kontrol kualitas dan metode analisis

8/18/2019 Kontrol Kualitas Dan Metode Analisis

1/29

1

Makalah Fitofarmasi

Kontrol Kualitas dan Metode Analisis Bahan

Alam

Oleh:

Aprillia Hardiyani Tanto

051311133066

Kelas A

Kelompok 2

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS AIRLANGGA

SURABAYA

2016


2/29

2

DAFTAR ISI

COVER ………………………………………………………………………………… 1

DAFTAR ISI …………………………………………………………………………… 2

I. Kontrol Kualitas ………………………………………………………………… 4

1. 1. Pendahuluan Kontrol Kualitas ………………………………………….. 4

1. 2. Parameter untuk Kontrol Kualitas Obat Herbal ………………………… 6

1. 2. 1. Pemeriksaan makroskopis dan mikroskopis ……………………. 6

1. 2. 2. Penetapan Bahan Asing ………………………………………… . 7

1. 2. 3. Penetapan Abu ………………………………………………… .... 7

1. 2. 4. Logam Berat ……………………………………………………… 8

1.

2. 5. Penetapan Kontaminan Mikroba dan Aflatoxins ………………… 8

1.

2. 6. Penetapan Residu Pestisida ………………………………………. 9

1. 2. 7. Penetapan Residu Radioaktif …………………………………….. 9

1. 2. 8. Metode Analisis ………………………………………………… .. 9

II. Metode Analisis Bahan Alam ……………………………………………………. 10

2. 1. Pendahuluan …………………………………………………….... 10

2. 2. Metode Analisis ………………………………………………… .. 11

2. 2.1. TLC ……………………………………………………………… . 11

2.2.2. HPLC …………………………………………………………… .. 12

2.2.3. LC-MS …………………………………………………………… 13

2.2.4. LC-NMR …………………………………………………………. 13

2.2.5. GC-MS …………………………………………………………… 14

2.2.6. GC-FID …………………………………………………………… 14

2.2.7. SFC ……………………………………………………………… .. 15

2. 3. Validasi Metode Analisis …………………………………………. 15

2.3.1. Tujuan Validasi Metode Analisis …………………………………. 15

2.3.2. Panduan Validasi Metode Analisis ……………………………… 16

2.3.3. Karakteristik Kinerja Analitik yang Digunakan dalam Validasi

Metode ………………………………………………………… ... 17


3/29

3

2.3.4. Kategori Metode Analisis ………………………………………… 25

III. DAFTAR PUSTAKA …………………………………………………………… . 27


4/29

4

I. KONTROL KUALITAS OBAT HERBAL

1.1. PENDAHULUAN

Pengendalian mutu untuk efikasi dan dan keamanan dari obat herbal adalah hal

yang sangat penting. Kualitas dapat didefinisikan sebagai status obat yang ditentukan

oleh identitas, kemurnian, konten, dan sifat fisika, kimia serta biologi atau dari proses

manufakturnya. Kontrol kualitas adalah istilah yang mengacu kepada proses yang terjadi

dalam mempertahankan kualitas dan validitas dari sebuah produk yang diproduksi.

Istilah “obat herbal” menunjukkan tanaman atau bagian tanaman yang telah

diubah menjadi sediaan fitofarmasetika dengan proses sederhana yang melibatkan proses

panen, pengeringan, dan penyimpanan (EMEA, 1998).

Secara umum, kontrol kualitas didasarkan pada tiga definisi penting menurut

farmakope, yaitu:

1. Identitas – harus terdiri dari satu tumbuhan.

2. Kemurnian – tidak boleh ada kontaminan lain selain tumbuhan itu sendiri.

3. Konten atau pengujian – Konstituen aktif harus berada dalam batas-batas yang

ditentukan.

Hal ini jelas bahwa konten merupakan salah satu hal yang paling sulit untuk diuji,

karena dalam obat herbal konstituen aktifnya tidak diketahui. Terkadang senyawa marker

dapat digunakan, yang mana berarti, secara kimiawi konstituennya dapat ditentukan

untuk tujuan pengendalian, terlepas apakah senyawa itu memiliki aktivitas terapetik atau

tidak (WHO, 1992).

Identitas dapat diketahui melalu pengamatan makro dan mikroskopis. Wabah

penyakit tanaman dapat mengakibatkan perubahan fisik tanaman dan menyebabkan

identifikasi yang salah (WHO, 1988; Smet, 1999). Pada suatu waktu, pelabelan terhadap

kualitas botani yang salah dapat menjadi masalah.

Kemurnian, erat hubungannya dengan penggunaan obat-obatan secara aman dan

beberapa faktor lain seperti kadar abu, kontaminan (misalnya benda asing dalam bentuk

tumbuhan lain), dan logam berat. Namun, sehubungan dengan berkembangnya aplikasi


5/29

5

dari metode analisis modern, evaluasi kemurnian juga termasuk mengenai kontaminan

mikroba, aflatoxin, radioaktivitas, dan residu pestisida. Metode analisis seperti analisis

fotometri, kromatografi lapis tipis (KLT), kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT),

kromatografi lapis tipis kinerja tinggi (HPTLC), dan kromatografi gas dapat digunakan

dalam rangka menghasilkan komposisi yang konstan dari preparasi obat herbal.

Kandungan atau penetapan adalah adalah hal yang paling sulit dilakukan dalam

lingkup kontrol kualitas, karena pada obat herbal konstituen aktifnya tidak diketahui.

Dalam kasus lain, di mana tidak terdapat konstituen aktif atau senyawa penanda yang

dapat ditentukan untuk obat herbal, persentasi dari senyawa yang dapat diekstraksi

dengan sebuah pelarut mungkin digunakan sebagai bentuk pengujian, pendekatan ini

dapat dilihat di farmakope (WHO, 1996; WHO, 1998).

Bentuk khusus dari pengujian adalah penetapan kadar minyak esensial dengan

distilasi uap. Di mana konstituen aktif (misalnya sennosida pada senna) atau senyawa

marker (misalnya alkilamida pada Echinacea) diketahui, penetapan kadar dengan metode

analisis kimia modern seperti spektrofotometri UV/VIS, TLC, HPLC, HPTLC, GC,

spektroskopi massa, atau kombinasi GC/MS dapat digunakan (Watson, 1999).

Beberapa masalah yang tidak terjadi pada obat sintetis sering memengaruhi

kualitas obat herbal. Contohnya:

1. Obat herbal biasanya merupakan campuran dari banyak konstituen.

2. Senyawa aktifnya, pada banyak kasus tidak diketahui.

3. Metode analisis yang selektif atau senyawa referens mungkin tidak tersedia secara

komersial.

4. Bahan tanaman secara kimiawi dan alami bervariasi.

5. Adanya chemo-varieties dan chemo-cultivars.

6. Sumber dan kualitas dari bahan mentah bervariasi.

Metode pemanenan, pengeringan, penyimpanan, transportasi, dan pemrosesan

(sebagai contoh bentuk ekstraksi dan polaritas dari pelarut ekstraksi, ketidakstabilan

konstituen, dll.) juga memengaruhi kualitas obat herbal (Wani, 2007).

Senyawa marker adalah konstituen kimiawi yang sudah diketahui dari obat herbal

yang penting untuk kualitas produk akhir. Idealnya, senyawa marker yang terpilih juga


6/29

6

merupakan senyawa yang memiliki efek farmakologis bagi tubuh. Ada 2 kategori

standarisasi. Kategori pertama, “true” standardization, senyawa fitokimia pasti atau

kelompok konstituen yang diketahui memiliki aktivitas. Ginkgo dengan kandungan 26%

ginkgo flavon dan 6% terpen adalah contoh klasiknya. Senyawa ini sangat terkonsentrasi dan

tidak mewakili tumbuhan secara keseluruhan, dan sekarang dianggap sebagai fitofarmasi.

Dalam banyak kasus, senyawa ini jauh lebih efektif daripada bila digunakan sebagai satu

tumbuhan. Namun, prosesnya dapat memungkinkan berkurangnya efikasi dan potensi efek

samping serta interaksi obat herbal dapat meningkat. Kategori standarisasi yang lain

didasarkan pada jaminan produsen pada kehadiran senyawa marker dalam jumlah yang pasti;

hal ini bukan merupakan indikator aktivitas terapetik atau kualitas dari tumbuhan (Kunle,

2012).

1.

2. Parameter untuk Kontrol Kualitas Obat Herbal

1.2. 1. Pemeriksaan makroskopis dan mikroskopis

Tanaman obat dikategorikan menurut pengamatan sensorik, karakter mikroskopik

dan makroskopiknya. Sebuah pemeriksaan untuk menentukan karakteristik ini adalah

langkah awal untuk menunjukkan identitas dan kemurnian dari suatu bahan, dan harus

dilakukan sebelum melakukan tes lain yang lebih jauh (lebih kompleks). Jika

memungkinkan, spesimen yang telah diautentifikasi dari bahan yang akan diperiksa dan

sampel yang sudah sesuai dengan kualitas far makope harus ada untuk dijadikan sebagai

referensi. Inspeksi visual merupakan jalan paling sederhana dan cepat untuk

membuktikan identitas, kemurnian, dan jika memungkinkan kualitas dari bahan yang

diperiksa. Jika sebuah sampel ditemukan berbeda secara signifikan, dari segi warna,

konsistensi, aroma atau rasanya, dari spesifikasi, diperkirakan bahan ini tidak memenuhi

persyaratan. Namun, penilaian harus diulangi saat menentukan aroma dan rasa, karena

penilaian yang bervariasi dari satu orang dengan orang yang lain atau oleh satu orang

pada waktu yang berbeda.

Identitas makroskopis dari bahan tanaman obat adalah didasarkan pada bentuk,

ukuran, warna, karakteristik permukaan, tekstur, karakteristik pecahan, dan penampilan

dari bagian yang terpotong. Namun, karena karakteristik-karakteristik ini dinilai secara


7/29

7

subyektif, masih memungkinkan senyawa tambahan atau adulterant terlihat sangat mirip

dengan senyawa asli yang diperiksa. Sering dibutuhkan pemeriksaan secara mikroskopi

atau fisiko-kimia.

Inspeksi mikroskopis bahan tanaman obat sangat diperlukan untuk identifikasi

bahan yang sudah tidak dalam bentuk asalnya atau bentuk serbuk; spesimennya mungkin

harus direaksikan dengan reagen kimia. Pemeriksaan mikroskopi sendiri tidak selalu

dapat menyajikan identifikasi yang lengkap, meskipun telah digabungkan dengan metode

analisis lain, hal ini sering dapat menambahkan bukti-bukti yang kurang mendukung.

Informasi tambahan apapun yang berguna untuk preparasi atau analisis juga harus

dimasukkan ke dalam prosedur pemeriksaan untuk bahan tanaman, sebagai contoh

penentuan pembuluh tumbuhan dan perbandingan palisade.

1. 2. 2. Penetapan Bahan Asing

Tumbuhan yang dikumpulkan harus bersih dari tanah, bagian serangga, atau

kotoran hewan dsb. Bahan tanaman obat harus bersih secara keseluruhan dari tanda-tanda

kontaminasi yang dapat terlihat oleh mata seperti lumut atau serangga, dan kontaminasi

hewan lainnya, termasuk kotoran hewan. Tidak ada bau yang tidak normal, diskolorasi,

lendir, dan tanda kemunduran harus sudah dideteksi. Selama penyimpanan, bahan-bahan

harus dijaga pada tempat yang bersih dan hieginis sehingga tidak ada kontaminasi.

Penanganan khusus harus dilaksanakan untuk menghindari pembentukan lumut, karena

lumut memungkinkan pembentukan aflatoxin. Pemeriksaan makroskopis dapat dilakukan

untuk menentukan adanya bahan asing pada seluruh bagian tanaman atau bagian yang

telah dipotong. Namun, pemeriksaan mikroskopis juga dibutuhkan untuk bahan serbuk.

Tanah, pasir, batu, debu, dan bahan asing anorganik lainnya harus dibersihkan sebelum

bahan tanaman obat dipotong atau diuji.

1. 2. 3. Penetapan Abu

Sisa abu karena pembakaran dari bahan tanaman obat ditentukan dengan 3

metode yang berbeda yang mana mengukur kadar total abu, kadar abu tidak larut asam,

dan abu larut air. Metode pengukuran kadar abu total didesain untuk mengukur jumlah


8/29

8

total dari bahan yang tersisa setelah pembakaran. Hal ini termasuk baik “abu fisiologis”

yang berasal dari jaringan tanaman itu sendiri, dan “abu non -fisiologis” yang merupakan

residu dari bahan eksternal yang menempel pada permukaan tanaman.

Abu tidak larut asam adalah residu yang didapat setelah merebus abu total dengan

asam klorida encer, dan membakar bahan sisa yang tidak larut, kemudian diukur jumlah

silica yang ada, terutama sebagai pasir dan tanah yang mengandung silica. Abu larut air

adalah perbedaan berat antara abu total dan residu setelah melarutkan abu total dalam air

(Belle, 2011).

1. 2. 4. Penetapan Logam Berat

Kontaminasi karena logam berat dapat terjadi baik karena disengaja maupun

tidak. Kontaminasi karena logam berat seperti merkuri, timbal, tembaga, kadmium, dan

arsen pada obat herbal dapat terjadi karena beberapa sebab, termasuk polusi lingkungan

dan dapat berakibat berbahaya secara klinis terhadap kesehatan pengguna obat herbal.

Oleh karena itu, jumlah logam berat pada obat herbal harus dibatasi (AOAC, 2005;

WHO, 1998c; De Smet, 1992).

Penentuan logam berat secara langsung dan sederhana banyak ditemukan dalam

banyak farmakope dan didasarkan pada reaksi warna dengan reagen khusus seperti

thioasetamida atau dietilditiokarbamat, dan jumlah yang ada ditentukan dengan

membandingkannya dengan sebuah standar (WHO, 1998). Analisis instrumental harus

digunakan ketika ada logam berat dalam jumlah kecil, dalam campuran, atau saat analisis

harus bersifat kuantitatif. Secara umum, metode utama yang biasa digunakan adalah

atomic absorption spectrophotometry (AAS), inductively coupled plasma (ICP) dan

neutron activation analysis (NAA) (Watson, 1999).

1. 2. 5. Penetapan Kontaminan Mikroba dan Aflatoxin

Jumlah lempeng total bakteri aerobik, bakteri pathogen seperti enterobacteria, E.

coli, salmonella, Pseudomonas aeruginosa, Stapjyloccocus aureus, dan adanya aflatoxin

dsb (Belle, 2011).


9/29

9

1. 2. 6. Penetapan Residu Pestisida

Batasan untuk residu pestisida harus ditetapkan menurut rekomendasi dari Food

and Agriculture Organization of United Nations (FAO) dan WHO yang mana sudah

dikeluarkan untuk makanan dan pakan hewan. Rekomendasi ini juga termasuk mengenai

metodologi analisis untuk penetapan kadar residu pestisida secara spesifik (Belle, 2011).

Meskipun tidak ada laporan serius mengenai toksisitas dari pestisida dan

fumigants, penting untuk memastikan bahwa tumbuhan dan produk herbal terbebas dari

bahan kimia ini atau setidaknya tetap dikontrol agar tetap berada pada rentang aman (De

Smet, 1992).

Cara untuk menetapkan kadar residu pestisida, sampel dari obat herbal diekstrak

dengan prosedur standar, kotoran dibersihkan dengan cara partisi dan/atau adsorpsi, dan

masing-masing residu pestisida diukur dengan GC, MS, atau GC-MS. Beberapa prosedur

sederhana telah dikeluarkan oleh WHO dan Farmakope Eropa telah menetapkan batasan

umum untuk residu pestisida pada obat (WHO, 1996a, 1998a, 2000; De Smet, 1999;

AOAC, 2005).

1. 2. 7. Penetapan Residu Radioaktif

Di lingkungan banyak sekali sumber ionisasi radiasi, termasuk radionuklida, oleh

karena itu perlu pembatasan tingkat paparan radioaktif (AOAC, 2005; WHO, 2000; De

Smet, 1992). Paparan radioaktif dari tanaman harus diperiksa menurut acuan dari

International Atomic Energy (IAE) di Vienna dan menurut WHO (Shrikumar dkk, 2004).

1. 2. 8. Metode Analisis

Penetapan konstituen secara kuantitatif telah dibuat lebih mudah pada

perkembangan instrument analisis dalam waktu terakhir. Kemajuan terbaru dalam isolasi,

pemurnian, dan elusidasi struktur dari metabolit bahan alam telah memungkinkan untuk

membangun strategi yang tepat untuk penentuan dan analisis kualitas dan standarisasi

obat herbal. Klasifikasi tumbuhan dan organisme dengan kandungan kimianya disebut

sebagai kemotaksonomi. TLC, HPLC, GC, Kuantitatif TLC, dan HPTLC dapat

menentukan homogenitas ektrak tumbuhan. Over Pressured Layer Chromatography


10/29

10

(OPLC), infra merah dan spektrometri UV/VIS, MS, GC, LC dapat digunakan tersendiri

atau dalam kombinasi seperti LC-MS, dan GC-MS, Resonansi Magnetik Inti (RMI),

teknik elektroforesa, terutama dengan hyphenated chromatographic techniques adalah

alat-alat dengan peforma tinggi, sering digunakan untuk standarisasi dan mengontrol

kualitas baik bahan mentah dan produk jadi. Hasil dari teknis yang canggih ini berupa

sidik jari kimia terkait dengan bahan alam atau kotoran yang ada pada ekstrak tanaman

(WHO, 2002c). Berdasarkan konsep foto ekivalen, sidik jari kromatografi dari obat

herbal dapat digunakan untuk kontrol kualitas.

II. METODE ANALISIS BAHAN ALAM

2.1. Pendahuluan

Obat herbal tradisional telah digunakan dan proses preparasinya telah dilakukan

secara luas selama ribuan tahun baik di negara berkembang maupun negara maju karena

berasal dari alam dan karena efek yang lebih rendah atau ketidakpuasan atas obat-obat

sintetis. Salah satu karakteristik dari proses pembuatan obat tradisional adalah bahwa

semua obat-obatan herbal, baik yang mengandung ramuan tunggal atau beberapa ramuan

dalam formula campuran, diekstraksi dengan air mendidih selama proses perebusan. Hal

ini mungkin menjadi alasan utama mengapa kontrol kualitas dari obat herbal tradisional

menjadi lebih sulit daripada obat-obat sintetis. Seperti yang ditunjukkan dalam “Pedoman

Umum Metodologi Riset dan Evaluasi Obat Tradisional (World Health Organization,

2000)”, “Meskipun keberadaannya dirasakan dan penggunaanya dilakukan secara terus

menerus selama berabad-abad dan popularitasnya serta penggunaannya yang ekstensif

selama beberapa dekade terakhir, obat tradisional belum resmi diakui di sebagian besar

Negara.”

Pada zaman dahulu obat digunakan untuk mengobati pasien secara individual dan

obat disiapkan sesuai dengan kebutuhan pasien tetapi sekarang keadaan telah berubah,

obat-obatan herbal sedang diproduksi dalam skala besar dan produsen menemukan

banyak permasalahan seperti ketersediaan bahan baku berkualitas baik, otentikasi bahan

baku, ketersediaan standar, metodologi standarisasi yang tepat untuk obat tunggal dan


11/29

11

formulasinya, parameter kontrol kualitas, dll. Maka, konsep kualitas dari langkah pertama

adalah faktor penting yang harus mendapatkan perhatian yang baik (Kamboj, 2012).

Kandungan kimia dalam tanaman melibatkan adanya konstituen penting yang

memiliki efek terapi yang biasanya terkait dengan banyak bahan inert (zat pewarna,

selulosa, lignin, dll). Bahan aktif diekstrak dari tanaman dan dimurnikan untuk

mendapatkan efek terapi sesuai dengan aktivitas farmakologisnya. Jadi, kontrol kualitas

dari bahan mentah obat tradisional dan konstituennya sangat penting dalam sistem

pengobatan modern. Kurangnya parameter standar yang tepat untuk standarisasi obat

herbal dan beberapa contoh herbal standar, mengakibatkan adanya obat herbal yang

dipalsukan. Untuk menghindari hal tersebut dan memenuhi dorongan rasa ingin tahu akan

obat herbal, standarisasi obat herbal adalah wajib (Chaundhry, 1999; Kokate, 2005;

Raina, 2003; Raven, 1999; Yan, 1999).

Oleh karena itu, setiap obat tradisional perlu diperiksa kualitasnya untuk

memastikan bahwa obat tradisional tersebut telah memenuhi persyaratan kualitas dan

bersifat konsisten. Standarisasi menjamin bahwa produk yang ada terpercaya dalam hal

kualitas, efektifitas, keamanan, dan kinerjanya (Kamboj, 2012).

2. 2. Metode Analisis

2. 2. 1. TLC (Thin L ayer Chromatography)/ KLT (Kromatografi Lapis Tipis)

Kromatografi Lapis Tipis, yang dikenal sebagai KLT, adalah salah satu

teknik kromatografi paling sederhana dan banyak digunakan untuk pemisahan

campuran senyawa. Dalam penaksiran fitokimia dari obat-obatan herbal, KLT

secara luas digunakan untuk alasan-alasan sebagai berikut:

1. Analisis ekstrak herbal yang cepat dengan sampel clean-up yang minimal.

2. Dapat menyediakan informasi kualitatif atau semikuantitatif tentang senyawa

yang telah dipisahkan.

3. Dapat dilakukan kuantifikasi zat-zat kimia. Proses sidik jari menggunakan

KCKT dan GLC juga dilakukan dalam kasus-kasus tertentu.


12/29

12

Dalam proses penyidikjarian menggunakan KLT, data yang dapat dicatat

menggunakan pemindai KLT kinerja tinggi adalah kromatogram, nilai retardation

factor (Rf), warna dari pita- pita yang terpisahkan, spectrum absorpsi, λ maks, dan

shoulder infection dari pita-pita yang terpisahkan. Semua hal tersebut, bersama

dengan profil derivatisasi dari reagen yang berbeda, menunjukkan profil sidik jari

KLT dari sampel. Informasi yang diperoleh dapat diaplikasikan pada identifikasi

obat yang asli, mengeluarkan bahan pemalsu, dan menjaga kualitas dan

konsistensi obat. Penyidikjarian menggunakan KCKT antara lain pencatatan

kromatogram, waktu retensi dari puncak-puncak secara individual, dan spektra

absorpsi (pencatatan menggunakan detektor photodiode array) dengan fase mobil

yang berbeda-beda. Demikian juga dengan GLC, digunakan untuk menghasilkan

profil sidik jari dari minyak-minyak mudah dari obat-obatan herbal. Selain itu,

pendekatan-pendekatan terbaru dalam pengaplikasian kromatografi dan

spektrometri secara berhubungan seperti Kromatografi Cair Kinerja Tinggi-Diode

Array Detection (HPLC-DAD), Kromatografi Gas-Spektroskopi Massa (GC-MS),

Capillary Electrophoresis-Diode Array Detection (CE-DAD), Kromatografi Cair

Kinerja Tinggi-Spektroskopi Massa (HPLC-MS) dan Kromatografi Cair Kinerja

Tinggi-Spektroskopi Resonansi Magnetik Inti (HPLC-NMR) dapat menyediakan

informasi spektrum tambahan yang akan sangat berguna untuk analisis kualitatif

dan bahkan untuk elusidasi struktur secara on-line (Liang et al., 2004, Ong et al.,

2002).

2. 2. 2 HPLC (High Peformance L iquid Chromatography)

HPLC analisis dan preparatif digunakan secara luas di industry farmasi

untuk mengisolasi dan memurnikan senyawa herbal. Pada dasarnya ada dua jenis

HPLC preparatif: HPLC dengan tekanan rendah (di bawah 5 bar) dan HPLC

tekanan tinggi (tekanan di atas 20 bar) (Chimeze et al. 2008). Parameter penting

yang harus diperhatikan adalah resolusi, sensitivitas, dan kecepatan waktu analisis

pada analisis menggunakan HPLC di mana baik derajat kemurnian solute dan

jumlah senyawa yang dapat dihasilkan per unit waktu, contoh throughput atau


13/29

13

recovery pada HPLC preparatif (Rao et al., 2009). Pada HPLC preparative

(tekanan di atas 20 bar), kolom stainless steel yang lebih panjang dan packing

materials (ukuran partikel 10-30 mikrometer) dibutuhkan. Contoh dari kolom

silica fase normal adalah Kromasil 10 mikrometer, Kromasil 16 mikrometer,

Chiralcel AS 20 mikrometer dan di mana untuk fase terbalik adalah Kromasil

C18, Kromasil C8, YMC C18. Tujuannya adalah untuk mengisolasi atau

memurnikan senyawa, di mana tujuan utama analisisnya adalah untuk

mendapatkan informasi mengenai sampel. Hal ini begitu penting dalam industri

farmasi mengingat untuk sekarang ini produk baru (alami, sintesis) harus

dikenalkan pada pasar sesegera mungkin. Memiliki teknik pemurnian yang sangat

baik membuat semakin sedikit waktu yang digunakan pada kondisi sintesis

(Bhutani, 2000; Marston, 2002; Brandt et al., 2002).

2. 2. 3. L iquid Chromatography-M ass Spectroscopy (LC-MS)

LC-MS telah menjadi metode pilihan dalam banyak tingkatan dalam

pengembangan obat (Lee, 1999). Hal mutakhir terakhir meliputi teknik

electrospray, thermospray, dan ionspray ionization yang mana menawarkan

keuntungan unik dalam hal sensitivitas deteksi yang tinggi dan spesifisitas,

spektroskopi massa ion cairan sekunder, kemudian spektroskopi massa laser

dengan 600 MHz menganalisis penentuan berat molekul protein dan peptide

secara akurat. Teknik ini juga dapat mendeteksi pola isotop (Bhutani, 2000).

2. 2. 4. L iquid Chromatography – Nuclear Magnetic Resonance (LC-NMR)

LC-NMR mengembangkan kecepatan dan sensitivitas dari pendeteksian

dan diketahui berguna dalam bidang farmakokinetik, studi toksisitas, metabolism

obat, dan proses penemuan obat. Kombinasi dari teknis pemisahan kromatografi

dengan spektroskopi NMR adalah salah satu metode yang sangat baik dan hemat

waktu untuk pemisahan dan elusidasi struktur dari campuran senyawa yang tidak

diketahui, terutama untuk elusidasi struktur dari senyawa yang sensitive terhadap

sinar dan oksigen (Patil et al,. 2010).


14/29

14

2. 2. 5. Gas Chromatography (GC-MS)

Peralatan GC dapat secara langsung dihubungkan dengan pemindai cepat

spektroskopi massa dari berbagai tipe. GC dan GC-MS adalah metode yang

digunakan untuk analisis obat tradisional dengan kandungan senyawa yang

mudah menguap, berhubungan dengan sensitifitasnya, stabilitasnya, dan efisiensi

yang tinggi. Terutama, menghubungkan dengan MS akan menghasilkan informasi

yang terpercaya untuk analisis kualitatif dari senyawa kompleks (Guo et al., 2006

and Teo et al., 2008). Kecepatan alir dari kolom kapiler secara umum cukup

rendah sehingga keluarannya dapat dihubungkan langsung ke dalam ruang

ionisasi pada MS. Detektor paling sederhana pada GC adalah Ion Trap Detector

(ITD). Pada instrument ini, ion dibuat dari sampel yang telah dieluasi oleh ionisasi

kimia dan disimpan dalam sebuah bidang frekuensi radio; ion yang telah dijebak

kemudian diejeksikan dari area penyimpanan ke electron multiplier detector.

Pengejeksian ini dikontrol sehingga pemindaian pada rasio mass-to-charge

menjadi mungkin. Instrumen GC-MS telah digunakan untuk identifikasi dari

ratusan komponen senyawa yang ada pada alam dan sistem biologi (Sharma,

2009).

2. 2. 6. GC-FID

Banyak detector yang digunakan pada kromatografi gas. Detektor yang

paling umum digunakan adalah flame ionization detector (FID) dan thermal

conductivity detector (TCD). Penyambungan kolom kapiler kromatografi gas

degan FT-IR menghasilkan informasi yang sangat baik dalam pemisahan dan

identifikasi dari komponen dalam campuran yang berbeda (Sharma, 2009).

Keduanya sensitif untuk berbagai senyawa dalam rentang yang luas dan kedunya

juga sensitive bekerja untuk rentang konsentrasi yang luas. TCD merupakan

detektor yang universal dan dapat digunakan untuk mendeteksi komponen apapun

selain gas pembawa (selama konduktivitas termal senyawa yang dideteksi

berbeda dari gas pembawa, pada suhu detektor). FID lebih sensitif dari TCD


15/29

15

terutama untuk senyawa hidrokarbon. Namun, FID tidak dapat mendeteksi adanya

air. Kedua detektor ini cukup tegar (robust). Karena TCD adalah detektor yang

non-destruktif, detektor ini dapat digunakan dalam serangkaian analisis sebelum

penggunaan FID (bersifat destruktif), dan demikian dapat menghasilkan deteksi

komplementer dari analit yang sama (Patra et al ., 2010).

2. 2. 7. Supercri tical F lu id Chromatography (SFC)

Supercritical Fluid Chromatography adalah penggabungan dari

kromatografi gas dan cair yang mengkombinasikan keunggulan dari masing-

masing metode analisis. SFC memungkinkan pemisahan dan penentuan dari

sekelompok senyawa yang tidak dapat dideteksi oleh kromatografi cair atau gas.

SFC telah digunakan pada berbagai material termasuk bahan alam, obat,

makanan, dan pestisida (Matthew et al, 2006). Senyawa-senyawa ini bersifat non-

volatil dan labil secara termal sehingga prosedur GC tidak dapat digunakan atau

senyawa tersebut tidak mengandung gugus fungsi yang memungkinkan

pendeteksian oleh spektroskopi atau teknik elektrokimia pada LC (Patil et al.,

2010).

2. 3. Validasi Metode Analisis

2. 3. 1. Pendahuluan

Tujuan dari pengukuran analitis apapun adalah untuk memperoleh data

yang konsisten, terpercaya, dan akurat. Metode analisis yang telah divalidasi

memiliki peran utama dalam mencapai tujuan ini. Hasil dari validasi metode dapat

digunakan untuk menilai kualitas, reliability, dan konsistensi dari hasil analisis,

yang merupakan bagian integral dari praktik analisis yang baik. Validasi metode

analisis juga dipersyaratkan oleh sebagian besar peraturan dan standar kualitas

laboratorium (Huber, 2010). Menurut USP 36, validasi metode analisis adalah

pengumpulan bukti terdokumentasi yang menjelaskan bahwa prosedur analisis

sesuai untuk digunakan. Penggunaan prosedur yang sudah divalidasi dengan


16/29

16

instrumen analisis yang sudah dikualifikasi akan menghasilkan data pengujian

yang ajeg dan dapat dipercaya.

Metode analisis perlu divalidasi, diverifikasi, atau di re-validasi dalam hal-

hal berikut:

Sebelum penggunaan awal dalam pengujian rutin

Ketika dipindahkan ke laboratorium lain

Kapan saja saat kondisi atau parameter validasi dari metode yang sudah

divalidasi berubah (misalnya, instrument dengan karakteristik yang

berbeda atau sampel dengan matrix yang berbeda) dan perubahan itu

berada di luar lingkup asli dari metode

Validasi metode telah mendapat banyak perhatian dalam literatu dari

komite industri dan badan pembuat regulasi (Huber, 2010). Pada bagian ini akan

dibahas mengenai bagaimana validasi metode membantu dalam mendapatkan data

yang berkualitas tinggi.

2. 3. 2. Tujuan Validasi Metode

Validasi metode menurut United State Pharmacopeia (USP) dilakukan

untuk menjamin bahwa metode analisis akurat, spesifik, reprodusibel, dan tahan

pada kisaran analit yang akan dianalisis (Gandjar dan Rohman, 2009).Suatu metode analisis harus divalidasi untuk melakukan verifikasi bahwa

parameter-parameter kinerjanya cukup mampu untuk mengatasi problem analisis,

karenanya suatu metode harus divalidasi, ketika:

1. Metode baru dikembangkan untuk mengatasi problem analisis tertentu.

2. Metode yang sudah baku direvisi untuk menyesuaikan perkembangan atau

karena munculnya suatu problem yang mengarahkan bahwa metode baku

tersebut harus direvisi.

3. Penjaminan mutu yang mengindikasikan bahwa metode baku telah berubah

seiring dengan berjalannya waktu.

4. Metode baku digunakan di laboratorium yang berbeda, dikerjakan oleh analis

yang berbeda, atau dikerjakan dengan alat yang berbeda.


17/29

17

5. Untuk mendemonstrasikan kesetaraan antar 2 metode, seperti antara metode

baru dan metode baku (Gandjar dan Rohman, 2009).

2. 3. 3. Panduan Validasi Metode Analisis

Beberapa panduan yang digunakan dalam melakukan validasi metode

analisis antara lain:

ICH Q2A : Text on validation of analytical Procedure

ICH Q2B Validation of analytical procedures methodology

FDA-CDER ( Center for Drug Evaluation and Research)

a. Reviewer guidance validation of chromatographic methods

b. Submitting sample and analytical data for method

validation

c. Analytical procedure and method validation for human

studies

d. Bioanalytical method validation for human studies

USP: Validation of compendial method (Yuwono, 2014).

2. 3. 4. Karakteristik Kinerja Analitik yang Digunakan dalam Validasi

Metode

1) Akurasi

Akurasi suatu prosedur analisis adalah tingkat kedekatan antara

hasil pengujian dengan prosedur yang sedang divalidasi terhadap

nilai yang benar. Akurasi prosedur analisis harus ditetapkan

meliputi rentang nilai benar tersebut.

Akurasi dihitung sebagai persentase perolehan kembali dari

penetapan sejumlah analit yang ditambahkan dan diketahui

jumlahnya ke dalam sampel, atau sebagai selisih antara hasil rata-


18/29

18

rata dengan hasil benar yang diterima bersama dengan batas

kepercayaannya.

Dokumen ICH merekomendasikan bahwa akurasi ditetapkan

dengan menggunakan minimal 9 penetapan meliputi 3 tingkat

konsentrasi berbeda yang telah ditetapkan (misalnya 3 konsentrasi

dan 3 replikasi untuk masing-masing konsentrasi).

Penilaian akurasi dapat dilakukan dengan berbagai cara, termasuk

menilai persen perolehan kembali dari berbagai rentang pengujian,

atau menilai linearitas hubungan antara konsentrasi yang dihitung

terhadap konsentrasi sebenarnya (Kemenkes, 2014).

Perhitungan perolehan kembali dapat juga ditetapkan

dengan rumus sebagai berikut:

Rentang kesalahan yang diijinkan pada setiap konsentrasi analit

pada matriks dapat dilihat pada tabel

(Riyanto, 2014)


19/29

19

2) Presisi atau precision adalah ukuran yang menunjukkan derajat

kesesuaian antara hasil uji individual, diukur melalui penyebaran

hasil individual dari rata-rata jika prosedur diterapkan secara

berulang pada sampel-sampel yang diambil dari campuran yang

homogen.

Presisi diukur sebagai simpangan baku atau simpangan baku relatif

(koefisien variasi) dari satu seri pengukuran. Presisi meliputi

repeatability (keterulangan), intermediate precision (presisi

antara), dan reproducibility (ketertiruan).

a) Repeatability adalah keseksamaan metode jika dilakukan

berulang kali oleh analis yang sama pada kondisi sama dan

dalam interval waktu yang pendek. Repeatability dinilai

melalui pelaksanaan penetapan terpisah lengkap terhadap

sampel-sampel identik yang terpisah dari batch yang sama,

jadi memberikan ukuran keseksamaan pada kondisi yang

normal.

b) Presisi antara menyatakan keragaman dalam laboratorium

yang dilakukan pada hari yang berbeda atau oleh analis

yang berbeda atau peralatan yang berbeda di laboratorium

yang sama (Kemenkes, 2014).

c) Reproducibility adalah keseksamaan metode jika

dikerjakan pada kondisi yang berbeda. Biasanya analisis

dilakukan dalam laboratorium-laboratorium yang berbeda

menggunakan peralatan, pereaksi, pelarut, dan analis yang

berbeda pula.

Kriteria seksama diberikan jika metode memberikan simpangan

baku relatif (RSD) atau koefisien variasi (CV) 2% atau kurang

(Riyanto, 2014).


20/29

20

Dokumen ICH merekomendasikan bahwa repetabilitas ditetapkan

dengan menggunakan minimal 9 penetapan meliputi suatu rentang

konsentrasi khusus untuk prosedur (misalnya 3 konsentrasi dan 3

replikasi untuk masing-masing konsentrasi, atau minimal 6

penetapan pada konsentrasi uji 100%) (Kemenkes, 2014).

3) Spesifisitas

Dokumen ICH mendefinisikan spesifisitas sebagai kemampuan

menguji secara tepat suatu analit dengan adanya komponen lain

dan diperkirakan ada sebagai cemaran, hasil degradasi, dan matriks

sampel. Ketiadaan spesifisitas dari prosedur analisis dapat diatasi

dengan penggunaan prosedur analitik pendukung. [Catatan

beberapa organisasi internasional menggunakan istilah selektivitas

untuk menggantikan spesifisitas.] Untuk menjelaskan definisi di

atas dapat digunakan implikasi berikut:

a) Uji identifikasi prosedur harus menjamin identitas analit.

b) Uji kemurnian prosedur harus menjamin dalam penetapan

akurat kandungan cemaran dalam analit (seperti senyawa

sejenis, batas logam berat, cemaran organik mudah

menguap).

c) Penetapan kadar Prosedur harus menjamin dan memberikan

pernyataan akurat pada kadar atau potensi analit dalam

sampel.

Dokumen ICH menyatakan, jika digunakan prosedur kromatografi,

maka kromatogram harus disertakan untuk menunjukkan derajatselektivitasnya, dan puncak harus diberi tanda. Uji kemurnian

puncak (dengan “ Diode Array” atau Spektrometri Massa) dapat

digunakan untuk menunjukkan bahwa puncak kromatogram analit

tidak mengandung komponen lain (Kemenkes, 2014).


21/29

21

4) Batas Deteksi

Batas deteksi adalah karakteristik uji batas. Ini merupakan

konsentrasi terendah analit dalam sampel yang dapat dideteksi,

tetapi tidak perlu kuantitatif dalam kondisi percobaan yang

ditentukan. Batas deteksi umumnya dinyatakan sebagai konsentrasi

analit (misalnya persen, bpj, bpm) dalam sampel (Kemenkes,

2014). Pengujian dapat dilakukan dengan 3 cara:

a) Based on Visual Evaluation

Evaluasi visual bisa digunakan untuk metode non-

instrumental maupun instrumental. Batas deteksi ditentukan

oleh analisis sampel dengan konsentrasi analit yang

diketahui dan dengan melakukan analisis dengan analit

yang masih dapat dideteksi pada konsentrasi terkecil.

b) Based on Signal-to-Noise

Pendekatan ini hanya dapat dilakukan pada prosedur

analisis yang menunjukkan baseline noise.

Penentuan dari rasio signal-to-noise dilakukan dengan

membandingkan sinyal dari blanko dan sinyal dari sampel

dengan konsentrasi rendah yang diketahui tetapi analit

masih dapat dideteksi. Dikatakan batas deteksi diterima bila

perbandingan signal-to-noise adalah 3 atau 2:1.

c) Based on the Standard Deviation of the Response and the

Slope

Batas deteksi dapat ditunjukkan dengan:

Slope S dapat diketahui dari kurva kalibrasi analit (ICH

Q2-R1, 2005).


22/29

22

5) Batas Kuantitasi

Batas kuantitasi adalah konsentrasi terendah dari analit dalam

sampel yang ditetapkan dengan akurasi dan presisi yang dapat

diterima dalam kondisi percobaan yang telah ditetapkan. Batas

kuantitasi dinyatakan sebagai konsentrasi analit (misalnya persen,

bpj, bpm) dalam sampel (Kemenkes, 2014). Pengujian dapat

dilakukan dengan 3 cara:

a) Based on Visual Evaluation

Evaluasi visual bisa digunakan untuk metode non-

instrumental maupun instrumental. Batas kuantitasi

umumnya ditentukan melalui analisis sampel dengan

konsentrasi analit yang diketahui dimana konsentrasi

minimum analit dapat dikuantisasi dengan akurasi dan

presisi yang baik.

b) Based on Signal-to-Noise

Pendekatan ini hanya dapat dilakukan pada prosedur

analisis yang menunjukkan baseline noise. Penentuan dari

rasio signal-to-noise dilakukan dengan membandingkan

sinyal dari blanko dan sinyal dari sampel dengan

konsentrasi rendah yang diketahui tetapi analit masih dapat

dideteksi. Dikatakan batas deteksi diterima bila

perbandingan signal-to-noise adalah 10:1

c) Based on the Standard Deviation of the Response and the

Slope

Batas kuantitasi dapat ditentukan dengan cara:


23/29

23

Slope S dapat diketahui dari kurva kalibrasi analit (ICH

Q2-R1, 2005).

6) Linearitas dan Rentang

Linearitas adalah kemampuan untuk menunjukkan hasil uji yang

secara langsung atau dengan melalui transformasi matematik yang

tepat proporsional terhadap konsentrasi analit dalam sampel dalam

rentang yang diberikan. Dalam kaitan ini, linearitas mengacu pada

hubungan linear antara konsentrasi dan hasil pengukuran pengujian

(Kemenkes, 2014).

Rentang adalah interval antara batas tertinggi dan batas terendah

dari kadar analit yang telah dibuktikan, dapat ditentukan dengan

presisi, akurasi, dan linearitas yang sesuai menggunakan prosedur

analisis yang ditetapkan. Rentang umumnya dinyatakan dalam

satuan yang sama dengan hasil uji (misalnya persen, bpj, bpm)

yang diperoleh dengan prosedur analisis ini (Kemenkes, 2014).

ICH merekomendasikan bahwa linearitas ditetapkan dengan

menggunakan minimal 5 konsentrasi yang digunakan secara

normal. Dan juga direkomendasikan rentang minimum yang

digunakan sebagai berikut:

Penetapan kadar senyawa obat (atau sediaan farmasi akhir):

dari 80% hingga 120% dari konsentrasi uji.

Penetapan cemaran: dari 50% hingga 120% dari kriteria

penerimaan.

Untuk keseragaman kandungan: minimal 70% hingga 130%

dari konsentrasi uji (sangat tergantung pada sifat alami bentuk

sediaan).


24/29

24

Untuk uji disolusi: kurang lebih 20% dari rentang spesifik

(misalnya pada sediaan pelepasan terkendali, setelah 1 jam

20%, dan setelah 24 jam lebih dari 90%, maka rentangnya dari

0%-110% dari konsentrasi yang dinyatakan pada etiket)

(Kemenkes, 2014).

7) Ketegaran ( Robustness)

Ketegaran adalah ukuran kemampuan prosedur untuk tetap

bertahan dan tidak terpengaruh oleh keragaman kecil yang

disengaja pada parameter prosedur yang terdapat dalam dokumen.

Ketegaran dapat ditentukan pada waktu pengembangan prosedur

analisis.

Kesesuaian sistem

Salah satu konsekuensi dari pengujian ketegaran adalah parameter

kesesuaian sistem yang perlu ditetapkan untuk menjamin validitas

prosedur agar tetap bertahan selama digunakan.

Keragaman yang umum:

Stabilitas larutan analisis

Perbedaan peralatan Perbedaan analis

Keragaman dalam hal kromatografi cair:

pH fase gerak

Komposisi fase gerak

Perbedaan lot kolom/pemasok kolom

Suhu fase gerak

Kecepatan alir fase gerak

Keragaman dalam kromatografi gas:

Perbedaan lot kolom atau pemasok kolom


25/29

25

Suhu fase gerak

Kecepatan alir fase gerak (Kemenkes, 2014).

2. 3. 4. Kategori Metode Analisis

Setiap prosedur analisis yang berbeda membutuhkan skema

validasi yang berbeda. Bagian ini hanya mencakup kategori pengujian

secara umum yang mensyaratkan data validasi. Kategori-kategori tersebut

adalah sebagai berikut:

1) Kategori I Prosedur analisis untuk penetapan kadar

komponen utama dalam bahan baku obat atau bahan aktif

(termasuk pengawet) dalam sediaan obat jadi.

2) Kategori II Prosedur analisis untuk penetapan cemaran

dalam bahan baku obat atau senyawa hasil degradasi dalam

sediaan obat jadi. Prosedur ini terdiri dari penetapan

kuantitatif dan uji batas.

3) Kategori III Prosedur analisis untuk penetapan karakteristik

kinerja sediaan (misalnya disolusi, pelepasan obat).

4) Kategori IV Prosedur analisis untuk identifikasi.

Untuk setiap kategori diperlukan informasi analitik yang berbeda.

Tabel berikut ini mencantumkan unsur data yang diperlukan untuk setiap

kategori.


26/29

26

(Kemenkes, 2014)

Parameter yang harus diperhatikan, menurut ICH Q2-R1

Lebih jauh, re-validasi mungkin dibutuhkan dalam kondisi berikut:

Perubahan dalam sintesis dari zat obat

Perubahan komposisi dari produk akhir

Perubahan dari prosedur analisis

Tingkat revalidasi yang diperlukan bergantung pada sifat perubahan yang terjadi.

Beberapa perubahan lainnya juga dapat membutuhkan validasi (ICH Q2-R1,

2005).


27/29

27

III. DAFTAR PUSTAKA

EMEA. Quality of herbal medicinal products. Guidelines. European Agency for the

Evaluation o Medicinal products (EMEA), London, 1998.

WHO. Quality Control Methods for Medicinal Plant Materials. World Health Organisation,

Geneva, 1992.

WHO. The International Pharmacopeia, Vol.3: Quality Specifications for Pharmaceutical

Substances, Excipients, and Dosage forms, 3rd edn. World Health organization Geneva,

1988.

De Smet. PAGM. Drug Information Journal , 33, 1999, 717-724.

De Smet PAGM, Keller K, Hansel R, Chandler RF (1992). Aristolochia species In: Adverse

Effects of Herbal Drugs, Springer-Verlag, Heidelberg. 1.

WHO. Guidelines for the appropriate use of Herbal Medicines. WHO Regional publications,

Western pacific series No 3, WHO Regional office for the Western Pacific, Manila, 1998.

WHO. Guidelines for the Assessment of Herbal Medicines. WHO Technical Report Series,

No863. World Health Organization, Geneva, 1996.

AOAC (2005). Official Methods of Analysis of AOAC International, 18th edn. AOAC

International, Gaithersburg, MD.

Watson DG. Pharmaceutical Analysis. Churchill Livingstone, Edinburgh, 1999.

Wani MS (2007 ). Herbal medicine and its standardization. Pharma. info., 1: 6.

WHO (1996a). Quality Assurance of Pharmaceuticals: A Compendum of Guidelines and

Related Materials, Good Manufacturing Practices and Inspection. World Health

Organization, Geneva. 2.

WHO (1998a). Quality Control Methods for Medicinal Plant Materials, World Health

Organization, Geneva.

WHO (2000). The WHO Recommended Classification of Pesticides by Hazard and

Guidelines to Classification 2000 – 2002 (WHO/PCS/01.5). International Programme on

Chemical Safety, World Health Organization, Geneva.

WHO (2002c). General Guidelines for Methodologies on Research and Evaluation of

Traditional Medicine. World Health Organization, Geneva.


28/29

28

Shapna, Shrikumar, M. Uma Maheswari, A. Suganthi, T. K.Ravi, Pharma infonet vol 2, 2004

Standardization of herbal medicines - A review

Kunle, Oluyemisi Folashade1*, Egharevba, Henry Omoregie1 and Ahmadu, Peter Ochogu2

1Department of Medicinal Plant Research and Traditional Medicine, National Institute

for Pharmaceutical Research and Development (NIPRD), Idu Industrial Layout Idu, PMB

21 Garki, Abuja, Nigeria.

Bele, A. Khale, A. 2011. Standardization of Herbal Drugs : an Overview. Internatiol

Research Journal of Pharmacy.

Kamboj, Anjoo. 2012. Analytical Evaluation of Herbal Drugs, Drugs Discovery Research in

Pharmacognosy. In Tech: Rijeka, Croatia

Nikam, Parvin H., 2012, “ Future Trends in Standardization of Herbal Drugs”. Journal of

Applied Pharmaceutical Science. Volume 2, No. 6,

www.japsonline.com/admin/php/uploads/499_pdf.pdf , 11 Maret 2016

Kementeterian Kesehatan Republik Indonesia. 2014. Farmakope Indonesia Edisi V. Jakarta:

Kementerian Kesehatan RI

ICH Validation Of Analytical Procedures: Text And Methodology November 2005

Riyanto, Ph.D. 2014. Validasi & Verifikasi Metode Uji Sesuai dengan ISO/IEC 17025 Laboratorium

Pengujian dan Kalibrasi. Yogyakarta: Deepublish

Chaudhury RR. 1999. Herbal medicine for human health. World Health Organization Geneva,

CBS publishers and distributors LTD, New Delhi,

Kokate CK, Purohit AP, Gokhale SB. 2005. Pharmacognosy, 31st edition Nirali Prakshan, 97-

131.

Raina MK. 2003. Quality control of herbal and herbo-mineral formulations, Indian journal of

natural products, 19, 11-15.

Raven PH, Evert RF, Eichhorn SE. 1999. Biology of Plants, sixth ed.,Freeman, New York.

Yan XJ, Zhou JJ, Xie GR, Milne GWA. 1999. Traditional Chinese Medicines: Molecular

Structures, Natural Sources and Applications, Aldershot, Ashgate.

Liang YZ, Xie P, Chan K, J., Quality control of herbal medicines, Chromatogr B, 2004; 812: 53 –

70.

Ong ES, Chemical assay of glycyrrhizin in medicinal plants by pressurized liquid extraction

(PLE) with capillary zone electrophoresis (CZE). J Sep Sci, 2002; 25: 825-831

http://www.japsonline.com/admin/php/uploads/499_pdf.pdfhttp://www.japsonline.com/admin/php/uploads/499_pdf.pdfhttp://www.japsonline.com/admin/php/uploads/499_pdf.pdf


29/29

29

Chimezie A, Ibukun A, Teddy E, Francis O. HPLC analysis of nicotinamide, pyridoxine,

riboflavin and thiamin in some selected food products in Nigeria. Afr J Pharm Pharmacol

2008; 2(2):29-36

Rao Udaykumar B, Anna NP .Stability- indicating HPLC method for the determination of

efavirenz in bulk drug and in pharmaceutical dosage form. Afr J Pharm Pharmacol

2009;3(12):643-650

Bhutani KK, Finger-Printing of Ayurvedic Drugs, The Eastern Pharmacist, 2000; 507: 21-26

Marston A, Role of advances in chromatographic techniques in phytochemistry. Phytochem,

2002; 68: 2785-2797

Brandt A, Schering AG, Kueppers S, Practical Aspects of Preparative HPLC in Pharmaceutical a

and Development Production. (www.lcgceurope.com), 2002; 2-5

Mike Lee S, Edward Kerns H. LC/MS applications in drug development. Milestone

Development Services, Pennington, New Jersey, 24 July 1999.

Patil PS, Rajani S. An advancement of analytical techniques in herbal research. J Adv Sci Res

2010; 1(1):8-14.

Guo F.Q., Huang L.F., Zhou S.Y., Zhang T.M., Liang Y.Z., Comparison of the volatile

compounds of Atractylodes medicinal plants by headspace solid-phase microextraction-

gas chromatography – mass spectrometry.Anal. Chim. Acta 570: (2006) 73-78 .

Sharma, Handbook of Thin Layer Chromatography. Chromatographic Science Series, Marcel

Dekker, Inc, New York Press 2009; 55: 353-387.

Patra, Kartik Chandra, Surendra K. Pareta, Ranjit K. Harwansh, K. Jayaram Kumar. Traditional

Approaches towards Standardization of Herbal Medicines. Journal of Pharmaceutical

Science and Technology 2010; 2 (11):372-379.

Matthew C, Henry R. Supercritical fluid chromatography, Pressurized liquid extraction, and

supercritical fluid extraction. Anal Chem 2006; 78: 3909.

Gandjar, Gholib., dan Rohman, 2009. Kimia Farmasi Analisis. Pustaka Pelajar: Yogyakarta.

Sudjadi,1985. Metode Pemisahan. Kanisius, Yogyakarta

Huber, Ludwig. 2010. Validation of Analytical Methods. Agilent Technologies: German.

kontrol kualitas dan metode analisis

Documents