Tutorial: Manejo de espectrofotómetro Beckman-Coulter ® DU 800

Elaborado por: Q.F.B. Isboset Gabriel Núñez Luna

Universidad Nacional Autónoma de México.Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán.

Requerimientos

• El espectrofotómetro Beckman-Coulter ® DU 800 requiere del sistema operativo Windows XP.

Encendido

• Encender el interruptor de la parte trasera del equipo.

• Revisar el interior del espectrofotómetro.• Remueva cualquier pelusa, polvo o partícula

extraña con microfibra o tela que no deje residuos.

• El equipo debe encenderse por lo menos 5 minutos antes de utilizar el software controlador.

Acceso al software

1. Dar clic en la barra de Inicio Seleccionar DU 800 Spectrophotometer Dar doble clic con el mouse o pulsar la tecla “Enter”

2. Dar clic en el acceso directo que dice DU 800 Spectrophotometer.

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2

Antes de realizar cualquier ensayo • El software cuenta con una rutina de diagnóstico

previo del aparato.• Esta rutina no dura más de 5 minutos.• Se evalúa funcionamiento de los focos,

monocromador, detectores, etc.• Una vez finalizado, dar clic en el botón

“Continuar/Continue”

Antes de realizar cualquier ensayo 2

• Encender las lámparas UV/VIS dando clic sobre los botones “Visible” y “UV”

• La lámpara UV tarda de 30 a 60 segundos en encender.

• Después del encendido, hay que permitir un tiempo de “espera” de no más de 5 minutos para que el funcionamiento de los focos sea óptimo.

PROCEDIMIENTO GENERAL DE EJECUCIÓN

Funciones disponibles en el espectrofotómetro Beckman-Coulter ® DU 800.

• Longitud de onda fija.• Barrido (Escaneo/Sondeo

de longitud de onda)• Cinética/Tiempo• Análisis de un solo

componente.• Análisis de ácidos nucleicos.• Validación de desempeño

• Antes de realizar cualquier lectura en el espectrofotómetro, se debe utilizar un blanco.

• Este puede ser agua destilada, todas las especies químicas de un sistema menos el analito etc.

• Limpie su celda de lectura con sumo cuidado, no dejando pelusas, grasa o similares sobre el lado traslúcido.

• Coloque la celda, de manera que el lado opaco quede orientado hacia Ud.

• Presione el botón BLK para iniciar el proceso.• Durante la lectura del blanco, el botón de STOP

parpadeará hasta la finalización de la tarea.

• Después de haber realizado la lectura del blanco, continúe su experimento oprimiendo el botón “GO Scan” y midiendo los sistemas que tenga listos para evaluar.

Por ningún motivo debe levantarse la tapa del espectrofotómetro mientras

efectúa las lectura de blancos y/o muestras.

BARRIDO

Indicaciones generales

1. Seleccionar opción “Wavelength Scan” de la barra de opciones.

2. Enseguida, aparecerá una pantalla con una hoja cuadriculada. En esta cuadricula se observará el comportamiento del barrido.

3. Para especificar las condiciones del barrido, nos dirigimos a la opción “Methods” que se hallar en la barra de menú.

4. Aparece una serie de opciones y damos clic en la opción “Create/Edit Method”.

Selección de Absorbancia oTransmitancia.

Rango de lectura (nm)

Velocidad de lectura

Otros

LONGITUD DE ONDA ÓPTIMA

Indicaciones generales

1. Seleccionar opción “Fixed Wavelenght” (Longitud de onda fija) de la barra de opciones.

2. Para especificar las condiciones del barrido, nos dirigimos a la opción “Methods” que se hallar en la barra de menú.

3. Aparece una serie de opciones y damos clic en la opción “Create/Edit Method”.

• Al igual que el barrido, cuenta con la opción de selección de % de transmitancia y/o absorbancia. (1)

• También cuenta con ajuste de cálculos, incluso pudiendo ya efectuar la cuantificación introduciendo una formula o multiplicando por factores numéricos. (2)

• Puede leer hasta en 12 longitud de onda diferentes. Sin embargo considere que a mayor cantidad de longitud de onda, el tiempo de lectura de muestra es mayor.(3)

12

3

CINÉTICAS

Indicaciones generales

1. Seleccionar opción “Kinetics/Time” (Longitud de onda fija) de la barra de opciones.

2. Para especificar las condiciones del barrido, nos dirigimos a la opción “Methods” que se hallar en la barra de menú.

3. Aparece una serie de opciones y damos clic en la opción “Create/Edit Method”.

4. Aquí se puede especificar la longitud de onda analítica y la de fondo. (1)

5. Número de muestras, intervalo de tiempo entre cada lectura, tiempo total y factores/unidades. (2)

1

2

Análisis de ácidos nucleicos

• En técnicas de Biología molecular es importante determinar la cantidad de material genético (DNA/RNA).

• En caso de que no hallarse suficiente cantidad de alguno, ciertos métodos podrían verse comprometidos en su ejecución (PCR) e indicarían problemas de preparación de muestra o adición de reactivos.

• La longitud de lectura óptima para cuantificar RNA es de 280 nm y para DNA es de 260 nm. Valores decrementandos nos pueden indicar baja pureza de los materiales extraídos.

• Dado que se trata del análisis de analitos muy específicos, en realidad no hay que hacer muchos ajustes.

• Se encuentra en la pantalla 5 columnas: la primera es el nombre y número de muestra, la segunda es la absorbancia de DNA a 260 nm, la tercera es la absorbancia de RNA a 280 nm, la cuarta es la proporción que existe entre DNA/RNA y la última es la proporción entre RNA/DNA.

GUARDADO

• Existen dos modos de guardar el trabajo (barridos, curvas, etc.) con el programa.

• Una de ellas es directa y la otra exportando la información.

Exportando la información.

• El programa crea una hoja de calculo con las terminaciones .xls o .csv (dependiendo del análisis efectuado).

• Esta hoja de calculo puede ser consultada sin necesidad de abrir el programa directamente.

• De clic en barra de menú “Tools/Herramientas”.

• Seleccionar la opción “Data Export”.

• En seguida, aparecerá un cuadro de dialogo para que especifiquemos la ubicación de guardado del archivo.

Guardado directo

• Se genera un archivo de terminación .dux que sólo puede ser abierto desde el mismo programa del espectrofotómetro.

• En ocasiones este almacenaje resulta más ventajoso para algunas tareas (Ej. Barridos)

• De clic en el botón “Save file/Guardar archivo”. (1)

• Igualmente, aparecerá un cuadro de dialogo para especificar la carpeta de almacenaje.

• Para abrir los archivos en formato .dux, seleccione la opción de “Open file/Abrir archivo” (2)

• Emergerá un cuadro de dialogo donde se puede seleccionar el archivo a abrir.

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2

FIN