meios de cultura e técnicas de semeio- microbiologia
DESCRIPTION
Os meios de cultura e as técnicas de semeio em microbiologia.TRANSCRIPT
![Page 1: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/1.jpg)
Meios de cultura
![Page 2: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/2.jpg)
Quanto ao estado físico os meios podem ser:
SÓLIDO – Ágar-ágar (1.5%).
Utilizado isolamento de colônias bacterianas (plaqueamento);
SEMI-SÓLIDO – Ágar-ágar (0.5/0.7%)
Utilizado para observação de motilidade;
LÍQUIDO – Caldo.
Utilizado para enriquecimento bacteriano;
A consistência dos meios é dada pela concentração de “AGAR-AGAR” constituído de polissacarídeo
complexo (gelose)
![Page 3: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/3.jpg)
ÁGAR SANGUE: Crescimento das bactérias piogênicas e observação dos três tipos de hemólise: alfa, beta e gama.
AGAR CHOCOLATE: Observa-se hemólise alfa e crescimento de Streptococcus e Haemophylus
ÁGAR CHOCOLATE THAYER MARTIN: Crescimento de Neisserias
ÁGAR CHOCOLATE TELURITO DE POTASSIO: Crescimento de Corynebacterium;
MEIOS SÓLIDOS
![Page 4: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/4.jpg)
MEIOS SÓLIDOS:
ÀGAR TEAGUE, McCONKEY, HECTOEN
ENTERIC e SS: São seletivos (crescem
Gram negativas) e indicadores (separam as
bactérias em LACTOSE POSITIVA E
LACTOSE NEGATIVA)
ÁGAR TCBS: Crescimento de Vibrio
ÁGAR DNAse: Classificação dos
Staphylococcus
Teague
McConkey
DNAse
![Page 5: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/5.jpg)
MEIOS SÓLIDOS cont.
Ágar-sangue
Ágar-chocolate
Ágar-Chocolate Thayer Martin
![Page 6: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/6.jpg)
BHI (Brain Heart Infusion): Enriquecimento de cultura de bactérias piogênicas em secreções ou em frascos para hemocultura
TIOGLICOLATO: Crescimento de bactérias anaeróbias
TETRATIONATO: Crescimento de bactérias do trato fecal (enriquecimento das bactérias lactose negativas)
ÁGUA PEPTONADA ALCALINA: Crescimento do bacilo da cólera
MEIOS LÍQUIDOS
CALDO DE TIOGLICOLATO
![Page 7: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/7.jpg)
MEIOS SEMI-SÓLIDOS
FLETCHER: utilizado em hemoculturas e
conservação de Leptospiras
URÉIA: Produção de urease
![Page 8: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/8.jpg)
MEIOS ENRIQUECIDOS
São acrescentadas substâncias para aumentar o poder nutritivo do meio
Exemplos:
BHI Ágar-sangue (sólido): 5 a 10% de sangue desfibrinado de ovelha, coelho ou humano.
Fletcher (semi-sólido): soro de coelho, hemoglobina.
Ágar-chocolate (sólido): sangue de ovelha aquecido: fastidiosos
Ágar Müller-Hinton: Infusão animal, casaminoácidos e amido: crescimento de
muitos organismos.
Ágar Thayer-Martin Fatores de crescimento:hemoglobina, vitaminas,
difosfopiridina e glutamina
![Page 9: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/9.jpg)
MEIO SÓLIDO ENRIQUECIDO
ÁGAR-SANGUE
ÁGAR-CHOCOLATE
HEMÓLISE: • ALFA (PARCIAL) • BETA (TOTAL) • GAMA (AUSÊNCIA)
![Page 10: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/10.jpg)
Padrões de hemólise
Hemólise beta Hemólise alfa
Hemólise gama
![Page 11: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/11.jpg)
MEIOS SELETIVOS
Têm o objetivo de favorecer ou selecionar um tipo bacteriano
Manitol Ágar sal: Tem 7.5% de NaCl (favorece o S. aureus);
MacConkey: Contém sais biliares e cristal de violeta 1% (inibe os Gram positivos)
Teague, EMB: Contém eosina 2% e azul de metileno 0,5% (Inibe os Gram positivos, selecionando os Gram negativos)
HE: sais de bile (inibição de Gram positivos e retardamento do crescimento de Gram negativos da microbiota normal)
![Page 12: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/12.jpg)
MEIOS INDICADORES
Indicam características bioquímicas/fisiológicas dos microrganismos
Ex.: se o microrganismo fermenta a lactose ou não – coloração das colônias
Teague: : modificação na cor e precipitação dos corantes como resultado da queda do pH.
MacConkey: Produção de ácido pelos fermentadores de lactose: mudança do corante neutro
absorvido pelas colônias para vermelho e precipitação de sais de bile.
Não fermentadores de lactose: colônias sem coloração ou transparentes
HE: Sais de ferro (tiosulfato de sódio e citrato de amônio férrico): detecção da
produção de gas sulfídrico (H2S): precipitado negro nas colônias.
![Page 13: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/13.jpg)
MEIOS DE CULTURAS SÓLIDOS
TEAGUE TEAGUE COM CRESCIMENTO
MEIO SELETIVO E INDICADOR
![Page 14: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/14.jpg)
MEIOS DE CULTURAS SÓLIDOS
McConkey
MEIO SELETIVO E INDICADOR
![Page 15: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/15.jpg)
MEIOS DE CULTURAS SÓLIDOS
HECTOEN ENTERIC - HE HE -COM CRESCIMENTO
MEIO SELETIVO E INDICADOR E H2S
![Page 16: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/16.jpg)
Composição de meios de cultura comumente
utilizados
Agar citrato de Simmons
Diferenciação de bacilos
entéricos Gram negativos.
Citrato=fonte de carbono
Crescimento = utilização sais de
amônio
Quebra dos sais de amônio:
alcalinização do meio = indicador
azul de bromotimol : de verde
para azul.
![Page 17: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/17.jpg)
Composição de meios de cultura comumente
utilizados
TSI (Triple Sugar Iron)
Fermentadores e não-fermentadores de glicose, lactose e sacarose, produção de gás e de H2S
Fermentadores: acidificação = amarelo
Sais de ferro e tiosulfato: H2S + tiosulfato: sultato ferroso: precipitado negro.
TSI
![Page 18: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/18.jpg)
Composição de meios de cultura
comumente utilizados
Agar Bile-Esculina Isolamento e identificação de
Streptococcus do grupo D, incluindo os Enterococcus.
Streptococcus do grupo D, incluindo Enterococcus: hidrólise da esculina.
Reação com o citrato férrico no meio para produzir sais de ferro insolúveis.
Deposição dos sais de ferro: enegrecimento do meio, indicando a hidrólise da esculina.
.
![Page 19: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/19.jpg)
Composição de meios de cultura
comumente utilizados
Agar Mueller-Hinton meio transparente
susceptibilidade de organismos a antibióticos.
Amido no meio:proteção dos organismos contra substâncias tóxicas e fonte de energia.
![Page 20: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/20.jpg)
Composição de meios de cultura
comumente utilizados
Agar Lisina Ferro
Três parâmetros: dascarboxilação da lisina, desaminação da lisina e produção de H2S.
Contém lisina (aminoácido), glicose (carboidrato), uma pequena quantidade de proteína, violeta de bromocresol (indicador de pH) e tiosulfato de sódio/ citrato de amônio férrico (fonte de enxofre e indicador de H2S).
Região inferior alcalina (violeta) e superior alcalina (violeta) indicam que o organismo descarboxila a lisina mas não pode desaminá-la.
Região inferior ácida (amarelo) e superior alcalina (violeta) indicam que o organismo fermentou a glicose mas não foi capaz de desaminar ou descarboxilar a lisina.
Região inferior ácida
(amarelo) e superior
vermelho-bordeaux
indicam que o
organismo desamina
a lisina mas não é
capaz de realizar a
descarboxilação.
enegrecimento na região inferior indica produção de H2S a partir do tiossulfato de sódio.
![Page 21: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/21.jpg)
Composição de meios de cultura
comumente utilizados
Agar Manitol-Sal
Alta concentração de sal (7,5%):
Staphylococcus aureus é capaz de fermentar manitol, a única fonte de carbono no meio
baixa no pH: indicador vermelho de fenol para amarelo.
S. aureus: colônias amarelas, rodeadas por uma área amarelada.
Outras espécies de Staphylococcus e Micrococcus :colônias rodeadas por uma área avermelhada ou rosada
![Page 22: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/22.jpg)
TÉCNICAS DE SEMEIO
Para o isolamento, cultivo como também a identificação, são
necessárias técnicas adequadas de inoculação em meio de
cultura, que permitam o crescimento rápido e sem contaminação
![Page 23: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/23.jpg)
TECNICAS DE SEMEIO
Cuidados:
Técnicas assépticas;
Ambiente estéril – próximo à chama (bico de Bunsen);
Alças devem ser flambadas antes e depois do uso;
Tubos, quando abertos, devem ser flambados antes e
depois do uso.
![Page 24: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/24.jpg)
SEMEIO EM MEIO SÓLIDO
POR ESGOTAMENTO
Técnica necessária para o
isolamento e obtenção de culturas puras;
Com a alça de platina fazer estrias na superfície do meio de cultura, até o esgotamento de todo material presente na alça
Alça de platina
![Page 25: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/25.jpg)
SEMEIO POR ESGOTAMENTO
![Page 26: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/26.jpg)
SEMEIO EM MEIO SÓLIDO COM
ALÇA DE DRIGALSKY
Quantificação
Semeio uniforme;
Uso de suspensão bacteriana;
Inóculo: 50-100ųl da suspensão;
Semeio cobrindo toda a superfície do meio
![Page 27: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/27.jpg)
Semeio – Alça Drigalsky
![Page 28: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/28.jpg)
SEMEIO EM MEIO SÓLIDO COM “SWAB”
Técnica de antibiograma;
Suspensão bacteriana padronizada: 0,5 na Escala de McFarland
Umedecimento do “swab” na suspensão;
Retirada do excesso
Semeio cobrindo toda a superfície do meio.
![Page 29: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/29.jpg)
SEMEIO EM MEIO LÍQUIDO
Tocar com a alça de platina na amostra;
Inocular o meio líquido;
Incubar;
Observar a turvação do meio.
![Page 30: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/30.jpg)
SEMEIO EM PICADA
Utilizado nas provas bioquímicas
(TSI, citrato, lisina);
Meios sólidos em tubos inclinados
ou “slants”
Semeio com a agulha de platina em
profundidade, e no caso do TSI na
superfície do meio
![Page 31: Meios de cultura e Técnicas de semeio- MICROBIOLOGIA](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050907/559791211a28ab3d798b457c/html5/thumbnails/31.jpg)
Semeio em picada
TSI