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Metodi di osservazione dei Metodi di osservazione dei microrganismimicrorganismi
11m = 0,001mmm = 0,001mm1nm = 0,000001mm1nm = 0,000001mm1A = 0,0000001 mm1A = 0,0000001 mm
Le dimensioni dei microrganismi
Limite di risoluzione dell’occhio umano (a 25 cm): 0,2 mm
Microscopio ottico
Microscopio elettronico
I microscopi ottici
•microscopi semplici: un solo sistema di lenti (lenti di ingrandimento, i primi microscopi…);
•microscopi composti: due sistemi di lenti (i microscopi moderni con obiettivi e oculari)
Anatomia di un microscopio
stativo
fonte di illuminazione
fotocamera o telecamera
oculari
diaframma di campo
revolver con obiettivi
tavolino traslatore
vite macrometrica e micrometrica
condensatore
Ingrandimento
La luce visibile
Risoluzione e ingrandimento
POTERE DI RISOLUZIONE vs INGRANDIMENTOPOTERE DI RISOLUZIONE vs INGRANDIMENTO
Il limite di risoluzione dei microscopi
d 0,5Nsen
: è 400-700 nm per la luce visibileN: è 1 quando il mezzo interposto fra lente e preparato è l’aria: nelle lenti migliori si avvicina ad 1
= ~0,25m: lunghezza d’onda della luceN: indice di rifrazione del mezzo interposto fra lente e preparato: semiangolo della lente dell’obiettivo
Il limite di risoluzione dei microscopi
Il limite di risoluzione può essere migliorato Il limite di risoluzione può essere migliorato (diminuito):(diminuito):
• diminuendo diminuendo (200-400 nm per la luce UV) (200-400 nm per la luce UV)
• aumentando il prodotto Nsenaumentando il prodotto Nsen (apertura (apertura numerica, NA) per esempio interponendo fra numerica, NA) per esempio interponendo fra obiettivo e campione un olio con un indice di obiettivo e campione un olio con un indice di rifrazione simile a quello del vetro (1,518)rifrazione simile a quello del vetro (1,518)
d 0,5Nsen
= ~0,16m
Microscopio ottico in campo oscuro
Campo chiaroCampo chiaro Campo oscuroCampo oscuro
Treponema pallidum
Microscopio ottico a fluorescenza
Microscopio elettronico
Gli elettroni si comportano come onde
La lunghezza d’onda degli elettroni è di 0,1-0,04 nm
Fonte di elettroni
Condensatore
Condensatore
Fonte di elettroni
Campione
Campione
Obiettivo
Lente delproiettore
Lente delproiettore
Fascio di elettroni
Fascio di elettroni
Immagine sullo schermo fluorescente
Immagine sullo
schermo televisivo
Microscopio elettronico a trasmissione
Microscopio elettronico a scansione
Deviazione degli elettroni
Detector
Microscopio elettronico a trasmissione
Microscopio elettronico a scansione
Microscopio elettronico