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Società Italiana Biotecnologie s.r.l Via Cardano n. 42 – 8 0 0 5 5 Portici (NA). Tel 081/7762618 - Fax 02/335178012 - PIva 03837431216 Sito Web: http://www.societaitalianabiotecnologie.it LA CASA DEL MENANDRO L'ultimo proprietario di questa grandiosa abitazione fu il liberto Quintus Poppaeus, edile in carica intorno il 40 d.C., membro di una famiglia che vantava vincoli con Poppea Augusta, moglie in seconde nozze di Nerone. La famiglia sarebbe stata proprietaria anche della Casa degli Amorini dorati e di una fabbrica di tegole (figlina) ed aveva visto eleggere diversi suoi membri alle magistrature cittadine. L'abitazione, ubicata nel Vicolo Meridionale, fu denominata "del Menandro" per il ritratto del famoso poeta greco rinvenuto in una delle nicchie dipinte in fondo al peristilio ed in particolare in quella nella nicchia centrale sul lato destro, seduto e con un rotolo in mano. - email: [email protected] 1

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Page 1: LA CASA DEL MENANDRO - biodeterioramento.it DEL... · quadretti con maschere tragiche. Accanto all'entrata è il larario monumentale a due frontoni con una colonnetta angolare ed

Società Italiana Biotecnologie s.r.l Via Cardano n. 42 – 8 0 0 5 5 Portici (NA). Tel 081/7762618 - Fax 02/335178012 - PIva 03837431216 Sito Web: http://www.societaitalianabiotecnologie.it

LA CASA DEL MENANDRO

L'ultimo proprietario di questa grandiosa abitazione fu il liberto Quintus Poppaeus, edile in

carica intorno il 40 d.C., membro di una famiglia che vantava vincoli con Poppea Augusta,

moglie in seconde nozze di Nerone.

La famiglia sarebbe stata proprietaria anche della Casa degli Amorini dorati e di una

fabbrica di tegole (figlina) ed aveva visto eleggere diversi suoi membri alle magistrature

cittadine.

L'abitazione, ubicata nel Vicolo Meridionale, fu denominata "del Menandro" per il ritratto

del famoso poeta greco rinvenuto in una delle nicchie dipinte in fondo al peristilio ed in

particolare in quella nella nicchia centrale sul lato destro, seduto e con un rotolo in mano.

- email: [email protected]

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Costruita nel III sec. a.C. ed estesa poi per oltre 1.800 mq la casa è stata, nel tempo,

ristrutturata (II sec. a.C.-I sec. d.C.) spostando il suo fulcro sul peristilio.

Lo scavo ha restituito una serie di oggetti molto interessanti per ricostruire la vita che si

svolgeva nella casa, primo fra tutti un intero servizio di argenteria, avvolto in panni di lana,

accuratamente custodito in una cassa di legno posta nei sotterranei del cortile.

Nel quartiere servile invece erano conservati un carro agricolo, un corredo di attrezzi

agricoli, anfore di cui una conteneva miele del tipo despumatum, altre contenevano aceto,

vino di Sorrento ed una con una scritta che raccomandava di riempirla con salsa di pesce

di prima qualità.

Attualmente nella stalla (equile) è esposta la ricostruzione del carro agricolo (originali solo

le parti in ferro e in bronzo).

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La casa del Menandro rappresenta uno degli esempi più classici del tipo di casa romana

con peristilio, conservato qui nel semplice schema originario, in asse con l'atrio.

La casa si sviluppa su due piani.

Il corpo centrale è infatti costruito a un livello superiore rispetto a quello del cortile con il

forno e i sotterranei e a quello dell'ergastulum, il quartiere riservato ai servi.

Lungo la facciata dell'edificio vi sono bassi sedili in muratura per la clientela (clientes) e

l'ingresso è inquadrato da due pilastri corinzi. Il grande impluvium rettangolare nell'atrio

tuscanico, con tetto privo di

colonne con travature a sostegno delle falde inclinate del tetto, è rivestito di marmo.

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Sulle pareti compaiono medaglioni affrescati con testa di Zeus-Ammon (in IV° stile) e

quadretti con maschere tragiche.

Accanto all'entrata è il larario monumentale a due frontoni con una colonnetta angolare ed

i calchi delle transenne di legno che lo chiudevano, dove si veneravano i Lares (protettori

della famiglia) e il Genius, spirito vitale del capofamiglia.

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Nell'ala a sinistra dell'atrio vi sono pareti rosse bipartite in senso verticale, al centro delle

quali figurano le scene della caduta di Troia: sulla destra Laoconte e i figli strangolati dai

serpenti; nella parete a sinistra Cassandra si oppone al rapimento da parte di Ulisse sotto

gli occhi del vecchio Priamo. Nella parete di fondo Cassandra osteggia invano

l'introduzione del cavallo di legno, pieno di guerrieri greci, nella città.

Il lato di fondo della casa è occupato da un tablino (sala di ricevimenti) ed il passaggio

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dall'atrio al tablino è fiancheggiato da colonne in tufo con sovrapposizioni in stucco dipinto.

Il tablino risulta essere fiancheggiato da due corridoi di accesso al peristilio che racchiude

un grande giardino con colonne ricoperte di stucco e con gli intercolunni chiusi da bassi

plutei decorati.

Le facce esterne dei plutei sono decorate con gruppi di animali, mentre i fusti di colonna

sono dipinti con cespi d'edera e oleandri. Nel vasto peristilio si aprono sulla parete di

fondo una biblioteca, un sacello domestico ed un’esedra rettangolare inquadrata da due

ad abside decorate da pitture.

Nella prima esedra da destra, decorata in IV stile, è una piccola nicchia con altare per il

culto domestico o sacello domestico in quanto contiene un larario in muratura sul quale

sono posti i calchi dei ritratti in legno degli antenati (imagines maiorum).

Le cinque sculture in cera o legno, ivi deposte, lasciarono impronte nel banco di cenere

indurita, e se ne poterono così trarre calchi di gesso; sono le uniche immagini di antenati

recuperati a Pompei. Esse venivano portate in processione in occasione di sacrifici

pubblici e nei funerali di famiglia.

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Nella esedra centrale sono dipinti due poeti seduti: quello che declama è il commediografo

Menandro e l’altro era, probabilmente, Euripide, mentre sulle altri pareti vi sono maschere

tragiche e satiriche e le altre esedre ad abside sono decorate con Artemide e con Afrodite.

Intorno al peristilio, come di consueto, si aprono diversi ambienti.

Sul lato Est si apre l’immenso salone (oecus triclinare) con pareti a fondo giallo dipinte in

IV stile a strisce verticali nere con arabeschi; con amorini e medaglioni con ritratti

circondati da sfingi e tralci di vite.

Il fregio racconta in chiave umoristica le nozze di Ippodamia con Piritoo, re dei Lapiti in

Tessaglia: i centauri, accalorati dal vino, rapiscono la sposa mentre le donne dei Lapiti

rimangono immobili. Il triclinio è il più vasto di Pompei, alto circa 8 m con una superficie di

87.5 m2, presenta in alto su una parete una grande finestra con timpano.

Sul pavimento (più antico) è un bel mosaico colorato in tessere minute con scena nilotica

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che raffigura le delizie della vita sul Nilo, con ville a portico, palmizi e cipressi sulle rive e

una nave con pigmei.

Dal lato orientale del peristilio s'accede oltre che al grande triclinio anche ad alcune stanze

minori e al quartiere servile (a mezzo di una rampa) ed inoltre ad una stalla con la rimessa

del calesse in cui fu trovato anche lo scheletro del cane da guardia.

La casa è dotata, inoltre, di un piccolo quartiere termale.

Il quartiere termale, in restauro al momento dell'eruzione (79 d.C.), presenta il cortile con 4

colonne, lo spogliatoio, il calidarium (sala calda): qui i mosaici raffigurano animali marini e

figure negroidi e, all'ingresso, un servo che porge recipienti per unguenti.

Sulla soglia dell'ingresso al calidarium, che presenta pitture in IV stile, un servo porta due

recipienti, uno per l'olio l'altro per il profumo.

Nel pavimento a mosaico nuotano pesci, delfini, un granchio,un negro itifallico mentre

un'altro caccia un mostro col tridente.

Nelle pitture delle pareti vediamo gruppi di lottatori, allusione agli esercizi ginnici che

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accompagnano la pratica balneare. Sul lato Ovest dell'atrio si trova una terrazza con una

grande esedra adibita a solarium.

Al disotto del settore termale vi sono i sotterranei dove fu rinvenuta una cassa con un

tesoro di 118 pezzi d'argenteria per un peso di 24 Kg, mentre uno scrigno conteneva

gioielli d'oro e 1432 sesterzi.

Tutto sommato si tratta di un tesoro mediogrande: la disponibilità di denaro liquido delle

famiglie ricche pompeiane oscillava tra i 1.000 e 3.000 sesterzi.

Evidentemente il proprietario della casa aveva nascosto qui i suoi beni più preziosi durante

i lavori di restauro necessari alla casa, rimasta danneggiata dal terremoto del ‘62.

Gli argenti attualmente sono esposti nel Museo Archeologico Nazionale di Napoli.

INDAGINI STRUMENTALI

Le indagini strumentali sono state eseguite per un periodo di tempo sufficiente a delineare

il macrosistema (l’intero sito ove sono ubicati gli affreschi da preservare) e le condizioni

microclimatiche presenti, le cui componenti principali comprendono:

- valutazione dell'esposizione alla temperatura;

- valutazione dell’umidità relativa;

- indagini luxmetriche;

- valutazioni polveri aerodisperse

- valutazione inquinamento da campi elettromagnetici

- valutazione inquinamento da inquinanti atmosferici

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Per ciascun sito sono state individuate le postazioni di misura relative a differenti affreschi,

ponendo particolare attenzione a quelle caratterizzate da importanti fenomeni di degrado

in corso e collocate in punti tra loro distanti o comunque soggetti a condizioni

microclimatiche differenti (esposizione al sole, alla luce, all’umidità di risalita).

Le misure delle condizioni di temperatura, umidità relativa, l’illuminanza, polveri,

elettromagnetismo ed inquinanti atmosferici sono state condotte per un tempo sufficiente a

minimizzare l’errore di rilevazione e badando a che l’operatore e il relativo allestimento

non costituisse fattore di imprecisione.

STRUMENTAZIONE DI CAMPIONAMENTO MICROCLIMATICO

I parametri microclimatici rilevati sono stati campionati a mezzo di una STAZIONE

MICROCLIMATICA BABUC prodotta dalla società LSI S.p.A. di Settala (MI).

Tutte le misure sono state eseguite in base ai seguenti principi:

- la centralina microclimatica è stata posta a circa 1 metro dalla posizione oggetto del

monitoraggio;

- la scelta dei punti da campionare è stata effettuata privilegiando punti in cui fossero

presenti condizioni macroscopiche di maggiore degrado delle opere d’arte.

I dati campionati sono stati analizzati e valutati a mezzo di apposito software di gestione

dei dati “Infogap evoluto”.

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Il campionatore-multiacquisitore è stato dotato delle seguenti sonde:

- Anemometro a filo caldo BSV101 per la misura del parametro “velocità

dell’aria”

- Sonda psicrometrica BSU102 costituita da 2 sensori di temperatura, di cui

uno a bulbo asciutto che misura la temperatura secca dell’aria, il secondo è

un termometro rivestito di una guaina idrofila, con l’opposta estremità

immersa in acqua ultrapura, che misura la temperatura di bulbo umido a

ventilazione forzata.

- Globotermometro BST131; la temperatura rilevata consente di calcolare la

temperatura media radiante.

- Sonda per temperatura di bulbo umido a ventilazione naturale BSU121.

L'umidità relativa è data dal rapporto tra l'umidità assoluta (quantità di

vapore d'acqua presente in un ambiente) e l'umidità massima (quantità di

vapore d'acqua che può essere contenuta ad una determinata temperatura

senza che si verifichi la condensazione del vapore).

- Sonda termometrica BST105;

- Sonde luxmetriche per ambienti interni BSR001 e BSR003;

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I risultati del campionamento microclimatico e luxmetrico è riportato nei seguenti grafici,

suddivisi per temperatura, umidità e luce presenti nel sito archeologico oggetto delle

indagini strumentali. Per l’indagine riguardante l’influenza della luce sul degrado dei dipinti

si è deciso di posizionare la sonda direttamente su quelli ritenuti maggiormente degradati:

il grafico illuminometrico riporta quattro misure relative a quattro punti riportati con i

seguenti codici:

18: parete frontale

19: parete sinistra.

20: mosaico

1221: affresco del Menandro

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Misura della temperatura_casa di Menandro

0,00

5,00

10,00

15,00

20,00

25,00

10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00 16.00 17.00 18.00

ora

°C

Atrio_ lato sinistrostanza con mosaicoStanza con dipinto di Menandro

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Misura dell'umidità_casa di Menandro

0,00

10,00

20,00

30,00

40,00

50,00

60,00

70,00

80,00

90,00

100,00

10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00 16.00 17.00 18.00

ora

RH

%

Atrio_ lato sinistrostanza con mosaicoStanza con dipinto di Menandro

Misura dell'illuminanza_casa di Menandro

0,00

100,00

200,00

300,00

400,00

500,00

600,00

700,00

10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00 16.00 17.00 18.00

ora

lux

19_parete frontale20_parete sinistra21_stanza con mosaico22_volto di Menandro

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CAMPIONAMENTI DEGLI INQUINANTI ATMOSFERICI

Per la ricerca degli inquinanti atmosferici si sono utilizzate sonde appresso elencate. I dati

sono stati anch’essi analizzati e valutati a mezzo di apposito software di gestione dei dati

“Infogap evoluto”.

- Sonda elettrochimica BSO101 per il monitoraggio della concentrazione

ambientale di carbonio monossido (CO) nel range tra 0 e 1000 ppm;

- Sonda elettrochimica BSO103 per il monitoraggio della concentrazione

ambientale di anidride carbonica (CO2) nel range tra 0 e 3000 ppm;

- Sonda elettrochimica BSO108 per il monitoraggio della concentrazione

ambientale di ossidi di azoto (NOx) nel range tra 0 e 20 ppm;

- Sonda elettrochimica BSO111 per il monitoraggio della concentrazione

ambientale di anidride solforosa (SO2) nel range tra 0 e 20 ppm;

Inquinanti atmosferici ppm Siti monitorati CO2 CO NO2 SO2

Atrio _lato sinistro 459 1,3 0,3 0,1 Stanza con mosaico 502 1,2 0,4 0,2

Stanza con dipinto di Menandro 425 1,4 0,2 0,1

CAMPIONAMENTO DEL PARTICOLATO AERODISPERSO

Le polveri aerodisperse sono state campionate mediante uno strumento di prelievo a

portata costante modello DIGIT ISO prodotto dalla Zambelli.

Il flussometro digitale incorporato garantisce assoluta precisione in un range tra 0,5 e 30

litri/minuto e permette di mantenere la portata costante per l’intero campionamento.

Un dispositivo di controllo segnala le anomalie sul display e, se la causa che provoca

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l’allarme persiste per un tempo maggiore di 5 minuti, il campionamento viene interrotto.

Lo strumento è dotato di batterie tampone a salvataggio dei programmi impostati in caso

di mancanza di rete.

Utilizzando tale campionatore unitamente a un elaboratore modello 5005 per la rilevazione

della temperatura e della pressione differenziale è stato possibile effettuare precisi ed

affidabili campionamenti isocinetici.

Le polveri sono state captate su filtri a membrane micropori Metricel da 0,45 µm di colore

bianco in nitrato di cellulosa con diametro di 47 mm.

Dopo il campionamento i filtri sono stati condizionati e quindi ripesati su bilancia analitica

eseguendo una determinazione gravimetrica.

CAMPIONAMENTO ELETTROMAGNETICO

L’attrezzatura utilizzata per monitorare l’inquinamento indotto da campi elettrici o

magnetici è costituito da un monitore PMM Mod. 8053 A corredato da un sensore

isotropico di campo elettrico EP-330 operante tra 100 KHz-3 GHz.

La strumentazione di misura è stata controllata a cura del laboratorio di controllo SIT 08,

tracciabile all’Istituto Metrologico Nazionale.

L’uso di procedure automatiche minimizza i tempi di calibrazione della strumentazione. Lo

strumento è dotato di un microprocessore e di un display grafico di grandi dimensioni.

Utilizza circuiti ad alta densità che sono facilmente riparabili o sostituibili.

Il firmware interno può essere aggiornato via PC o scaricato dal sito.

Polveri totali

Campi elettromagnetici

Siti monitorati Valore trovato mg/mc Siti monitorati Valore trovato V/m

Atrio_ lato sinistro 0,4 Atrio_ lato sinistro < 0,3 Stanza con mosaico 0,6 Stanza con mosaico < 0,3

Stanza con dipinto di Menandro 0,5 Stanza con dipinto di Menandro

< 0,3

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INDAGINI MICROBIOLOGICHE

La microflora presente sulle costruzioni di materiale lapideo è rappresentata da un

complesso ecosistema che si sviluppa in diversi modi a secondo delle condizioni

ambientali e delle caratteristiche chimiche e fisiche del materiale. Per la caratterizzazione

dei biodeteriorigeni presenti nel sito in esame si è proceduto ricercando i seguenti gruppi

microbici e fisiologici: • Conta Microbica Totale aerobia;

• Funghi;

• Lieviti;

• Attinomiceti;

• Batteri solfo-ossidanti;

• Batteri nitrosanti;

• Batteri nitricanti;

• Batteri azotofissatori;

• Microflora fototrofa.

Sono stati effettuati dei prelievi non distruttivi delle superfici delle opere d’arte. La scelta

dei punti da campionare è stata fatta valutando il grado di deterioramento complessivo

dell’intero sito, individuando, attraverso una preliminare valutazione visiva, la presenza di

eventuali patine microbiche o biofilm, o di zone con macchie di umidità, suscettibili di

contaminazioni microbiche. In assenza di evidenti sintomi di deterioramento si procedeva

utilizzando una termocamera ad infrarossi che permetteva di rilevare i punti di maggiore

umidità non visibili ad occhio nudo. Tale analisi preliminare ha permesso di individuare in

questo sito tre pareti da campionare in una stanza (parete centrale, sinistra e destra) in

prossimità di punti maggiormente danneggiati (scolorimento della superficie pittorica) e

umidi.

- email: [email protected]

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CAMPIONAMENTO DELLA MICROFLORA BIODETERI

Per il campionamento e il monitoraggio sono s

Raccomandazioni NORMAL (3/80; 19/85; 1/80; 9/82) e

10923) applicando delle modifiche metodologiche a

condizioni ambientali via via riscontrate. Le modalità d

state:

- em

16

ORIGENA

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tate consultate e seguite le

la normativa UNI ( NI 10922 e

seconda delle esigenze e delle

i campionamento utilizzate sono

ail: [email protected]

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Società Italiana Biotecnologie s.r.l Via Cardano n. 42 – 8 0 0 5 5 Portici (NA). Tel 081/7762618 - Fax 02/335178012 - PIva 03837431216 Sito Web: http://www.societaitalianabiotecnologie.it

• Tamponi

• Aria

Per il prelievo con il tampone è stato utilizzato un delimitatore di superficie costituito da

una sagoma vuota al centro di 100 cm2 di ampiezza, costituito da materiale plastico

monouso o da metallo sterilizzabile. Una volta scelta e delimitata la superficie da

campionare, il prelievo è stato effettuato mediante l’uso di tamponi sterili che sono stati,

poi, immersi in 18 ml di soluzione fisiologica.

Per il monitoraggio dell’aria piastre di PCA e di DRBC sono state inserite nel campionatore

MASS 100 (Foss Electrics) e, alla fine del periodo di aspirazione, esse sono state incubate

a 28°C per 24-48 h per il conteggio della Microflora totale aerobia, lieviti e muffe. Il valore

ottenuto è stato espresso come Indice di Contaminazione Microbica dell’aria (IMA)

calcolato come UFC/50 m3 di aria.

DETERMINAZIONI MICROBIOLOGICHE

Conteggio microbico

19

La contaminazione delle superfici è stata valutata inoculando i substrati di crescita solidi

indirettamente mediante diluizioni-sospensioni delle stesse in soluzione fisiologica. Per la

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ricerca e il conteggio della carica microbica totale, di funghi, lieviti e attinomiceti sono stati

utilizzati substrati solidi (PCA, DRBC, Terreno per attinomiceti secondo Jensen) incubati a

28°C per 48-72h; invece per la microflora fototrofa sono stati utilizzzati diversi substrati

solidi e liquidi specifici che hanno permesso di contare diversi gruppi di alghe (Diatomee,

Cianoficee, Cloroficee e la Carica Algale Totale). Per la valutazione di quest’ultima è stato

usato un terreno di coltura secondo Pochon e Tardieux, e un nuovo substrato

appositamente messo a punto in base allo studio dei diversi componenti utili per la

crescita di tutte le specie di alghe. Le piastre sono state incubate a temperatura ambiente

per 30 giorni in presenza di luce continua naturale di giorno e artificiale di notte, ottenuta

con lampade al neon con intensità di 3600 lux.

La presenza di gruppi fisiologici appartenenti ai solfo-ossidanti, nitrosanti, nitricanti e

azotofissatori è stata ricercata in mezzo liquido dopo circa 20 giorni d’incubazione a 28°C,

attraverso la determinazione dei prodotti delle loro specifiche attività fisiologiche oppure

valutando la formazione di un anello superficiale del mezzo liquido causato

dall’accrescimento microbico, come nel caso degli azotofissatori.

La carica batterica totale mostra valori molto bassi, infatti, sulla parete centrale è stato

trovato il valore più alto (1,15 UFC/cm2), sulla parete sinistra e destra il valore è di 0,17

UFC/cm2 e infine sull’affresco raffigurante Menandro, di 0,92 UFC/cm2. La presenza di

funghi e lieviti, invece, è stata rilevata solo presso la parete centrale con un valore di 0,11

UFC/cm2 e presso il mosaico, con un pari a 0,23 UFC/cm2. Gli attinomiceti non sono stati

trovati, a parte sulla parete centrale dove hanno mostrato un valore pari a 1,96 UFC/cm2.

Non è stata, poi, rilevata la presenza di altri gruppi fisiologici. Per quanto riguarda la

contaminazione di alghe e cianobatteri sono ancora in corso analisi per ottenere

un’identificazione molecolare delle specie eventualmente presenti.

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Campioni Solfo-ossidanti (MPN/cm2)

Nitrosanti (MPN/cm2)

Nitricantia(MPN/cm2)

Azoto- fissatori

(MPN/cm2)

Carica batterica

totale (UFC/cm2)

Funghi (UFC/cm2)

Attinomiceti (UFC/cm2)

19 -

-

-

- 1,15 0,11 1,56

20 -

-

-

- 0,17 0 0,06

21 -

-

-

- 0,17 0,23 0,06

22 -

-

-

- 0,92 0 0,8

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

1,6

UFC

/cm

2

Parete centrale Parete sx Stanza conmosaico

Volto Menandro

Punti campiona

Carica batterica totaFunghi e lievitiAttinomiceti

Conteggi microbici per la valutazione della contaminazione dell’aria

Per quanto riguarda i risultati del monitoraggio dell’aria, si è riscontrata una

contaminazione della microflora totale alta nei quattro punti campionati. Sulla parete

centrale l’indice IMA è pari a 11 UFC/ 50 m3, sulla parete sinistra l’indice IMA è uguale a

15,6 UFC/ 50 m3, sulla parete destra l’indice IMA è pari a 13,4 UFC/ 50 m3, e infine

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sull’affresco rappresentante il volto di Menandro l’indice IMA ha mostrato il valore più alto

(20,4 UFC/ 50 m3).

La contaminazione di funghi e lieviti ha mostrato valori variabili nei 4 punti campionati;

infatti sulla parete centrale l’indice IMA è 12 UFC/ 50 m3, sulla parete sinistra, ha un valore

molto simile (indice IMA pari a 12,8 UFC/ 50 m3), anche, in prossimità della parete destra

l’indice IMA ha valore simile (10 UFC/ 50 m3); infine sull’affresco raffigurante il Menandro,

l’indice IMA ha valore più alto (22,8 UFC/ 50 m3).

Punti campionati Carica microbica totale (PCA) UFC/ 50m3

Funghi e lieviti (DRBC) UFC/ 50m3

Parete frontale 11 12

Parete sinistra 15,6 12,8

Stanza con mosaico 13,4 10

Volto di Menandro 20,4 22,8

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0

10

20

30

40

50

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70

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Casa dellaVenere inConchiglia

Casa del Menandro Casa di Iulius Polybius Casa degli Amorini Dorati

Punti campionati

Carica batterica totaleFunghi e lieviti

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Identificazione fenotipica

Gli isolati microbici ottenuti dall’isolamento su substrato solido, sono stati sottoposti a

identificazione microbica convenzionale e molecolare.

Preliminarmente è stata effettuata un’osservazione delle colonie andando a rilevare la loro

morfologia in piastra prima di procedere alla purificazione. Si è valutata la dimensione, la

forma, i margini, il colore e la consistenza.

Una volta ottenute delle colonie pure, queste sono state osservate al microscopio La

morfologia degli isolati è stata evidenziata mediante osservazione al microscopio ottico di

preparati a fresco e colorati. Questo tipo di indagine ha consentito di riconoscere la

morfologia e la struttura cellulare propria di ogni isolato microbico.

E’ stato usato il microscopio in campo chiaro di preparati a fresco o colorati. La

colorazione usata per l’osservazione di alcuni campione è quella semplice. L’osservazione

al microscopio ha permesso di individuare e riconoscere, preliminarmente, i principali

gruppi microbici oggetto delle analisi. L’osservazione al microscopio è stata fatta non solo

per le colonie purificate ma anche per i substrati liquidi che hanno mostrato crescita.

Ove possibile, le colonie sono state sottoposte alla reazione di Gram e al saggio della

catalasi.

Identificazione molecolare

In seguito alla purificazione e all’identificazione, i ceppi isolati sono stati sottoposti a

estrazione del DNA, per procedere all’accertamento tassonomico mediante

sequenziamento di una regione parziale del 16S DNA, con amplificazione del 16S

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eubatterico mediante PCR, per ottenere la loro identificazione definitiva. L’amplificazione è

stata eseguita in un termociclizzatore programmabile.

Tutto il prodotto di reazione ottenuto mediante PCR, è stato controllato mediante

elettroforesi su gel di agarosio all’1,5% a 100 volt per circa 1h.

Per procedere alla purificazione le bande di DNA ottenute sul gel erano asportate

mediante taglio con bisturi, e sottoposte a un processo di purificazione, quantificazione e

infine sequenziamento. Invece, in seguito alla purificazione e all’identificazione, i ceppi

fungini isolati sono stati sottoposti a estrazione del DNA, per procedere all’accertamento

tassonomico mediante sequenziamento di una regione parziale D1-D2 del 23S rDNA

mediante PCR. Tutto il prodotto di reazione ottenuto mediante PCR, è stato controllato

mediante elettroforesi su gel di agarosio all’1,6% a 100 volt per circa 1h. Per procedere

alla purificazione le bande di DNA ottenute sul gel erano asportate mediante taglio con

bisturi, e sottoposte a un processo di purificazione, quantificazione e infine

sequenziamento.

Dagli affreschi presenti in questo sito, sono state isolate prevalentemente forme batteriche

sporigene appartenenti al genere Bacillus, in particolare le specie Bacillus pumilus,

Bacillus antrhacis e Bacillus cereus. Analogamente si sino isolate diverse specie fungine

Davidiella tassiana, Davidiella macrospora, Cladosporium cladosporioides, Cladosporium

allii-porri, Choiromyces aboriginum, Aspergillus puniceus, Aspergillus ustus, Aspergillus

ivoriensis, Aspergillus pseudodeflectus, Aspergillus granulosus, Aspergillus caespitosus,

Aspergillus versicolor e Emericella variecolor.

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*Identificazione mediante sequenziamento del 16S rDNA.

Identificazione microbica mediante metodi molecolari

Batteri* Funghi٭

Bacillus pumilus Bacillus pumilus Bacillus pumilus Bacillus anthracis Bacillus cereus

Davidiella tassiana Davidiella macrospora Cladosporium cladosporioides Cladosporium allii-porri Choiromyces aboriginum Aspergillus puniceus Aspergillus ustus Aspergillus ivoriensis Aspergillus pseudodeflectus Aspergillus granulosus Aspergillus caespitosus Aspergillus versicolor Emericella variecolor

.Identificazione mediante sequenziamento del frammento D1-D2 del 28S rDNA٭

- email: [email protected]

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