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Cours de formation sur la gestion des MTN au niveau district

Module 9 Diagnostics des MTN à CTP

Session 3: Laboratoire et outils diagnostics pour les filaires, et pour les

parasites intestinaux et urinaires

Cours de formation sur la gestion des MTN au niveau district Meeting NTD STAG, 29-30 April 2013, Geneva, Switzerland 2


Session 3 : Laboratoire et Outils Diagnostics pour les filaires, et pour les parasites intestinaux et urinaires

But de la Session 3:

Le but de cette unité est de fournir aux individus une compréhension des techniques de diagnostic et des outils de laboratoire utilisés dans le diagnostic de la filariose lymphatique, de l'onchocercose, de la schistosomiase et des helminthiases transmises par le sol

Objectifs:

• Tous les participants auront une connaissance de base des outils de diagnostic utilisés sur le terrain pour la détection, l'identification et la quantification des filaires liées à la filariose lymphatique, à l'onchocercose, aux helminthiases transmises par le sol et à la schistosomiase.

• Chez qui faire les prélèvements d'échantillons, le type d'échantillons, le nombre et la raison pour laquelle les échantillons sont collectés



Diagnostic des filaires

• Chez qui les échantillons seront-ils prélevés?

– Enquête communautaire

• Quels échantillons seront prélevés?

– Echantillons de sang et biopsies cutanées

• Pourquoi?

– Les résultats fournissent les prévalences de base des maladies ciblées au niveau du district pour déterminer si la CTP est nécessaire



Test de Diagnostic Rapid (TDR) pour la filariose lymphatique (ICT)

Carte ICT • Le test est sous la forme d'une

carte de TDR • Il est très sensible et spécifique

pour W. bancrofti • Réalisé avec 100 µl de sang • Les résultats doivent être lus à la

10ème minute • Comme tous les TDR, la positivité

de ce test est révélée par la formation d'une seconde bande à «T» (voir figure)

• La carte a une durée de vie plus longue, si la conservation au frais est possible



Bandelette test FTS pour la FL

Ce nouvel outil, très sensible, a remplacé la carte ICT pour détecter la présence de W. bancrofti. Il est déjà utilisé dans certains pays. Ce test est plus sensible que les anciennes cartes ICT et ne nécessite pas une chaîne du froid.



Un nouveau test bandelette

Schéma 1 Schéma 2 Schéma 3

Positif* Positif* Négatif (faible) seule ligne témoin présente

Toute ligne rose visible au cours du test devra être considérée comme un résultat positif Schéma 4 Schéma 5

Non valable Non valide

Pas de ligne apparente ligne test seule présente

* Classer les tests des bandelettes est utile mais optionnel. Négatif; 0=ligne test plus faible que ligne témoin

1= ligne test égale ligne témoin 2= ligne test plus forte que ligne témoin

C = Témoin T = Test



Test Diagnostique Rapide pour Brugia

La carte test de diagnostic rapide (TDR) détecte la présence de B. malayi ou B. timori. Les résultats peuvent être lus après 15-25 minutes



Tests diagnostics pour microfilaires

• Ces tests sont effectués à l'aide d'un microscope pour détecter, identifier et quantifier les espèces de microfilaires dans les échantillons de sang et de peau

• Les tests fournissent la confirmation des résultats des TDR

• Utilisé chez les populations âgées de > 5 ans

• Les échantillons de sang doivent être collectés à des moments spécifiques de la journée parce que chaque espèce a une période déterminée d'apparition dans la circulation sanguine (voir tableau)

Espèces Périodicité Période de collecte convenable

Wucheria bancrofti Périodicité nocturne Tard dans la nuit– entre 21h et 22h

Brugia malayi Apériodique A n’importe quelle heure

Brugia timori Apériodique A n’importe quelle heure

Mansonella spp. Apériodique A n’importe quelle heure

Loa loa Périodicité diurne Dans la journée entre 12 et 14 h



Tests diagnostics pour microfilaires (suite)

• Goutte épaisse de sang - enquête hématologique nocturne : utilisée pour détecter W. bancrofti,

- enquête hématologique à n’importe quelle heure: utilisée pour détecter B. malayi, B. timori, Mansonella spp. et

- enquête hématologique diurne : utilisée pour détecter pour Loa loa

• La chambre de comptage de Sedgewick : une alternalive rapide, quantitative et fiable au frottis sanguin pour la détection des espèces de filaires

• Biopsie cutanée exsangue : le standard pour le diagnostic de l’onchocercose.

Les procédures opératoires standardisées (POS) doivent être respectées et de bons réactifs utilisés dans ces tests pour garantir la précision des résultats. Le contrôle de qualité devrait être fait sur 10 % au moins des lames. Le contrôle de qualité doit aussi tenir compte du respect des POS pour la collecte des échantillons sur le terrain



Interprétation des résultats d'enquête pour calculer la prévalence et l'intensité des microfilaires

• Prévalence: = Nombre d’individus dont les lames sont positives aux mf x100

Nombre total d’individus examinés pour microfilaires

• Intensité: mf par ml de sang ( assumant 60 microl par lame)

= Nombre total de microfilaires trouvées sur les lames positives x16.7

Nb. Total de lames trouvées positives

Outil de réference : BENCH AIDS FOR THE DIAGNOSIS OF FILARIAL INFECTIONS, WHO 1997



Biopsie cutanée pour le diagnostic de l'onchocercose

• Détection du parasite Onchocerca volvulus qui est la cause de l’onchocercose (cécité des rivières )

• Utilise de petits échantillons de peau et la microscopie



Diagnostic de parasites intestinaux et urinaires

• Chez qui les échantillons seront prélevés?

Enfants d'âge scolaire (quand le taux de scolarisation est élevé) ou à base communautaire (quand le taux de scolarisation est faible )

• Quels échantillons seront prélevés?

Des échantillons d'urines et de matières fécales (voir les POS pour détails)

• Pourquoi?

Les résultats fournissent les prévalences de base des maladies ciblées au niveau du district pour déterminer si la CTP est nécessaire et pour évaluer l’impact des interventions



La technique de Kato Katz

Cette technique est utilisée dans les enquêtes de terrain pour la détection des œufs de HTS et de SCH dans les échantillons de selles • Utilisée à la fois dans le diagnostic quantitatif et qualitatif des HTS et SCH • Les échantillons doivent être testés le jour de la collecte (les œufs d'ankylostome

disparaissent de la lame, si elle n'est pas lue rapidement, dans l'heure qui suit sa préparation)

• Elle a une faible sensibilité surtout après les DMM, lorsque les niveaux d'infection (intensité) diminuent

Le Contrôle de Qualité devrait être effectué sur 10 % au moins des lames



La technique de Kato Katz (suite)

• 41,7 mg de selles filtrées à travers un tamis de nylon sont introduits dans le trou d'un gabarit.

• Le gabarit est soigneusement retiré, laissant l'échantillon de selles de forme cylindrique sur la lame.

• L'échantillon est recouvert d'une lamelle de cellophane pré imprégnée pendant 24 heures dans une solution à 50% de glycérine-bleu de méthylène et retourné sur une surface plane et lisse adsorbant pour le répartir uniformément.

• L’échantillon doit être examiné dans un intervalle d'une heure après sa préparation, pour les ankylostomes et de préférence 24 heures plus tard pour les autres œufs de parasites



FEC et Flotac

Les techniques suivantes sont moins couramment utilisées car elles sont plus adaptées au laboratoire qu’au terrain en raison de l'équipement requis • Une concentration Formol-éther (FEC): nécessite

l'utilisation d'une centrifugeuse avant que le test soit effectué avec un kit FEC (s'il vous plaît noter également: que «le formol n'est plus recommandé en raison de ses effets cancérigènes, à la place, l'éther acétyle est recommandé»)

• FLOTAC: technique sensible et à faible coût qui représente une potentielle alternative au Kato-Katz; cependant, elle nécessite également une centrifugeuse



Test de l’Antigène Cathodique Circulant (CCA)

• Le test de CCA est un test qualitatif de présomption qui détecte l'antigène cathodique circulant (CCA) dans l'urine du patient

• Le test est bon pour la détection de S. mansoni et peut potentiellement remplacer le traditionnel test de Kato-Katz

• Une goutte d'urine est introduite dans un trou du test CCA et une goutte de solution tampon y est ajoutée

• Si l'antigène CCA est présent, il se fixera sur l'anticorps monoclonal étiqueté du parasite et réagira avec lui pour former une deuxième ligne rose

• Le test CCA est rapide, très sensible et facile à réaliser



Outils pour le diagnostic des parasites urinaires

• Le Questionnaire: utilisé pour une évaluation rapide grâce à l'auto-déclaration de la présence de sang dans l'urine, à l'aide d'un questionnaire standardisé de l'OMS

• Hemastix: utilisé pour détecter la présence de sang dans l'urine qui peut être le résultat d'une infection à S. haematobium. Il ne détecte pas la présence d'œufs de S. haematobium

• La Filtration des urines: utilisé pour détecter des œufs de S. haematobium dans les urines. 10ml d'urine filtrées à travers une membrane de filtration pré-chargée dans un porte-filtre pour piéger les œufs de S. haematobium. Le filtre est examiné sous un microscope pour chercher les œufs de S. haematobium



Activité de l’unité 3

Partage d’expériences :

Les participants se divisent en groupes de 4-6 personnes pour discuter de leurs expériences sur les préparatifs de la cartographie et/ou des activités de S&E.

Chaque groupe doit mettre en évidence les éléments suivants:

- Les principaux préparatifs qu'ils ont fait

- Toute difficulté rencontrée au cours de ces préparatifs

- Comment ces difficultés peuvent-elles être surmontées.

Après 10 minutes, chaque groupe présentera les principaux points mis en évidence avec les facilitateurs et les autres participants



Activité de l’unité 3 (suite)

Étude de cas en RDC Dans les provinces de l'Equateur et du Bas-Congo, la plupart des districts sont co-endémiques à la FL, la Loa loa et l'onchocercose. Décrire les méthodes de diagnostic qui doivent être utilisées, lors de la cartographie pour la FL, la Loa loa et l'onchocercose pour confirmer l'endémicité de la filariose lymphatique car il est connu que la DMM avec l'ivermectine ne peut pas être mise en œuvre dans les districts où la FL et la Loa loa (prévalence élevée) sont endémiques.

- Quelles méthodes allez-vous utiliser pour cartographier la FL? - Quelles méthodes diagnostiques allez-vous utiliser pour cartographier la Loa loa? - Quelles méthodes de laboratoire et de diagnostic supplémentaires allez-vous

utiliser pour confirmer l'endémicité de la FL et la Loa loa dans la plupart des districts?

Pour chaque méthode de diagnostic et de laboratoire, s'il vous plaît expliquez votre choix? Prendre un peu de temps pour réfléchir sur l'étude de cas et écrire vos réponses

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