“la unica herramienta que estandariza los bancos de sangre ... · de sangre : calidad” ......
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“LA UNICA HERRAMIENTA QUEESTANDARIZA LOS BANCOS
DE SANGRE : CALIDAD”
ALDREDO MARTINEZLABORATORIO DE ANÁLISIS CLÍNICOS
CEMIC
“ La única fuente de obtención de sangre es el serhumano, por lo cual la misma debe emplearse encondiciones de equidad, raciocinio e igualdad, de estemodo la disponibilidad de la misma y sus componentesse transforman en una problemática de orden público einterés nacional dada su calidad de irreemplazable ynecesaria”.
Marcos Andrés Bujas; “Revista Argentina deTransfusión”, prologo de la editorial
“Guias Nacionales para el uso apropiado desangre y sus hemocomponentes”
Volumen XXXIII/ Nº 3,4/ 2007, Pag. 193
UN HIJO LE ESCRIBE A SU MADRE:
“MAMÁ AYUDAME A SABER QUE PASA CON
ESTE AMIGO QUE NO ALCANZO A ENTENDERLO,
PORQUE SE DIVORCIÓ DE SU MUJER SE
ENAMORÓ DE LA HERMANA DE SU CUÑADA
QUE ES MADRE DE SUS SOBRINOS, NIETOS
DE SU EX SUEGRO”
LA MADRE LE CONTESTA A SU HIJO:
“NO SE SI PUEDO AYUDARTE HIJO MIO, PORQUE
TAMBIEN YO TENGO ALGUNAS INCOGNITAS, YO SE
QUE ERES MI HIJO, PERO YO ESTUVE ENAMORADA
DE TU PADRE, QUE FUE MI CUÑADO, AUNQUE NO
ERA EL TIO DE TUS PRIMOS PERO SI EL HIJO DE
TU ABUELO Y EL HERMANO DE MI CUÑADA”
METODOS CUALITATIVOS
SI - NORESPUESTA BINARIA:
PRESENCIA - AUSENCIA
POR ARRIBA DE UNA DETERMINADO NIVEL(CONCENTRACIÓN)a
Métodos Cualitativos : Definición
EXISTEN GUÍAS CLARAMENTE DEFINIDAS PARALA VALIDACIÓN DE MÉTODOS CUANTITATIVOS.
NO EXISTEN LINEAMIENTOS CLAROS PARA LOSMÉTODOS CUALITATIVOS .
LOS PARÁMETROS DE DESEMPEÑO QUECARACTERIZAN A LOS MÉTODOS CUALITATIVOS YCUANTITATIVOS SON DISTINTOS.
VALIDACION ES LA CONFIRMACIÓN MEDIANTE EL EXAMENY LA PROVISIÓN DE UNA EVIDENCIA OBJETIVA DE QUE SE
HAN SATISFECHO UNOS REQUISITOS PARTICULARESPARA UN USO PRETENDIDO Y ESPECIFICO
DEFINICION DE VALIDACION SEGUN LA NORMA ISO 8402
Validación. Definición
“Verificar las especificaciones provistas por elfabricante y asumimos que el ensayo puede
ser incorporado al laboratorio”
Verificación. Definición
LAS PREGUNTAS A CONSIDERAR SON:
-CUMPLE ESE ENSAYO CON NUESTROS REQUERIMIENTOSDE CALIDAD?
-DE ACUERDO A LOS PARÁMETROS DE DESEMPEÑOVOLCADOS POR EL FABRICANTE EN SUS INSERTOS (QUESE TRANSFORMARAN EN NUESTRAS ESPECIFICACIONESA VERIFICAR),¿PODEMOS DECIR QUE EN FORMA TEÓRICAEL ENSAYO CUMPLE CON NUESTROS REQUERIMIENTOSDE CALIDAD
- ¿CÓMO PODEMOS ASEGURAR ESTO?
FABRICANTE VALIDACION
PARAMETROS DEDESEMPEÑO
BIAS, CV, RANGOREPORTABLE
VERIFICACION
SE INCORPORA ALBANCO DE SANGRE
“Los métodos cualitativos o semi-cualitativosse suelen emplear como métodos descreening”Separan o discriminan muestras de un grupo más grande.-Uno o más analitos por encima o por debajo de un valorpreestablecido.
- Este valor preestablecido puede haber sido establecido dedistintas formas:
1) Organismo oficial2) Control de Calidad Interno3) Requerimientos del Cliente VALOR DE CORTE
CUT OFF
Como pueden Verificarse los parámetrosde un ENSAYO
ESTÁNDAR INTERNACIONAL
PANELES DE SEROCONVERSIÓN
MUESTRAS CLINICAS
Parámetros de Desempeño:
-Veracidad:
“Se define como el grado de acuerdo entreuna cantidad medida o calculada y a su valor
estimado (mejor estimación del valorverdadero), mediante análisis de materialesde referencia o comparación de resultados
con los obtenidos por un método deReferencia.”
PrecisiónLA PRECISIÓN ES CUAN CERCA LOS VALORES
MEDIDOS ESTÁN UNOS DE OTROS.
Precisión en condiciones de repetibilidad (Sr, SDr)- El mismo procedimiento de medida- El mismo laboratorio- El mismo operador- El mismo equipo- Repeticiones en un intervalo corto de tiempo-“Es lo que comúnmente denominamos precisiónintra corrida o intra serie”
VALOR DE CORTE : “CUT Off”
“ES EL UMBRAL ESTABLECIDO POR ELFABRICANTE POR ENCIMA DEL CUAL EL TESTES POSITIVO Y POR DEBAJO DEL CUAL EL TEST
ES NEGATIVO “
CUT OFF : 50%(+)- 50% (-)
C50
RESPUESTANEGATIVA
RESPUESTAPOSITIVA
C= 0,02 CONCENTRACION
C= 0,02 CONCENTRACION
ZONA DEVERDADEROS
NEGATIVOS
ZONA DEVERDADEROS
POSITIVOS
ZONA DE FALSOSPOSITIVOS
ZONA DE FALSOSNEGATIVOS
VALOR DE CORTE “CUT OFF”
IDEAL
REAL
1- Preparar tres tipos de muestras una con laConcentración del cut off C50 y las otras dos conun rango de concentraciones 20% por arriba delcut off y 20% por debajo de manera de poder hacer40 replicados sobre la misma muestra
2-Las muestras deben testearse 40 veces o más porduplicado y determinar el porcentaje de resultadospositivos y negativos
VERIFICACION DE PARAMETROSDE ENSAYOS
CON MUESTRAS CLINICAS
ES EL C50 PREPARADO EL CORRECTO ?
REPLICADOS C50 REPLICADOS (+) % (+)
N=40 13 32.5
27 67.5
C50INCONSISTENTE
REPLICADOSC50 n=40
18 A 22 (+) 45 % A 55%
C50CONSISTENTE
EL RANGO DE CONCENTRACION +20% -20%CONTIENE EL INTERVALO C5-C95 ?
1- SI 35/40 (87.5%) RESULTADOS (+) ESTAN DENTRO DELRANGO +20% Y 35/40 (87.5%) DE RESULTADOS NEGATIVOSESTAN DENTRO DEL RANGO -20%. EL RANGO +20% -20%ESTA DENTRO DEL INTERVALO C5-C95
2- SI 36/40 (90%) RESULTADOS (+) ESTAN DENTRO DELRANGO +20% Y 36/40 (90%) DE RESULTADOS NEGATIVOSESTAN DENTRO DEL RANGO -20% . EL RANGO +20% -20%CONTIENE EL INTERVALO C5-C95
3- SI 36/40 (90%) RESULTADOS (+) ESTAN DENTRO DELRANGO +20% Y 35/40 (87.5%) DE RESULTADOS NEGATIVOSESTAN DENTRO DEL RANGO -20% . EL RANGO +20% -20%ESTA PARCIALMENTE DENTRO DEL INTERVALO C5-C95
4- SI 35/40 (87.5%) RESULTADOS (+) ESTAN DENTRO DELRANGO +20% Y 36/40 (90%) DE RESULTADOS NEGATIVOSESTAN DENTRO DEL RANGO -20% . EL RANGO +20% -20%ESTA PARCIALMENTE DENTRO DEL INTERVALO C5-C95
Falso Positivo (FP)“Muestras (+) por el “test de screening” y (-) porel método de referencia”
Falso Negativo (FN)“Muestras (-) por el “test de screening” y (+) porel método de referencia”
Tasa de Falsos Positivos“Probabilidad de que una muestra con valorverdadero negativo de un valor positivo por eltest de screening”
FP
FP + TNTASA DE FP =
FP: Falso PositivoFN: Falso NegativoTP: Positivo VerdaderoTN: Negativo Verdadero
Tasa de Falsos Negativos
“Probabilidad de que una muestra con valor verdaderopositivo de un valor negativo por el test de screening”
FN
FN + TPTASA DE FALSON NEGATIVOS =
Método X Diagnóstico ClínicoPositivo Negativo Total
Positivo A B A+BNegativo C D C+D
Total A+C B+D N
S= 100% (A/A+C)
E=100% (D/B+D)
PVP= 100%{A/(A+B)}
PVN= 100%{D/(C+D)}
EE= 100%{(A+D)/N}
TABLA DE CONTINGENCIA
FLUJO DE TRABAJO EN EL USO DEHERRAMIENTAS MOLECULARES
Preanalítico Analítico Post
analítico
Toma de muestraExtracción ADN/ ARNAlmacenamiento
Toma de muestraExtracción ADN/ ARNAlmacenamiento
Preparación reacción PCRAmplificaciónDetección
Preparación reacción PCRAmplificaciónDetección
Informe del resultadoInterpretaciónInforme del resultadoInterpretación
DESAFÍOS DEL CONTROLCALIDAD EN MÉTODOS
MOLECULARES
• Nuevas tecnologías y de rápida evolución• Altas expectativas de precisión en pruebas
génicas• Falta de materiales de control de calidad y
de calibradores estandarizados• Posible contaminación de muestras,
equipos y aerosoles• Presencia de inhibidores de amplificación• etc.
Basic QC Practice ,3er edicion. Westgard
INCORPORACIÓN DE NUEVO ENSAYO MOLECULAR¿POR DONDE EMPIEZO?
• Revisar bibliografía disponible• Establecer la población a la que se le
realizara la prueba• Seleccionar metodología apropiada para la
enfermedad o condición a evaluar• Establecer las especificaciones analíticas y
determinar el procedimiento de control decalidad
• Implicancias del ensayo y limitaciones
Good Laboratory Practices for Molecular Genetic Testing for Heritable Diseases and ConditionsCDC. MMWR June 12, 2009
Integridad de lamuestra (DNA, RNA)Integridad de lamuestra (DNA, RNA)
Preparación de lamuestra, amplificación,detección.Calibradores y controles
Preparación de lamuestra, amplificación,detección.Calibradores y controles
Documentación,interpretación e informeDocumentación,interpretación e informe
CONTROL DE CALIDAD :DISEÑADO PARACONTROLAR …
Integridad de lamuestra (DNA, RNA)Integridad de lamuestra (DNA, RNA)
Preparación de lamuestra, amplificación,detección.Calibradores y controles
Preparación de lamuestra, amplificación,detección.Calibradores y controles
Documentación,interpretación e informeDocumentación,interpretación e informe
ETAPA PRE ANALÍTICA
• PLANILLAS: INFORMACIÓN PACIENTE OCONSENTIMIENTO PARA TEST GENÉTICOS
• TOMA DE MUESTRA: TUBOS, MEDIOS DETRANSPORTE, HISOPO . ALMACENAMIENTOHASTA EL PROCESADO (SEPARACIÓN DEPLASMA)
• TRANSPORTE Y ALMACENAMIENTO DE LAMUESTRA: TEMPERATURA Y CONDICIONES
• PREPARACIÓN DE LA MUESTRA: TEMPERATURAY VELOCIDAD DE CENTRIFUGADO
SOLICITUD DEL TEST- TIPO Y TOMA DE MUESTRA-TRANSPORTE
Good Laboratory Practices for Molecular Genetic Testing for Heritable Diseases and ConditionsCDC. MMWR June 12, 2009
ETAPA ANALÍTICA
• CONTROL AMPLIFICACIÓN: CONTROL POSITIVO,NEGATIVO Y CUANTIFICADOS (DOSCONCENTRACIONES) PARA TEST CUANTITATIVOS
• CONTROL DE EXTRACCIÓN ÁCIDOS NUCLEICOS• CONTROL DE INHIBICIÓN: CONTROL INTERNO• CONTROL DE CONTAMINACIÓN O DE REACTIVOS• CONTROL DE INSTRUMENTAL
PROCESAMIENTO DE MUESTRAS- EXTRACCIÓN DE ÁCIDOSNUCLEICOS, PREPARACIÓN Y EVALUACIÓN;- REACCIÓN ENZIMÁTICAO AMPLIFICACIÓN - DETECCIÓN DE ANALITOS - REGISTRO DERESULTADOS
Eileen Burd. Clin Microbiol Rev.23 (3)550-576 .2010
FALSOS NEGATIVOS/POSITIVOS
FALSOS NEGATIVO• TOMA DE MUESTRA Y/O CONSERVACIÓN INADECUADA• FALLA EN LA EXTRACCIÓN / AMPLIFICACIÓN : CONTROL
INTERNO• PROBLEMAS TÉCNICOS: REACTIVOS O INSTRUMENTOS
Good Laboratory Practices for Molecular Genetic Testing for Heritable Diseases and ConditionsCDC. MMWR June 12, 2009
FALSOS POSITIVOCONTAMINACIÓN: CONTROL BLANCO DE REACTIVOS
FLUJO UNIDIRECCIONAL DE MUESTRAS, REACTIVOSY PERSONAL
ETAPA ANALÍTICA
Objetivo: minimizar la contaminación de reactivos y de las muestras
ETAPA POST ANALÍTICA
• INTERPRETACIÓN DEL RESULTADO• INFORME DE RESULTADOS• TIEMPO DE ENTREGA DEL
RESULTADO• REGISTRO DE RESULTADOS
CRÍTICOS• NUEVAS MUTACIONES DETECTADAS
CONTROL DE CALIDAD EXTERNODEFINICIÓN ISO
SISTEMA QUE CONTROLA OBJETIVAMENTELOS RESULTADOS DE LABORATORIO POR
MEDIO DE UNA AGENCIA EXTERNA,INCLUYENDO LA COMPARACIÓN DE LOS
RESULTADOS DEL LABORATORIO AINTERVALOS CON LOS DE OTROS
LABORATORIOS, SIENDO SU MAYOROBJETIVO EL ESTABLECIMIENTO DE LA
VERACIDAD
UN CONTROL DE CALIDAD EXTERNO…
•EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL PARTICIPANTE
•EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DE LA METODOLOGÍA
•HERRAMIENTA DE EDUCACIÓN CONTINUA
•EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO ANALÍTICO Y SURELACIÓN CON LA CLÍNICA
•SOPORTE PARA EL CONTROL DE CALIDAD INTERNO
• VALIDACIÓN DE RESULTADOS DE INVESTIGACIÓN
TIPO 1– DISEÑADO PARA INFORMAR A TERCEROS EL DESEMPEÑO DE
LABORATORIOS : AUTORIDADES, ORGANISMOS DEACREDITACIÓN, SEGURIDAD SOCIAL, ETC.
TIPO 2– DISEÑADO PARA REPORTAR DESEMPEÑO ANALÍTICO A LOS
PARTICIPANTESTIPO 3
– DISEÑADO PARA RESPALDAR SOLUCIONES DE PROBLEMASEN LOS LABORATORIOS.
TIPO 4– DISEÑADOS PARA EVALUAR MÉTODOS DE MEDICIÓN Y
APARATOS IVDS
CONTROL DE CALIDAD EXTERNOTIPOS
DIAPOSITIVA Dra. Silvia Quiroga
• ESTIMULAR LA FILOSOFÍA Y PRÁCTICA DEL CONTROLDE CALIDAD
• RESPALDAR LA CONFIABILIDAD DE LOS RESULTADOSDE LOS LABORATORIOS CON UNA EVALUACIÓNINDEPENDIENTE
• MEJORAR EL CONSENSO ENTRE LABORATORIOSCONTROLAR METODOLOGÍAS Y EQUIPOS DISPONIBLESCOLABORAR EN LOS PROCESOS DE ACREDITACIÓN /CERTIFICACIÓN DE LOS LABORATORIOS
• VALIDAR LOS RESULTADOS DE INVESTIGACIÓN
CONTROL DE CALIDAD EXTERNOOBJETIVOS
OBJETIVOS DE CONTROL DE CALIDADEXTERNO PARA ENSAYOS DE BANCO DE
SANGRE
CONTROL DEL DESEMPEÑO
MUESTRAS ADECUADAS ?DISEÑO DEL ESQUEMA
EVALUACIÓN APROPIADA
COMUNICACIÓN CONLOS PARTICIPANTES
DESEMPEÑODEL PARTICIPANTE
HERRAMIENTAS SEGUIMIENTO
DESEMPEÑODEL MÉTODO
EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEUN MÉTODO
• INCLUYE REACTIVOS, CALIBRADORY EQUIPO
• ASPECTOS: TRAZABILIDAD,ESPECIFICIDAD, RANGO DINAMICO,LÍMITE DE DETECCIÓN, LIMITE DECUANTIFICACIÓNINTERFERENCIAS, PRECISIÓNCONTROL DE CALIDAD DEBE CREAR
GRUPOS HOMOGÉNEOS DE USUARIOS
• DESEMPEÑO DE LOS LABORATORIOSPARTICIPANTES
• VARIACIÓN INTRA LABORATORIO• VARIACIÓN INTER LABORATORIO• RELACIONES ENTRE PROCEDIMIENTOS DE
RESULTADOS ANALÍTICOS Y:– procedimientos analíticos adecuados– reactivos comerciales– instrumentos analíticos– constituyentes del material de control de
calidad
DESEMPEÑO DEL PARTICIPANTE
EL ORGANIZADOR
CONTROL DE CALIDAD EXTERNOEDUCATIVO
LAS MUESTRAS DEBEN DAR INFORMACIÓN CORRECTA YSER APROPIADAS PARA EL OBJETIVO
EL OBJETIVO DEL CC DEBE SER DELINEADO ANTES DECOMENZAR LA RONDA Y PREPARAR LAS MUESTRAS
LOS ORGANIZADORES DEL CC DEBEN BUSCAR ELORIGEN DE RESULTADOS ABERRANTES Y ENCONTRAR ELREMEDIO APROPIADO
MONITOREO DE LOS PARTICIPANTES, SIN ESPECIFICARLA CALIDAD ESPERADA
COMPARACIÓN ENTRE LOS DISTINTOS GRUPOS
COMPARACIÓN ENTRE DISTINTOS MÉTODOS
EVALUACIÓN DE FACTORES DE CALIDAD
OBJETIVOS DEL PROGRAMADE CC
CUALES SON LAS DESVENTAJASPARA REALIZAR UN CCE
1- LAS MUESTRAS A EVALUAR DEBEN PREPARASE CON UNESTANDAR INTERNACIONAL
2- DISTINTOS TIPOS DE HERRAMIENTAS MOLECULARES
3- DNA ES MAS ACCESIBLE QUE RNA
4- NO EXISTEN MÉTODOS DE REFERENCIA