MASTR 工作流程

1 2 3

计划运行

DQC 计算器 测序计算器 DNA 样品 每个单样品 n 重 2% 琼脂糖

或和/ 或

基于微流体的方法

多重 PCR 质量控制

4

稀释步骤和通用 PCR

每个样品 n 重 每个样品 n 重标记

8

纯化的标记 扩增子文库

测序样品

等摩尔混合

NGS

9 10

NGS（测序仪） 数据分析

标记 扩增子文库

纯化的标记 扩增子文库

纯化

7

或 或

5

2% 琼脂糖 基于微流体的方法

ABI 毛细管测序仪上的 GeneScan 模式

质量控制

6

混合多重单个样品

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仅限研究使用。不可用于诊断目的。

本文中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。

PR7000-0718 © 安捷伦科技（中国）有限公司，2017 2017 年 10 月，中国出版 5991-8365ZHCN

序号 信息 分析周期（* 手动操作时间） SFP

• 对提取的 DNA 进行质控• DQC 计算器：基于 Agilent QC Plex 结果，对来源于 FFPE 样本的 DNA 提出建议• 测序计算器：安排样品在一次测序运行中进行组合

• 使用 MASTR 试剂盒制备每一重（n 重）的 Multiplex 反应预混液• 添加 DNA：每重 20–50 ng (HMW) 或根据 QC Plex 结果 (FFPE)• 运行 PCR

约 30 min* 2 h 15 min 是

• 仅推荐用于生殖系 MASTR 检测 约 30 min*

• 使用 MID 试剂盒为每个样品（n 重）准备一份通用反应预混液• 每个样品添加稀释的 n 重• 运行 PCR

约 30 min*约 15 min*2 h 15 min

是

• 推荐用于所有 MASTR 检测 约 30 min*

• 混合每个样品的所有重（预定义混合方案）以获得完整的单管标记扩增子文库 • 标记扩增子文库仍包含少量残留 DNA 片段（dNTP、引物/引物二聚体）

约 15 min* 是

• 将 Agencourt AMPure XP 磁珠添加到标记扩增子文库• 纯化并用水洗脱

约 45 min(30 min*)

是

• 测定每个纯化标记扩增子文库的浓度• 请注意，使用扩增子试剂 3 (AR3) 的检测中需要使用分光光度法• 将文库在 TE 中稀释并等摩尔混合，以获得单管测序样品

约 30 min*

• 根据 NGS 系统制造商的说明制备测序模板• 序列

• 数据分析

1

2

3

4

5

7

8

6

NGS

9

10

CNV = 拷贝数变异 FFPE = 福尔马林固定石蜡包埋

HMW = 高分子量NGS = 新一代测序

SFP = 安全冰点（条件：–15 °C 到 –25 °C 之间） TE = Tris-EDTA 缓冲液

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