metabolismo del eritrocito fundatal 2006. reticulocito eritroblasto eritrocito pérdida del núcleo...
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Metabolismo del EritrocitoMetabolismo del Eritrocito
Fundatal 2006Fundatal 2006
ReticulocitoReticulocito
EritroblastoEritroblasto
EritrocitoEritrocito
Pérdida del núcleo
Pérdida de ARN y mitocondrias
EritrocitoEritrocito
Metabolismo reducidoMetabolismo reducido
Ausencia de Ausencia de Ciclo de KrebsCiclo de Krebs
Ausencia de núcleoAusencia de núcleo y ribosomas y ribosomas
Ausencia de síntesis Ausencia de síntesis de proteínas de proteínas
No se produce renovación No se produce renovación del stock de enzimas del stock de enzimas
Glicólisis Glicólisis anaerobiaanaerobia
Agotamiento progresivo de enzimasAgotamiento progresivo de enzimasque limitan la sobrevida del GRque limitan la sobrevida del GR
Ausencia de Ausencia de mitocondriasmitocondrias
Glucosa
Glucosa 6PGP
IFructosa 6P
Fructosa 1-6P
ATPADP HKMM
gg
DHAP G3P
ALDTP
I
1,3DPG
NAD
NADHG3PD
H
PiPi
PFKMgMgATPADP
Vía Pentosas
Síntesis GSHVIA EMBDEN-MEYERHOFVIA EMBDEN-MEYERHOF
Reducción Meta Hb
1,3DPG
PGKADP
ATPMMgg
3PG
2PG
PGM
PEP
PIRUVATO
ENOL
ADP
ATPMMgg PK
LACTATOLDH
Degradación Nucleótidos
y Vías de rescate
2,3DPG
DPGM
DPGP
Shunt Rapoport
Luebering
VIA EMBDEN MEYERHOFVIA EMBDEN MEYERHOF
pH (-)
pH (+)
NADNADH
Funciones del ciclo de EMPFunciones del ciclo de EMP
1. Inicia y mantiene la glicólisis1. Inicia y mantiene la glicólisis2. Síntesis de GSH2. Síntesis de GSH3. Activación de ribosa -5P (PRPP)3. Activación de ribosa -5P (PRPP)4. Mantenimiento de integridad y plasticidad de la 4. Mantenimiento de integridad y plasticidad de la
membranamembrana5. Mantenimiento de bomba cationes ATPasa dep5. Mantenimiento de bomba cationes ATPasa dep
Modulación de la curva de disociación de oxiHbModulación de la curva de disociación de oxiHb
1. Interviene en la reducción de piruvato a lactato1. Interviene en la reducción de piruvato a lactato 2. Reducción de MetaHb2. Reducción de MetaHb
Producción de intermediarios de la glicólisis anaerobia
ATP
2,3 DPG
NADH
Glucosa
Glucosa 6P
Gliceraldehído 3P
6P-gluconato
Ribulosa 5P + CO2
G6PDH
6PGDH
NADPH
NADP
NADPH
NADP
Fructosa 6P
CICLO DE LAS PENTOSASCICLO DE LAS PENTOSAS
Xilulosa 5P Ribosa 5P
F6P +
G3P
(…)
SÍNTESIS y REGENERACIÓN DE SÍNTESIS y REGENERACIÓN DE GLUTATIÓNGLUTATIÓN
Ácido glutámico
CisteínaATP
ADP
GCS
glutamilcisteína
Glicina
ATP
ADP
Glutatión
Sintetasa GSHG6P
6PG
NADP
NADPH GSSG
H2O2
H2O
O2
Stress oxidativ
o
SOD
G6PDG6PD
Glutatión Glutatión PeroxidasPeroxidas
aa
Glutatión Glutatión ReductasReductas
aa
CAPACIDAD REDUCTORACAPACIDAD REDUCTORA
NAD Cit bNAD Cit b5 5 HbHb
NADH Cit bNADH Cit b5 red5 red Meta Hb Meta Hb
Vía principal
67%
Vías accesorias
NADP AM oxid HbNADPH AM red Meta Hb
5%
NADP GSH dehidroasc HbNADPH GS-SG ascórbico MetaHb
16%
NADP GSH HbNADPH GS-SG MetaHb 12%
GSH R
GSH R
MetaHb R NADHdep
MetaHb R NADPHdep
Glucosa Glu H2O + ½ O2
Cys
GC Catalasa
G6P Gly
NADP+ 2 GSH H2O2 Hb Cb5+++ NADH
NADPH Cb5++ NAD+
6PG
NADP+ AzMet NADPH
NADPH GS=SG 2 H20 Hb AzMet NADP+
R5P
PRPP
G3P
F1-
6DP
F
6P6P
GD
G
6PD
H
K
Hemicromos reversibles
Hemicromos irreversibles
Cuerpos de Heinz
ox
red
MetaHb- prevención- reducción
Fe+++
Fe++
GS=SG-R GSH-P (FAD) (Se)
ATP-asaADP
ATP
AMP
AK
ADENOSINA
PRPP
Adenosina Quinasa
APRT
Inosina
R-5-P
ADA
ADPATP
H2ONH3
AdeninaPP
i
RPPK
Shunt HMP
R-1-P
CMP
UMP
UridinaCitidina Hipoxanti
na
R-1,5-P2
P5’N Pi
PPiIMP
Pi
AMPATP
PRMPNP
VÍA DE RESCATE DE PURINASVÍA DE RESCATE DE PURINAS
ARN ribosomal
ribonucleasa
nucleótidos
purínicos pirimidínicos
AMP GMP UMP CMP
P5´N
Pi
Uridina Citidina
Anemias HemolíticasAnemias Hemolíticas
Pruebas de laboratorioPruebas de laboratorio
ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de LaboratorioLaboratorio
Objetivos:Objetivos:
1.1. Destrucción acelerada de G. R.Destrucción acelerada de G. R.
2.2. Eritropoyesis aceleradaEritropoyesis acelerada
3.3. Diagnóstico diferencial Diagnóstico diferencial
Destrucción acelerada de Glóbulos RojosDestrucción acelerada de Glóbulos Rojos– Vida ½ eritrocitaria con Vida ½ eritrocitaria con 5151Cr Cr
Bilirrubina indirectaBilirrubina indirecta LDHLDH– Signos de hemólisis intravascularSignos de hemólisis intravascular
ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de LaboratorioLaboratorio
50
100
0 27 Días10
% A
ctiv
idad
de
5151 C
rC
r
Haptoglobina y hemopexinaHaptoglobina y hemopexina Hemoglobina libre en plasmaHemoglobina libre en plasma
– MetahemalbuminemiaMetahemalbuminemia
– Hemoglobinuria Hemoglobinuria
– HemosideruriaHemosideruria Estercobilinógeno Estercobilinógeno
y urobilinógenoy urobilinógeno
ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de LaboratorioLaboratorio
Signos de hemólisis intravascularSignos de hemólisis intravascular
Hb
Hb libre
MetaHb
Hem
Hb-hapto
Dimerosαβ
Globina
+ Hapto
+ Albúmina
+ Hemopexina
Hemopexina-Hem
MetahemaAlb + Hemopexina
ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de LaboratorioLaboratorio
Eritropoyesis aceleradaEritropoyesis acelerada– SANGRE:SANGRE:
ReticulocitosisReticulocitosis
PolicromatofiliaPolicromatofilia
MacrocitosisMacrocitosis
Punteado basófiloPunteado basófilo
Eritroblastos circulantesEritroblastos circulantes
– M.O.:M.O.:Hiperplasia eritroideHiperplasia eritroide
– FERROCINÉTICA:FERROCINÉTICA: Turn over de FeTurn over de Fe
ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de LaboratorioLaboratorio
Diagnóstico diferencialDiagnóstico diferencial– Hemograma completoHemograma completo
– Examen del frotis de sangre periféricaExamen del frotis de sangre periférica
– Recuento de reticulocitosRecuento de reticulocitos
– Prueba de CoombsPrueba de Coombs
– Electroforesis de HbElectroforesis de Hb
– Resistencia osmótica globularResistencia osmótica globular
– AutohemólisisAutohemólisis
– Test de HamTest de Ham
– Test de isopropanolTest de isopropanol
Déficit de Piruvato KinasaDéficit de Piruvato Kinasa
Déficit de Piruvato KinasaDéficit de Piruvato Kinasa
Test de Screening Test de Screening – AutohemólisisAutohemólisis::
FundamentoFundamento:: HemHemólisis por anomalía intrínseca ólisis por anomalía intrínseca del GR al someterlo a incubación a 37del GR al someterlo a incubación a 37ºC / 48 hs. ºC / 48 hs. con y sin agregado de glucosa y ATPcon y sin agregado de glucosa y ATPResultadoResultado: :
– V.N: < 2.0% en ausencia de glucosa V.N: < 2.0% en ausencia de glucosa – < 0.9% en presencia de glucosa < 0.9% en presencia de glucosa
DesventajaDesventaja:: – Tiempo (laboratorista)Tiempo (laboratorista)– No diagnóstico diferencial No diagnóstico diferencial
Déficit de Piruvato KinasaDéficit de Piruvato Kinasa
Test de Screening Test de Screening – Técnica de FluorescenciaTécnica de Fluorescencia::
PEPPEP ++ ++ADPADP
PKPK
PIRUVATOPIRUVATO ATPATP
PIRUVATOPIRUVATO ++ ++NADH + NADH + HH++
LACTATOLACTATO NADNAD++
LDHLDH
FluoresceFluoresce NO Fluoresce
Déficit de Piruvato KinasaDéficit de Piruvato KinasaTest Diagnósticos: Test Diagnósticos: – Dosaje cuantitativo de la actividad enzimática Dosaje cuantitativo de la actividad enzimática
de PKde PK
Desventajas:Desventajas: – Existencia de variantes cinéticas con Existencia de variantes cinéticas con afinidad por el afinidad por el
sustrato (System Low)sustrato (System Low)– ReticulocitosisReticulocitosis
– Biología MolecularBiología Molecular
PEPPEP ++ ++ADPADP
PKPK
PIRUVATOPIRUVATO ATPATP
PIRUVATOPIRUVATO ++ ++NADH + NADH + HH++
LACTATOLACTATO NADNAD++
LDHLDH
Déficit de Déficit de Glucosa-6-Fosfato-dehidrogenasaGlucosa-6-Fosfato-dehidrogenasa
Déficit de G6PDHDéficit de G6PDH
Tests de ScreeningTests de Screening– Test Brewer:Test Brewer:
Pasos:Pasos:
1.1. Hb (roja) + NOHb (roja) + NO22Na Na Hbi (marrón) Hbi (marrón)
2.2. Hbi + Azul Metileno + NADPH Hbi + Azul Metileno + NADPH Hb + NADP + leucobase Hb + NADP + leucobase
Desventaja:Desventaja:– No sirve para detección de heterocigotasNo sirve para detección de heterocigotas
Glucosa Glu H2O + ½ O2
Cys
GC Catalasa
G6P Gly
NADP+ 2 GSH H2O2 Hb Cb5+++ NADH
NADPH Cb5++ NAD+
6PG
NADP+ AzMet NADPH
NADPH GS=SG 2 H20 Hb AzMet NADP+
R5P
PRPP
G3P
F1-
6DP
F
6P6P
GD
G
6PD
H
K
Hemicromos reversibles
Hemicromos irreversibles
Cuerpos de Heinz
ox
red
MetaHb- prevención- reducción
Fe+++
Fe++
GS=SG-R GSH-P (FAD) (Se)
Déficit de G6PDHDéficit de G6PDHTests de ScreeningTests de Screening
– Test CitoquímicoTest Citoquímico
Hb Hb Hbi Hbi CNHbi (sol. con HCNHbi (sol. con H22OO22) )
G6PDG6PDHH
Formazan insol.Formazan insol.
MTT
NONO22NaNa HCNHCN
Déficit de G6PDHDéficit de G6PDHTests de ScreeningTests de Screening
– Electroforesis de isoenzimas de G6PDHElectroforesis de isoenzimas de G6PDH
B :B : normal normal
A :A : normal africana normal africana
A-:A-: población afroamericana población afroamericana
Mediterránea:Mediterránea: población blanca población blanca
Déficit de G6PDHDéficit de G6PDH
Tests diagnósticos: Tests diagnósticos: – Dosaje cuantitativo de la actividad enzimática Dosaje cuantitativo de la actividad enzimática
de G6PDHde G6PDH
– Biología MolecularBiología Molecular
G6P + NADP+ 6PG + NADPH + H+
6PG + NADP+ Ribulosa-5-P + NADPH + H+ + CO2
G-6-PDH
6-PGDH
Hora de despertarse…Hora de despertarse…
¡Muchas Gracias!