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TRANSCRIPT
Liquid Handling
César Pérez Vázquez
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Contenido
1
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Generalidades
4
Exactitud y Precisión
Principios de Pipeteo
3
Sistema de Pipeteo
5 Técnicas de Pipeteo
Factores que Afectan los Resultados
Ergonomía
Resumen
6
7
8
OrigenSartorius Liquid Handling
•Biohit Liquid Handling ahora es parte de Sartorius Lab Products and Services
•Fundada en 1988,especializada en productos para el manejo de líquidos.
•Localizada en Helsinki (Finlandia) con operaciones en 9 países.
Generalidades
Nuestras Metas
Ofrecer Productos de buena Calidad
Confianza en los Resultados
Reproducibilidad
Personalización, según la aplicación
Regulaciones y trazabilidad
Limpieza y Mantenimiento
Cuidado del Analista
Capacitación
Generalidades
Nuestros logros
Tener la pipeta más vendida del mundo (e-Line)
La pipeta electrónica más ligera, más exacta y más precisa
Sensor Optico y Motor DC patentado
Rastreador de Placas (Patentado)
Eyector de puntas patentado (Tacta)
Diseño
Calidad
Innovación
Confianza
Generalidades
Los logros de Nuestros Clientes
Reducción del tiempo de Análisis hasta en un 50%
Curvas de calibración “Perfectas”
Mejora de la Exactitud
Mejora de la precisión
Disminución de errores al trabajar con micropozos
Cuidado de su Salud
Analistas Capacitados
Confianza en los resultados
Generalidades
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1 Generalidades
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Exactitud y Precisión
Principios de Pipeteo
3
Sistema de Pipeteo
5
Técnicas de Pipeteo
Factores que Afectan los Resultados
Ergonomía
Resumen
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7
8
“Los resultados de un buen Pipeteo no dependen de la pipeta o de la punta por si solos, si no la combinación de ambos”
Sistema de Pipeteo
Puntas
Puntas estándar – Para uso general de laboratorio
Puntas con filtro – Puntas con filtro dentro, para evitarcontaminación en aplicaciones críticas
Puntas especiales – Para aplicaciones especiales
e.g.: - Puntas extendidas- Puntas de baja retención
- Puntas de borde ancho
- Puntas para carga de gel
Sistema de Pipeteo
Ajuste de la punta
10
La pipeta y la punta forman un Sistema que define la calidad de los resultados.
- Un sello perfecto entre la punta y el cono
- La punta debe estar firmemente colocadadurante el uso
- La columna de aire debe ser suficiente para retener el líquido
Sin fuga= Resultados exactos & precisos
Nota! Cambiar de punta (marca) requiere hacer re-calibración
Sistema de Pipeteo
Calidad de la punta
Criterio de calidad
Alta Resistencia química del material
La forma importa (rugosidad, superficie, firmeza)
Ambiente controlado durante sumanufactura
Absoluta trazabilidad por número de lote
Cada lote debe ser analizado
Certificados de pureza por cada lote
Sistema de Pipeteo
La calidad de las puntas juega un
papel muy importante en los
resultados.
Alta Resistencia Quimica de los materiales
(Punta de PP Vírgen y Filtros de PE)
Aseguran la integridad de los resultados.
Forma (rectitud de la punta, redondez del
agujero de la punta, superficie uniforme)
ayudan a mejorar la precisión de los
resultados.
ISO certified Certificado ISO de manufatura
en cuarto limpio, Certificado de pureza por
lote especifico, reduce el riesgo de
contaminación.
Calidad de las Puntas
Sistema de Pipeteo
0.00%
0.20%
0.40%
0.60%
0.80%
1.00%
990 995 1000 1005 1010
Ran
do
m e
rro
r (%
)
Dispensed volume (µl)
Selección de puntas de 1000 µl de algunos principales fabricantes
Volumen Objetivo Fabricante de la punta de la pipeta
Conclusion: The test was performed in a strictly controlled environment by a pipetting expert. Yet some
of the tips did not meet specifications. The best performing tip in this test was the pipette manufacturer’s
tip. Hence prefer using tips recommended by the pipette manufacturer – or, if not possible, check
the performance of the pipette and tip combination and calibrate the pipette accordingly.
Compatibilidad
Sistema de Pipeteo
Filtro tipo A Filtro tipo B Filtro tipo C Filtro tipo D
Tipo de Punta por aplicación – Puntas con Filtro
La mayoria de las puntas con filtro no tienen suficiente espacio de aire para el pipeteo
en reversa, dispensación multiple con pipetas electrónicas o para el pipeteado de cierto
tipo de fluidos, (Espumantes, solventes ....) Entoces el liquido facilmente puede tener
contacto con el filtro.
Esto puede afectar la exactitude de los resultados o bloquear el filtro (si es auto
bloqueante) evitando la dispensión completa. Parte de la muestra se pierde
Sistema de Pipeteo
Para evitar la pérdida de muestra, se recomienda
elegir una punta con filtro que tenga un espacio de
aire seguro entre el filtro y el líquido, especialmente
con los siguientes líquidos o con la técnica de
pipeteo usada.
Líquidos Espumantes (e.g. buffers), líquidos que
contengan proteinas o solventes.
Cuando se use la técnica de multiple dispensación
con una pipeta electrónica y en el pipeteo en
reversa.
Cualquier técnica de pipeteo que requiera espacio
de aire extra entre la muestra y el filtro
Tipo de punta por aplicación – Puntas con filtro
Sistema de Pipeteo
Puntas de baja retenciónAlgunos líquidos pueden ser difíciles de manejar cuando se usan puntas estándar.
Algunos residuos líquidos pueden permanecer en la punta debido a las diferencias entre la superficie del plástico y la tensión superficial de la muestra.
Los residuos causan imprecisión en el pipeteo y pérdida de muestra o
reactivo
Sistema de Pipeteo
Puntas de baja retención
Punta altamente Hidrofóbica y con alta resistencia Química
Sistema de Pipeteo
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Exactitud y Precisión
Principios de Pipeteo
2 Sistema de Pipeteo
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Técnicas de Pipeteo
Factores que Afectan los Resultados
Ergonomía
Resumen
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Exactitud y PrecisiónConceptos Clave de Pipeteo
Accurate
Precise
Precise
Not accurate
Accurate
Not precise
Not accurate
Not precise
Una pipeta es una herramienta de precisión, que mide microlitros (es decir,
millonésimas de litros o milésimas de mililitro) de líquidos. Por lo tanto la
exactitud y la precisión son las características más importantes de una pipeta y
requieren también la técnica correcta de pipeteado
Exactitud y Precisión
Exactitud y Precisión
Exacto &Preciso
PrecisoNo exacto
ExactoNo preciso
No exactoNo preciso
Exactitud y Precisión
Una pipeta es una herramienta de precisión, que mide microlitros (es decir, millonésimas de
litros o milésimas de mililitro) de líquidos. Por lo tanto la exactitud y la precisión son las
características más importantes de una pipeta y requieren también la técnica correcta de
pipeteado
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1 Generalidades
3 Exactitud y Precisión
Principios de Pipeteo
2 Sistema de Pipeteo
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Técnicas de Pipeteo
Factores que Afectan los Resultados
Ergonomía
Resumen
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7
8
Principales Fuentes de Errores en pipeteo de acuerdo a la ISO 8655-2
El mayor impacto en los resultados de pipeteo, hasta el 50%:
Goteos en el pistón y cilindro de la pipeta
Pobre ajuste de la punta (Las puntas gotean)
Menor impacto en los resultados del Pipeteo, hasta un 0,5%:
Movimiento irregular del pistón.
Diferencias de temperatura entre la pipeta, punta, liquido y la temperatura de la
habitación (hasta un 0,3%/C⁰)
Mediano impacto sobre los resultados del pipeteo hasta un 4%:
Re-usar las puntas
No dispensar el líquido por la pared del recipiente
Ambiente Inestable (Humedad, temperatura)
No pre-enjuagar la punta (Humectar)
Ritmo irregular y tiempo de pipeteo
Profundidad de inmersión de la punta y ángulo de la pipeta durante la pipeteado
Factores que Afectan los resultados
Las pipetas comprenden una variedad de
piezas mecánicas y electrónicas sujetas a:
“Usarse y romperse”
Sufrir Daños
Por lo tanto, asegúrese de la funcionalidad y el
rendimiento de la pipeta mediante un
mantenimiento y una calibración regulares.
Asegúrese de usar un socio acreditado para un
servicio de pipeta y una calibración confiables.
Para facilitar su trabajo, elija una pipeta que sea
fácil de limpiar, mantener y calibrar - de un
fabricante que cumpla con los estándares de
calidad de la industria.
Mantenimiento de las Pipetas
Factores que Afectan los resultados
Puntas con Filtro Filtros - cono
Reducir el Riesgo de Contaminación
Factores que Afectan los resultados
997
998
999
1000
1001
1002
1003
1004
1005
1006
0° 10° 20° 30° 40° 50° 60°
Vo
lum
en
Dis
pe
nsa
do
(µl)
Ángulo de Inclinación durante la succión
Ángulo de Pipeteo
45⁰ de inclinacion de la pipeta mientras se aspira el líquido,
incrementa el volumen en un 0.4%. El resultado es inexacto y
está fuera de especificación
Volumen Objetivo
Conclusión: Inclinar la pipeta mientras se aspira, entregará una mayor
cantidad de liquido de la pre-definida.
Factores que Afectan los resultados
Pre-enjuague Pipeteo Avanzado
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Conclusión: El pre-enjuague es necesario en el pipeteo directo para
obtener resultados consistentes.
Factores que Afectan los resultados
Pre-Humectación en Pipeteo en Reversa
no pre-rinsing
Number of dispensings
Vo
lum
e (
µl)
Conclusion: Pre-Humectación no es necesaria en Pipeteo en Reversa.
Factores que Afectan los resultados
Habilidades y Experiencia en el Pipeteo
0.00%
0.50%
1.00%
1.50%
2.00%
2.50%
3.00%
3.50%
0.00% 0.20% 0.40% 0.60% 0.80% 1.00%
Ran
do
m e
rro
r
Systematic error
Resultados del Pipeteo de
pequeños volúmenes (100 µl)
0.00%
0.50%
1.00%
1.50%
2.00%
2.50%
3.00%
3.50%
0.00% 0.20% 0.40% 0.60% 0.80% 1.00%
Ran
do
m e
rro
r
Systematic error
Unexperienced
Moderately experienced
Experts
Conclusión: Las habilidades de pipeteado y la experiencia tienen un mayor impacto, cuando se utiliza una pipeta mecánica en comparación con una electrónica. Con las pipetas electrónicas el motor controla el movimiento del pistón consistentemente, con cualquier usuario.
Factores que Afectan los resultados
Sujetar la pipeta en forma vertical cuando se aspire el líquido
Sumergir la punta 2-3 mm
Pre-humecte 3-5 veces antes de pipetear(pipeteo avanzado)
Mantener el ritmo.
Dispensar en un ángulo de 30 – 45°
Pipetear por la pared del recipiente
Reglas para Recordar
Factores que Afectan los resultados
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Técnicas de Pipeteo
Factores que Afectan los Resultados
Ergonomía
Resumen
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Ciclo del Pipeteo
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Ajuste de volúmen
Ajuste de punta
Pre-enjuagueAspiración
Dispensado & expulsión
Eyección de puntas
Ergonomía
Ergonomía en el Pipeteo
El Pipeteo es una tarea repetitiva acompañadapor posturas estacionarias
El Pipeteo incrementa el riesgo de lesiones pormovimiento repetitivo
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Ergonomía
¿Cómo afectaría una lesión por movimientorepetitivo en tu vida diaria?
El pipeteo puede ser un trabajo duro
El pipeteo causa tensión especialmente en el cuello, hombros, manos y dedos
Movimientos repetitivo
Posiciones incómodas
Fuerza excesiva
Períodos de pipeteo prolongados
33
Nota: 1½h por día de pipeteo contínuo incrementa el riesgo de lesiones por
movimiento repetitivo
- ¡Recuerda tomar descansos!
Ergonomía
Pipeta ergonómica
34
Gancho de soporte
Peso
Fuerza para el pipeteo
Eyector de puntas
Pantalla
Bloqueo de volumen Forma del cuerpo
Longitud
Ajuste de puntas
Ergonomía
Accesorios que nos facilitan el Trabajo
35
Ergonomía
Ergonomía
Estiramientos
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Principios de Pipeteo
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Técnicas de Pipeteo
Factores que Afectan los Resultados
Ergonomía
Resumen
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7
8
Dos Principios de Pipeteo
Desplazamiento de ire
|
Desplazamiento positivo
La mayoria de las pipetas usadas en los laboratorios, trabajan bajo el principio
de desplazamiento de aire, debido a los bajos costos comparados con los que
funcionan bajo el principio de desplazamiento positivo
Introduction al Pipeteo
Desplazamiento de aire
Columna de Aire
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Principios de Pipeteo
2 Sistema de Pipeteo
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Técnicas de Pipeteo
Factores que Afectan los Resultados
Ergonomía
Resumen
6
5
8
Técnicas de Pipeteo
Técnicas de Pipeteo
Pipeteo Avanzado
Pipeteo en Reversa
Multi dispensación
Manual
Dilución
Dispensación secuencial
Multi Aspersión
Titulación
Pipeteo avanzado
Es la técnica de pipeteo más utilizada.
La pipeta aspira el volúmen seleccionado y dispensa en un solo paso.
Aplicaciones típicas:
Soluciones acuosas
Líquidos que contengan pequeñascantidades de detergentes o proteínas
Nota: Las especificaciones de cada pipeta es
proporcionada únicamete para la técnica de
pipeteo Avanzado
Técnicas de Pipeteo
Pipeteo AvanzadoTécnicas de Pipeteo
1. Presionar el piston hasta
el 2do Tope y sumergir la
punta en el líquido a una
profundidad de 2–3 mm
2. Suavemente liberar
el piston hasta su
posición inicial.
Pipeteo en Reversa
3. Dispense el líquido
presionando el piston hasta
el 1er tope. Deseche el
exceso presionando hasta el
2do tope
Técnicas de Pipeteo
Pipeteo en reversa
Técnica usada con líquidos difíciles o
para aplicaciones que requieren
particularmente alta presición y exactitud.
La pipeta aspira el volumen requerido +
un volumen de exceso que mejora los
resultados para:
Fluidos Biológicos
Líquidos espumantes (proteinas o
detergentes)
Fluidos Viscosos
Pequeños Volúmenes
Técnicas de Pipeteo
Técnicas de Pipeteo
Pipeteo en Reversa
Técnicas disponibles con pipetas Electrónicas
Special aspiration (SA)
(washing, sample
pooling)
Diluting (dd)
Diluting+mixing
(dd+mix)
Sequential dispensing
(Sd)
Multi-dispensing (d)
Automatic dispensing
(Ad)
Tecnicas de Pipeteo
Tecnicas de Pipeteo
Multi-Dispensación
Tecnicas de Pipeteo
Dilución
Tecnicas de Pipeteo
Dispensación Secuencial
Tecnicas de Pipeteo
Tracker
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Principios de Pipeteo
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Técnicas de Pipeteo
Factores que Afectan los Resultados
Ergonomía
Resumen
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¡Mejorar la Técnica de pipeteo mejora los resultados!
Siga las buenas prácticas de
pipeteo: Sujete la pipeta en forma Vertical
Pre-Humecte la punta
Sumergir la punta de 2-3 mm
Trate de usar el mismo ritmo de
pipeteo o use una pipeta
electronica
Dispense el líquido por la pared
del recipiente
Elija el principio y
técnica de pipeteo
adecuado para su
aplicación y el líquido
de trabajo
Esté seguro que las
condiciones ambientales
son estables: Temperatura
Humedad
Presión
Mantenga limpia
su pipeta y
calíbrela cuando
sea requerido.
Su pipeta y punta, trabajan
como un solo Sistema: Mejores
resultados se obtienen usando
puntas que son recomendadas
por el fabricante de las pipetas
Resumen
¡Sí!
Seleccione la pipeta más ligera y cómoda de usar
Seleccione las puntas adecuadas
Use la técnica de pipeteo correcta
Ponga atención a las posturas de trabajo saludables
Calibre y provea de mantenimiento adecuado a su pipeta
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Resumen
¡No!
x No golpee ni gire la pipeta cuando coloque las puntas
x No use fuerza excesiva al colocar las puntas
x No trabaje en posturas incómodas
x No pipetee durante largos períodos
x No re-use las puntas
x No sobre-aspire el líquido
x No exceda el rango de volúmen de la pipeta
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Resumen
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Thank you very much for your attention!