Zeitsehrift fiir Krebs~orsehung 65, 506--512 (1963)

Aus dem Onkopathologischen Forsehungsinstitut Budapest (Direktor: Prof. Dr. B. K~LL~R)

Morphologische und enzymchemisehe Veriinderungen an einem )liiuse-Asciteslymphom mit induzierter Resistenz

Von

]~VA GX~I

(Eingegangen am 27. November 1962)

Dank der in unserem I n s t i t u t durehgeffihrten Un te r suehungen ist uns bekannt , dag Degranol [1,6-bis-(Ch]or/~thy]amino)-l,6-Desoxy-D-Mannit-di-chlorhydrat] auch das W a e h s t u m des NK/Ly-Asei tes tumors h e m m t (NkMET~, KELLNEI~- N]~NE~H u n d GiL). Die naeh einer e inmaligen groBen Dosis auf t re tenden mor- phologischen Ver/~nderungen zeigen einen regelrechten zeitl ichen Ablauf.

I m Verlauf unserer jetzigen Unte r suchungen riefen wir am NK/Ly-Asei tes- t umor Resistenz gegen Degranol hervor u n d vermochten e inmal die morpho- logischen Ver/inderungen, zum anderen, mit tels enzymchemischer Methoden, eine wesentliche quan t i t a t ive ]4nderung in bezug auf die Aktivit/~t dieser Enzyme nachzuweisen.

Methoden In die BauchhShle verschiedengeschlechtlicher, geziichteter Ca-Mguse yon gleichem

Gewicht (20 g) spritzten wir 2 • 106 NK/Lymphom-Ascitestumorzellen ein. Die Behandlung begann i Tag naeh der Uberimpfung, und zwar so, dab je 5 Tiere an 10 aufeinanderfolgenden Tagen intraperitoneal 0,2 mg/kg Degranol erhielten. Die behandelten Tumoren wurden am 11. Tag an je 5 Tiere weiter iiberimpft, und die Gaben yon Degranol allmghlich erhSht, bis nach der 28. Passage aueh die therapeutische Dosis (3 • 10 mg/kg) keine Wachstumshemmung mehr im Tumor herbeffiihrte. Den Kontrollen und den behandelten Tieren - - nach der 5., 10. bzw. 31. Passage - - verabreichten wir die semiletale Degranoldosis (80 mg/kg) intra- peritoneal.

Ein Teil der Tiere wurde vor Verabreiehung der grogen Degranoldosis, ein anderer 24, 48, 72, 96, 120 bzw. 144 Std naehher getStet und folgendes bestimmt: 1. die Zahl der in 1 ml enthaltenen Tumorzellen, 2. die Gesamtmenge der BauehhShlenfliissigkeit, 3. die Anzahl sgm~lieher Tumorzellen in der Bauehh6Me der Versuehstiere und 4. das Volumen der Tumor- zellen auf Grund der Formel

V-- tI/~matokrit % Zellzahl/mm a

Naeh Absaugung eines Tropfens Aseitesfliissigkeit fertigten wir zu den obenerwghnten Zeitpunkten Ausstriehe an, um sie dann naeh MAY-GRi~NWALD-GI~MS~ zu fgrben. In diesen Ausstriehen bestimmten wit (dureh Zghlung yon je 2000 Zellen) das Verhiiltnis der ingakten Gesehwulstzellen (Caspersson A) zu den zerfallenden (Caspersson B), den Mitosen, den mehr- kernigen Gesehwulstzellen und der Anzahl der Leukoeyten, Lymphoeyten, Endothelzellen.

I-Iand in I-Iand mit den morphologisehen nahmen wir aueh enzymehemisehe Unter- suehungen vor. Die Bestimmung der Nuccinodehydrogenase-Aktivitgt erfolgte spektrophoto- metriseh (E. C. Sr.AT~, W. D. B o ~ R ) , die des Eiweil~es mit ttilfe der Biuretreaktion. Die spezifisehe Aktivit~t der Sueeinodehydrogenase wurde bei einer Temperatur yon 20 o C, bezogen auf die molare Konzentration des Natriumsueeinats und 1 mg Eiweil~ (ausgedriiekt dureh die Extinktionsver//nderung je Minute) bereehnet.

Die quantitative Bestimmung der Aktivitgt yon saurer und alkaliseher Phosphatase erfolgte naeh der Modifikation naeh ]~On~SKu 9 ml Substratl6sung 1 ml des 1:10 ver-

Vergnderungen an einem lVI/~use-Aseiteslymphom mit induzierter Resistenz 507

diinnten Homogenisags yon in der (unmittelbar nach T6tung der M/iuse entnommenen) Ascitesfliissigkeit ausgefiillten Geschwulstzellen zusetzen. Die eine Hglfte des Untersuchungs- materials (I) mSglichs~ sehnell mi~ 2 mt 30%iger Trichloressigsi~ure ausigllen und filtrieren, die andere Halite (2) 1 Std lung im Wasserbad inkubieren und ebenfalls mit 2 ml 30%iger Trichloressigs~ure ausfgllen. Aus (1) und (2) Phosphorbestimmung durchfiihren; die Differenz der gewonnenen Werte ergib~ die Phosphatase-Einheit. Substratl6sung zur Bestimmung der MkMischen Phosphatase: 0,5 g Na-Glycerophosphat, 0,429 g VeronM-Na, 3 ml Petrol~ther auf I00 ml dest. Wasser auffiillen, p~I ~ 8,6. Substratl6sung zur Bestimmung der sauren Phosphatase: 0,5 g Na-Glyeerophosphat, 0,429 g Veronal-Na, 3 ml Petrol~ther, 5 ml n/10 Essigs~ure ~uf 100 ml desk. Wasser aufi/illen, p~ = 5.

Zur Phosphorbestimmung: 5ml Untersuehungsma~eriM, 2ml Ammonium-Molybdat, 0,4 ml Eikonogen (1-amino-2 naphtol-2 Sulfons/iure) auf 10 ml dest. Wasser auffiillen. Die Intensit~t des so gewonnenen Molybd~nblaus ist dem Phosphorspiegel direkt proportional. Ablesung mit Hilfe eines S~ufenphotometers (S~2-Filter). Eine Enzymeinheit entsprich~ 1 y Phosphor, hervorgerufen dureh die Phosphatase-Aktivi~gt eines - - feucht - - 0,2 g schweren Tumors.

Ergebnisse der morphologischen Untersuehungen

In der proliferativen Wachstumsphase (1.--6. Tag) des NK/Ly-Ascitestumors nimmt die Zahl der Geschwulstzellen (vom Typ A) stfirmisch zu, w~hrend die der zerfMlenden Zellen (vom Typ B) stark abnimmt. Der Anteil der Mitosen liegt bei 5%, der der mehrkernigen Zellen bei 10%. In der station/@en Phase (7. bis 13. Tag) nimmt anl/~Blich jeder weiteren Untersuehung die Zahl der A-Zellen zu- gunsten der B-Zellen ab; in I~,5% der F~]le kommt es zu Mitosen, zn 5--8% treten mehrkernige Zellen in Erscheinung.

Nach Degranolgaben yon 80 mg/kg steigt die Zahl der B-Zellen, der Nucleolus, der Kern der A-Zellen und die Zellen selbst werden gr61]er. Kurze Zeit nach Verabreichung des Mittels verringert sich die Anzahl der normalen Mitosen, es kommt zu anomMen Zellteilungen, zu beaehtlichem Kern- und ZellzerfM1, und 72 Std sp/iter setzt mit der Vermehrung der mehrkernigen Zellen die Restitu- tion ein.

Nach der 5. Passage erh6ht sieh der Anteil der mehrkernigen Zellen auf 25%, nach der 10. auf 40 % ; die semiletale Degranoldosis vermindert ihre Zaht, und nach der 30. Uberimpfung bleibt die gleiche Dosis ohne Wirkung auf das 10--15%ige Vorkommen der mehrkernigen Zellen. Im Verlanf der Resistenzentwieklung, und zwar naeh der 5. bzw. 10. Passage, verschwinden die Mitosen nach wie vor unter der Wirkung dieser groBen Degranoldosis, wobei jedoeh Zellnntergang und Zell- zerfM1 seltener werden; naeh der 30. Passage li~Bt sich selbst unter der Wirkung einer semiletalen Dosis keine Zellsch/~digung erkennen (Tabelle 1).

Wahrend des Waehstums des NK/Ly-Ascitestumors steigt die Zahl s/~mtlicher Tumorzellen gleiehm/iBig an. 72 Std naeh einer Degranolgabe yon 80 mg/kg gehen 70 % der Gesehwulstzellen zugrunde, und mit dem Einsetzen der Restitution erh6ht sieh ihre Anzahl wieder. Im Verlauf der Resistenzentwieklung fiihrt dieselbe Dosis nach der 5. Passage noch zu einem 74%igen Zellzerfall, ws sie naeh der 10. und der 30. l~berimpfung keine signifikante Ver/~nderung in bezug auf die Zahl der Geschwnlstzellen hervorruft (Tabelle 2).

Das Voinmen der NK/Ly-Aseitestumorzellen ~ndert sieh ira Verlauf ihrer Waehstumsphase nieht wesentHch.

35*

508 ]~VA GXTI:

Tabelle 1.

S t d n a c h Degr~nol - g a b e n y o n 80 m g / k g

Vor Degr~nolg~ben yon 80 mg/kg

24

48

72

96

120

144

Prozentuale

ZeU - typen

Verteilung der Zelltypen bei einem NK/Ly-Ascitestumor unter der Wirkung yon 80 mg/lcg Degranol

Vor der N a c h der N a c h der ~ b e r i m p i u n g 5. ~ b e r i m p f u n g 1 0 . ~ b e r i m p f u n g

11 40

36 10 32 10 13 14 14 13

40 11

45 15 50 16 60 25 39 28 32 30 18 65

25 25

68 10 36 14 37 15 34 19 33 11

Zeichenerkl~rung: B = Zellen vom Typ B; M = mehrkernige Zellen.

N a c h der 30. ~ b e r i m p f u n g

33 10

25 9

30 7 8

11 8

11

Tabelle 2. Die Zahl sSmtlicher TumorzeUen bei einem NK/Ly-Ascitestumor unter der Wirkung yon 80 mg/lcg Degranol

S t d n a c h Degrano l - Vor der N a c h der N a c h der N a c h der g a b e n y o n 80 m g / k g ~ b e r i m p f u n g 5. ~ b e r i m p f u n g i0 . ] J b e r i m p f u n g 30. ~ b e r i m p f u n g

Vor Degranolg~ben yon 80 mg/kg

24 48 72 96

120 144

8,5 �9 10 s

2,38 �9 l0 s 2,45" l0 s 2,4 �9 10 s 2,94" 10 s 2,82. l0 s 4,50" l0 s

5,5 �9 l0 s

5,12 �9 l0 s 6,3 �9 l0 s 1,33 �9 l0 s 5,13" l0 s 6,51 �9 l0 s

3,2 - l0 s

2,91 �9 108 3,44 �9 l0 s 2,81 �9 108 4,20 �9 10 s

6,15. l0 s

6,39. l0 s 6,4 �9 l0 s 5,67 �9 l0 s 6,13 �9 l0 s

U n t e r d e r W i r k u n g y o n 80 m g / k g D e g r a n o l v e r s e c h s f a c h t es sich, u m s ich

be i g l e i chen D o s e n n a c h d e r 5. ~ b e r i m p f u n g n u r m e h r au f das 2 ,5 fache n n d n a c h

de r 30. auf das 1 ,5fache se ines u r s p r i i n g l i c h e n W e r t e s zu vergrSBern . 57~ch d e r

10. U b e r i m p f u n g /~ul~ert s ich das m a s s e n h ~ f t e E r s c h e i n e n d e r m e h r k e r n i g e n

Zel len a u c h in e iner Z u n ~ h m e des d u r c h s c h n i t t l i c h e n Z e l l v o l u men s . Zu d i e s e m

Z e i t p u n k t b l e i b t j e d o c h die s emi l e t a l e Dos is s c h o n o h n e w e s e n t l i c h e n EinfluI~

auf die Gr51~e d e r Ze] len (Tabel le 3).

Tabelle 3. VerSnderung des Volumens der ZeUen bei einem NK/Ly-Ascitestumor unter der Wirkung yon 80 mg/lcg Degranol

S t d n~ch D e g r o n a l - Vor 4er N~ch der N a c h der N a c h der g a b e n won 80 m g / k g ~ b e r i m p f l m g 5. ~ b e r i m p f u n g 10, ~ b e r i m p f u n g 30. ~ b e r i m p f u n g

VorDegranolgaben yon 80 mg/kg

24 48 72 96

120 144

2O0O

3400 5700 6100 7000 7090

13000

4600

1990 2000 3440 3560 4980

5620

3000 3300 4980 5650

2040

3000 2850 2460 2720

Ver/~nderungen an einem Ms mi~ induzierter Resis~enz 509

Ergebnisse der enzymehemisehen Untersuehungen

Die spezifische Aktivit/it der Succinodehydrogenase ist in der proliferativen Wachstumsphase des T mors grSBer Ms in der station/iren, um dann in der Terminalphase beachtlieh abzusinken (Ta- belle 4). Die spezifische Aktivit/~t der Suc- einodehydrogenase des unbehandelten sowie des 5real fiberimpften Tumors nimmt unter der Wirkung der semiletMen Degranoldosis naeh Ablauf yon 24--48 SM ab, um mit beginnender Restitution, d.h. yon der 72. Std an, wieder zuzunehmen. Naeh der 10. Uber- impfung wird diese Zunahme, bei gleieh- bleibenden Dosen, immer gr5Ber. I m Verlauf weiterer Uberimpfungen ohne Degranol- behandlung zeigt die spezifisehe Aktivit~t 50--65 % hShere Werte Ms bei den Kontrol- len (Tabelle 5).

In der proliferativen Waehstumsphase des ~K/Ly-Tumors erreicht der Durch- schnittswert der sauren Phosphatase 8 Einhei- ten, der der aIkalischen Phosphatase 6,5, urn in der station/~ren Phase, zur Zeit tier jeweiligen Untersuchungen, 7 bzw. 5 Einheiten zu betragen (Tabelle 6).

Naeh Verabreiehung einer Degranoldosis yon 80 mg/kg vermiadert sieh die Aktivi tat der sauren Phosphatase um 75% und die der Mka- lischen um 70%; mit beginnender Restitution steigt allmahhch die Enzymaktivit/i t , und die Aktivit/it der sauren Phosphatase erhSht sich weir fiber den Ausgangs- wert hinaus. I m Verlauf der Resistenzentwick- lung nimmt die Aktivi-

Tabelle 4. Ver~inderung der Succino- dehydrogenase~Aktivitiit bei einem NK/ Ly-Ascitestumor wiihrend seines Wachs-

turns

N a c h der ~ b e r i m p f u n g

(Tage)

6 7 8 9

10 11 12 13 14 15

Spezif ische Ak t i~ i t~ t

D u t c h - S t a n d a r d - s c h n i t t a b w e i c h u n g

1 - t - 2 10 • 10 :]:1 6 :[:I 6 • 5 • 4 •

• 0,2 •

Tabelle 5. Verdinderung der Succinodehydrogenase-Aktivitdt bei einem NK/Ly-Ascitestumor unter der Wirkung yon 80 mg/kg

Degranol

l J b e r i m p f u n g e n

Vor der lJberimpfung . .

Nach der 5. ~berimpfung

Nach der 10. Uberimpfung

Nach der 30. Uberimpfung

I ~ach der 33. Uberimpfung [

I Nach der 35. ~berimpfung /

Std n a c h Degranolgaben yon 80 mg/kg

24 48 72 96 24 48 72 96 24 48 72 96 24 48 72 96

ohne Degranol- behandlung

ohne Degranol- behandlung

Differenz der Enzymakt ivi t i i~t bei b e h a n d e l t e n u n d I~ontroll- t i e ren (in % )

- - 4 3 - - 30

0 § 30 - - 60 -- 220 § 20

125

-~ 33 § 50 -? 55 § 90 § 75 § 250 + 50 -~ 50

-~ 6 5

+ 50

tat der sauren Phosphatase 72 Std nach der 5. Passage, zur Zeit der Maximal- wirkung der gleichen/)egranoldosis schon nut mehr um 10% ab, wahrend die der alkahschen Phosphatase eine Zanahme yon 150 % zeigt. Naeh der 10. Passage

Z. Krebsforsch., Bd. 65 3 5 a

510 ]~vA G ~ I :

is t die Aktivit /~t der sauren Phospha tase u m 40 %, die der a lkal ischen Phospha- tase dagegen 200 % hSher als die der noch unbehande l t en Geschwulstzellen, und

nach Ver~breichung gro- Tabelle 6. Ver~nderung der A]ctivitiit der sauren und alkalischen Phosphatase bei einem NK/Ly-Ascitestumor w~ihrend seine8

Wachstums

Saure Phosphatase Alkalische Phosphatase Nach der

~ber- in Bod~nskysehen Enzymeinheiten impfung (Tage) Dutch: Standard- Durch- Standard-

schnitt abweichung schnitt abweichung

3 4 5 6 7 8 9

10 11 12 13 14 15

8 7 6,75 6,75 7,5 7,25 7 7 7 7,27 7,25 6,5

5

4-0,75 4-2 4-1,75

1,75 • ~=0,25 • 0,25 ~=0,25 • 0,25 4- 0,25 • 4-0,25 4-1

6,5 5,5 5,5 5,5 5,75 5,75 5,75 4,75 5 5,25 5,75 4,75 4

:~ 0,5 ~: 0,25 4- 0,25 =t=1,5 4- 0,25 ~=0,25 :Eo,25 :Eo,25 ~= 0,25 4-0,5 4-0,25 4- 0,25 4-1

~er Degranolgaben s te igt die A k t i v i t ~ t der alka- l ischen Phospha tase u m weitere 200 %. Nach der

Res is tenzentwicklung unte rsche ide t sich die Akt iv i t i i t der a lkal ischen Phospha tase n icht yon der der unbehande l t en Geschwulstzel len und wird auch yon der semi- le ta len Degranoldosis n icht beeinfluSt. Die Akt iv i t / i t der sauren Phosph~tase is t 40 % hSher als die der un- behandel tenGeschwu]s t - zellen und wird durch

Tabelle 7. Veriinderung der Aktivitiit der sauren und alkalischen Phosphatase bei einem NK/Ly- Ascitestumor unter der Wirkung von 80 mg/kg Degranol

Vor der _. Nach der Nach der Nach der l~ach der Std naoh ~berimpfllng 5. T[~berimpf~ng 10. ~be_rimpfu~_ 30. ~_berimpfn~__ 35. ~berimpinng

Degranol- I I "" " gaben yon saute alkali- saure alkali- saute alkali- saute alkali- alkali- 80 mgfl~ sche sche sche sche saute sche

Vor Degranol- g~benvon 80 mg/kg

24 48 72 96

120 144

Phosphatase

7

4,75 2,75 1,75 8,75

10 12

5

,75

1,5

4,75

7

3,75 7,75 6,25 6,25 8,25

5

6 17,25 12,25 16,25 16

10

10 ' 7,25

10,25

15

26 17,5 13,5 26

10

7 7,25

11,25 10

5

5,25 5,25 4,75 6

10

D i s k u s s i o n

N a c h R~ZC~ABD U. Mi ta rb . li~B~ sich i m Fa l l e yon Asc i t e s tumoren die ge- schwuls themmende W i r k u n g eines Chemothe rapeu t i cums bzw. bei ResisSenz das AufhSren der W a c h s t u m s h e m m u n g auf G r u n d der ve r~nder ten Zahl de r in der Ascitesf l i issigkeit en tha l t enen Geschwulstzel len beurtei len, zumal die B a u e r der ~be r l ebensze i t du rch die immunologischen Verh~ltnisse sowie die toxische ~u kung der Mi t te l beeinflulBt wird.

die semilet~le Degranoldosis ebenfal ls n ieh t herabgese tz t . Die ohne Dogranol- behand lung wei ter i iber impf~en res i s ten ten Geschwulstzel len beha l t en die gestei- ger te A k t i v i t ~ t der sauren Phospha t a se bei (Tabelle 7).

Ver~tnderungen an einem M~use-Asciteslymphom mit induzierter Resistenz 511

Auf Grund der Untersuchungen gelang es uns, unter der Wirkung yon Degra- nol im empfindlichen Tumor eine beaehtliche Abnahme in bezug auf die Zahl der Zellen nachzuweisen; da abet nach der 30. Passage auch die semiletale Degranol- dosis die Zahl der Geschwulstzellen nicht verminderte, ist anzunehmen, dab die Entwicklung der l~esistenz gegen Degranol stattgefunden hat. Im Verlauf der Resistenzentwieklung /~nderte sieh das morphologisehe Verhalten des Tumors. Im empfindlichen Tumor wandelte sich ein groBer Teil der gesunden A-Zellen in zerfallende B-Zellen um; wiihrend der l~esistenzentwicklung nahm diese Umwand- lung immer mehr ab, und im resistenten Tumor erhShte sich die Zahl der B-Zellen auch nach Verabreichung der semfletalen Dosis nieht. Diese J~nderung /iuBerte sich teilweise aueh in einer Verkleinerung des durchschnittlichen Zellvolumens, da ja das Volumen der A-Zellen im Durehsehnitt kleiner ist als das der B-Zellen.

Each den Untersuchungen K ~ L L ~ s spielen die mehrkernigen Zellen bei der nach Sch~digung der Geschwu]st zustande kommenden Restitution mit.

Anl~Blich unserer friiheren (GXTI) und gegenw/~rtigen Untersuchungen konnten wir feststellen, dab sich wi~hrend der l~esistenzentwicklung (mehrere Generationen hindurch) die Zahl der mehrkernigen Gesehwu]stzellen in der Zellpopulation immer mehr erh6hte. Diese Anderung ist so zu werten, daI~ im Verlauf der l~esistenzentwicklung - - trotz Behandlung - - start der Zellseh/~digung immer mehr auf Restitution deutende morphologisehe Zeiehen im Vordergrund stehen.

F u ~ A ~ u. Mitarb. beobachteten nach Senfnitrogengaben einen starken Ab- fall im SH-Gruppen-Gehalt des GesehwulsteiweiBes. BLACK und SrE~g wiesen unter der Wirkung yon Senfnitrogen und TE1V[ eine Abnahme der Sueeinodehy- drogenase-Aktivit/~t mensehlieher Gesehw~lste naeh. Unsere Versuehe ergaben, dab sieh aueh unter der Wirkung yon Degranol die Aktivit/~t der Suceinodehy- drogenase des NK/Ly-Ascitestumors verringert.

Im Verlauf der l~esistenzentwieklung ist eine stetige, kontinuierliehe Aktivi- t/~tszunahme der Sueeinodehydrogenase und der sauren Ph0sphatase zu erkennen, und ebenso konstant ist der Anstieg in bezug auf die Zahl der A-Zellen. Diese Ver/~nderungen seheinen f~r einen genetisehen Ursprung der l~esistenz zu spre- then. Die Vermehrung der mehrkernigen Zellen und die ~uBerst hoehgradige Aktivit~ttszunahme der alkalischen Phosphatase sind in der Fr/ihphase der Resistenzentwieklung yon vor/ibergehendem Charakter.

Zusammenfassung Es gelang uns, einen gegen Degranol (1,6-bis-(Chlors

D-Mannit-dichlorhydrat) resistenten NK/Lymphom-Aseitestumor zu erhalten. Die semiletale Degranoldosis setzt im empfindlichen Tumor die Zahl der

Geschwulstzellen bedeutend herab, w/ihrend sie sic im resistenzerwerbenden Tumor schon nach der 10. Passage nicht mehr beeinfluBt. Dabei wandeln sieh im emp- findlichen Tumor zahlreiche intakte Geschwulstzellen (Typ A) in zerfallende Gesehwnlstzellen (Typ ]~) urn, nicht dagegen im resistenten Tumor. Im empfind- lichen Tumor werden die Mitosen vSllig gehemmt, w/~hrend sic im resistenz- erwerbenden Tumor nach der 10. ~berimpfung wieder auftreten.

Im Verlauf der Resistenzentwicklung steig~ die Aktivit/~t der alkalischen Phosphatase vorfibergehend sehr an, w/~hrend sich die Aktivit/~t der Sueeino-

512 ]~vA G i ~ : Ver~inderungen an einem M~use-Asciteslymphom mit induzierter Resistenz

dehydrogenase und der sauren Phospha tase sukzessive erhSht, und zwar nach erfolgter Res i s tenzen twickh ing auch bei Un te rb rechung der Behandlung . Die semile ta lc Degranoldosis ff ihrt im sensiblen T u m o r zum Abs inken dieser E n z y m - aktivit/~t, wKhrend sic im res i s ten tcn T u m o r unver~nder t b le ib t oder noch wel ter zun immt .

Morphologie and Enzymat ic Changes in a Mouse i s c i t e s L y m p h o m a wi th Induced R e s i s t a n c e

S u m m a r y

W e were able to m a i n t a i n a N K ascites l y m p h o m a which became re s i s t an t to Degranol (1 .6 -ch lo re thy lamino- l .6 -desoxy-d-mann i t e d ich lorhydra te ) .

I n the sensi t ive t u m o r the semi le tha l dose of degranol reduced m a r k e d l y the n u m b e r of t u m o r cells, whereas the dose fai led to affect the cell n u m b e r in the t u m o r acquir ing resis tance af te r the 10th t r ansp lan ta t ion . I n the sensi t ive t u m o r innumerab le in t ac t t u m o r cells ( type A) became t r ans fo rmed into degenera t - ing t u m o r cells ( type B) ; this change d id no t occur in the res i s tan t tumor . I n the sensi t ive t u m o r mitoses were comple t e ly inhibi ted , bu t in the t u m o r acquir ing res is tance af te r the 10th t r a n s p l a n t a t i o n t h e y appeared .

Dur ing the deve lopmen t of the res is tance the a c t i v i t y of the a lkal ine phos- pha t a se increased momen ta r i l y , whereas the a c t i v i t y of the succinic dchydrogenase and the acid phospha tase increased successively, especial ly a f te r the deve lopmen t of res is tance and a f t e r i n t e r r u p t i o n of t h e t r e a t m e n t . The semi le tha l dose of degranol in t he sens i t ive t u m o r led to a r educ t ion of these enzyme act iv i t ies , whereas t h e y r ema ined unchanged in r e s i s t an t t umors or even increased.

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