mecanismos intracelulares implicados en la regulaciÓn de la expresiÓn gÉnica de receptor de...
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MECANISMOS INTRACELULARES IMPLICADOS EN MECANISMOS INTRACELULARES IMPLICADOS EN LA REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA DE LA REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA DE RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) POR CALCIO RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) POR CALCIO
EXTRACELULAR EN GLÁNDULAS PARATIROIDES. EXTRACELULAR EN GLÁNDULAS PARATIROIDES. ESTUDIOS “ESTUDIOS “IN VITROIN VITRO”.”.
Cañadillas S, Almadén Y, Canalejo R, Rodríguez ME, Quintero A, Pérez J, Rodríguez M.
Unidad de Investigación, Unidad de Investigación, Servicio de Nefrología. Servicio de Nefrología.
CÓRDOBACÓRDOBA
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INTRODUCCIÓN
PLA2
ARNmVDR
PTH
PTH PTH
PTH
PTH
PTH
PTH PTH
PTH
PTH
NúcleoNúcleo
G
CaCa2+2+
ERK1/2MAPKAA
CaiCaRCaR
CÉLULA PARATIROIDEA
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HIPÓTESIS
PLA2
ARNmVDR
PTH
PTH PTH
PTH
PTH
PTH
PTH PTH
PTH
PTH
NúcleoNúcleo
GCai
AA
CaCa2+2+
ERK1/2MAPK
??
CaRCaR
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OBJETIVO
Evaluar si el efecto del AA sobre la secreción de PTH y sobre la expresión génica de VDR es dependiente de la
actividad de ERK1/2-MAPK.
G
CaRCaRPLA2
Cai
AA
ARNmVDRPTH
PTH PTH
PTHPTH
PTHPTH PTH
PTHPTH
NúcleoNúcleo
??ERK1/2MAPK
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G
CaRCaRPLA2
Cai
AA
ARNmVDRPTH
PTH PTH
PTHPTH
PTHPTH PTH
PTHPTH
NúcleoNúcleo
??ERK1/2MAPK
DISEÑO EXPERIMENTAL
CaCa2+2+
[Ca2+] = 0.6mM +AA (20μM)
AA exógeno
Inhibidor de ERK1/2
(PD98059)
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IRMA
RT-PCR GENESCAN
DISEÑO EXPERIMENTAL
PTH secretada
Expresión ARNmVDR
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[Ca] 0.6mM [Ca] 1.5mM [Ca] 0.6mM +AA +PD
[Ca] 0.6mM +AA
1. Participacion de la actividad ERK1/2-MAPK en la inhibicion de la secrecion de PTH por AA.
% PTH vs máxima (0.6mM)
Ca=0.6mM Ca=1.5mM Ca=0.6mM+AA + PD (50μM)
Ca=0.6mM+AA (20µM)
a p<0.01 vs 0.6mM
b p<0.01 vs 0.6mM+AA
c p<0.01 vs 1.5mM
1 hora
0
20
40
60
80
100
120
aa
b c
Sin ERK
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2. Participacion de la actividad ERK1/2-MAPK en la regulación de la expresión de ARNmVDR por AA.
Ca=0.6mM Ca=1.5mM Ca=0.6mM+AA + PD (10µM)
Ca=0.6mM+AA (20µM)
[Ca] 0.6mM [Ca] 1.5mM [Ca] 0.6mM +AA +PD
[Ca] 0.6mM +AA
%ARNmvdr / β-actina vs Ca=0.6mM
a p<0.01 vs 0.6mM
b p<0.01 vs 0.6mM+AA
c p<0.01 vs 1.5mM
6 horas
0
40
80
120
160
200
240
a
a
b c
Sin ERK
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PLA2
ARNmVDR
PTH
PTH PTH
PTH
PTH
PTH
PTH PTH
PTH
PTHNúcleoNúcleo
G
Cai
CaCa2+2+
PD
PD
PTH
PTHPTH
PTHPTH
PTH
PTHPTH
ERK1/2MAPK
AA
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3. Efecto del AA sobre la activación (fosforilación) de ERK1/2-MAPK
Ca=0.6mM Ca=1.5mM Ca=0.6mM+AA
CaRCaRCa2+
PLA2 - AA
ARNmvdr
PTH ERK1/2 MAPK
P
?
Inmunohistoquímica. Ac. Anti-Fosfo-ERK1/2
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Ca = 1.5mM Ca = 0.6mM
Ca = 0.6mM + AA
Células positivas ERK1/2-MAPK
activa
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En glándulas paratiroides de rata, el efecto del AA sobre: 1) Secreción de PTH 2) Síntesis de ARNmVDR
es dependiente de la actividad ERK1/2- MAPK.
CONCLUSIÓN
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MECANISMOS INTRACELULARES IMPLICADOS EN MECANISMOS INTRACELULARES IMPLICADOS EN LA REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA DE LA REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA DE RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) POR CALCIO RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) POR CALCIO
EXTRACELULAR EN GLÁNDULAS PARATIROIDES. EXTRACELULAR EN GLÁNDULAS PARATIROIDES. ESTUDIOS “ESTUDIOS “IN VITROIN VITRO”.”.
Cañadillas S, Almadén Y, Canalejo R, Rodríguez ME, Quintero A, Pérez J, Rodríguez M.
Unidad de Investigación, Unidad de Investigación, Servicio de Nefrología. Servicio de Nefrología.
CÓRDOBACÓRDOBA