kriminallab pyro (ej mord)
DESCRIPTION
Kriminallab från VetenskapenshusTRANSCRIPT
Vetenskapens hus
KriminalteknologiKriminalteknologi medmed
PYROSEKVENSERINGPYROSEKVENSERING
Vetenskapens hus
KriminalteknologiKriminalteknologi
Tidigare metoderAnalys av: blodgrupp, serumproteiner och enzymer
− Färska och tillräckligt stora blodspår krävs
−Endast uteslutning Ej identifiering
DNA-metoderAnalys av: de flesta biologiska spår såsom blod, saliv, sperma, hårstrån och hud
+Ersatt traditionella metoder (from 1994)
+Gamla och små spår kan användas
+Mycket specifik Identifierar
−Spår från fel person?
Vetenskapens hus
DNADNADeoxyribonucleic AcidDeoxyribonucleic Acid
• DNA – kroppens recept – kodar för gener (ca 22 000 st)
• Socker, fosfat och fyra baser; A (Adenin) T (Tymin) C (Cytosin) G (Guanin)
• Baserna binder (A=T och C≡G) bildar DNA-kod (ex ACTTG)
• Människans DNA 2 meter (3 000 000 000 baspar) / cell!
Vetenskapens hus
DNADNA• I varje cellkärna och i
mitokondrierna
• Hälften av kärn-DNAt från varje förälder
• Alla cellers DNA hos en person är identiska
• Varierar ej med tiden
• Unikt hos varje individ
Vetenskapens hus
STR - STR - MetodMetod
DNA DNA CSI?CSI?
Hitta och säkerställa spår!
Vetenskapens hus
AATG
Uppsättning från 1 individ
STRSTRShort Tandem RepeatsShort Tandem Repeats
• Standardmetod kriminal
• DNA från minst 100 celler
• STR-områden = repetitioner om 4 baser (ex AATG AATG AATG) + kön
• Nonsens-DNA
• 1/1 000 000 undersöks 10 specifika områden
• Skillnad i antal upprepningar
• Dubbel uppsättning (från mamma och pappa)
Vetenskapens hus
1 chans på 1 miljon att 2 obesläktade personer har samma DNA-profil
1. Kopiering PCR
2. Separering efter storlek elekrofores
3. Utläsning DNA-profil
Vetenskapens hus
DNA-registerDNA-register
• Svenska register upprättades 1999
• Används för att lösa / koppla samman ouppklarade brott
• Innehåller DNA-profiler (STR) brottsplatsspår fällda gärningsmän
• Endast nonsens-DNA
• Register med hela befolkningen?
Vetenskapens hus
FramtidFramtid• Snabbare analyser
• Skadat / gammalt DNA
• Små mängder DNA
• Automatisering, microchips
• På-plats-labb
• Få ut info från DNA: längd, ögon- & hårfärg
• Internationellt samarbete
Vetenskapens hus
• DNA från mitokondrierna (energistationer i cellen)
• Ärvs från mamman
• Tåligare, kortare och mindre variation i baserna
• I varje cell finns flera mitokondrier mer mtDNA än kärnDNA i varje cell färre celler krävs
• Mord, identifiering av lik, komplement till STR. Små och gamla spår.
Mitokondrie-DNA (mtDNA)Mitokondrie-DNA (mtDNA)
Vetenskapens hus
PyrosekvenseringPyrosekvensering
mtDNA analyseras med hjälp av…
Vetenskapens hus
1. Utvinning av DNA från biologiskt spår
2. PCR för att öka mängden DNA vi vill sekvensera
3. Förbehandla provet och sätta till sekvenseringsprimers (idag!)
4. Syntetisera DNA med hjälp av Pyrosekvensering (idag!)
Vid förbehandling av provet separeras de två DNA – strängarna.
Vetenskapens hus
1. Nedbrytning SDS bryter ned
cellmembran.Proteinas K bryter ned proteiner bundna till DNA.
2. Rening Kolonn binder DNA.Cellrester tvättas bort.
3. Eluering DNA sköljs ur kolonn.Rent DNA i provröret!
1. Extraktion & Rening1. Extraktion & Rening
Vetenskapens hus
Masskopiering av DNA
Syntes av DNA i cykel:1. Denaturering: Separation av
DNA strängar (95°C)
2. Hybridisering: Primer fästs (~50°C)
3. Elongering: Komplementär sträng syntetiseras (70°C)
Biotin sätts fast på DNA mha Primer
2. Polymerase Chain Reaction 2. Polymerase Chain Reaction (PCR)(PCR)
Vetenskapens hus
Magneter kopplas till den ena DNA-strängen
3. Provberedning3. Provberedning
A C A A T T G C G G AStrepatividin
S
SSS
S
S
S
S S S
ST G T T A A C G C C T
G C C TBiotin
NaOH
A C A A T T G C G G A
T G T T A A C G C C T
Biotin
A C A A T T G C G G A
T G T T A A C G C C T
Biotin
G C C T
G C C T
G C C T
DNA-strängarna separeras med NaOH Sekvenseringsprimers tillsätts
Vetenskapens hus
Magnet
VätskaVätskaPCR skräpDNA fragment utan biotinNukleotiderEnzym
NaOHDNA sträng utan biotin
Obundna sekvenseringprimers
Vetenskapens hus
4. Pyrosekvensering4. Pyrosekvensering
Vetenskapens hus
Vetenskapens hus
PPPPii
Enzym Ursprung
1 Polymeras Bakterie
2 Sulfyrulas Jäst
3 Luciferas Eldfluga
4 Apyros Potatis
Vetenskapens hus
Vetenskapens hus
Vetenskapens hus
Dagens uppgift:Dagens uppgift:
Sekvensera (ta fram ordningen på baserna) DNA från ert hår!