis vibrasi itu menjadi

sukar sekali atau tidak mungkin sama sekali, karena bukan saja

disebabkan besarnya jumlah pusat pusat vibrasi, melainkan karena juga

harus diperhitungkan terjadinya saling mempengaruhi (inter-aksi)

beberapa pusat vibrasi.

Vibrasi molekul dapat dibagi dalam dua golongan, yaitu vibrasi

regang dan vibrasi lentur.

a. Vibrasi regang

Di sini terjadi terus menerus perubahan jarak antara dua atom di

didalam suatu molekul. Vibrasi regang ini ada dua macam yaitu vibrasi

regang simetris dan tak simetri.

b. Vibrasi lentur

Di sini terjadi perubahan sudut antara dua ikatan kimia. Ada empat

macam vibrasi lentur yaitu vibrasi lentur dalam bidang yang dapat berupa

vibrasi scissoring atau vibrasi rocking dan vibrasi keluar bidang yang

dapat berupa waging atau berupa twisting (Noerdin, 1985).

3. Spektrometri resonansi magnetik inti proton (1H-NMR)

Spektrometri Resonansi Magnetik Inti (Nuclear Magnetic

Resonance, NMR) merupakan alat yang berguna pada penentuan struktur

molekul organik. Teknik ini memberikan informasi mengenai berbagai

jenis atom hidrogen dalam molekul. Struktur NMR memberikan informasi


32/50

23

mengenai lingkungan kimia atom hidrogen, jumlah atom hidrogen dalam

setiap lingkungan dan struktur gugusan yang berdekatan dengan setiap

atom hidrogen. (Cresswell, 1982).

Pergeseran kimia adalah pengukuran medan dalam keadaan

bebas. Semua proton-proton dalam satu molekul yang ada dalam

lingkungan kimia yang serupa kadang kadang menunjukkan pergeseran

kimia yang sama. Setiap senyawa memberikan penaikan menjadi puncak

absorbsi tunggal dalam spektrum NMR (Bernasconi,1995).

Senyawa yang paling lazim dan paling berguna dipakai sebagai

acuan adalah tetrametilsilana (TMS). Senyawa ini mempunyai beberapa

kelebihan; lamban secara kimia, isotop magnet, serta larut dalam

kebanyakan pelarut organik; TMS memberikan puncak serapan tajam

tunggal serta menyerap pada medan lebih tinggi daripada hampir semua

proton organik ( Silverstein, 1986 ).

Pada spektrometri RMI integrasi sangat penting. Harga integrasi

menunjukkan daerah atau luas puncak dari tiap tiap proton. Sedangkan

luas daerah atau luas puncak tersebut sesuai dengan jumlah proton.

Dengan demikian perbandingan tiap integrasi proton sama dengan

perbandingan jumlah proton dalam molekul (Muldja, 1995).

Di dalam medan magnet, perputaran elektron-elektron valensi dari

proton menghasilkan medan magnet yang melawan medan magnet yang

digunakan. Hingga setiap proton dalam molekul dilindungi dari medan

magnet yang digunakan dan bahwa besarnya perlindungan ini tergantung

pada kerapatan elektron yang mengelilinginya. Makin besar kerapatan

elektron yang mengelilingi inti, maka makin besar pula medan yang

dihasilkan yang melawan medan yang digunakan. Akibat secara

keseluruhan adalah inti/proton merasakan adanya pengurangan medan

yang mengenainya. (sastrohamidjojo, 1991).


33/50

24

BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

A. Waktu dan Tempat

Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Februari 2013. Penelitian ini

dilakukan di Laboratorium Fakultas Farmasi Universitas Muhamadiyah

Purwokerto.

B. Alat dan Bahan

Bahan yang diperlukan dalam penelitian ini adalah daun jambu biji

(Psidium guajava), Metanol, N-heksana, Etil Asetat, Silikagel, Pereaksi

Feri Klorida 5 %, Pereaksi Natrium Hidroksida 10 %, H2SO4(p)

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah Gelas ukur 50 ml,

Gelas Beaker 250 ml, Gelas Erlenmeyer 250 ml, Corong Saring, Kolom

Kromatografi, Tabung Reaksi, Plat Skrining, Neraca Analitis, Alat

Pengering, Rotari Evaporator, Labu Alas 500 ml, Alat pengukur titik lebur,

Lampu UV, Spatula, Batang Pengaduk, Pipet Tetes, Botol Vial, Bejana

Kromatografi lapis tipis, Spektrofotometer dan Kertas Saring

C. Tahapan Penelitian

1. Penyediaan Sampel

Sampel yang diteliti adalah daun jambu biji (Psidium guajava). daun

jambu biji (Psidium guajava) dikeringkan di udara terbuka, lalu dihaluskan

sampai diperoleh serbuk sebanyak 1500 gram.

2. Uji Pendahuluan Terhadap Ekstrak daun jambu biji (Psidium

guajava)

Daun jambu biji (Psidium guajava) diidentifikasi dengan

menggunakan cara:


34/50

25

a. Uji Busa

Serbuk daun jambu biji (Psidium guajava) sebanyak 1500 g

dimaserasi dengan metanol, kemudian sebanyak 5ml ekstrak methanol

dimasukkan kedalam tabung reaksi. Kemudian ditambahkan 10 ml

aquadest dan dipanaskan pada penangas air. Lalu dikocok-kocok dengan

kuat hingga terbentuk busa dan didiamkan selama 10 menit. Ternyata

busa hilang yang membuktikan bahwa di dalam daun jambu biji (Psidium

guajava) tidak terdapat senyawa glikosida.

b. Skrining Fitokimia

Untuk mengetahui adanya senyawa Flavonoid pada daun jambu biji

(Psidium guajava) maka dilakukan uji pendahuluan secara kualitatif.

Serbuk daun jambu biji (Psidium guajava) diekstraksi maserasi dengan

metanol, dikeringkan. Filtrat yang diperoleh ditambahkan pereaksi

H2SO4(p), NaOH 10%, FeCl3 5% dan Mg-HCl, terjadilah perubahan warna

pada setiap penambahan pereaksi yang menunjukkan adanya senyawa

flavonoid.

c. Analisis Kromatografi Lapis Tipis

Analisis kromatografi Lapis Tipis dilakukan terhadap ekstrak

metanol dengan menggunakan fasa diam silika gel 60 F254. Fasa gerak

yang digunakan adalah campuran n-Heksana : Etil Asetat dengan

perbandingan (90 : 10)v/v ; (80 : 20)v/v; (70: 30)v/v; (60 : 40)v/v ; (50 :

50)v/v.

Prosedur analisis kromatografi lapis tipis : Dimasukkan 10 ml

larutan fase gerak n-heksana : etil asetat dengan perbandingan (90 : 10)

v/v ke dalam bejana kromatografi, kemudian dijenuhkan. Ditotolkan

ekstrak pekat metanol pada plat KLT. Dimasukkan plat ke dalam bejana

yang telah berisi pelarut yang telah dijenuhkan, lalu ditutup dan dielusi.

Plat yang telah dielusi dikeluarkan dari bejana, lalu dikeringkan.

Diamati warna bercak yang timbul dibawah sinar Ultra Violet

dengan = 254 nm dan dihitung harga Rf yang diperoleh. Perlakuan yang

24


35/50

26

sama dilakukan untuk perbandingan pelarut n-Heksana : Etil asetat (80 :

20)v/v;(70:30)v/v;(60:40)v/v;(50:50)v/v.

Dari hasil analisis KLT menunjukkan bahwa di dalam daun jambu

biji (Psidium guajava) terkandung senyawa flavonoid. Hasil pemisahan

yang baik diberikan pada fase gerak nHeksana:Etil asetat(80:20)v/v.

3. Prosedur Untuk Memperoleh Senyawa Kimia Dari Ekstrak daun

jambu biji (Psidium guajava)

Serbuk daun jambu biji (Psidium guajava) ditimbang sebanyak

1500 g, dimasukkan ke dalam bejana dan ditambahkan dengan pelarut

metanol sampai semua terendam oleh pelarut dan dibiarkan selama 48

jam dan sesekali diaduk. Maserat disaring dan diperoleh ekstrak berwarna

hijau. Maserasi dilakukan berulang kali dengan menggunakan pelarut

metanol sampai ekstrak metanol yang diperolehmemberikan hasil uji yang

negatif pada pereaksi untuk identifikasi senyawa flavonoid. Ekstrak

metanol yang diperoleh dikumpulkan dan dipekatkan dengan

menggunakan alat rotari evaporator pada suhu 60 0C sehingga diperoleh

ekstrak pekat metanol, kemudian diekstraksi partisi dengan menggunakan

pelarut nheksan, sehingga terbentuk lapisan n-heksan dan lapisan

metanol. Fraksi metanol ditampung dan dipekatkan dengan menggunakan

rotarievaporator, sehingga diperoleh ekstrak pekat metanol sebanyak

10,23 gram.

4. Isolasi Senyawa Flavonoid dengan Kromatografi Kolom

Isolasi senyawa flavonoid secara kolom dilakukan terhadap ekstrak

pekat metanol daun jambu biji (Psidium guajava) yang telah diperoleh.

Fasa diam yang digunakan adalah silika gel 60 G dan fasa gerak adalah

campuran pelarut n-Heksana : etil asetat dengan perbandingan (90:

10)v/v;(80:20)v/v;(70:30)v/v(60:40)v/v;(50:50)v/v.

Prosedur isolasi senyawa flavonoid dengan kromatografi kolom:

Dirangkai seperangkat alat kolom kromatografi. Terlebih dahulu

dibuburkan silika gel 60 G dengan menggunakan n-Heksan, diaduk-aduk

hingga homogen lalu dimasukkan ke dalam kolom kromatografi.


36/50

27

Kemudian dielusi dengan menggunakan n-Heksan 100% hingga silika gel

padat dan homogen. Dimasukkan 10,23 g ekstrak pekat daun jambu biji

(Psidium guajava) ke dalam kolom kromatografi yang telah berisi bubur

silika gel di puncak kolom, lalu ditambahkan fasa gerak nHeksana : etil

asetat dengan perbandingan (90: 10)v/v;(80:20)v/v;(70:30)v/v(60:40)v/v;

(50:50)v/v secara perlahan-lahan dan diatur aliran fasa gerak yang keluar

dari kolom sama banyaknya dengan penambahan fasa gerak dari atas

kolom. Hasil yang diperoleh ditampung dalam botol vial setiap 5 ml, lalu di

KLT dan digabung fraksi dengan harga Rf yang sama. Setelah itu diuji

flavonoid dan diuapkan sampai pelarutnya habis hingga terbentuk kristal.

5. Pemurnian

Senyawa yang diperoleh dari fraksi yaitu pada fraksi 41-80

dilakukan pemurnian senyawa. Senyawa pada fraksi 41-80 dilarutkan

dengan etil asetat, sehingga pengotor pada amorf akan larut dan

larutannya didekantasi kemudian disaring dan dimurnikan dilakukan

secara berulang-ulang.

6. Uji Kemurnian Hasil Isolasi dengan Kromatografi Lapis Tipis(KLT)

Uji kemurnian senyawa dilakukan dengan kromatografi lapis tipis

dengan menggunakan fasa diam silika gel 60 F254 dengan fasa gerak n-

heksana : etil asetat (80:20)v/v.

Prosedur uji kemurnian hasil isolasi dengan kromatografi lapis tipis:

Dimasukkan 10 ml larutan fasa gerak ke dalam bejana kromatografi, lalu

dijenuhkan. Ditotolkan kristal yang sebelumnya dilarutkan pada KLT.

Dimasukkan plat KLT tersebut ke dalam bejana kromatografi yang telah

jenuh. Setelah pelarut fasa gerak merembes sampai batas tanda, plat KLT

dikeluarkan dari bejana, dikeringkan, dan difiksasi dengan menggunakan

pereaksi Feri klorida dalam air menghasilkan bercak berwarna hitam yang

menunjukkan adanya senyawa flavonoid. Perlakuan yang sama dilakukan,

dan difiksasi dengan Natrium Hidroksida dalam air yang menghasilkan

bercak berwarna biru violet.


37/50

28

Gambar 2 Diagram Alir Penelitian

150 g Daun Jambu Biji


38/50

29

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil Penelitian

Dari hasil skrining pendahuluan terhadap ekstrak methanol dari

daun jambu biji (Psidium guajava) dengan adanya penambahan pereaksi-

pereaksi warna untuk menentukan golongan senyawa kimia yang

dikandung dengan menggunakan pereaksi flavonoid yakni:

- Pereaksi FeCl3 5% memberikan warna hitam

- Pereaksi NaOH 10% memberikan warna biru violet

- Pereaksi Mg-HCl memberikan warna merah muda

- Pereaksi H2SO4(p) memberikan warna coklat

Dari hasil kromatografi lapis tipis dengan menggunakan adsorben

silika gel 60F254, dapat diketahui bahwa pelarut yang baik untuk

mengisolasi senyawa flavonoid dari daun jambu biji (Psidium guajava)

adalah nheksan : etil asetat pada perbandingan ( 80 : 20 )v/v.

Dari hasil isolasi b daun jambu biji (Psidium guajava)diperoleh

senyawa berwarna coklat berbentuk amorf sebanyak 60 mg. Dari

Spektrum UV-Visible memberikan 2 pita serapan yaitu pita II dengan =

256 nm dan pita I dengan = 310 nm sebagai bahu.

Hasil analisis Spektrofotometer FT-IR dari senyawa hasil isolasi

menghasilkan pita-pita serapan pada daerah bilangan gelombang sebagai

berikut :

1. Pada bilangan gelombang 3443,59 cm-1 puncak sedang

(menunjukkan adanya vibrasi yang mengikat gugus OH).

2. Pada bilangan gelombang 2924-2853,59 cm-1 puncak kuat

(menunjukkan adanya vibrasi gugus CH alifatis)

3. Pada bilangan gelombang 1627,65 cm-1 puncak kuat ( menunjukkan

adanya vibrasi gugus C=O dari keton )


39/50

30

4. Pada bilangan gelombang 1497,68 1464,67 cm-1 puncak sedang

(menunjukkan adanya vibrasi gugus C=C)

5. Pada bilangan gelombang 1376,70 cm-1 puncak lemah (menunjukkan

adanya vibrasi gugus CH3)

6. Pada bilangan gelombang 1288,69 1215,69 cm-1 puncak lemah

(menunjukkan adanya vibrasi gugus C-O)

7. Pada bilangan gelombang 1172,70 614,75 cm-1 puncak lemah

(menunjukkan adanya vibrasi gugus CH senyawa aromatik)

Hasil analisis Spektrometer Resonansi Magnetik Inti Proton (1H-

NMR) memberikan pergeseran kimia pada daerah (/ppm) sebagai

berikut:

1. Pergeseran kimia pada daerah = 1,831 ppm puncak singlet (s)

menunjukkan adanya proton-proton gugus metil pada prenil (-CH 2-

CH=C(CH3)2) (Markham, 1988).


menunjukkan adanya proton-proton gugus CH pada prenil (-CH2-

CH=C(CH3)2) (Markham, 1988).


menunjukkan adanya proton metoksi (-OCH3-6 dan OCH3-4)

(Markham, 1988).


menunjukkan adanya proton pada CH gula (Markham, 1988).

5. Pergeseran kimia pada daerah = 5,206 ppm puncak singlet

(s) menunjukkan adanya proton OH pada cincin A atau pada

cincin B.


(s) menunjukkan adanya proton H6 pada cincin A (Markham,

1988).


(s) menunjukkan adanya proton H2 pada cincin C (Markham,

1988).

29


40/50

31


(s) menunjukkan adanya pelarut CDCl3.

B. Pembahasan

Daun jambu biji (Psidium guajava) dinyatakan mengandung

senyawa flavonoid berdasarkan hasil skrining fitokimia yang dilakukan

dengan pereaksi FeCl3 5%, NaOH 10%, Mg-HCl, dan H2SO4(p). Terhadap

daun jambu biji (Psidium guajava) dilakukan ekstraksi maserasi dan juga

partisi dengan menggunakan perbandingan pelarut n-Heksan : etil asetat

(80 : 20)v/v berdasarkan KLT yang dilakukan, karena pada perbandingan

tersebut menghasilkan noda lebih banyak dan pemisahannya lebih baik.

Dari hasil analisis Spektrofotometer ultra violet-visible (UV-Visible)

dengan pelarut metanol memberikan 2 pita serapan panjang gelombang

yaitu pada pita I dengan = 310 nm bahu dan pita II dengan = 256 nm.

Hal ini menunjukkan bahwa senyawa adalah golongan flavonoida yang

mempunyai struktur seperti Isoflavon

Isoflavon

Dari hasil interpretasi spektrum FT-IR dan spektrum resonansi

magnetik inti proton (1H-NMR) senyawa hasil isolasi dengan

menggunakan pelarut CDCl3 dalam standardt TMS diperoleh bahwa :

1. Pergeseran kimia pada daerah = 1,831ppm puncak singlet (s)

menunjukkan adanya proton-proton gugus metil pada prenil (-CH2-

CH=C(CH3)2). Hal ini didukung oleh Spektrofotometer IR pada


41/50

32

bilangan gelombang 1376,70 cm-1 terdapat puncak lemah yang

menunjukkan adanya vibrasi gugus metil (-CH3)

2. Pergeseran kimia pada daerah = 3,402 ppm puncak singlet (s).

menunjukkan adanya proton-proton gugus CH pada prenil (-CH2-

CH=C(CH3)2). Hal ini didukung oleh Spektrofotometer IR pada

bilangan gelombang 2924-2853,59cm-1 terdapat puncak kuat

menunjukkan adanya vibrasi gugus CH alifatis.


menunjukkan adanya proton metoksi.Hal ini didukung oleh

Spektrofotometer IR pada bilangan gelombang 1288,69-1215,69 cm

-1 terdapat puncak lemah menunjukkan adanya vibrasi gugus CO.


menunjukkan adanya proton pada CH gula. Hal ini didukung oleh

Spektrofotometer IR pada bilangan gelombang 2924-2853,59 cm-1

terdapat puncak kuat menunjukkan adanya vibrasi gugus CH alifatis.


menunjukkan adanya proton OH. Hal ini didukung oleh

Spektrofotometer IR pada bilangan gelombang 3443,59 cm-1terdapat

puncak sedang menunjukkan adanya vibrasi dari atom C yang

mengikat gugus OH.

6. Pergeseran kimia pada daerah = 6,219ppm, 6,75ppm

menunjukkan adanya proton pada senyawa aromatik. Hal ini

didukung oleh Spektrofotometer IR pada bilangan gelombang

1172,70-614,75 cm-1 terdapat puncak lemah menunjukkan adanya

vibrasi gugus CH senyawa aromatik.

Berdasarkan data dan analisa terhadap spektrum UV-Visible,

spektrum FT-IR dan spektrum 1H-NMR, memperlihatkan bahwa senyawa

hasil isolasi adalah senyawa flavonoida yang struktur senyawanya jenis

Isoflavon dengan kemungkinan estimasi kedudukan relatif gugus-

gugusnya seperti struktur berikut:


42/50

33

Isoflavon


43/50

34

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan

1. Hasil isolasi yang diperoleh dari 1500 gram daun jambu biji (Psidium

guajava) diperoleh berupa amorf yang berwarna coklat sebanyak 60

mg.

2. Berdasarkan hasil uji skrining fitokimia dan anlisis Spektrofotometer

UVVisible, Spektrofotometer Inframerah (FT-IR) dan Spektrometer

Resonansi Magnetik Inti Proton (1H-NMR) dapat disimpulkan bahwa

senyawa hasil isolasi adalah senyawa Isoflavonoida.

B. Saran

1. Perlu dilakukan analisis Spektroskopi Massa agar diperoleh data-data

yang lebih mendukung untuk menentukan struktur senyawa flavonoida

yang diperoleh dari hasil isolasi.

34


44/50

35

DAFTAR PUSTAKA

Bernasconi, G. 1995. Teknologi Kimia. Jilid 2. Edisi pertama. Jakarta. PT.Pradaya Paramita.

Creswell, C. J. 1982. Analisa Spektrum Senyawa Organik. Edisi ke-2.Terjemahan Kosasih Padmawinata dan Iwang Soediro.Bandung: ITB.

Effendy, S. 1982.Ensiklopedia Tumbuh-tumbuhan Berkhasiat yang ada diBumi Nusantara. Surabaya : Penerbit Karya Anda.

F.S.P.Ng. D Phil. 1978. Tree Flora Of Malaya A Manual for Foresters.Volume Three. Forest Depertment Ministry of Primary Industries.Malaysia.

Gritter, R. J. 1991. Pengantar Kromatografi. Terbitan ke-2.TerjemahanKosasih Padmawinata. ITB. Bandung.

Harbone, J. B. 1996. Metode Fitokimia. Penentuan Cara ModernMenganalisa Tumbuhan. Terbitan ke-2. Terjemahan KosasihPadmawinata dan Iwang Soediro. ITB. Bandung.

Markham, K. R.1988. Cara Mengidentifikasi Flavonoida. TerjemahanKosasih Padmawinata. ITB. Bandung.

Muldja, M. H. 1995. Analisis Instrumental. Cetakan ke-1. UniversitasAirlangga Press. Surabaya.

Pavia, L. D. 1979. Introduction to Spectroscopy a Guide for Students ofOrganic Chemistry. Saunders College. Philadelphia.

Rianto, D. S. 2009. Isolasi Senyawa Flavonoida Dari Tumbuhan

Harimonting. Departemen Kimia. FMIPA USU. Medan.

Robinson, T. 1995. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Edisi ke-4Terjemahan Kosasih Padmawinata. ITB Press. Bandung.

Sastrohamidjojo, H. 1991. Kromatografi. Edisi ke-1. Penerbit Liberty.Yogyakarta.

Sastrohamidjojo, H. 1996. Sintesis Bahan Alam.Gadjah Mada UniversityPress.Yogyakarta.

35


45/50

36

Silverstein, R. M. 1986. Penyidikan Spektrometrik Senyawa Organik. Edisike-4. Terjemahan A. J. Hartomo dan Anny Victor Purba.

Erlangga. Jakarta.

Sudjadi. 1986. Metode Pemisahan. Kanisius. Yogyakarta.Underwood, A.L. 1981. Analisa Kimia Kuantitatif. Edisi ke-4. Erlangga. Jakarta.


46/50

37

Lampiran 1


47/50

38

Lampiran 2Hasil Kromatografi Lapis Tipis Ekstrak Metanol daun jambu biji

(Psidium guajava)Fasa Diam : Silikagel 60 F254 ( E. MERCK ART 554E : Ekstrak metanol daun jambu biji (Psidium guajava)


48/50

39

Lampiran3Hasil Kromatografi Lapis Tipis Senyawa Hasil Isolasi Melalui

Penampakan Noda Dengan Pereaksi


49/50

40

Lampiran 5. Spektrum Ultraviolet- Tampak (UV-Visible) Senyawa hasilIsolasi


50/50

41

FORM NILAI LAPORAN FIELD TRIP

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS MATHLAUL ANWAR BANTEN

Setelah membaca dan mempelajari naskah laporan Field Trip mahasiswa

berikut


N I M : G.20.10.0019

Program Studi : FARMASI

Judul Laporan : Isolasi Senyawa Flavonoid Ekstrak Daun Jambu Biji

(Psidium guajava L)

.

Mahasiswa tersebut pantas dan layak untuk mendapatkan nilai .

Menyetujui

Dosen Pembimbing Field Trip

(Agus Kurniawan, S.Si)

Mengetahui

Bagian Akademik FMIPA UNMA

(Andin Vita Amalia, S.Si., M.Sc)

isolasi senyawa flavonoid ekstrak daun jambu biji

Documents