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LA PODREDUMBRE ÁCIDA DE LOS RACIMOS DE LA VID
RODRIGUEZ ROMERA, M. 1 ORIOLANI, E. 1; COMBINA, M. 1,2
1EEA Mendoza – INTA, 2 CONICETSan Martín 5838- (5505) Luján de Cuyo. Mendoza.
INTRODUCCIÓN
En Francia y Chile comenzó a ser importe hace más 15 años.
Causa pérdidas de producción en Mendoza y San Juan.
La incidencia y la severidad se incrementó en los últimos tiempos.
Esta enfermedad frecuentemente se confundía con la “podredumbre de los racimos” (Botrytis cinerea, Aspergillus sp., Penicillium sp., Rhizopus, Cladosporium sp. y Alternaria sp.)(ORIOLANI, E et.al 1982),
En Francia fue detectada hace más de 100 años.
Presente en otros países Europeos, Americanos y en Sudáfrica
Ing. Agron. Rodriguez Romera, M.
INTRODUCCIÓN
Levaduras
Investigadores de distintos países han asociado esta enfermedad a un complejo de microorganismos que incluye:
Hongosfilamentosos
Bacterias
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El origen etiológico y la secuencia de aparición de cada patógeno no han sido aclaradas totalmente:
Algunos investigadores señalan que los hongos son los principales responsables de esta enfermedad y que las levaduras y bacterias actuarían como patógenos secundarios . (LATORRE, B. Et al 2002 ).
Otros afirman que la presencia de microfisuras o heridas en la epidermis de la baya es el factor desencadenante permitiendo la entrada de levaduras y bacterias, las que actuarían como patógenos primarios, siendo los hongos los secundarios . (GRAVOT ,E. et al 2001),( LAURENT J.C 1998 ), (SNOWDON A. L. et al 1990 ).
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SINTOMAS
Comienzan en el racimo después del envero hasta poscosecha.
En bayas aisladas o en grupos.
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Oxidación de la cutícula u hollejoAblandamiento y maceración de la pulpaVaciamiento de la baya,
SINTOMAS
Pérdida de mosto
Fuerte olor a ácido acético
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SINTOMAS
Presencia de larvas y adultos de la mosquita del vinagre (Drosophila melanogaster).
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≠
Podredumbre ácidade los racimos
Podredumbre de los racimos
PODREDUMBRE DE LOS RACIMOS Vs PODREDUMBRE ÁCIDA
PODREDUMBRE DE LOS RACIMOS
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PODREDUMBRE DE LOS RACIMOS
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PODREDUMBRE DE LOS RACIMOS
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PODREDUMBRE ACIDA
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PODREDUMBRE ACIDA
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PODREDUMBRE ACIDA
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PODREDUMBRE ACIDA
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PODREDUMBRE ACIDA
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PODREDUMBRE ACIDA
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PODREDUMBRE ACIDA
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PODREDUMBRE ACIDA
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Vinos inestablesUva de mesa no comercializable
Perdida de producción en poscosecha en uva de
mesa
Mostos con elevadaacidez volátil
CONSECUENCIAS
PODREDUMBREÁCIDA
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ESTUDIOS REALIZADOS DESDE EL 2004-2008 EN EEA-MZA
“Se determinó e identificó el complejo etiológico que produce la podredumbre ácida de los racimos en las condiciones ecológicas de los viñedos de las provincias de Mendoza y San Juan.”
Parte I - AISLAMIENTO DE PATÓGENOS.
Parte II - PRUEBA DE PATOGENICIDAD.
Ing. Agron. Rodriguez Romera, M.
Parte I - AISLAMIENTO DE PATÓGENOS.
Ing. Agron. Rodriguez Romera, M.
Procedencia
Cultivares
Aislamientos
2004/05de bayas sintomáticas
y asintomáticas
Chenín, Bonamico, Tempranilla, Pedro
Gímenez y Red Globe
MATERIALES Y MÉTODOS
Lavalle, San Martín, Luján de Cuyo y Tunuyán de la provincia de MendozaEl Zonda de la provincia de San Juan.
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MATERIALES Y MÉTODOS
Bayas sin síntomas, sin y con desinfección (hipoclorito de calcio).
Siembra en placas de Petri enBergey modificado para bacterias.
Purificación de levaduras en WL nutriente agar.
Purificación de bacterias en GYCa.
Siembra en placas de Petri en AEM modificado para levaduras.
Conservación levaduras: - YPD a 4ºC.- glicerol 30 % a -18º C.
Conservación bacterias : - GYCa a 4ºC. - glicerol 30 % a -18º C.
Bayas con síntomas, sin y con desinfección (hipoclorito de calcio).
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Reacción en Cadena de la Polimerasa(PCR) del fragmento del ADN ribosomal
5.8S-ITS
IDENTIFICACIÓN DE LEVADURAS
Restricción o RFLPs con las endonucleasas Hinf, Cfo y Hae (Esteve-Zarzoso y col., 1999).
Los patrones de amplificación y de restricción obtenidos fueron analizados utilizando la base de datos Yeast-Id (Universidad de Valencia-CSIC) lo que permitió una adecuada asignación de las
especies. Secuencias obtenidas analizadas por BLAST con base de datos de nucleótidos
Secuenciación del fragmento 5.8S-ITS
Técnicas moleculares de identificación
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Especies de levaduras
identificadas
Zygosaccharomyces baillii
Saccharomyces cerevisiae
Pichia membranifaciens
Dekkera bruxellensis
Pichia kluyveri
Issatchenkia orientalis
Pichia galeiformes
Candida apicola
Candida sorbosa
Candida magnoliae
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A nivel de grupo por :
– Tinción de Gram
– Reacción de la catalasa
– Producción de ácido
A nivel de género por :– Reacción de oxidación o superoxidación del etanol.
IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS
Gluconobacter Etanol ox ácido acetico (amarillo)
Acetobacter Etanol ox ácido acetico (amarillo) ox CO2 + H2O (verde)
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Tabla 4: Desarrollo de hongos filamentosos
Géneros de hongos Presencia Aspergillus 10-17% Penicillium 2-9% Botrytris 0-6% Rhizopus 0-2%
Identificación de bacterias a nivel de grupo:
•Tinción de Gram : 100% Gram negativa•Reacción de la catalasa :100% catalasa positiva•Producción de ácido : 100% producción de ácido
Géneros de Bacterias Bayas con síntomas Bayas sin síntomasAcetobacter, 71,8 % 85,7%Gluconobacter 6,4 % 14,3%
Acetobacter+Gluconobacter 21,8 % -
Tabla 3: Identificación de bacterias a nivel de género
RESULTADOS
BACTERIASÁCETICAS
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Parte I - AISLAMIENTO DE PATÓGENOS.
Parte II - PRUEBA DE PATOGENICIDAD.
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Microrganismos
cultivar
Prueba de patogenicidad
2005/06
Red Globe
MATERIALES Y MÉTODOS
Levaduras Bacterias Agrupadas en 5 categorías por
similitud de las colonias Suspensión de 6x108 lev /mL
Agrupadas en Gluconobacter y Acetobacter
Suspensión de 8.108 UFC/ml
Método
•cámara húmeda• 10 grupos de tres bayas c/u , con repetición •Se inocularon bayas con levaduras y bacterias, solas o combinadas, con y sin microheridas. •se mantuvieron a 27° C, durante tres semanas
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RESULTADOS
Tabla 5: Comparación de medias de bayas infectadas entre muestras con superficie sana y herida
*Letras distintas indican diferencias significativas (p ≤ 0,05)
Tratamiento Medias
Sin heridas 9,7%a*
Con heridas 99,6% b
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RESULTADOS
sin heridas
con heridas
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RESULTADO DEL RE-AISLAMIENTO DE LA PRUEBA DE PATOGENICIDAD
Las bacterias correspondieron al grupo de las acéticas, 83 % al género Acetobacter y 17% a Gluconobacter
A partir de las bayas sintomáticas se re-aislaron los microorganismos, recuperando sólo 4 especies de levaduras: 1. Saccharomyces cerevisiae 2. Issatchenkia orientalis 3. Pichiamembranifaciens 4.Pichia galeiformes.
Tabla 6:Agresividad de las levaduras re-aisladadas de la prueba de patogenicidad
MUESTRA MediasPichia galeiformes. 15% aTestigo 30% aPicchia membranifaC iens 58% bIssatchenkia orientalis 88% cSaccharomyces cerevisiae 100 % c
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DISCUSIÓN
Microheridas
Levaduras(Degradan)
Azúcares de bayas
Alcohol
Acido acético
Bacterias(Oxidan)
Perdida de mosto
Hongos(Patógenos secundarios)
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LABORATORIO DE FITOPATOLOGIA – EEA MZA