memoria fio año 2011

Memoria de Investigación y Docencia

Año 2011

Memoria de Investigación y Docencia 2011

Fundación de Investigación Oftalmológica

Avda. Doctores Fernández-Vega, 34 / 33012 / Oviedo

Telf.: 34 985 240 141 / e-mail: [email protected]/ http://fio.fernandez-vega.com

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ÍNDICE

1.- Investigación Traslacional………………………………..3

1.1. Unidad de Superficie Ocular……………………….3

1.2.- Unidad de Neurobiología de la Retina……….….16 1.3.- Unidad de Genética del Glaucoma……………....18

2.- Unidad de Investigación Clínica………………………...23 3.- Actividad Docente………………………...………………..26 3.1.- Estudios de Post-Grado…………………………….26 3.2.- Estudios de Pre-Grado………………………………26 3.3.- Seminarios impartidos en 2011……...…………….27 4.- Mecenazgo y participación en proyectos con

financiación competitiva………………………………..31

5.- Resultados de la Investigación………………………….34 5.1.- Publicaciones Científicas………………………….34

5.2.- Comunicaciones Congreso ARVO 2011…....…..36 The Association for Research in Vision and Ophthalmology

6.- Recursos de la Fundación…………………………...……43 6.1- Recursos Humanos…………………………………..43 6.2.- Recursos Materiales………………………………….43





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1.- Investigación Traslacional.

1.1.- Unidad de Superficie Ocular.

Investigadores Principales:

Prof. Dr. Jesús Merayo (Universidad de Oviedo), Director de Investigación de la Fundación

Prof. Dr. Carlos Belmonte (U. Miguel Hernández, Alicante)

Dr. Alvaro Meana (Centro Comunitario de T y Trasplante de Tejidos Asturias)

Investigadores Colaboradores : Carlos Alonso, Ignacio Alcalde, Ana Fernández, Omar González y Ana C. Riestra.

Técnicos de Laboratorio: Manuel Chacón, Enol Artime Resumen: Esta unidad está dedicada a estudiar los mecanismos básicos de la inervación y cicatrización de la superficie ocular con el fin último de abordar enfermedades que no tienen tratamiento curativo en el momento actual como son el dolor neuropático, las alteraciones del trofismo ocular, y enfermedades que afectan al envejecimiento y calidad de vida de la población como son el ojo seco (30% de la población), las alergias oculares o las enfermedades inflamatorias del segmento anterior del ojo. Concretamente se estudian las enfermedades desde la identificación de receptores y su relevancia en la patología oftálmica (relación del TRPM8 y el ojo seco) como la mejora de la cicatrización y calidad de visión tras la herida de la cirugía refractiva corneal (aplicación del plasma rico en factores de crecimiento, PRGF). Durante el año 2011 se ha ampliado este grupo con la incorporación del Dr. Alvaro Meana que a partir de su experiencia en el desarrollo de piel artificial se dedica a la medicina regenerativa corneal con un ambicioso proyecto de desarrollo de corneas artificiales y cultivos de endotelio para iniciar la aplicación de terapias avanzadas en el tratamiento de la ceguera corneal. A continuación se resumen los diferentes proyectos de esta línea de investigación. Proyecto 1.- Contribución de las fibras nerviosas c orneales de frío a la génesis de las sensaciones de sequedad oc ular. La sensación de sequedad ocular se debe a la alteración de la actividad de las terminaciones sensoriales de frío de la superficie ocular. Estas pueden activarse en condiciones normales por leves variaciones de temperatura debidas a la evaporación de la película lacrimal, pero pueden también disparar anómalamente tras su lesión en patologías de la superficie ocular o consecutivas a la sección de las fibras nerviosas durante la cirugía del polo anterior del ojo. La aparición de sensación de ojo seco en personas de edad





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avanzada parece también estar relacionada con la alteración en el número y la morfología de los terminales de frío corneales. Estudios experimentales

1. Caracterización morfológica y cuantificación de las fibras corneales de frío en el modelo de ratón transgénico GFP-TRPM8.

2. Modelo de ‘ratón con ojo seco’ asociado a la edad (estudio de las fibras de frío en ratones envejecidos en relación con la secreción lacrimal basal).

3. Modelo de cirugía fotorrefractiva con excimer laser en ratón transgénico

GFP-TRPM8 para determinar la implicación de las fibras de frío corneales en la aparición del síndrome de ojo seco tras ectasia corneal.

4. Cambios morfológicos y funcionales en neuronas de frío del ganglio

trigémino en el modelo experimental de ojo seco.

5. Caracterización morfológica y cuantificación de las fibras corneales de frío en el modelo de ratón knock-out para TRPM8.

6. Estudio de las alteraciones en la secreción basal de lágrima en ratones

carentes de canal TRPM8 y su implicación en la regulación de la humectación ocular.

7. Modelo de cirugía fotorrefractiva con excimer laser en ratón KO TRPM8

para determinar la implicación de las fibras de frío en la correcta reinervación de la superficie corneal.

Estos trabajos han sido llevados a cabo por Ignacio Alcalde y Manuel Chacón. Los estudios derivados de esta línea de investigación forman parte de un proyecto subvencionado por el Ministerio de Ciencia e Innovación (MICINN) en su convocatoria de 2011, coordinado por la Dra. Juana Gallar y el Dr. Carlos Belmonte. Los datos obtenidos apuntan a una regulación del mantenimiento de la película lacrimal mediadada por las neuronas sensoriales de frío. Se está estudiando, mediante trazadores neuronales retrógrados, la conexión existente entre los terminales sensoriales de la superficie ocular y las glándulas responsables de la hidratación de la córnea. Asimismo, pretendemos estudiar la morfología y los patrones de expresión diferencial de las neuronas sensoriales de frío en el ganglio trigémino como respuesta a la denervación de la superficie corneal. Se han iniciado los experimentos sobre un modelo animal de cirugía refractiva utilizando ratones transgénicos GFP-TRPM8 y knock-out para TRPM8 (KO TRPM8) para evaluar la contribución de las fibras nerviosas





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corneales en el proceso de cicatrización corneal y la aparición de dolor neuropático postquirúrgico. Algunos resultados parciales ya han sido presentados en Congresos internacionales:

Age-related Changes in Density and Morphology of Co rneal Cold Nerve Fibers. Jesús Merayo-Lloves, Ignacio Alcalde, Juana Gallar, Cruz Morenilla-Palao, Susana del Olmo, Carlos Belmonte. 2011 Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) Annual Meeting. Fort Lauderdale, FL (EEUU), mayo de 2011.

Figura 1

Figura 1. Plexo subbasal en una córnea de ratón de 90 días mostrando fibras de frío TRPM8-EYFP (en verde) con una morfología arrosariada típica. Foto plexo p.90

Figura 2

Figura 2. Comparado con la fotografía anterior, la densidad de fibras de frío TRPM8-EYFP (en verde) en el plexo subbasal a los 180 días se ha reducido significativamente. Foto plexo p. 180.





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Proyecto 2. Modelo de cicatrización corneal en rató n. Aunque la evaluación clínica de la cicatrización corneal está bien documentada en humanos y en algunos modelos animales, los procesos histopatológicos y moleculares siguen siendo bastante desconocidos. Los eventos registrados en sistemas in vitro no siempre se corresponden con lo observado in vivo. La disponibilidad de numerosos modelos animales adecuados para el estudio de la córnea basados en ratones transgénicos hizo necesario el establecimiento de un modelo experimental de cicatrización corneal adaptado al ratón. Se eligió la cirugía fotorrefractiva con láser excimer (PRK) por la uniformidad de la lesión corneal producida. De esta manera, disponemos de una herramienta útil para la evaluación temporal de los eventos celulares sucedidos durante la cicatrización corneal y que sirve como patrón para la evaluación de estrategias terapéuticas en la superficie ocular. Procedimientos experimentales

1- Producción de lesiones corneales con afectación estromal mediante cirugía PRK.

Ablación de 45 µm de profundidad y 2 mm de diámetro.

2- Caracterización morfológica de los estadios representativos de la cicatrización corneal atendiendo a los marcadores clásicos (Martínez-García, et al., 2006).

Marcadores para α-Actina, TGFß, E-Cadherina, TuJ1, marcadores de proliferación (BrdU, PCNA) y muerte celular (TUNEL).

3- Participación de metaloproteasas en los procesos de cicatrización.

4- Análisis de la reinervación corneal tras la lesión. Estudio de las interacciones de los elementos neurales con las células estromales y epiteliales. Efecto de la destrucción de fibras nerviosas en el patrón de expresión de las neuronas sensoriales del ganglio trigémino (Gasser).

Los primeros resultados de este proyecto fueron presentados en los Congresos Internacionales de ARVO 2009 y 2010:

Influence of ErbB 2 Receptor on the Innervation of Corneal Stroma During a Wound Healing Process. I. Alcalde, S. del Olmo-Aguado, P. Gallego, P. Pérez-Merino, R. Cantalapiedra, L. Ibares-Frías, J.Merayo-Lloves, T. Blanco. 2009 Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) Annual Meeting. Fort Lauderdale, FL (EEUU), mayo de 2009.





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Changes in Phenotype of Neural-like Corneal Stromal Cells During a Wound Healing Process. I. Alcalde, G. Ferrara, S. del Olmo, M. Chacón, J. Merayo-Lloves. 2010 Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) Annual Meeting. Fort Lauderdale, FL (EEUU), mayo de 2010.

Este modelo experimental sirve como herramienta para testar la efectividad de diferentes tratamientos para la reparación de la superficie ocular. De esta manera, el grupo de Superficie Ocular emplea este modelo en la evaluación de la influencia de diferentes derivados hemáticos (por ejemplo, el PRGF o el suero autólogo) sobre la cicatrización de lesiones corneales.

Proyecto 3. Evaluación de la actividad reparadora d el PRGF (Plasma Rich in Growth Factors) in vivo . Tradicionalmente, se han empleando distintos derivados hemáticos para el tratamiento de algunas patologías de la superficie ocular como el ojo seco o las úlceras herpéticas. Recientemente, en nuestra clínica se ha iniciado la implantación de uno de estos derivados hemáticos como terapia regenerativa de la superficie ocular. El éxito del PRGF en otros ámbitos terapéuticos y la inocuidad de otros derivados hemáticos en la superficie ocular invita a explorar nuevas áreas de aplicación y terapias reparativas. Para ello, evaluaremos la capacidad del PRGF para mejorar el proceso de cicatrización corneal en un modelo de lesión corneal por cirugía PRK en ratón. Estudios experimentales

1. Producción de una ablación con láser excimer de 45 µm de profundidad y 2 mm de diámetro en la córnea de ratones C57BL/6.

2. Tratamiento con distintas presentaciones de PRGF:

Suero fisiológico (grupo control lesionado)

Colirio a base de PRGF utilizando solamente la fracción F3

Colirio a base de PRGF utilizando toda la columna de plasma

Colirio a base de PRGF utilizando toda la columna de plasma inactivado por calor a 56° C durante 30 min.

3. Seguimiento clínico del cierre epitelial.

4. Evaluación histopatológica del proceso de reparación a distintos tiempos de supervivencia, según el modelo establecido para lesiones corneales en ratón.

Estos experimentos están contemplados dentro del marco de colaboración con la empresa BTI (Biotechnology Institute) de Vitoria dirigida por el Dr. Eduardo Anitúa.





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Figura 3

Figura 3. Aspecto de las córneas lesionadas después de 7 días de reparación. La imagen A corresponde a un animal control (sin tratamiento). El epitelio presenta un borde inferior irregular y un número de capas de 5 ó 6 alturas. En la parte superior del estroma se observan numerosos miofibroblastos α-SMA+ (en rojo). La imagen B corresponde a una córnea tratada con PRGF-FU. Se observan algunos miofibroblastos tanto en la región subepitelial como en el estroma profundo. La imagen C corresponde a un animal tratado con PRGF inactivado, en la que no se aprecian miofibroblastos (Barras de escala: 40 µm). Proyecto 4. Evaluación de la actividad reparadora d e las células madre mesenquimales procedentes de lipoaspi rados humanos. Se ha establecido una colaboración con el Dr. Marco Zeppieri, investigador del Hospital Universitario S.M. Misericordia de Udine (Italia). Otra aplicación para nuestro modelo de lesión corneal por cirugía refractiva en ratón es el uso de células madre mesenquimales procedentes de lipoaspirados para acelerar la reparación corneal. Esta descrito que estas células se comportan, en el ambiente corneal, como queratocitos. La evaluación de la viabilidad de las células trasplantadas y su impliación en la reparación tisular se evalúa con técnicas inmunohistoquímicas. De estos estudios ya se ha enviado a publicar un primer árticulo a la revista EYE.

Proyecto 5. Queratocono. Una de las patologías incapacitantes que frecuentemente se presenta en la consulta de superficie ocular es el queratocono. Sus causas son heterogéneas y de su origen y evolución se conoce bastante poco. El debilitamiento de la matriz estromal de la córnea parece estar relacionada con la alteración de la acción de determinadas metaloproteasas. En este sentido se ha iniciado un estudio sobre botones corneales humanos con queratocono procedentes de donaciones del IOFV y de muestras seleccionadas del servicio de Anatomía Patológica del Hospital Universitario Central de Asturias. Los hallazgos





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histopatológicos se podrán relacionar con las medidas biofísicas y de estesiometría recogidas de pacientes del IOFV diagnosticados de queratocono.

Estudios experimentales 1. Caracterización morfológica de la patología de la córnea con

queratocono.

2. Estudio inmunohistoquímico de marcadores relacionados con alteraciones de la matriz extracelular: MMP 2, MMP9, MMP24, laminina, E-Cadherina, tenascina.

3. Estudio imunohistoquímico de las alteraciones de la inervación corneal en el queratocono.

En este momento ya se tienen algunos resultados preliminares que fueron presentados en el Congreso Internacional de ARVO 2011.

En el proyecto participan Aurora Astudillo, Jesús Merayo, Guilherme Hermeto Ferrara, Jorge Feito, Manuel Chacón, Enol Artime e Ignacio Alcalde.

Analysis of Keratoconic Corneas by Light Microcopy and Immunochemistry. Jorge Feito, Aurora Astudillo, Guilherme Ferrara, Manuel Chacón, Ignacio Alcalde, Jesus Merayo-Lloves. 2011 Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) Annual Meeting. Fort Lauderdale, FL (EEUU), mayo de 2011.

Proyecto 6. Neuropéptidos y regeneración corneal. Se ha analizado la presencia y expresión en epitelio corneal, en los nervios corneales y en las neuronas trigeminales de los péptidos gastrina (GAST) y colecistoquinina (CCK) y de sus receptores, ampliamente identificados en otros sistemas, pero cuya producción en la córnea no se había descrito hasta el momento. Se ha podido detectar la presencia de los péptidos y sus receptores (los resultados se presentaron en ARVO en 2011) y se explora su posible papel funcional en los procesos de reparación de los tejidos de la córnea. Se espera publicar al menos un trabajo sobre este tema en una revista de investigación oftalmológica a lo largo del presente año. Estos resultados han sido, además, el objeto del proyecto de Master en Ciencias de Ana Fernández González, que obtuvo con el mismo el primer título de Master logrado con un trabajo realizado enteramente en la Fundación.





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Figura 4

Figura 4. Análisis inmunohistoquímico de CCK en la línea celular de epitelio corneal humano HCEsv

Proyecto 7. Acido Hialurónico y regeneración cornea l. Este proyecto se centra en el estudio de la influencia del peso molecular de polímeros glicosílicos naturales y en concreto del ácido hialurónico (HA), en la proliferación y la migración de las células epiteliales corneales. Su objetivo es establecer si existe una influencia directa del HA sobre los procesos de proliferación y migración epitelial corneal, los mecanismos por los que tiene lugar tal efecto y la posibilidad de su utilización para la aceleración de la cicatrización de las lesiones del epitelio corneal, bien postquirúrgicas o las que se producen en diferentes patologías (ojo seco, úlceras corneales de etiología diversa). Proyecto 8. Neuropéptidos y regeneración corneal. Este proyecto está dirigido a valorar el efecto del PRGF y de otras sustancias con potencial actividad analgésica, sobre la actividad eléctrica de las fibras sensoriales de la cornea. Para este fin, se envió a mediados del año a Omar González González al laboratorio del Dr. Belmonte en Alicante, para que aprendiera las técnicas de registro de terminaciones nerviosas corneales aisladas en la cornea de ratón in vitro. El entrenamiento se ha realizado con éxito. Omar está caracterizando los nociceptores polimodales en esta preparación y va a estudiar el efecto del PRGF y las ivabradina sobre los termorreceptores corneales de frío. Por último, se están comenzado los trabajos de implementación metodológica para estudiar el origen de las alteraciones en la regeneración corneal y que conducen a opacificaciones y cicatrices corneales empleando genética y biología molecular.





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Proyecto 9. Ingeniería Tisular de la Córnea . Epitelio corneal .: Se ha desarrollado un sistema de cultivo eficaz del epitelio corneal. Hay un stock de células cultivadas que se pueden utilizar para modelos de Ingeniería Tisular y para experimentos de otros grupos de trabajo de la FIO.

Estroma corneal .: El sistema de cultivo de células estromales estaba ya desarrollado en la FIO y a partir de estos stock celulares se han iniciado diversos modelos de cultivos en 3 dimensiones.

Endotelio.: El cultivo de endotelio es de momento nuestra asignatura pendiente. Se han expandido algunas células endoteliales, pero con un crecimiento muy lento y con tendencia a no pasar del segundo subcultivo. Estamos intentando optimizar el procesamiento del endotelio para obtener un buen número celular que haga efectivos los cultivos.

Cultivo de otras estructuras del globo ocular : Se han iniciado cultivos del iris, canal de Shlem y procesos ciliares. Se han obtenido células de distinta morfología que en el caso del canal nos parecen epiteliales y en el caso del iris nos parecen musculares y melanocitos. Aunque no se ha profundizado en estos cultivos, lo que se ha comprobado es que es posible obtener células de estas estructuras que podrían ser candidatos a posibles nichos para pensar en unas células ocular pluripotente capaz de originar todas las estructuras de la parte anterior del globo ocular.

Sistemas tridimensionales : El modelo que mejor nos ha resultado ha sido el “scaffold” desarrollado por el equipo de Granada, basado en fibrina y agarosa. Actualmente este modelo se usa de rutina y estamos en el desarrollo de modelos de diferenciación con posibilidades de aplicación en clínica.

Al mismo tiempo y en colaboración del grupo de terapia celular del Hospital Universitario Central de Asturias se está trabajando en la producción de films de queratina. Se han realizado pruebas de extracción de queratina humana y de oveja, purificación y producción de finas películas de estas proteínas para futuras estrategias de IT de la cornea en general y del endotelio en particular. También se ha entrado en contactos con otros grupos que trabajan en scaffolds o andamiajes de fibroína (seda) que puede ser una alternativa a la queratina.





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Figura 5

Figura 5. Queratinocitos 5x. Aspecto de células estromales corneales sanas

Figura 6

Figura 6. 12-63 limbo 20x-2. Aspecto de células epiteliales corneales sanas. Figura 7

Figura 7. 7 días CK+SMA 40x. Aspecto del epitelio en un modelo de córnea artificial mostrando una clara diferenciación entre la capa basal (de forma poligonal teñida de rojo intenso) y la capa superficial (de aspecto fusiforme teñida de rojo suave). En azul se muestran los núcleos.





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Como esta línea acaba de comenzar su actividad se detalla la planificación para el año 2012. Objetivos Prioritarios.

Células.

Para el 2012 como objetivo prioritario a desarrollar creemos que es el desarrollo de un sistema eficaz para regeneración del endotelio corneal.

Esto será bien por puesta a punto de un sistema de cultivo de endotelio o bien por otros métodos (ver más adelante).

Se partirá de anillos sobrantes tras la cirugía de trasplante o de endotelios completos no empleados tras queratoplastias anteriores. Se utilizarán métodos enzimáticos diversos y/o explantes. También se variarán diversos medios de cultivo hasta encontrar un sistema eficaz, tanto de procesamineto de las células como de cultivo.

Como alternativa al cultivo de células endoteliales se propone explorar el empleo de otras células similares a las endoteliales y de cultivo más sencillo. Las células candidatas podrían ser las células del epitelio peritoneal. Scaffolds

Como scaffold para el trasplante de prototipos de endotelio corneal se proponen films de queratina y/o fibroína.

En los últimos meses, en la Unidad de Terapia celular del Hospital Universitario Central de Asturias, se están desarrollando films de queratina obtenida del procesamiento del pelo humano o de lana de oveja. Esta sustancia permite la producción de películas finas y transparentes a las que algunas células se adhieren con facilidad. Durante este año se deberían valorar el empleo de este tipo de scaffolds para técnicas de It del endotelio.

También tenemos contactos con el Dr. Jose Luis Cenis del Departamento de Biotecnología del Instituto Murciano de Investigación y desarrollo agrario y alimentario, que está proporcionando scaffolds de fibroína, bien en forma tridimensional, bien en forma de películas trasparentes. Este sistema también debería ser explorado.

Otra posibilidad sería utilizar las córneas empleadas tras cirugía de DMEK para ensayos de endotelización, bien con células endoteliales propiamente dichas o bien con células de mesotelio. Esta posibilidad debería explorarse si los diversos films que se proponen para el cultivo y trasplante de células endoteliales o endoteliales-like no acaban de funcionar.

Objetivos secundarios.

Desarrollo de superficies oculares mediante técnica s de IT destinadas al estudio de toxicidad corneal “ex vivo”.





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Se ha desarrollado un modelo de estroma y epitelio corneal basado en fibrina y agarosa. Este modelo permite una buena diferenciación del epitelio. ¿Podría emplearse este modelo para estudios “in vitro” de toxicidad y regeneración de la cornea? Este modelo sería un modelo autolimitado a 2 estirpes celulares y la lesión y el proceso reparador (si ocurre) sería más fácil de analizar que en los modelos in vivo.

Desarrollo de superficies oculares inervadas . Se puede asociar a este modelo de estroma/epitelio células nerviosas de ganglio de Gasser de ratón, de conejo. Se han intentado realizar cultivos de epitelio de ratón, pero los resultados han sido malos, por lo que emplearíamos celulas humanas de corneas cultivadas con anterioridad más células nerviosas de un modelo animal. Hay que desarrollar el modelo y comprobar si se produce una inervación de los prototipos.

Otros objetivos.

Mediante el banco de tejidos disponemos de unos 140 globos aculares al año. Alguno de ellos podría ser empleado para desarrollar colecciones celulares de las diferentes partes del globo ocular.

También en este centro se trasplantan muchos pacientes con distrofia de Fuchs, por lo que disponemos de endotelios sobrantes de esta patología. Si ponemos a punto una técnica de cultivo de células endoteliales, sería muy interesante el disponer de la colección de endotelios cultivados a partir de pacientes. Estas células congeladas podrían ser la base de futuros proyectos. Proyecto 10. Investigación en Farmacológica Ocular. El Servicio de Farmacia Hospitalaria, incluido dentro de la unidad de Superficie Ocular está participando junto con la empresa DropSens en un estudio sobre la determinación de cloruros como posible medida indirecta de la osmolaridad de la lágrima. La medida de la osmolaridad se ha realizado tradicionalmente por la modificación del punto crioscópico (Osmostat®) o de forma indirecta a través de la impedancia (Tearlab®). El proyecto trata de realizar la medida de la osmolaridad a través de los niveles de cloro por medio de sensores electroquímicos miniaturizados que eventualmente se podrán aplicar en la lágrima, lo que podría ser un nuevo marcador útil para el diagnóstico de la enfermedad denominada de ojo seco.

Se plantea además un estudio independiente de análisis de las diferentes lágrimas artificiales comerciales en función de la osmolaridad con distintos sistema de medida ya que la osmolaridad en las lágrimas artificiales es un parámetro que puede diferenciar su uso en el tratamiento del síndrome de ojo seco.





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Hasta el momento se ha realizado revisión sistemática de las distintas lágrimas artificiales disponibles en el mercado y se está realizando la clasificación y fenotipado de las distintas clases de lágrimas de acuerdo con la osmolaridad.





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1.2.- Unidad de Neurobiología de la Retina.

Investigador Principal: Prof. Dr. Neville Osborne (U. de Oxford)

Investigadores Colaboradores: Susana del Olmo y Alberto García.

Resumen: Esta unidad está enfocada al estudio del daño en la retina por la luz y otros agentes con objeto de conocer los mecanismos de enfermedades como la degeneración macular y el glaucoma. El fin último es obtener medidas terapéuticas personalizadas para prevenir y tratar las primeras causas de ceguera en nuestro medio.

Aunque el ojo está expuesto al flujo diario de la radiación solar, la cantidad de radiación no ionizante que actualmente incide en la retina está entre 390-760 nm del conocido como “componente visible” del espectro electromagnético. Estudios experimentales han mostrado que la luz excesiva (390-760 nm) tiene un efecto negativo en la supervivencia de los fotorreceptores y en células del epitelio pigmentario retiniano (EPR), y se ha sugerido que una consecuencia de la luz excesiva aumenta la progresión y severidad de la degeneración macular asociada a la edad (DMAE) y, tal vez, algunas formas de retinitis pigmentosa.

El daño producido por luz en fotorreceptores/ERP está acompañado por un edema local en el espacio subretinal y la retina externa y esto, comprensiblemente, lleva a cambios secundarios asociados con otros tipos celulares retinianos.

Nuestros recientes estudios se han basado en la propuesta de que de todos los tipos neuronales en la retina interna, las células ganglionares son las que parecen ser más afectadas directamente por la luz y esto puede tener consecuencias negativas en ciertas situaciones.

Trabajamos con la hipótesis de que la luz es absorbida por fotosensibilizadores mitocondriales de células ganglionares en el ojo, pero ésta es tolerada cuando las células ganglionares se encuentran en un estado homeostático. Sin embargo, cuando el estado homeostático está comprometido como puede ocurrir en glaucoma, retinopatía diabética o por un defecto genético (Neuropatía Óptica Hereditaria de Leber), puede no darse el caso.

Sabemos que la respiración celular tiene lugar en la mitocondria y que algunos de sus componentes son capaces de absorber luz a diferentes longitudes de onda. Diversos estudios han mostrado que la luz azul, uno de los componentes de la luz visible, es particularmente dañina en tejidos retinianos. La luz, donde se incluye el componente electromagnético correspondiente al azul, es usada de manera rutinaria en varios instrumentos oftalmológicos y por tanto puede contribuir al desarrollo de edema macular después de cirugía. La luz azul también juega parte en la retinitis solar y está fuertemente implicada en la patogénesis de la degeneración macular asociada a la edad.

Nuestra hipótesis de trabajo es que la luz es potencialmente negativa para las células ganglionares de la retina, en ciertas situaciones donde tiene potencial de interactuar y afectar a un número de fotosensibilizadores putativos,





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asociados con los complejos de la fosforilación oxidativa, responsable de la producción mayoritaria del ATP requerido para una función neuronal óptima.

Los estudios realizados en una línea celular, que expresa ciertos marcadores de células retinianas, han mostrado el efecto dañino de la luz por cambios en diversos parámetros que incluyen la generación de especies reactivas del oxígeno, una diferente influencia en varios componentes de la fosforilación oxidativa, ruptura del DNA, expresión de marcadores que no involucran la activación de caspasas, y es sabido que es bloqueada por varias sustancias que incluyen la necrostatina-1, un inhibidor de la necroptosis.

Los datos obtenidos sugieren que la luz que entra en el ojo tiene la capacidad de matar células por la interacción con componentes, hasta la fecha no identificados, en la mitocondria para causar su muerte por necroptosis.





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1.3.- Unidad de Genética de Ocular.

Investigador Principal: Prof. Dr. Miguel Coca Prados (U. de Yale)

Investigadores Colaboradores: Lydia Álvarez, Héctor González, Montserrat García.

Resumen: Esta unidad está enfocada a los estudios de genética ocular con objeto de descubrir biomarcadores diagnósticos y terapéuticos para el abordaje de las patologías oculares más relevantes. Durante estos primeros años está dedicada a los estudios genéticos de glaucoma, enfermedad que a pesar de constituir una de las primeras causas de gasto farmacéutico y consumo de recursos sanitarios sigue provocando ceguera en los países desarrollados. Si se consiguen nuevos marcadores de diagnostico precoz y fármacos personalizados basados en los perfiles genéticos se podrá avanzar en la solución de una necesidad médica no resuelta hasta el momento.

A continuación se resumen los diferentes proyectos de esta línea de investigación

Proyecto 1: Estudio de especiación metálica en metalotioneinas en tejidos oculares glaucomatosos por HPLC-ICP-MS*. Las metalotioneinas (MTs) constituyen un grupo de proteínas capaces de complejar átomos metálicos a través de estructuras en forma de cluster metal-tiolato. Se han implicado en procesos protectores de estrés oxidativo y hemos sugerido su posible implicación en patologías oculares como el glaucoma y la degeneración de la mácula asociada a la edad. Entre las características bioquímicas que caracterizan las MTs figura su bajo peso molecular (6000-7000 daltons), alto contenido en cisteínas con una distribución característica tripeptidica Cys-X-Cys, elevado contenido de metales (p.ej. Zn), termoestable, distribución citoplásmica y presencia de numerosas isoformas. Se han identificado 4 formas de MTs (MT1, MT2, MT3 y MT4), de las cuales MT1 y MT2 son ubicuas en todos los tejidos oculares, MT3 es específico de la retina y MT4 no se detecta en el ojo humano. Los genes que codifican las MTs conservan una gran homología a nivel de su secuencia nucleotídica. Contienen 3 exones y 2 intrones. Es de destacar la presencia en la región promotora de estos genes de sitios con secuencias nucleotidas que sirven de “elementos de respuesta a metales.” (MRE). Estas secuencias, que intervienen tanto en la expresión basal como en la inducción del gen, realizan su función mediante la unión con determinados factores de transcripción, de los cuales el más importante es el metal responsive transcription factor-1 (MTF-1). Existen evidencias de un control a nivel post-transcripcional en la síntesis de las MTs. De hecho, no todos los mRNAs son traducidos, si no que existe una regulación de la traducción dependiente del metal o los metales que actúan como inductores. Con objeto de estudiar en qué medida las MTs intervienen en patologías oculares como el glaucoma, hemos estudiado en primer lugar el perfil de expresión de MTs en tejidos oculares postmortem de donantes normales y de





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donantes con glaucoma. Para ello, se ha utilizado la plataforma microarray de Ilumina. El análisis bioestadístico ha revelado que existe una disminución significativa de la expresión de MTs en donantes con glaucoma. En segundo lugar, se ha utilizado un sistema celular in vitro, para estudiar el mecanismo de regulación de las MTs. Se ha encontrado que el zinc, como metal, es un activador muy potente en la sobre-expresión y síntesis de MTs en células en cultivo, y este efecto se potencia aún más en presencia de citoquinas pro-inflamatorias. En vista de que el zinc por sí solo tiene un efecto inhibidor de la expresión de citoquinas con propiedades pro-inflamatorias, los hallazgos encontrados se explican dentro de un mecanismo en el que existe una interrelación entre MTs y citoquinas. Estos hallazgos se han confirmado con técnicas cromatográficas analíticas por HPLC y de especiación de metales por ICP-MS. Estos hallazgos nos permitirán ahora explorar si las MTs pueden servir como biosensores de los procesos oxidativos por metales libres asociados a procesos patológicos como el glaucoma.

*Proyecto en Colaboración con el Prof. Dr. Alfredo San-Medel, Catedrático de Química-Analítica, Universidad de Oviedo. Proyecto 2: Variantes polimórficos en los genes WDR 36 y P53 y su posible susceptibilidad en GPAA**. Glaucoma es una neuropatía óptica genéticamente heterogénea, caracterizada por la muerte apoptotica de las células ganglionares de la retina, y es una de las causas más comunes de ceguera irreversible en el mundo. La enfermedad progresa lentamente, conduce a la atrofia del nervio óptico, pérdida del campo visual y, finalmente, a la ceguera.

Glaucoma primario de ángulo abierto (GPAA) es la forma más común entre los glaucomas. Se caracteriza por un patrón complejo hereditario, con una manifestación mayor a partir de los 40 años y un reducido flujo de drenaje del humor acuoso, lo que origina una elevación de la presión intraocular. Si bien se han encontrado hasta 14 loci asociados con GPAA, solamente se han identificado 3 genes (MYOC, OPTN y WRD36) que causan la enfermedad siguiendo un patrón de herencia mendeliana. Variaciones en sus secuencias nucleótidas se han encontrado en forma no mendeliana en GPAA entre el 5-10% de los casos. Por otro lado, alrededor de 15 genes adicionales, a los ya mencionados anteriormente se han reportado estar asociados con GPAA en diferentes estudios. Entre estos genes figuran el gen CYP1B1, en el que se han encontrado mutaciones hipomórficas y que cuando están en el estado heterozigótico constituye un factor de riesgo en GPAA en 7% de los pacientes. Mutaciones heterozigóticas en el gen NFT4 se han encontrado asociadas con GPAA en aproximadamente 1.7% de los pacientes de origen europeo. El gen WDR36 se ha identificado también como causante de glaucoma en la forma adulta en el 6% de las familias estudiadas. En cambio, en casos de GPAA no familiar de diferentes poblaciones, se han encontrado resultados que indican que variantes polimórficas del gen WDR36 pueden actuar como causantes y/o





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modificadores en GPAA.

WDR36 está implicado en el procesamiento del ARN 18S y en la homeostasis nucleolar. Ausencia de RNA mensajero del gen WDR36 en células en cultivo de la malla trabecular causa la muerte celular por apoptosis y una sobre-expresión de varios RNA mensajeros incluyendo el del gen p53. El gen P53 codifica un factor de transcripción que activa la expresión de genes implicados en el arresto del crecimiento celular o en apoptosis en respuesta a múltiples formas de estrés celular. Se induce en enfermedades neurodegenerativas y en lesiones tóxicas neuronales, promoviendo la muerte celular por apoptosis. El role de polimorfismos en el gen P53 en GPAA se ha investigado con resultados dispares. Por ejemplo, se ha encontrado que la pérdida de función de wdr36 en el pez-zebra activa la vía de señalización de estrés de p53, lo que sugiere que la herencia conjunta de genes con defectos asociados a esta ruta puede modificar el impacto de variantes WDR36 en GPAA.

En este proyecto se ha estudiado el efecto conjunto de variantes en los genes WDR36 y P53 en poblaciones españolas con GPAA. Se ha encontrado que variantes polimórficas en las regiones reguladoras en el gene WDR36 y la presencia de la variante polimórfica R72P en el gen P53 están también asociadas a GPAA. Se ha llegado a la conclusión de que existe una interacción entre los genes WDR36 y P53 y que las variantes polimórficas encontradas en estos genes confieren un riesgo moderado de susceptibilidad a desarrollar glaucoma entre la población Española.

** Proyecto en Colaboración con el Prof. Dr. Julio Escribano, Catedrático de Genética, Universidad de Castilla-La Mancha, Albacete Proyecto 3: Análisis bioinformático de los Transcriptomas de ojos de donantes con GPAA y DMAE. A partir de ojos colectados de donantes postmortem con GPAA, DMAE, y control (sin enfermedad ocular) se han generado el perfil individual de expresión génica (transcriptomas) de ambos ojos, es decir, del ojo derecho y del ojo izquierdo de cada donante. Para ello se han diseccionado y extraído de cada uno de los tejidos oculares (p.ej., córnea, malla trabecular, iris, lente, cuerpo ciliar, epitelio pigmentario de la retina, retina y sclera) el RNA total, y, siguiendo un protocolo riguroso de control de calidad, se han sometido a un análisis de microarray usando la plataforma “Whole-Genome Gene Expression: HumanHT-12 v4 Expression BeadChip (Illumina)”. Cada perfil consta de aproximadamente 47,000 sondas de ADN representativas de todo el genoma humano, de modo que ha sido posible obtener el perfil de expresión de cada tejido y los niveles relativos de cada sonda. Utilizando herramientas bioinformáticas y de señalización celular (network) hemos identificado clusters de genes que son específicos de tejido, genes que aparecen significativamente sobre-expresados y/o sub-expresados en cada una de las patologías oculares al compararlos con los mismos genes expresados en tejidos control, y el mecanismo de señalización. En este proyecto, confiamos en identificar genes candidatos asociados a una patología especifica (glaucoma/DMAE), y





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determinar su estudio posterior como biomarcadores genéticos, y/o su aplicación en terapia génica en “gene targeting”. Proyecto 4: Análisis del Proteoma de plasma de paci entes con GPAA, PEXG y con cataratas. En este proyecto se ha llevado a cabo el análisis mediante electroforesis bidimensional y marcaje DIGE del proteoma de muestras de suero de un total de 146 pacientes llegados al IOFV, de los cuales resultaron 53 pacientes con POAG, 42 PEGX y 51 individuos control con cataratas. Para una máxima resolución del análisis, se disminuyó el rango dinámico de las muestras utilizando un sistema de ecualización basado en la afinidad aleatoria a hexapéptidos degenerados. Se ha obtenido el mapa proteico del suero tratado con el kit Proteominer en el rango de pH 4-7 y que consta de 823 spots. Una vez construida la matriz de datos, se ha llevado a cabo un filtrado de la misma en función del p-value asociado a ANOVA con un punto crítico de 0.001 reduciéndose a 214 el número de spots significativos y tras realizar "feature subset" mediante ‘Information gain’, que es un método de filtrado supervisado que indica cuales son las variables con mayor poder de separación de los grupos, el número de variables totales se redujo a 44, siendo estos spots aquellos con mayor poder de separación y más significativos. El análisis “principal component analysis” (PCA) con los datos proteómicos filtrados muestra una buena separación entre los grupos. Se comprueba que el grupo control se encuentra totalmente separado del grupo POAG y se observa una buena separación tanto entre el grupo PEGX y CT como PEGX y POAG, con el centro de los clusters suficientemente distanciados. Estos resultados pueden observarse en la Figura 1. Figura 8





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Figura 8. Análisis de componentes principales (PCA) con proyección sobre los ejes de las variables (spots) más significativas. Cada uno de los puntos representa un individuo dentro del estudio y su color (rojo:PEGX, azúl:CT, verde:POAG). La dirección que toma cada vector desde su salida en el origen (0,0) indica la dirección que hace tomar a cada uno de los puntos dentro de la gráfica.

Mediante esta metodología se ha establecido un panel de spots cuyos perfiles de expresión se encuentran claramente variados en los tres grupos de estudio. En la actualidad, se está llevando a cabo la identificación de las proteínas presentes para poder visualizar un posible panel de biomarcadores que permitan diferenciar las patologías objeto de estudio.





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2.- Unidad de Investigación Clínica.

La Unidad de Investigación clínica se divide en los grupos de investigación de Superficie Ocular (Dr. José F. Alfonso, Dr. Jesús Merayo y el Dr. Luís Fernández-Vega) y la de Retina (Dr. Alvaro Fernández-Vega). En la actualidad tiene los proyectos de investigación que se detallan a continuación.

2.1. Segmento anterior: Superficie Ocular, Córnea, Cirugía Refractiva y Cristalino (Dr. José F. Alfonso, Dr. L uis Fernández-Vega y Dr. Jesús Merayo)

2.1.1. SEGMENTOS INTRACORNEALES: Estudio prospectivo en el que hasta la fecha están incluidos más de 100 pacientes. El objetivo es la definición de un nomograma para la corrección del astigmatismo en queratoconos. (Dr. Alfonso)

2.1.2. LENTES DIFRACTIVAS TORICAS: El objetivo es la estabilidad de las

ICL tóricas. Hasta la fecha, se han recogido y analizado datos sobre una muestra de 50 pacientes de un año de seguimiento. (Dr. Alfonso)

2.1.3. SEGMENTOS INTRACORNEALES CON ICL: Estudio prospectivo sobre córneas queratocónicas sometidas a una intervención con segmentos intraestromales y que han presentado un defecto refractivo susceptible de ser corregido con una lente fáquica. (Dr. Alfonso)

2.1.4. OPTIMIZACION DEL NOMOGRAMA DE LENTES FÁQUICAS: Con los

datos recabados durante los últimos siete años se realiza un ajuste al nomograma para el implante de estas lentes, con el objetivo de evitar una de las complicaciones más severas en la cirugía con este tipo de lentes intraoculares. (Dr. Alfonso)

2.1.5. ENSAYO CLINICO EN FASE III: Estudio piloto, aleatorizado, con sujetos

enmascarados, que compara la función visual después de un implante bilateral de lentes intraoculares para corregir la presbicia. Alcon M10-070. (Dr. Alfonso)

2.1.6. Estudio clínico piloto prospectivo de la LIO multifocal tórica AcrySoft IQ

ReSTOR. Alcon M09-052 (Dr. Alfonso) 2.1.7. Ensayo Clínco Fase III “SANSIKA-NOVAGALLI PHARMA Study number:

2011-000160-97”. Estudio de la eficacia de la ciclosporina A en el ojo seco. Título: A multicenter, randomized, double-masked, 2 parallel arm, vehicle controlled, 6 month phase III trial with a 6 month open label treatment safety follow-up, period to evaluate the efficacy and safety of cyclokat 1 mg/ml (ciclopsorin/cyclosporine) eye drops, emulsion administered once daily in adult patients with severe Dry Eye Disease (DED) NVG10E117 (N09F1001) (Dr. Merayo)





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2.1.8. QUERATOLASTIA ENDOTELIAL DE MEMBRANA DE DESCEMET (DMEK). Estudio clínico intramural prospectivo de trasplante avanzado selectivo de endotelio para el tratamiento de la distrofia de Fuchs´ y la queratopatía bullosa. En colaboración con el Centro Comunitario de Sangre y Tejidos de Asturias se aíslan láminas de endotelio de donantes de córnea para implantarlas en pacientes con descompensación corneal. Se estudia la aceleración de la rehabilitación visual y la reducción de posibles complicaciones del trasplante clásico. (Dr. Alfonso)

2.1.9 QUANTIFERON EN UVEÍTIS CON EDEMA MACULAR CRÓNICO. Estudio clínico intramural retrospectivo de serie de casos para estudiar la implicación de la TBC latente como causa de edema macular en uveítis crónicas. Se realizan pruebas inmunológicas de última generación para determinar la implicación de la TBC en el caso y de confirmarse se adapta el tratamiento y se evalúa la respuesta al mismo. (Dr. Merayo) 2.1.10 PRGF. Estudio clínico de serie de casos intramural retrospectivo para estudiar el efecto de la terapia avanzada con hemoderivados para el tratamiento del ojo seco severo refractario de etiología múltiple. Análisis de efectividad y tolerancia. (Dr. Merayo) 2.1.11 ESTESIOMETRÍA EN QUERATOCONO. Estudio clínico intramural prospectivo comparativo de tres cohortes para comparar la sensibilidad corneal tras el implante de anillos intraestromales mediante laser de femtosegundo frente al uso de lentes de contacto rígidas. (Dres. Merayo y Alfonso)

2.1.12 OSMOLARIDAD DE LA LÁGIMA EN QUERATOCONO. Estudio clínico intramural prospectivo comparativo de tres cohortes para comparar la osmolaridad de la lágrima tras diferentes tratamientos para el queratocono. (Dres. Merayo y Alfonso)

2.2. Grupo de Vítreo-Retina (Dr. Alvaro Fernández-V ega)

2.2.1. PROYECTO DE INVESTIGACIÓN: POSURDEX EN EMD (ALLERGAN). Estudio Multicéntrico, Fase 3, Enmascarado, Aleatorizado, Controlado con Simulador, con una Duración de 3 años para “Evaluar la Seguridad y Eficacia del Sistema Aplicador DEX PS DDS” (Sistema de Liberación del Fármaco Dexametasona en el Segmento posterior) de 700 ug. y 350 ug. en el Tratamiento de Pacientes con Edema Macular en Retinopatía Diabética. (Dr Alvaro Fernández-Vega)

2.2.2.PROYECTO DE INVESTIGACIÓN: VIEW2 Título: “Estudio en fase 3 aleatorizado, con doble enmascaramiento, comparado con sustancia activa para evaluar la eficacia, seguridad y tolerabilidad de dosis repetidas de VEGF Trap-Eye intravítreo en sujetos con degeneración macular asociada a la edad (DMAE) de tipo neovascular”





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2.2.3. PROYECTO DE INVESTIGACIÓN CLÍNICA VIVID. Promotor: BAYER Study number: BAY 86-5321/91745. V 2.0. Título: A randomized, double masked, active controlled, phase III study of the efficacy and safety of repeated doses of intravitreal VEGF Trap-Eye in subjects with diabetic macular edema.

2.2.4. PROYECTO DE INVESTIGACIÓN CLINICA. FOVEA Promotor: SANOFI-AVENTIS. Study number: FOV2304/CLIN/201/P Título: 6 month, Phase II, Double-masked, Multicenter, Randomized, Placebo-controlled Parallel Group Study to Assess to Safety and Efficacy of Topical Administration of two concentrations of FOV2304 (1% and 2%) Twice daily for the treatment of center involving clinically significant macular edema associated with diabetic retinopathy.





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3.- Actividad Docente.

Convenio Marco de colaboración entre la Universidad de Oviedo y la Fundación de Investigación Oftalmológica. El 10 de marzo de 2009, la Universidad de Oviedo (UNIOVI) y la FIO suscriben un convenio marco de colaboración siendo prioritarias en la actualidad, las áreas de investigación y docencia. La Universidad de Oviedo colabora con la Fundación de Investigación Oftalmológica facilitando el uso de sus bibliotecas y bioterio por parte de los investigadores de la FIO. Los investigadores de la UNIOVI colaboran en los proyectos que se están desarrollando en la FIO (CENIT, FICYTT, Biomecánica Corneal)

3.1.- Estudios de Post-Grado.

Títulos Propios de la Universidad de Oviedo.

-Master en Superficie Ocular, Cornea, Cristalino y Cirugía Aditiva.

-Master en Optometría Clínica

-Master en Enfermería Oftalmológica.

-Experto Universitario en Cirugía Aditiva de la Córnea.

-Programa de Formación Continuada en Ciencias de la Visión.

-Estudios de Doctorado.

3.2.- Estudios de Pregrado.

En la FIO y el IOFV se realizan prácticas de la asignatura de Oftalmología de la licenciatura en medicina. Además, biológos de las Universidades de León y de Oviedo realizan prácticas de emrpesa en los laboratorios de la Fundación.





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3.3.- Seminarios Impartidos en 2011. SEMINARIOS DE INVESTIGACIÓN FIO-IOFV -"Bases neuronales de las patologías retinianas: ¿Es suficiente la cirugía?". 26-Enero-2011. Ponente: Prof. Nicolás Cuenca. -"Medios de conservación corneal". 28-Enero-2011. Ponente: Dr. Javier Celis. -“Fármacos Poliméricos con actividad antiangiogénicac de interés en el entorno ocular”. 09-Febrero-2011. Ponente: Prof. Julio San Roman. -“Innovadores diseños LIOs multifocales obtenidos a partir de estructuras fractales y aperiódicas”. 23-Febrero-2011. Ponente: Prof. Walter Furlan. -“Bases genéticas y moleculares del glaucoma: papel de los genes MIOCILINA Y CITOCROMO P450 1B1”. 25-Febrero-2011. Ponente. Julio Escribano. -“Cross-Linking”. 07-Abril-2011. Prof. Ángel Ramón Gutiérrez. -“Cicatrización corneal posterior a cirugía refractiva”. 08-Abril-2011. Prof. Carmen Martínez García. -“Responsabilidad profesional del Oftalmólogo. Situación actual”. 13-Abril-2011. Prof. José Antonio Menéndez de Lucas. -“Imagen del segmento anterior: óptica, esctructura y biomecánica”. 26-Noviembre-2011. Ponente: Prof. Susana Marcos. SESIONES CLÍNICAS -“Galilei”. 31-Enero-2011. Ponente: Dr. Carlos Arce. -“Nuevos antiangiogénicos de Entrechem. Buscando aplicaciones en oftalmología”. 14-Marzo-2011. Ponente: Dr. Francisco Morís. -“Aplicaciones de Microfluídica en Oftalmología”. 14-Marzo-2011.Ponentes: Dr. Diego F. Pozo-Ayuso y Mario Castaño Álvarez. -“Mecánica y Electrónica aplicada a instrumentos ópticos y optométricos”. 04-Abril-2011. D. José Ramón Blanco González y D. Efrén Vigil Caballero. -“Expresión de gastrina y colecistoquinina en el epitelio corneal”. 05-Septiembre-2011. Dña. Ana Fernández González.





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-“Nuevos datos sobre un vieja conocida: Oftalmología de Graves-Basedow”. 03-Octubre-2011. Ponente: Dr. Santiago Vilar González. -Métrica del QTC (Análisis de los parámetros tanto topográficos como aberrométricos”. 21-Noviembre-2011- Ponente: D. Luís Miguel González. SESIONES BIBLIOGRÁFICOS -"TGF-B induces sustained up-regulation of SNAI1 and SNAI2 through Smad and nom-Smad pathways in a human corneal epithelial cell line". 11-Enero-2011. Ponente: Ana Fernández. -“Retinal Cell Responses to Elevated Intraocular Pressure: A Gene Array Comparison between the Whole Retina and Retinal Ganglion Cell Layer”. 15-Enero-2011. Ponente: Alberto García Manso. -“Comparison of Fourier Domain OCT, Spectral Domain OCT and Confocal Scarnning Laser Ophthalmoscope in the measurement of ISNT rule”. 15-Marzo-2011. Ponente: Javier Lozano Sanroma. -“Inflammation and EMT: an alliance towards organ fibrosis and cancer progersion”. 06-Septiembre-2011. Ponente: Dña. Ana Fernández González. -“Reconstrucción of a human cornea_by self-assembly approach of tissue engineering using the three native cell_Typbes”. 04-Octubre-2011. Ponente: Manuel Chacón. -“Artificial corneas: a regenerative medicine approach”. 11-Octubre-2011. Ponente: Dr. Dagoberto Almanzar Brito. -“Standardized “No-Touch” Technique for Descemet Membrane Endothelial Keratoplast. 25-Octubre-2011. Ponente: Dr. Miguel Naveiras Torres-Quiroga. -“Ranibizumab en OVCR”. 07-Noviembre-2011. Ponente: Dra. Eva Villota Deleu. -“Activity of the Neuronal Cold Sensor TRPM8 ls Regulated by Phospholipase C via the Phospholipid Phosphoinositol 4,5-Bisphosphate*”. 29-Noviembre-2011. Ponente: Ignacio Alcalde. SESIONES DE ACTUALIZACIÓN -“Degeneración macular asociada a la edad seca”. 20-Enero-2011. Ponente: Dra. Eva Villota. -“Degeneración macular asociada a la edad húmeda”. 27-Enero-2011. Ponente: Dra. Eva Villota.





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-“Actualización en infecciones I”. 10-Febrero-2011. Ponente: Dr. Mariano Yllera. -“Actualización en infecciones II”. 24-Febrero-2011. Ponente: Dr. Mariano Yllera

-“Lentes M. Plus”. 17-Marzo-2011. Ponente: Dr. José Ignacio Bláquez.

-“Glaucoma”. 24-Marzo-2011. Ponente: Dr. Pedro P. Rodríguez Calvo. SEMINARIOS REGIONALES DE OFTALMOLOGÍA -Seminario del 26 de Febrero.

Conferencia: • “Células madre y su potencial terapéutico en las enfermedades

retinianas neurodegenerativas”. Dra. Isabel Pinilla Comunicaciones:

• “Trombosis de vena central de la retina en hemangioma racimoso”. Dr. Álvaro Fernández-Vega, Dra. Eva Villota.

• “Queratocono, entre los segmentos y la queratoplastia”. Dr. José F. Alfonso, Dr. Carlos Lisa.

-Seminario del 9 de Abril.

Conferencia: • “Express. Implante para la cirugía de glaucoma”. Dra. Carmen

Rodríguez Bermejo. Comunicaciones:

• “Tratamiento del agujero macular”. Dra. Alba García López, Dr. Joaquín Castro Navarro, Dra. Carmen González Castaño.

• “Papel de los antiangiogénicos en la estrategia terapéutica de la VCPI”. Dr. Samuel Laria Blanco, Dra. Ana García Alonso, Dra. Marta Fonollá Gil.

-Seminario del 18 de Junio. Conferencia:

• Presentación y discusión de casos clínicos de Unidad de Uveítis. Dr. Miguel Cordero. Hospital de León.

Comunicación:

• Programa de cooperación con los diabéticos saharauis. Experiencia 15 años. Dr. Francisco Cadórniga, Dr. Joaquín Castro Navarro.





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-Seminario del 22 de Octubre. Conferencias:

• “Alteraciones en la superficie ocular producidas por la cirugía de párpados”. Dra. Consuelo Prada Sánchez.

• “Patología orbitaria y tiroidea en los últimos años. ¿En qué hemos cambiado? Dr. José Pérez Moreiras.

Comunicación:

• “Desprendimientos bullosos retinianos infrecuentes”. Dr. Andrés Sampedro, Dra. Cándida Viña.

-Seminario del 17 de Diciembre. Conferencias:

• “Alergia Ocular”. Dr. Galarreta.

Comunicaciones: • “Errores, complicaciones y algún milagro”. Dr. J.J. Barbón • “Coroiditis serpinginosa por tuberculosis”. Dres. N. Fernández, A.

Sampedro.





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4.- Mecenazgo y participación en proyectos con fin anciación competitiva.

La FIO cuenta con la financiación estable aportada por el Instituto Oftalmológico Fernández-Vega y la Fundación María Cristina Masaveu Peterson.

Una vez puesta en marcha la actividad investigadora, se ha contado con ayudas de las entidades Cajastur, Fundación BBVA, Fundación Rafael del Pino, Fundación Ramón Areces, Caja Rural, Caixanova, entre otros.





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A través del IOFV participa en proyectos con financiación del Programa Jovellanos (Gobierno del Principado de Asturias), Fundación para el Fomento en Asturias de la Investigación Científica Aplicada y la Tecnología (FICYT) y CTDI-Ministerio de Ciencia e Innovación (Proyecto CENIT)





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5.- Resultados de la Investigación. 5.1.- Publicaciones Científicas.

5.1.1.- Investigación Traslacional.

Investigative Ophthalmology Visual Science 2011 Aug 1; 52(9):6066-73. “Plasma Rich in growth factors (PRGF-Endoret) stimul ates proliferation and migration of primary keratocytes and conjunctiv al fibroblast while inhinits and revert TGF [beta] 1-induced myodiferen tiation” . Anitua E, Sanchez M, Merayo-Lloves J, de la Fuente M, Muruzabal F, Orive G. Prog Retin Eye Res. 2011 30(5):324-42. “Purinergic signaling involved in Müller cell funct ion in the mammalian retina” . Wurm A, Pannicke T, Iandiev I, Francke M, Hollborn M, Wiedemann P, Reichenbach A, Osborne NN, Bringmann A Apoptosis. 2011 16(4):425-37. “Light- and sodium azide-induced death of RGC-5 cel ls in culture occurs via different mechanisms ”. Ji D, Kamalden TA, del Olmo-Aguado S, Osborne NN. Neurochem Res. 2010 35(12):2027-34. “Light effects on mitochondrial photosensitizers in relation to retinal degeneration” . Osborne NN, Kamalden TA, Majid AS, del Olmo-Aguado S, Manso AG, Ji D. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2011 Jan 5; 52(1):179-89. “Interaction of Recombinant Myocilin with the Matri cellular Protein SPARC: Functional Implications” . José Daniel Aroca-Aguilar, Francisco Sánchez-Sánchez, Sikha Ghosh,Ana Fernández-Navarro, Miguel Coca-Prados, and Julio Escribano. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. September 19, 2011 iovs.11-7489. “WDR36 and P53 Gene Variants and Susceptibility to Primary Open-Angle Glaucoma: Analysis of Gene-Gene Interactions" Cristina Blanco-Marchite, Francisco Sánchez-Sánchez, María-Pilar López-Garrido Mercedes Iñigez-de-Onzoño, Francisco López-Martínez, Enrique López-Sánchez, Lydia Alvarez, Pedro-Pablo Rodríguez-Calvo, Carmen Méndez-Hernández, Luis Fernández-Vega, Julián García-Sánchez, Miguel Coca-Prados, Julián García-Feijoo, and Julio Escribano.





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5.1.2.- Investigación Clínica.

Clin Experiment Ophthalmol. 2011 Sep 8. doi: 10.1111/j.1442-9071.2011.02698.x.2001;1. Intrastromal corneal ring segments: visual outcomes from a large case series . Ferrara G, Torquetti L, Ferrara P, Merayo-Lloves J. Revista Española de Glaucoma e Hipertensión Ocular. 2001;1. El mantenimiento de la superficie ocular y su trata miento . Alvarez de Toledo J, Benitez del Castillo JM, García Feijoó J, Merayo Lloves J, Muñoz FJ. Tordesillas Investigación Multidisciplinar. 2011;2: 31-42. Estudio de la capa de Bowman en diferentes modelos animales y su papel en la protección a radiaciones solares. Study of Bowman ʼs layer in different animal models and its role in the sun rad iation protection . Gonçalves GC, Martínez-García M C, Merayo-Lloves J, Cantalapiedra-Rodríguez R. Journal of Emetropia 2011; 2. Research in Myopia: A strategic target for the Jour nal of Emetropia . Merayo-Lloves. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 2011 Nov;249 (11):1705-12. Epud 2011 Aug 13. PMID: 21842130 Intrastromal corneal ring segment implantation in 2 19 keratoconic eyes at different stages . Alfonso JF, Lisa C, Fernández-Vega L, Madrdid-Costa D, Montés-Micó R. J Cataract Refract Surg. 2011 Jun; 37 (6):1090-6. PMID: 21596252. Visual quality after diffractive intraocular lens i mplantation in eyes with previous hyperopic laser in situ keratomileusis . Alfonso JF, Fernández-Vega L, Baamonde B, Madrid-Costa D, Montés-Micó R. J Cataract Refract Surg. 2011 May; 37(5):873-80. PMID: 21511154. 5 year follow-up of Phakic implantable Collamer Pos terior Chamber Intraocular Lenses to Correct Myopia . Alfonso JF, Baamonde B, Fernández-Vega L, Fernandes P, González-Méijome JM, Montés-Micó R.

J Cataract Refract Surg. 2011 Apr; 37(4): 706-13. PMID: 21420596. Intrastromal corneal ring segments and posterior ch amber phakic intraocular lens implantation for keratoconus corre ction . Alfonso JF, Lisa C, Fernández-Vega L, Madrid-Costa D, Poo-López A, Montés-Micó R.

Eur J Ophthalmol. 2011 Mar-Apr;21(2):125-31. PMID: 20853270. Refractive lens Exchange with Acri.LISA bifocal int raocular lens implantation . Alfonso JF, Fernández-Vega L, Baamonde B, Ortí S, Montés-Micó





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5.2.- Comunicaciones Congreso ARVO 2011.





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6.- Recursos de la Fundación. 6.1.- Recursos humanos. Personal adscrito a la Fundación: Cinco Investigadores principales:

Prof. Dr. Miguel Coca Prados. Prof. Dr. Carlos Belmonte. Prof. Dr. Neville Osborne. Prof. Dr. Jesus Merayo. Dr. Alvaro Meana.

Siete investigadores post-doctorales. Cuatro investigadores pre-doctorales. Un técnico en informática. Tres técnicos de laboratorio. Dos gestores de Proyectos. 6.2.- Recursos materiales.

A. Crioconservación.

Almacenamiento de colecciones celulares y genoteca. Banco de tejidos y muestras oculares patológicas. B. Microscopía.

Servicio dedicado a la documentación y análisis de secciones histológicas y técnicas de inmunofluorescencia avanzada. Estación de trabajo en célula viva (en proceso) C. Esterilización

Sala dedicada a la limpieza y esterilización de todo el material que se usa en el laboratorio. D. Servicios Experimentación Animal.

- Quirófano Experimental. - Animalario.





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Instalaciones dedicadas a la experimentación con animales. Mantenimiento de los modelos experimentales animales. En el año 2010 se ha establecido la colonia de ratones KNOCK OUT TRPM-8 -/- y se mantienen animales bajo tratamiento quirúrgico experimental.

E. Cultivos Celulares.

Se han desarrollado sistemas de evaluación invitro de cicatrización corneal. Se trabaja con líneas celulares establecidas de epitelio corneal humano y de células ganglionales retinianas. También se desarrollan cultivos primarios de diversos tejidos oculares y células madre de la superficie ocular.

memoria fio año 2011

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