observatii privind modificarea ficatului la puii de gaina in urma intoxicarii experiment ale cu...

31
''Observaţii privind ''Observaţii privind modificările histologice modificările histologice ale ficatului la puii de ale ficatului la puii de găină în urma intoxicării găină în urma intoxicării experimentale cu experimentale cu ochratoxina A'' ochratoxina A'' CANDIDAT, Roxana ANANIA ÎNDRUMĂTOR, ÎNDRUMĂTOR, Conf. Dr. Carmen Conf. Dr. Carmen SOLCAN SOLCAN

Upload: ananiaroxana

Post on 27-Jul-2015

300 views

Category:

Documents


3 download

TRANSCRIPT

Page 1: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

''Observaţii privind ''Observaţii privind modificările histologice ale modificările histologice ale ficatului la puii de găină în ficatului la puii de găină în

urma intoxicării urma intoxicării experimentale cu experimentale cu ochratoxina A''ochratoxina A''

CANDIDAT,Roxana ANANIA

ÎNDRUMĂTOR,ÎNDRUMĂTOR,Conf. Dr. Carmen Conf. Dr. Carmen SOLCANSOLCAN

Page 2: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Caracterele generale ale micotoxinelor

Structura chimică complexă;Molecule nepolare;Masa moleculară mică;Rezistenţă la acţiunea agenţilor fizici şi chimici;Toxicitate;Efecte asupra sistemelor biologice.

Page 3: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Ochratoxina AOchratoxina AMetabolit secundar elaborat de diferite mucegaiuri Metabolit secundar elaborat de diferite mucegaiuri

din genul Aspergillus şi Penicilliudin genul Aspergillus şi Penicilliu

Aspergillus ochraceus Penicillium viridicatum

Page 4: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Structura chimică a Structura chimică a ochratoxinei Aochratoxinei A

Page 5: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

FenilalaninaFenilalaninaAminoacid aromatic care se gAminoacid aromatic care se găăseseşşte te îîn n proteineproteinelele vegetale vegetale şşi animalei animale..

Organismul transformă fenilalanina în Organismul transformă fenilalanina în epinefrinepinefrină, dopamină şi norepinefrină, 3 ă, dopamină şi norepinefrină, 3 neurotransmiţători foarte importanţi.neurotransmiţători foarte importanţi.

Page 6: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Ochratoxina A se găseşte în natură în diferite suşe Ochratoxina A se găseşte în natură în diferite suşe de cereale, boabe de cafea, fasole şi fructe uscate;de cereale, boabe de cafea, fasole şi fructe uscate;

Este o toxină nefrotoxică cu proprietăţi Este o toxină nefrotoxică cu proprietăţi carcinogenice, teratogenice, imunotoxice şi carcinogenice, teratogenice, imunotoxice şi neurotoxice;neurotoxice;

Nefrotoxicitatea este datorată omologiei structurale Nefrotoxicitatea este datorată omologiei structurale a ochratoxinei cu fenilalanina;a ochratoxinei cu fenilalanina;

Alterează procesele care implică fenilalanina.Alterează procesele care implică fenilalanina.

Efectele biologice ale ochratoxinei A pot fi Efectele biologice ale ochratoxinei A pot fi prevenite prin suplimentarea cu fenilalanină sau cu prevenite prin suplimentarea cu fenilalanină sau cu alte substanţe analoage. alte substanţe analoage.

Ochratoxina A

Page 7: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Mecanismul de acţiune al ochratoxinei AMecanismul de acţiune al ochratoxinei A

Page 8: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Acţiunea biochimică a ochratoxinei AAcţiunea biochimică a ochratoxinei AOchratoxina A este absorbită parţial la nivelul stomacului,Ochratoxina A este absorbită parţial la nivelul stomacului, dardar principala cale de absorbţie se realizează la nivelul principala cale de absorbţie se realizează la nivelul intestinului;intestinului;

Prezintă o afinitate crescută pentru proteinele plasmatice Prezintă o afinitate crescută pentru proteinele plasmatice (aproximativ 90 % dintre proteine); (aproximativ 90 % dintre proteine);

Odată ajunsă în sânge ochratoxina A se leagă de albumina Odată ajunsă în sânge ochratoxina A se leagă de albumina serică;serică;

Inhibă sinteza proteinelor la nivelul ribozomilor din celule;Inhibă sinteza proteinelor la nivelul ribozomilor din celule;

Inhibarea sintezei ADN – ului şi ARN – ului determină Inhibarea sintezei ADN – ului şi ARN – ului determină ihibarea diviziunii celulare;ihibarea diviziunii celulare;

Reduce rezistenţa organismului faţă de alţi factori patogeni.Reduce rezistenţa organismului faţă de alţi factori patogeni.

Page 9: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Efectele ochratoxinei A Efectele ochratoxinei A la păsărila păsări

Acţionează asupra potenţialului Acţionează asupra potenţialului imunologic;imunologic;Creşte susceptibilitatea;Creşte susceptibilitatea;Determină o rată scăzută a creşterii;Determină o rată scăzută a creşterii;Scăderea procentului de limfocite T din Scăderea procentului de limfocite T din circulaţia sanguină;circulaţia sanguină;Reduce concentraţia totală a proteinelor Reduce concentraţia totală a proteinelor din ser, a albuminei şi globulinei.din ser, a albuminei şi globulinei.Diminuează activitatea enzimelor glicolitice Diminuează activitatea enzimelor glicolitice şi creşte activitatea enzimelor şi creşte activitatea enzimelor gluconeogenice. gluconeogenice.

Page 10: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Cercetări propriiCercetări proprii

Investigaţiile s-au efectuat pe 60 pui de găină, Investigaţiile s-au efectuat pe 60 pui de găină, începând cu varsta de o zi care au fost împărţiţi în 4 începând cu varsta de o zi care au fost împărţiţi în 4 loturi: loturi:

- 1 lot martor (LM);- 1 lot martor (LM); - 3 loturi experimentale (LE)- 3 loturi experimentale (LE)

LE1- s-au administrat 1ppm ochratoxina A;LE1- s-au administrat 1ppm ochratoxina A;LE2- s-au administrat 5ppm ochratoxina A;LE2- s-au administrat 5ppm ochratoxina A;LE3- s-au administrat 20ppm ochratoxina A;LE3- s-au administrat 20ppm ochratoxina A;Puii au primit hrană şi apă indemnă de micotoxine, Puii au primit hrană şi apă indemnă de micotoxine, ad libitum, au fost crescuţi la sol, pe aşternut ad libitum, au fost crescuţi la sol, pe aşternut permanent.permanent.Prelevarea probelor s-a efectuat la 7zile, 14zile şi Prelevarea probelor s-a efectuat la 7zile, 14zile şi 21de zile, când au fost sacrificaţi câte 5 pui din 21de zile, când au fost sacrificaţi câte 5 pui din fiecare lot. fiecare lot. Au fost recoltate fragmente de ficat şi rinichi, fixate Au fost recoltate fragmente de ficat şi rinichi, fixate în formaldehidă 10%, incluse la parafină, secţionate în formaldehidă 10%, incluse la parafină, secţionate şi colorate prin coloraţiile HEA, PAS, Papenheim. şi colorate prin coloraţiile HEA, PAS, Papenheim.

Page 11: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Rezultate obţinuteRezultate obţinute

Ficatul la puii din LM, la toate cele 3 categorii Ficatul la puii din LM, la toate cele 3 categorii de vârstă, prezintă lobuli hepatici nedelimitaţi de vârstă, prezintă lobuli hepatici nedelimitaţi de septe conjunctive, identificaţi după prezenţa de septe conjunctive, identificaţi după prezenţa venulei centrolobulare şi a spaţiilor Kiernnan în venulei centrolobulare şi a spaţiilor Kiernnan în vecinătatea acesteia. vecinătatea acesteia.

Hepatocitele, au formă poligonală, prezintă 1 Hepatocitele, au formă poligonală, prezintă 1 sau 2 nuclei, nucleolaţi. Rar, în citoplasma sau 2 nuclei, nucleolaţi. Rar, în citoplasma celulelor se pot observa vacuole colorate celulelor se pot observa vacuole colorate deschis, care sunt de fapt lăcaşul picăturilor deschis, care sunt de fapt lăcaşul picăturilor mici de lipide, care au fost dizolvate de solvenţii mici de lipide, care au fost dizolvate de solvenţii organici prin metoda secţionării la parafină organici prin metoda secţionării la parafină

Page 12: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Ficat, la pui de 7 zile din lotul martor. Col PAS x Ficat, la pui de 7 zile din lotul martor. Col PAS x

200200 hepatocit

Page 13: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Lotul experimental 1Lotul experimental 1Simptomele clinice comune, observate la puii din Simptomele clinice comune, observate la puii din loturile experimentale, sunt reducerea creşterii în loturile experimentale, sunt reducerea creşterii în greutate, scăderea apetitului, reducerea alimentelor greutate, scăderea apetitului, reducerea alimentelor consumate, stagnare în creştere, slăbire şi diaree. consumate, stagnare în creştere, slăbire şi diaree. Modificări macroscopice ale organelor interne se Modificări macroscopice ale organelor interne se caracterizează prin creşterea în volum a ficatului, şi caracterizează prin creşterea în volum a ficatului, şi reducerea organelor limfoide. reducerea organelor limfoide. La puii din LE1, la vârsta de 7 şi 14 zile ficatul prezintă La puii din LE1, la vârsta de 7 şi 14 zile ficatul prezintă leziuni de hepatosteatoză caracterizată prin hepatocite leziuni de hepatosteatoză caracterizată prin hepatocite cu picături de lipide mai frecvente decât la LM.cu picături de lipide mai frecvente decât la LM. În zone reduse alături de picăturile de lipide se pot În zone reduse alături de picăturile de lipide se pot observa şi mici depozite de glicogen. observa şi mici depozite de glicogen. În perenchimul hepatic au fost surprinse şi aglomerări În perenchimul hepatic au fost surprinse şi aglomerări limfoide mici. Este cunoscut faptul că păsările nu au limfoide mici. Este cunoscut faptul că păsările nu au ganglioni limfatici. ganglioni limfatici. Aglomerările limfoide sunt prezente în majoritatea Aglomerările limfoide sunt prezente în majoritatea organelor, pentru a compensa funcţia ganglionilor organelor, pentru a compensa funcţia ganglionilor limfatici.limfatici.

Page 14: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Spaţiile portobiliare prezintă o proliferare a epiteliului Spaţiile portobiliare prezintă o proliferare a epiteliului canalelor biliare iar venulele au lumen larg, mare canalelor biliare iar venulele au lumen larg, mare neregulat, caracteristic vaselor ectaziate.neregulat, caracteristic vaselor ectaziate.Degenerarea hepatocitelor sub acţiunea ochratoxinelor Degenerarea hepatocitelor sub acţiunea ochratoxinelor se realizeză prin inhibarea activităţii proteinkinazei, se realizeză prin inhibarea activităţii proteinkinazei, iniţiatoare enzimatică a sistemului de fosforilare a iniţiatoare enzimatică a sistemului de fosforilare a glicogenului.glicogenului.Ochratoxina afectează în primul rând adenozin 3' – 5' Ochratoxina afectează în primul rând adenozin 3' – 5' monofosfat ciclic (AMPc) dependent de proteinkinază. monofosfat ciclic (AMPc) dependent de proteinkinază. Sistemul AMP ciclic dependent de proteinkinază care Sistemul AMP ciclic dependent de proteinkinază care iniţiază cascada fosforilării glicogenului, când iniţiază cascada fosforilării glicogenului, când funcţionează normal determină glicogenoliză. funcţionează normal determină glicogenoliză. Aceste rezultate confirmă criteriile morfologice ale Aceste rezultate confirmă criteriile morfologice ale glicogenozei prezentă în boala de stocare a glicogenului glicogenozei prezentă în boala de stocare a glicogenului de tip X şi rezultă ca o deficienţă a AMPc dependent de de tip X şi rezultă ca o deficienţă a AMPc dependent de preoteinkinază. preoteinkinază. În condiţii fiziologice această cascadă enzimatică este În condiţii fiziologice această cascadă enzimatică este ţinta unor hormoni ca glucagonul, şi epinefrina care ţinta unor hormoni ca glucagonul, şi epinefrina care stimulează adenilciclaza implicată în producerea stimulează adenilciclaza implicată în producerea mesagerilor secundari AMPc.mesagerilor secundari AMPc.

Page 15: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Ficat de pui în vârstă de 7 zile, din lotul Ficat de pui în vârstă de 7 zile, din lotul experimental 1. Col. PAS x 100.experimental 1. Col. PAS x 100.

Aglomerare de limfocite

Page 16: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Ficat, la pui de 14 zile din LE1. Col PAS x 200Ficat, la pui de 14 zile din LE1. Col PAS x 200

Hepatocit cu acumulare de lipide

Page 17: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Ochratoxinele determină perturbarea Ochratoxinele determină perturbarea homeostaziei calciului, proceselor de homeostaziei calciului, proceselor de peroxidare a lipidelor, inhibă activitatea peroxidare a lipidelor, inhibă activitatea mitocondriilor şi a ARN t sintetazei.mitocondriilor şi a ARN t sintetazei.Este posibil ca ochratoxina să nu inhibe direct Este posibil ca ochratoxina să nu inhibe direct fenilalanil – ARN t sintetaza prin competiţie cu fenilalanil – ARN t sintetaza prin competiţie cu fenilalanina din structura ochratoxinei A. fenilalanina din structura ochratoxinei A. Totuşi ele inhibă formarea Aminoacil ARN t Totuşi ele inhibă formarea Aminoacil ARN t sintetazei în mod direct prin inhibiţia producerii sintetazei în mod direct prin inhibiţia producerii de ATP în mitocondrii, necesar activării de ATP în mitocondrii, necesar activării aminoacizilor. Inhibă astfel şi sinteza aminoacizilor. Inhibă astfel şi sinteza proteinelor.proteinelor.Ficatul puilor în vârstă de 21 zile din LE1 Ficatul puilor în vârstă de 21 zile din LE1 prezintă o cantitate mai mare de glicogen în prezintă o cantitate mai mare de glicogen în hepatocite responsabil de fenomene hepatocite responsabil de fenomene degenerative.degenerative.Hepatocitele sunt mai mari, iar glicogenul este Hepatocitele sunt mai mari, iar glicogenul este polarizat. polarizat.

Page 18: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Ficat, la pui în vârstă de 21 zile din LE1. Degenerarea Ficat, la pui în vârstă de 21 zile din LE1. Degenerarea hepatocitelor cu glicogen. Col PAS x 400hepatocitelor cu glicogen. Col PAS x 400

Canal biliar

Venulă

Hepatocit cu acumulare de lipide

Page 19: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Lotul experimental 2Lotul experimental 2

Puii din LE2, care au primit 5ppm, Puii din LE2, care au primit 5ppm, prezintă leziuni degenerative induse de prezintă leziuni degenerative induse de stocarea glicogenului la 7, 14, şi 21 de stocarea glicogenului la 7, 14, şi 21 de zile.zile.

Hepatocitele sunt încărcate cu glicogen, Hepatocitele sunt încărcate cu glicogen, care în urma colorării s-a deplasat către care în urma colorării s-a deplasat către unul din polii celulelor (fenomen numit unul din polii celulelor (fenomen numit spălarea glicogenului).spălarea glicogenului).

Capilarele sinusoide şi venulele sunt Capilarele sinusoide şi venulele sunt ectaziate.ectaziate.

Page 20: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Ficat de pui în vârstă de 7Ficat de pui în vârstă de 7 zile, LE2. Col. PAS x 60zile, LE2. Col. PAS x 60 venulă

Page 21: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Ficat de pui în varstă de 7 zile, LE2. Col PAS x Ficat de pui în varstă de 7 zile, LE2. Col PAS x

6060

Zonă de degenerare

Celule cu necroză, necrobioză, moarte celulară

Page 22: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Ficat de pui în vârstă de 14zile, LE2. Ficat de pui în vârstă de 14zile, LE2. Hepatocite lizate care alternează cu Hepatocite lizate care alternează cu

hepatocite încărcate cu glicogen. Col. PAS x hepatocite încărcate cu glicogen. Col. PAS x

6060

Page 23: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Ficat, la pui în vârstă de 21 zile din LE2. Ficat, la pui în vârstă de 21 zile din LE2. Degenerarea hepatocitelor cu glicogen. Col Degenerarea hepatocitelor cu glicogen. Col

PAS x 400PAS x 400

Page 24: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Lotul experimental 3Lotul experimental 3

Hepatocitele puilor din LE3 la toate cele 3 categorii Hepatocitele puilor din LE3 la toate cele 3 categorii de vârstă prezintă fenomene de degenerescenţă mai de vârstă prezintă fenomene de degenerescenţă mai accentuată decât la puii din LE2. accentuată decât la puii din LE2. Sunt zone de hepatocite anucleate, altele necrozate Sunt zone de hepatocite anucleate, altele necrozate care alternează cu hepatocite nucleate încărcate cu care alternează cu hepatocite nucleate încărcate cu glicogen.glicogen.Hepatocitele prezintă modificări nucleare, Hepatocitele prezintă modificări nucleare, reprezentate de picnoză, cariorexă, carioliză, reprezentate de picnoză, cariorexă, carioliză, indicatori ai morţii celulare. indicatori ai morţii celulare. În spaţiile Kiernnan venulele sunt dilatate iar În spaţiile Kiernnan venulele sunt dilatate iar canalele biliare prezintă fenomene proliferative canalele biliare prezintă fenomene proliferative epiteliale.epiteliale.Perivascular apar uneori leucocite, sub forma unor Perivascular apar uneori leucocite, sub forma unor aglomerări reduse.aglomerări reduse.

Page 25: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Ficat de pui în vârstă de 7zile, LE3 Col. PAS x Ficat de pui în vârstă de 7zile, LE3 Col. PAS x 60.60.

venulă

Page 26: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Ficat de pui în vârstă de 7zile, LE3. Col. Ficat de pui în vârstă de 7zile, LE3. Col.

PAS x 100PAS x 100

Page 27: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Ficat de pui în vârstă de 12zile, LE3. Col. PAS Ficat de pui în vârstă de 12zile, LE3. Col. PAS

x 100x 100..Infiltraţie perivasculară

Celulă Kupffer

Page 28: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Ficat, la pui în vârstă de 14 zile din LE3. Degenerarea Ficat, la pui în vârstă de 14 zile din LE3. Degenerarea

hepatocitelor cu glicogen. Col PAS x 400hepatocitelor cu glicogen. Col PAS x 400

Page 29: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Ficat, la pui în vârstă de 21 zile din LE3. Zone Ficat, la pui în vârstă de 21 zile din LE3. Zone de degenerare intensă hepatică. Col PAS x 400de degenerare intensă hepatică. Col PAS x 400

Celule cu necroză, necrobioză, moarte celulară

Page 30: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Ficat, la pui în vârstă de 21 zile din LE3. Canal Ficat, la pui în vârstă de 21 zile din LE3. Canal biliar cu epiteliul proliferat. Col PAS x 400biliar cu epiteliul proliferat. Col PAS x 400

Canal biliar hipertrofiat

Page 31: Observatii Privind Modificarea Ficatului La Puii de Gaina in Urma Intoxicarii Experiment Ale Cu Ochratoxina

Concluzii Concluzii

La puii din LE1, la vârsta de 7 şi 14 zile ficatul La puii din LE1, la vârsta de 7 şi 14 zile ficatul prezintă leziuni de hepatosteatoză prezintă leziuni de hepatosteatoză caracterizată prin hepatocite cu picături de caracterizată prin hepatocite cu picături de lipide mai frecvente decât la LMlipide mai frecvente decât la LMPuii din LE2, care au primit 5ppm, prezintă Puii din LE2, care au primit 5ppm, prezintă leziuni degenerative induse de stocarea leziuni degenerative induse de stocarea glicogenului la 7,14, şi 21 de zileglicogenului la 7,14, şi 21 de zileHepatocitele puilor din LE3 la toate cele 3 Hepatocitele puilor din LE3 la toate cele 3 categorii de vârstă prezintă fenomene de categorii de vârstă prezintă fenomene de degenerescenţă mai accentuată decât la puii degenerescenţă mai accentuată decât la puii din LE2. Sunt zone de hepatocite anucleate, din LE2. Sunt zone de hepatocite anucleate, altele necrozate care alternează cu hepatocite altele necrozate care alternează cu hepatocite nucleate încărcate cu glicogen.nucleate încărcate cu glicogen.