Método DPPH

Aluna: Yasodhara CapellaProfª: Enayde Melo

Introdução

• Vários processos metabólicos e estresses em geral foram espécies reativas denominada radicais livres.

• O método DPPH é rotineiramente praticado para avaliar o potencial de sequestro de radicais livres por uma molécula antioxidante.

• É comumente usada em grão e farelo de trigo, legumes, óleos, e farinhas em diferentes sistemas (etanol, metanol, acetona e alcool aquoso, benzeno)

Introdução

• DPPH é um radical que se apresenta roxo, absorvendo a luz a 515nm em metanol.

• O método é baseado no princípio que o DPPH vai aceitar um H de uma molécula antioxidante, se tornando DPPH2 e mudando a coloração para amarelo, com uma diminuição da absorbância a 515nm. Essa mudança é acompanhada com espectrofotômetro.

• Esse método foi desenvolvido pela primeira fez por Blois, em 1958, quando demonstrou a habilidade de o DPPH aceitar H da cisteína.

• Com mudanças feitas por Brand-Williams, Cuvelier, and Berset em 1995, esse método tem sido usado mundialmente como um ponto de referência, sendo adotado com modificações de acordo com a necessidade.

Fatores que afetam o método

Método

[DPPH]

Vol. e tipo da

amostra

Tempo de

reação

águapH

Fe, Cu

Luz, O2

Proteínas

Precipita em

metanol

Detergente não iônico

Estável e solúvel por

60min

• Relação entre a concentração do antioxidante e o sequestro do DPPH não é linear, por isso medir o EC50 é problemático.

• É necessário estudar o comportamento de cada amostra e obter uma curva padrão para cada uma.

• As curvas não apresentam bons ajustes, levando a erros

• Obteve EC20, com 40% de inibição• Para assegurar a linearidade entre a inibição

do DPPH e a concentração da amostra.• Sugeriu-se usar EC20 porque o EC50 está

numa zona não-linear e não definida, o que dificulta a determinação de maneira acurada.