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Nachweis von E. coli / Coliformen
Auswertung der Untersuchungen im Rahmen des Praktikums
WasserhygieneSS 2007
Katharine MoritzUlrike Frömmel
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Einleitung
E.Coli REM E.Coli Gramfärbung
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Coliforme Bakterien• Familie: Enterobacteriaceae• Gattungen: Escherichia coli
Enterobacter amnigenusEnterobacter cloacaeKlebsiella pneumoniaeKlebsiella oxytocaCitrobacter freudii
• gramnegativ• nicht sporenbildend• Cytochromoxidase- negativ• stäbchenförmig• Lactosevergärung zu Säure und Gas (48 h, 37 °C)• Glucosefermentation
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Coliforme Bakterien
• Vorkommen in der Umwelt und der Darmflora von Warmblütern
• Nutzung als Indikatorbakterien zur hygienisch-bakteriologischen Überwachung des Trinkwassers
• Hinweis auf mögliche Verunreinigung, oder ungenügende Desinfektion des Wassers
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Durchführung
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Nachweis von Coliformen
• Bestimmung des Coli-Titers kleinste Wassermenge in mL, in der noch Bakterien in Kultur
nachgewiesen werden können
• MPN- Verfahren höchstwahrscheinliche Keimzahl je 1 ml Probe
• Anlegen von Subkulturen zur Bestätigung der nach der Anreicherung positiv beurteilten
Kulturen Beimpfung von ENDO-Agar und Tergitol-7-Agar
• Biochemische Identifizierung „Bunte Reihe“: Oxidase, Citratverwertung, Glc- und Lac- verwertung, Indolbildung, Harnstoffverwertung, Methylrot, Voges-Proskauer, Kliegler-Agar
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Untersuchte Wasserproben
Bezeichnung Probe Erwartete Belastung mit E. coli/ Coliformen
TW Trinkwasser 0 in 100 ml
EL Elbe an der Fährstelle Kötitz gering
QW Quellwasser gering
BrW Brunnenwasser gering
PKA-ZL Zulauf Pflanzenkläranlage hoch
PKA-AL Ablauf Pflanzenkläranlage gering
KA-ZL Zulauf Kläranlage hoch
KA-AL Ablauf Kläranlage gering
BW Badeteich gering
TS Talsperre Malter; Badebereich gering
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Ergebnisse
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Quantifizierung von Coliformen nach dem MPN-Verfahren I
Wasserprobe BrW BaW TS AL-KA
Verdünnung
0ri 10 ml
0ri 1 ml
0.1 0.010ri 10
ml0ri 1 ml
0.1 0.01 ori 0.1 0.01 0.001 0.01 0.0010.000
10.000
01
MUG-Bouillon (+ = trüb)
++ ++ ++ ++ ++ + - -- -- ++ -- -- -- ++ ++ -- --
ENDO-Agar (+ = E.coli) ++ -- --
Tergitol-7-Agar (+ = E.coli) -- ++ -- -- -- --
nachgewiesene MO
E. coli Klebsiella (?)Citrobacter freundii
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Quantifizierung von Coliformen nach dem MPN-Verfahren II
Wasserprobe ZL-KA AL-PKA ZL-PKA EL
Verdünnung
0.001
0.0001
0.00001
0.000001
0.0000001
0.010.00
10.0001
0.00001
0.001
0.0001
0.00001
0.000001
0.0000001
0.010.00
10.0001
0.00001
MUG-Bouillon (+ = trüb)
++ ++ ++ +- -- ++ ++ + - -- ++ ++ ++ ++ -- ++ ++ ++ ++
ENDO-Agar (+ = E.coli)
++ ++ ++ -- ++ ++ -- -- - - - - - - - - -
Tergitol-7-Agar (+ = E.coli)
++ ++ ++ -- + + + - -- -- -- ++ ++
nachgewiesene MO
Coliforme
E. coli Klebsiella
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Coli-Titer
Wasserprobe Coli-Titer
Brunnenwasser 0,01
Badewasser 10
Talsperre 10
AL-Kläranlage 0,001
ZL-Kläranlage 0,000001
Al-Pflanzenkläranlage 0,0001
ZL-Pflanzenkläranlage 0,000001
Elbewasser < 0,00001
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Quantifizierung von Coliformen nach dem MPN-Verfahren (Wasserproben)
BrW BaW TS AL-KA ZL-KA AL-PKA ZL-PKA EL
MPN 70 0,62 0 2400 240000 6200 210000 70000
LL 0,1 500 50000 1000 61000
UP 3,8 11000110000
0 38000 730000
0,1
10000
1000000000
BrW BaW TS AL-KA ZL-KA AL-PKA
ZL-PKA
EL
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Quantifizierung von E. coli nach dem MPN-Verfahren
• Elbewasser• Mikrotiterplatte• Messung der
Fluoreszenz• MPN = 6.3• LL = 3.1• UL = 13
Verdünnungsstufe
Platz 0.1 0.01 0.001
1 0 0 0
2 1 0 0
3 0 0 0
4 1 0 0
5 1 1 0
6 2 0 0
7 1 0 0
8 0 0 0
9 0 0 0
11 0 0 0
12 0 0 0
13 1 0 0
14 0 0 0
15 0 0 0
16 0 0 0
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Membranfilterverfahren (NKS)
Tergitol-7-NKS
00,5
11,5
22,5
33,5
44,5
55,5
66,5
77,5
88,5
99,510
10,511
11,512
BW TW
Wasserproben
BW
: K
olo
nie
/ 1
ml
TW
: K
olo
nie
/ 1
00
ml
e.coli coliforme
Auf ENDO-NKS kein Nachweis von E. coli /Coliformen
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Vielen Dank für die Aufmerksamkeit!