lp2_microscopul electronic biocel.pptx
TRANSCRIPT
-
7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx
1/23
Microscopia electronica
-
7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx
2/23
In microscopia electronica, in loculfotonilor, imaginea este formata cuajutorul unui facicul de electroniaccelerati si focalizati asupra tintei.Detallile sunt realizate pornind de lacomportamentul tintei, care poate sa
e electronoopaca sauelectronotransparenta, oarecumsimilar cu comportamentul optic in
microscopia clasica.
-
7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx
3/23
TEM si SEM
Microscopia electronica de transmisie(TEM utilizeaza un fascicul de electronicare a parcurs specimenul, pentru a forma
imaginea acestuia, prin intermediul unuisistem de focalizare a imaginii (o!iecti",analog celui din M#
Microscopia de !aleiaj formeaza imagineautilizand electronii re$ectati%de"iati detinta, focalizarea prin intermediul lentileio!ieti"
-
7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx
4/23
Microscopulelectronic detransmise
-
7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx
5/23
Microscopul electronic cu!aleiaj
-
7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx
6/23
&rele"are pro!a
'iare ()lutardialde*ida pt. proteine
&ost+are (#s# - genereaza structuri
electronoopace prin legarea #s# lacomponentele *idrofo!e ale lipidelor demem!rana lipide si proteine
Includerea + in rasina epoidica (E/ -
asigura rigiditatea piesei pentru0
sectionare (ultramicrotom, 1+211 nmgrosime
-
7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx
7/23
&repararea pro!elor
Criofxarea- racirea rapida a pro!ei, de regulala temperatura azotului lic*id. 3ceasta coser"aspecimenul prin racire instantanee in starea sainitiala . Din aceasta procedura au deri"at
procedee de are aplicate si in M#.
Fixare+ este un termen general care descrieproccesul de conser"are care pre"inedeteriorarea ulterioara, astfel incat acesta sa
conser"e cat mai mult din starea initiala. 'iareapentru ME utilizeaza glutardialde*ida pentrureticularea proteinelor, si post+area ci tetraoidde osmiu, prin care se eaza (si coloreaza
lipidele.
-
7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx
8/23
&repararea pro!elor
Deshidratarea- indepartarea apei din pro!e. Seinlocuieste apa cu sol"enti organici ca etanolul
sau acetona, ca o etapa catre uscarea totala aspecimenelor SEM sau impreg!narea cu rasina
urmata de incorporare, pentru TEM.
Includerea- inltrarea tesutului cu o rasina cumeste araldita sau 45 6*ite, care polimerizeaza,formand un !loc rigidizat pentru a se sectiona.
Sectionarea+ are ca scop realizarea de sectiuniultrane din specimen. Sectiunile tre!uie sa esemitransparente pentru electroni , intre 1 si211 nm. 3ceste sectiuni se realizeaza cu un
iltramirotom, a"and cutite de sticla (mai ieftinesau de diamant.
-
7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx
9/23
&repararea pro!elor
Colorarea- foloseste metale grele (&! sau 7amplicand in acest fel contrastul structurile!iologice sunt initial transparente pentru electroni, iar prin colorare se o!tine o densitate mai marefata de electroni. Specimenele se pot colora inaintede incorporare sau duppa sectionare, prin epunerela coloranti cu metale grele.
Crioracturarea si crio-decapajul+ o metoda depreparare utila in special pentru eaminarea
mem!ranelor lipidice si a proteinelor de mem!rana.&iesele se eaza rapid prin crioare, apoi suntfracturate prin utilizarea unui ultramicrotom latemperatura azotului lic*id. Suprafetele fracturate
se decapeaza prin riicarea temperaturii la +89
-
7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx
10/23
&repararea pro!elor Se realizeaza apoi o um!rire prin acoperirea cu
platina "aporizata (la un ung*i de :o. Se aplica unstrat de car!on, care se e"apora perpendicular pesuprafata, marind sta!ilitatea acoperirii. Mascametalizata se degajeaza de resturile de material
!iologic, se depune pe grile si se eamineaza. In cazul SEM, eaminarea poate facuta imediat
dupa crio+fracturare si decapaj.
Acoperirrea prin pulverizare catodica - se
poate depune un strat ultra+n de metal(electroconductor, printr1+un procedeu in "idinaintat. 3ceasta pre"ine incarcarea pro!ei (datorataincarcarii statice, iar la SEM asigura o crestere a
numarului de electroni detecta!ili, crescand astfelraportul semnal%zgomot. 3semenea acoperiri se fac
-
7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx
11/23
7ltramicrotomul
-
7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx
12/23
Imagine generala a uneicelule
-
7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx
13/23
Eucromatina
-
7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx
14/23
-
7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx
15/23
/ucleol
-
7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx
16/23
3n"elopa nucleara
-
7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx
17/23
&or nuclear
-
7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx
18/23
5E5
5E5
&lasmocit,uman.
-
7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx
19/23
5eticul endoplasmic neted
5E5 si 5E/ -
-
7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx
20/23
Mitocondrii
&lasmocitSo!olan
&lasmocit7man
-
7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx
21/23
3paratul )olgi
Maimuta
&lasmocituman
-
7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx
22/23
Spatiul intercelular
Stratum spinosum (omSpatii intercelulare largite
Sinapsa, corte deso!olan,;u "ezicule sinaptice
Spatiul intercelularSu!st. de !aza =colagen4igament, so!olan
-
7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx
23/23
Tig*t junction(jonctiune stransa(*epatocite, so!olan
>onctiune gap(;o!ai, urec*ea interna
Interdigitatie si desmozom
Duoden de maimuta