68

Viabilitas sel fibroblas BHK-21 pada permukaan resin akrilik rapidheat cured

(Viability of fibroblast BHK-21 cells to the surface of rapid heat cured acrylicresins)

Anita YuliatiBagian Ilmu Material dan Teknologi Kedokteran GigiFakultas Kedokteran Gigi Universitas AirlanggaSurabaya - Indonesia

ABSTRACT

Acrylic resins are widely used in the fabrication of denture bases and have been shown to be cytotoxic as a result of substancesthat leach from the resin. Numerous reports suggest that residual monomer may be responsible for mucosal irritation and sensitizationof tissues. This information is important in eddition to the information of the biologiced effect of such materials. The purpose of thisstudy was to know the viability of fibroblast BHK-21cells to the surface of rapid heat cured acrylic resins. The sample of 5 mm indiameter and 1 mm thickness was cured in water bath for 20, 30, and 40 minutes at 100° C. BHK-21 cells were grown in mediumeagle to be 2 × 105 cell/ml in 96 well micro titer plates as the added sample and incubated at 37° C for 24 hour. Five hours beforethe end of the incubation MTT solutionwas added from step one to each well containing cells. Viability cells were measured byspectrophotometer at 550 nm. The data were statistically analyzed by using one-way analysis of variance followed by LSD test. Theresult indicated that viability of fibroblast BHK-21 cells did not decrease to the surface of resin acrylic rapid heat cured.

Key words: viability BHK-21 cells, rapid heat cured acrylic resins

Korespondensi (correspondence): Anita Yuliati, Bagian Ilmu Material dan Teknologi Kedokteran Gigi, Fakultas Kedokteran GigiUniversitas Airlangga. Jln. Mayjen. Prof. Dr. Moestopo No. 47 Surabaya 60132.

PENDAHULUAN

Polimetil metakrilat yang merupakan material dasardari resin akrilik di bidang kedokteran gigi digunakansebagai material pembuatan basis gigi tiruan lepasansemenjak mulai diperkenalkan pada tahun 1937.1 Materialini mempunyai beberapa keunggulan antara lain estetikyang baik, kekuatan tinggi, menyerap air rendah, daya larutrendah, mudah dilakukan reparasi, proses manipulasimudah karena tidak memerlukan peralatan rumit.2 Olehkarena itu resin akrilik masih menjadi pilihan utama doktergigi sebagai pembuatan basis gigi tiruan lepasan, meskipunsaat ini telah banyak digunakan material logam campursebagai basis gigi tiruan lepasan.

Perkembangan material untuk pembuatan basis gigitiruan telah dirasakan pada saat ini dengan dipasarkan resinakrilik jenis rapid heat cured. Pabrik pembuat materialtersebut menyebutkan bahwa resin akrilik ini mempunyaifitting yang baik, komfortabel, free bubble, kuat, cadmium-free. Keunggulan jenis resin akrilik ini tidak memerlukanwaktu yang lama untuk proses polimerisasi. Menggunakanperbandingan antara bubuk dan cairan resin akrilik yangtepat berdasarkan petunjuk pabrik dan jenis resin akrilikini hanya memerlukan waktu selama 20 menit untuk prosespolimerisasi. Hal ini berbeda dengan resin akrilik yangsebelumnya, memerlukan waktu sekitar 120 menit untukproses polimerisasi.

Apabila proses polimerisasi dari resin akrilik berjalansingkat, akan menyebabkan kandungan monomer yangbelum bereaksi menjadi polimer masih tetap tinggi.3,4 Halini telah terbukti bahwa resin akrilik jenis rapid heat curedbila proses polimerisasi selama 20 menit, kandunganmonomer sisa yang terdeteksi dengan kromatografi gassebesar 1,9%. Kandungan monomer sisa tersebut cukuptinggi bila dibandingkan dengan resin akrilik yang diprosesdengan polimerisasi waktu yang lama.5 Kandunganmonomer sisa dalam resin akrilik yang tinggi perlumendapatkan perhatian. Bila material tersebut digunakandi dalam rongga mulut dapat mengakibatkan terjadi iritasipada mukosa rongga mulut yang manifestasinya berupakemerahan, rasa sakit dan pembengkakan.6 Peneliti lainjuga melaporkan terjadi iritasi mukosa yang disebabkanpelepasan monomer sisa dari resin akrilik yang telahmengeras.7

Syarat material di bidang kedokteran gigi terutamayang digunakan di dalam mulut harus bersifatbiokompatibel, artinya dapat diterima oleh inang, tidaktoksik, tidak iritan, tidak bersifat karsinogenik dan tidakmenimbulkan reaksi alergi.8 Kekurangan material resinakrilik adalah bersifat toksik.2

Metode kultur sel sering digunakan untuk pengujianefek biologi pada tingkat awal dari suatu material yangdigunakan pada kedokteran gigi untuk mengetahui efektoksisitas.8,9 Sel fibroblast BHK-21 adalah sel yang paling

69Yuliati: Viabilitas sel fibroblas BHK-21

banyak digunakan para peneliti untuk uji toksisitas materialdi bidang kedokteran gigi. Toksisitas dari material resinakrilik jenis rapid heat cured ini tidak dilaporkan olehpabrik. Toksisitas material yang digunakan di kedokterangigi berhubungan dengan viabilitas sel yang hidup. Padapenelitian ini viabilitas sel ditentukan dengan MTTcolorimetric bioassays untuk mendeteksi secara kuantitatifsel hidup.10 Oleh karena itu perlu diteliti bagaimanaviabilitas sel fibroblast BHK-21 pada permukaan resinakrilik jenis rapid heat cured bila proses polimerisasidiperpanjang. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahuiviabilitas sel fibroblas BHK-21 pada permukaan resinakrilik jenis rapid heat cured yang proses polimerisasinyadiperpanjang. Manfaat penelitian ini dapat digunakansebagai pertimbangan yang tepat dalam menentukan lamaproses polimerasasi resin akrilik jenis rapid heat cureduntuk menghasilkan material yang biokompatibel.

BAHAN DAN METODE

Jenis penelitian ini adalah eksperimental laboratoris.Bahan yang digunakan untuk penelitian adalah resin akrilikrapid heat polymerized (Biocryl-2, Altripon Co. INC Box3526 Paranaque, Philippines), gips keras (Moldano), selBHK-21 diperoleh dari stok (TDC Unair), MTT (SigmaCat.No.M-5655), media eagle's, bovine serum albumin,fosfat bufer salin, lempeng kultur sel 96 sumuran beralasdatar, larutan tripsin versene.

Alat yang digunakan adalah model master kuningandiameter 5 mm tebal 1 mm, kuvet logam, timbangandigital, termometer, pipet mikro, laminar flow cabinet,inkubator, spektofotometer. Penelitian dilakukan di bagianIlmu Material dan Teknologi Kedokteran Gigi FakultasKedokteran Gigi dan Tropical Disease Center UniversitasAirlangga. Waktu penelitian Juli sampai Agustus 2003.

Pembuatan mould dilakukan dengan mengaduk gipskeras dan air dengan perbandingan 100 gram gips dan24 ml air (aturan pabrik) diaduk menggunakan spatel diatas vibrator. Adonan dimasukkan ke dalam kuvet yangtelah disediakan di atas vibrator. Kemudian masterkuningan diameter 5 mm dan tebal 1 mm diletakanditengah kuvet, gips dibiarkan sampai mengeras. Setelahgips mengeras, permukaan gips diulasi vaselin dan kuvetatas dipasang, selanjutnya adonan gips diisi di atas vibratordan dipres, dibiarkan sampai gips mengeras. Selanjutnyakuvet dibuka, master model diambil sehingga diperolehsuatu cetakan (mould).

Pembuatan sampel dengan cara, mould yang diperolehdiulasi dengan bahan separator dan dibiarkan sampaikering. Kemudian mencampur resin akrilik jenis rapid heatcured dengan perbandingan 4 gram polimer: 2 mlmonomer dalam mangkuk porselen. Setelah 5 menitadonan mencapai dough stage, adonan dimasukkan kedalam mould sampai penuh dan ditutup dengan kertasselopan, selanjutnya kuvet lawan dipasang dan dipresdengan pres hidrolik bertekanan 50 kg/cm2. Kemudian

kuvet dibuka kelebihan resin akrilik dipotong. Prosedurini diulangi sampai tiga kali. Resin akrilik dibiarkan selama15 menit (aturan pabrik). Selanjutnya, dilakukanpenggodokan dalam air selama 20, 30 dan 40 menit padasuhu 100° C. Setelah itu kuvet diambil dari pengodokandan dibiarkan sampai dingin pada suhu kamar. Selanjutnyasampel dikeluarkan dari kuvet, sisa gips yang menempelpada sampel akrilik dibersihkan.11 Sampel yang didapatpada setiap kelompok dipotong dengan ukuran 5 × 5 m.Jumlah sampel pada setiap kelompok perlakuan berjumlah6 buah.

Kultur sel BHK-21 dalam bentuk cell-line ditanamdalam botol. Setelah confluent, kultur dipanen denganmenggunakan larutan trypsine versene. Hasil panendiambil sedikit dan ditanam kembali dalam media eagleyang mengandung 10% bovine serum albumin diinkubasiselama 24 jam. Kemudian sel dipindahkan dalam botolkecil dan dibuat dengan kepadatan 2 × 105 sel/ml, seltersebut siap digunakan untuk pengujian sampel.

Pengujian viabilitas sel pada resin akrilik menggunakanlempeng kultur sel 96 sumuran beralas datar. Pengujianini dilakukan sesuai standar protocol yang dianjurkanuntuk esei MMT.12 Pada setiap sumuran dimasukkan200 μl media yang berisi sel dengan kepadatan2 x 105 sel/ml. Sebelum diuji sampel disterilkan terlebihdahulu dengan ultra violet selama 15 menit, selanjutnyasampel dimasukkan dalam lempeng sumuran. Padapenelitian ini pengujian dilakukan secara duplo. Kemudianlempeng sumuran diinkubasi selama 20 jam padasuhu 37° C. Setelah itu, pada setiap sumuran dimasukkan20 μl MTT yang telah dilarutkan dalam PBS, diinkubasikembali selama 5 jam suhu 37° C. Selanjutnya sampeldiambil dari setiap sumuran, dan pada setiap sumuranditambahkan 200 μl DMSO dan dipipet naik turun untukmelarutkan kristal yang terbentuk. Lempeng sumurandiinkubasi kembali selama 5 menit pada suhu 37° C.Selanjutnya, lempeng sumuran dibaca padaspektofotometer dengan panjang gelombang 550 nm. Hasilyang diperoleh dinyatakan dalam optical density(absorben). Besar absorben setiap sumuran menunjukkanjumlah viabilitas sel dalam kultur media. 13, 14

HASIL

Hasil penelitian tentang viabilitas sel fibroblast BHK-21 pada permukaan resin akrilik jenis rapid heat curedterlihat pada tabel 1.

Pada tabel 1 terlihat bahwa resin akrilik denganpenggodokan selama 40 menit paling tinggi rerata jumlahviabilitas selnya, sedangkan resin akrilik denganpenggodokan selama 20 menit paling rendah rerataviabilitas selnya. Data yang diperoleh homogen danberdistribusi normal, diuji dengan one sampleKolmogorov-Smirnov test. Untuk mengetahui perbedaanviabilitas sel fibroblast BHK-21 terhadap perlakuan resinakrilik rapid heat cured dilakukan perhitungan statistik

70 Maj. Ked. Gigi. (Dent. J.), Vol. 38. No. 2 April–Juni 2005: 68–72

dengan menggunakan ANOVA satu arah, didapatkan nilaip < 0,05. Hasil analisis ini menunjukkan bahwa viabilitassel fibroblast BHK-21 pada permukaan resin akrilik rapidheat cured terdapat perbedaan yang bermakna. Untukmenentukan ada perbedaan antar perlakuan dilakukan ujiLSD, seperti terlihat pada tabel 2.

Tabel 1. Rata-rata dan simpang baku viabilitas sel fibroblastBHK-21 pada permukaan resin akrilik rapid heat cured(optical density)

Kelompok Perlakuan Jumlah Sampel

Rata-rata ± Simpang Baku

Kontrol positif 6 0,881 ± 0,036 Penggodokan selama 20 menit 6 0,612 ± 0,092

Penggodokan selama 30 menit 6 0,626 ± 0,112

Penggodokan selama 40 menit 6 0,694 ± 0,103

Pada tabel 2, terlihat viabilitas sel fibroblast BHK-21pada permukaan resin akrilik jenis rapid heat cured yangdiperpanjang lama polimerisasinya dibandingkankelompok kontrol positif (sel dan media tanpa sampel)ada perbedaan yang bermakna, berarti terjadi penurunanviabilitas sel fibroblast BHK-21 pada permukaan resinakrilik jenis rapid heat cured dibandingkan kelompokkontrol. Bila polimerisasi resin akrilik jenis rapid heatcured diperpanjang 20, 30 dan 40 menit tidak adaperbedaan yang bermakna, berarti tidak terjadi penurunanviabilitas sel fibroblast BHK-21 pada permukaan resinakrilik jenis rapid heat cured.

PEMBAHASAN

Basis gigi tiruan dari resin akrilik yang berpolimerisasidengan sistem pemanasan dan kimia merupakan pilihanuntuk pembuatan gigi tiruan lengkap dan sebagian lepasan.Dalam aplikasinya resin akrilik yang digunakan sebagaibasis gigi tiruan akan kontak dan berada di dalam lingkunganrongga mulut, sehingga memerlukan penelitian tentangbiokompatibilitas yang berhubungan dengan materialtersebut. 13 Uji viabilitas sel merupakan bagian dari uji

toksisitas yang digunakan untuk mengevaluasi secarabiologi efek suatu material kedokteran gigi yang diperlukansecara langsung terhadap jaringan dalam kultur sel untukprosuder skrining standar yang direkomendasikan yangperhatian utama pada sifat iritasi lokal.8

Bila dilihat dari tabel 1, hasil ini sama dengan yangdilaporkan oleh peneliti sebelumnya, meskipun metodeyang digunakan untuk mendeteksi viabilitas sel berbeda.11

Penelitian ini menggunakan uji enzimatik untukmenentukan viabilitas sel atau toksisitas suatu materialdengan esei MTT {3-(4,5-dimethylthiaziol-2yl)-2,5-di-phenyl-tetrazolium bromide}. Esei ini banyak digunakanuntuk mengukur proliferasi seluler secara kuantitatif atauuntuk mengukur jumlah sel yang hidup. Keuntungan eseiini adalah pengukuran akurat dan sensitif karenamenggunakan alat spektrofotometer yang dapatmendeteksi perubahan metabolisme sel secara jelas,manipulasi mudah, peralatan yang digunakan biasatersedia di laboratorium, menghemat waktu, tenaga, tidakmenggunakan isotop radioaktif. 12

Resin akrilik diproses dengan penggodokan selama 20menit paling rendah jumlah viabilitas selnya. Hal inikemungkinan disebabkan pada pemanasan 20 menit masihtinggi kandungan monomer sisa yang ada dalam massaresin akrilik tersebut yang belum membentuk rantaipolimer. Metode polimerisasi resin akrilik yang digunakandi kedokteran gigi ada beberapa cara, misal carakonvensional (penggodokan dalam air), radiasi gelombangmikro dan sinar tampak. Proses polimerisasi resin akrilikmenggunakan cara konvensional sebaiknya penggodokanresin akrilik dalam air selama 90 menit pada suhu 70° Cdilanjutkan 30 menit pada suhu 100° C.15 Bila prosespolimerisasi dilakukan dalam waktu singkat dan suhurendah, proses polimerisasi tidak berjalan sempurna,kandungan monomer sisa masih tinggi.3 Terjadinyamonomer sisa dipengaruhi oleh perbandinganpencampuran antara bubuk dan cairan resin akrilik darisetiap jenis bahan dan prosedur prosesing resin akrilik.14

Hasil suatu penelitian, menyimpulkan kandunganmonomer sisa dari resin akrilik jenis rapid heat curedpaling tinggi pada penggodokan 20 menit dan palingrendah pada penggodokan selama 40 menit.5 Hal yangsama juga telah dilaporkan oleh peneliti lain, kandunganmonomer sisa dari resin akrilik yang di proses selama 20menit pada suhu 100° C paling tinggi dibandingkan yangdiproses pada suhu tinggi dan waktu lama.14

Tabel 2. Uji LSD viabilitas sel fibroblast BHK-21 pada permukaan resin akrilik rapid heat cured

Kelompok perlakuaan Kontrol positif Penggodokan 20 menit Penggodokan 30 menit Penggodokan 40 menit

Kontrol positif − S S S Penggodokan 20 menit − NS NS Penggodokan 30 menit − NS Penggodokan 40 menit −

Keterangan: NS = tidak bermakna; S = bermakna

71Yuliati: Viabilitas sel fibroblas BHK-21

Resin akrilik yang digodok selama 40 menit palingtinggi viabilitas sel dibandingkan dengan perlakuan yanglain. Hal ini kemungkinan disebabkan kandunganmonomer sisa menurun. Kandungan monomer sisa resinakrilik akan menurun bila proses polimerisasi lama dansuhu penggodokan ditingkatkan.16

Viabilitas sel fibroblast BHk-21 pada permukaan resinakrilik jenis rapid heat cured dari penelitian ini berbedabermakna dibandingkan kelompok kontrol (tabel 2).Keadaan ini membuktikan bahwa viabilitas sel dipengaruhioleh sesuatu komponen yang terlepas dari resin akrilik.Komponen yang terlepas tersebut kemungkinan adalahmonomer metil metakrilat yang tidak bisa terpolimerisasisecara sempurna. Hal ini sesuai yang dikatakan olehpeneliti sebelumnya, bahwa proses polimerisasi tidakpernah berjalan sempurna. Tidak terpolimerisasinyamonomer akan tertinggal dalam polimer sesudah proseskuring.17 Komponen dari resin akrilik misal: dimetakrilat,metil metakrilat, asam benzonat, dan formaldehidmerupakan komponen toksik yang dapat terlepas dari resinkomposit menyebabkan efek toksisitas.13

Metil metakrilat merupakan komponen utamamonomer resin akrilik kemungkinan mempengaruhiviabilitas sel pada penelitian ini. Monomer metil metakrilatmemperlihatkan tanda toksik pada monosit, granulosit dansel endotel pada penelitian in vitro setelah diinkubasi satumenit pada dosis 10 mg mL-1.18 Evalusi dari berbagaimerek dagang basis gigi tiruan, eluates dari resin akrilikmempunyai efek toksisitas terhadap sel epitel ronggamulut, gingival fibroblast manusia. Efek ini dapatmenghambat pertumbuhan sel, replikasi DNA, sentesisRNA, dan proses metabolik sel.13

Evaluasi mikroskop pada uji MTT esei terlihat, selgingival dan periodontal ligamen fibroblas yang terpaparmethyl methacrylate (MMA), isobutyl methacrylate(IBMA) dan 1,6-hexanediol dimethacrylate (1,6-HDMA)setelah inkubasi 24 jam memperlihatkan karakteristikmorfologi sel menjadi tidak normal. Sel terlihat pyknosis,membulat, membengkak, batas membran sel tidak teraturdan kehilangan perlekatan pada lempeng mikrotiter. MTTesei dapat menentukan aktivitas dehidrogenasemitokondria sel yang digunakan sebagai indikator dariviabiltas sel.19

Bila ditinjau dari hubungan antara struktur monomerdan toksisitas dapat disimpulkan bahwa kelompokhidroksil dan metakrilat nampaknya akan meningkatkantoksisitas, dimetakrilat dengan 23 rantai oxyethylenememperlihatkan tingkat toksisitas yang tinggi daripadadimetakrilat dengan 14 rantai oxyethylene, efek toksisitasdari monomer berkorelasi dengan logarithm dari koefisientoktanol/air (log P).20

Resin akrilik jenis rapid heat cured yang prosespolimerisasi diperpanjang dari anjuran pabrik, viabilitassel yang terdeteksi tidak ada perbedaan yang bermakna.Tidak terjadi penurunan viabilitas sel fibroblast BHK 21pada permukaan resin akrilik.

Toksisitas dapat dihubungkan dengan viabilitas selyang merupakan faktor utama biokompatibilitas suatumaterial di kedokteran gigi yang secara umum ditentukandengan uji sel kultur secara in vitro. Dibandingkan denganpenelitian secara in vivo, pada penelitian secara in vitrolebih mudah dikontrol, sistem parameter penilaian yangdigunakan lebih sederhana, meminimalkan variabelconfounding, dan penentuan mekanisme toksisitas lebihspesifik. Meskipun hasil penelitian secara in vitro secarakuantitatif tidak dapat dikorelasikan dengan hasil in vivo.Beberapa klinikus melaporkan ada toksisitas jaringanketika jaringan tersebut terpapar komponen yang terlepasdari resin akrilik yang terpolimerisasi. Jaringan ronggamulut secara langsung akan kontak secara in situ oleh resinakrilik yang terpolimerisasi sehingga mendapatkankonsentrasi bahan kimia tertinggi. Hal ini akanberpengaruh terhadap kerusakan jaringan yang lebihbesar.19 Oleh karena itu metode yang digunakan untukmengurangi substansi yang terlepas dari basis gigi tiruanyang baru diproses sebelum digunakan dalam ronggamulut, sebaiknya gigi tiruan direndam dalam air palingsedikit satu hari atau direndam dalam air panas suhu50° C.14, 21

Hasil penelitian ini dapat disimpulkan tidak terjadipenurunan viabilitas sel fibroblast BHK-21 pada resinakrilik jenis rapid heat cured bila lama polimerisasidiperpanjang dari 20 menit.

DAFTAR PUSTAKA

1. Craig RG, Powers JM. Restorative dental materials. 11st ed. StLouis, MO, Mosby; 2002. p. 636–89.

2. Parvizi A, Linquist T, Schneider R, Williamson D, Boyer D,Dawson DV. Comparasion of the dimensional accuracy of injection-molded denture base materials to that of conventional pressure-pack acrylic resin. J Prosthodont 2004; 13 (2): 83–9.

3. Combe EC. Notes on dental materials. 6th ed. New York: ChurchilLivingstone; 1992. p. 158–60.

4. Harrison A, Huggett R. The effect of curing cycle on residualmonomer level of acrylic resin denture base polymer. J ProsthetDent 1992; 20: 370–74.

5. Intan Nirwana. Kandungan monomer sisa pada resin akrilik rapidheat cured dengan proses kuring berbeda. Majalah Kedokteran Gigi2001; 34(3): 119–21.

6. Hensten, Petterson A, Yacobson N. Preceived side effect ofbiomaterials in prosthetic dentistry. J Prosthet Dent 1991; 65:138–44.

7. Taira M, Nakao H, Matsumoto T, Takahashi J. Cytotoxic effect ofmethyl methacrylate on 4 cultured fibroblasts. Int J Prosthodont2000; 13: 311–15.

8. Anussavice KJ. Phillips' science of dental materials. 11st ed.Elsevier Science (USA) Saunders; 2003. p. 172–94.

9. Schmalz G. The biocompatibility of non-amalgam dental fillingmaterials. Eur J Oral Sci 1998; 106: 696–706.

10. Rose EC, Bumann J, Jonas IE, Kappert HF. Contribution to thebiological assessment of orthodontic acrylic materials.Measurement of their residual monomer output and cytotoxicity. JOrofac Orthop 2000; 61(4): 246–57.

11. Intan Nirwana. Sitotoksisitas resin akrilik rapid heat polymerizedterhadap kultur sel BHK. Majalah Kedokteran Gigi 2004; 37(1):15–8.

72 Maj. Ked. Gigi. (Dent. J.), Vol. 38. No. 2 April–Juni 2005: 68–72

12. Dash P. Standard protocols MTT assay. 2002. Avalaible http://web.bham.ac.uk/can4psd4/brum/mtt.html. Accessed 8/1/2002.

13. Sheridan PJ, Koka A, Ewoldsen NO, Lefebre CA, Lavin MT.Cytotoxicity of denture base resins. Int J Prosthodont 1997; 10:73–7.

14. Kedjarune U, Charoenworaluk N, Kootongkaew S. Release ofmethyl methacrylate from heat-cured and autopolymerized resins:Cytotoxicity testing releated to residual monomer. AustralianDental Journal. 1999; 44: (1) 25–30.

15. De Clerek JP. Microwave polymerization of acrylic resin used indental prostheses. J Prosthet Dent 1987; 57: 650–8.

16. Dogan A, Bek B, Cevik NN, Usanmaz A. The effect of preparationconditions of acrylic denture base materials on the level of residualmonomer, mechanical properties and water absorption. J.Dent 1995;23: 313–8.

17. Kostoryz EL, Eick JD, Glaros AG, Judy BM, Welshons WV,Busmater S and Yourtee DM. Biocompatibility of hydroxylatedmetabolisme of BISGMA and BFDGE. J Dent Res 2003; 82: (5)367–71.

18. Dahl OE, Garvik LJ, Lyberg T. Toxic effects of methylmethacrylatemonomer on leukocytes and endothelial cells in vitro. Acta OrthopScan 1994; 65: 147–53.

19. Lai Y, Chen YT, Lee Sy, Shienh TM, Hung SL. Cytotoxic effectsofdental resin liquids on primary gingival fibroblasts andperiodontal ligament cells in vitro. J Oral Rehab 2004; 31 (12):1165–72.

20. Yoshi E. Cytotoxic effects of acrylates and methacrylates :relationships of monomer structures and cytotoxicity. J BiomedMater Res 1997; 37: 517–24.

21. Tsuchiya H, Hoshino Y, Tajima K and Takagi N. Leaching andcytotoxicity offormaldehyde and methyl maethacrylate from acrylicresin denture base materials. J Prosthet Dent 1994; 71(6): 618–24.