국산업 생 회지 권13 3 월(2003 12 )J Korean Soc Occup Environ Hyg 2003;13(3):

일 월 일 채택일 월 일2003 10 20 , 2003 12 19： ：

신 자 울 동구 행당동 번지 양 병원 산업 과( 17‡ ：

Tel 02-2290-8998(7) E-mail hykim@hmc.hanyang.ac.kr)： ：

서울시 일부 냉각탑중 레지오넬라의동정방법별 비교와 영향인자 연구

김기 ‡ 김 신 재철 수진 김 욱⋅ ⋅ ⋅ ⋅ 1) 태열⋅ 2) 원⋅ 3) 철민⋅ 4)

양 병원 산업 과 국생명공 연구소⋅1)

국립 경연구원⋅2)

양 병원 진단검사 과⋅3)

양 경 산업 연구소4)

Key-Young Kim‡ Yoon-Shin Kim Jae-Chul Song Su-jin Lee Sung-Uk Kim⋅ ⋅ ⋅ ⋅ 1)

Tae-Youl Choi2) Won-Seok park⋅ 3) Chul-Min Lee⋅ 4)

Department of Occupational medicine, Hanyang University Medical Centerkorea Research Institute of Bioscience and Biotechnology1)

National Institute of Environmental Research2)

Department of Laboratory Medicine Hanyang University Medical Center3)

Hanyang University Institute of Environmental and Industrial Medicine4)

In order to prevent and control Legionellosis outbreaks,

we determined level of contamination with Legionellae and

the effects on Legionella spp. of the cooling towers in Seoul

City. This study was carried out to compare the Legionella

spp. for 68 samples of cooling tower by conventional culture

method with there samples by Multiplex PCR(polymerase

chain reaction) from July to August in 2002. Also it was

analyzed the distribution of Legionella subtypes, and

evaluated molecular typing methods discrimination function

and feasibility, using a arbitrarily primed(Ap)-PCR with M13

reverse primer.

The detection positive rate of Legionella spp. was

22(32.3%) by conventional culture method and 33(48.5%) by

multiplex PCR method of 68 samples. Multiplex PCR

amplification showed 100% of positivity for 22 samples.

Out of 22 Legionella isolates, 19 were identified as Leg-

ionella pneumophilla serogroup I and 3 as Legionella pneu-

mophilla . Molecular analysis of 30 Legionella pneu- mo-Ⅳ

philla serogroup I showed 5 subtypes (Ia in isolates 17, Ib, 2;

Ic, 7; ,2 ; , 2) and Legionella pneumophilla sho-Ⅱ Ⅲ Ⅳ

wed(VI in isolates 2, 1) by Ap-PCR. Most of the effectives except turbidityⅤ

seemed not to be significant with Legionella species

isolation and it was significant to do not disinfect in mul-

tiplex PCR result.This results suggest that PCR method could be con-

tributed to detection of Legionella spp. Also it showed that

the Ap-PCR method could be used as a rapid and repro-

ducible tool in tracking legionellosis outbreak.

Key Words Legionella pneumophilla;： Cooling tower; legio-

nellosis; Conventional culture; Serogroup;

multiplex PCR; The effectives; Ap-PCR

2 신 송재철 이 진 욱 태열 원 이철민⋅ ⋅ ⋅ ⋅ ⋅ ⋅ ⋅

론.Ⅰ

산업사회 격히 함에 라

차 편 고 락 삶 추구 는

욕구가 증 고 있고 근에 건축

부분에 는냉난 효 증

시키 여러 종 법들이 시도

고 있 나 부분 집 식 시스,

냉난 인 어

고 있다.

여름철 냉각탑 는 부분 이 20

상승 며 는 후이고30 , pH 8.0 ,～ ℃

원생생 이 102 10～ 3 도/100 (Fields et㎖

가 어 지 라균등이다량al, 1993)

증식 에 합 조건이다 부.

분 냉각탑 외부 공 에 노출 어 있

며 냉각탑 도상승과태양,

등 인 여 함량이 높 진,

상태에 그람 간균 등 미

생 증식조건에도 리 다 우리나라.

다 이용시 등에 냉각 를 얻,

해 시간 동 가동 고 있어 염12 24～

냉각 가 주 염원 말 통해

계 병원균이 침 여 질병,

시키는 다양 사 (Lester, et al,

가 보고 고 있1980; Leoni, et al, 2001)

다 가장 인 사 는 지 라균.

감염(Legionellae) (강명 등, 1989).

이 균 자연계 강 토양 염, , ,

경 등자연 경과냉각탑 가습,

샤워 지 도 지 장 탱크, , , ,

용 등에 존재 는 인 그람

간균 이다(gram negative bacilli) .－

지 라균 주 병경 는 용

에 해 가 니라 에어컨 시스,

과 같 냉 조 장 상태aerosol

있는 이 균 입함 병

다 민자 지 라가일 키는( , 1995).

질 주 사 갖는15-30%

폐 재향군인병(Legionella pnemo-

phila 과독감양serogroup I) 상 나타내는

폐 인폰티 열(Pontiac fever)

가지 양상 생강명 등( , 1989;

신, 1995; OSHA Technical Manual,

는 경우가 부분이며 국내에2002) ,

도이미집단 생사 등( , 1985)

가 보고 었다 특히 이 질병 노약자. ,

만 폐질 자 면역 능이 자,

등에게 이 어 료를 지 못

경우 명 이 있는 질 경(

등 이나 독감 이러스나 역, 1988)

이러스처럼 감염 사람 부 직

지는 는다고 다 민자( ,

조규 등1994; , 1997).

편 매개 는 종 법3

염병인이 균 지내 사멸

균 좋 양 이용 다고

다 이외에도 철 이 지 라균. (Fe)

장 진시키며 탁도 등도 지, pH,

라균 생장 조건에 향 미 는

것 있고 미 엔도( , 1996),

톡신 존재가능 도높 편이다.

지 라균 염소나 그 외 다른 여러

종 약품 입에도 불구 고 거 사

멸 지 는것 있 며 재,

냉각탑 지 라균 거 목

국내에 는 염소처리 고 살균법 자외, ,

조사 존처리 구리 이 법등, , -

이사용 고있 나 어느 법도 지,

라균 거에는 벽 지 것

인식 고 있다국립보건원( , 2002).

재 우리나라에 경 염원 부

지 균 분리 동 에는 주

고 인 양 법 용 택 지를

사용 여 양 후 청 집

이용 고 있다 그러나(sero grouping) .

일 양 검출법 양 후 검출단계

지 소 시간이상이 소요 며 균종72 ,

동 에 요 생 검사 청

동 지 포함 면 어도 일이 소4 5～

요 고 있는 실 이다.

근에는 자 염원이나 생원

부 른 시간 내에 지 라균

검출 고민감도를높이(Nele et al, 2001)

분자생 근 법 합

효소 연쇄 (polymerase chain reaction,

이용 법이 리 사용 고있PCR)

다 이 에 도 지 라균속 검출.

목 는 근에 시도 고 있는 mul-

과 분리tiplex PCR Legionella pnemo-

phila 신속 게serogroup subtypingⅠ

동 있고 역 조사 시 Ap-PCR

(arbitrarily primed polymerase chain re-

법이 별분 법 도action)

입 어 용 고 있다(Adamsson et al,

2000).

Multiplex 를 이상PCR primer

사용 는 법 존 단일, primer

를 사용 는 법에 해 특이PCR ,

인 자 증폭 지 있어 지

라증 검출에 합 법이라고

보고 고있다 이 법(Miller et al, 1993).

는 소 내에 존재 는 극미량1ml

를검출 여 개 균 지DNA 10 100～

도검출 있 도 민감도가높다

고 있다 권범 등(Field, 1997; ,

사 에 염 열1998). AP-PCR

보가 없어도 부 복DNA

단편 동시에증폭시킬 있DNA

에 사(Welsh & McClelland et al, 1990)

람과 경 부 분리 균주 역

조사 시 청 동 신속 보 과

구별 분자역

조사 도구 새 운 법

히 연구 고 있다( Grattard et al, 1996;

이 경 등Cynthia et al, 1997; , 2001).

라 본 연구에 는 울시 일부

건 에 냉각탑 (cooling tower

에 분리 지 라균 상water)

동 법별 양 지

라균 생 에 미 는 향인자에 해

시간 가동 고 에는 가동 지 는12

곳과 시간 계속 여 가동 는 곳 각24

각 구분 여 조사 다 이 에.

어 졸 특 에 른 근원 추

여 냉각탑 주변과 공조 시스

내부 실내에어컨주변에 실내공

에 지 라균 포집(airborne)

각각 시도 며 다른 편 는,

고 인 일 양법과 검출 법PCR

행 여각각 양 평가 여 PCR

법 신속 검출 용 검토

고 분리, Legionella pneumophila 에

신속 동 법 법 사Ap-PCR

용 여 분포를 내

어 돌 인 지 라균주 감염원

규명과 진단 책 자

료를 공 고자 다 냉각탑,

울시 일부 냉각탑 지 라 동 법별 향인자 연구 3

에내에존재 는 Legionella 검출에

향 미 는 염인자 냉각탑 운용

시간 태 리상태 소독실시 등이․ ․

지 라균 양 에 미 는 향인자

를규명 여 향후국내냉각탑 실태,

지 라균 리 자료

용 목 실시 다.

연 대상.Ⅱ

연 대상 기간1.

지 라균 양 해 습도

이높 월 일에 월 일 지7 30 9 15

울시내 동구 주변에 임, 68

개 건 에 냉 가동시약, 1.5ℓ

냉각탑 를 채취 다.

연2.

약 냉각탑 를 채취 여 지1.5ℓ

라균 일 양과 분 해PCR

처리 목 채취 며 일부는,

염인자 향인자 분 여

를 개 이상 동일장소50ml conical tube 3

에 채취 여 사용 다.

실내 공 지 라균 말

여부를 인 해 공조시스 이 가

동 고 있는 실내 냉 에어컨

주변지 높이에 공 시료를채1.5m

취 다 이 사용 공 시료 포집.

는 에 천oxoid sampler(M.A.Q.S. )Ⅱ

지 택 지인(BAP; blood agar plate),

BCYE- (buffered charcoal yeastextract-α α

이 천 지-ketoglutarate : BCYE- )α

택 지 지 라균 경 에 합

택 지인 지DGVP (Bromthymol-

blue + Bromcresol purple/dye, glycine, pol-

등 이 지를이용ymixin B : DGVP )

며 공 는 각각 를, 1000 (120 LPM)ℓ

채취 다.

상건 특(1)

울시 동구 주변 심 임

다 이용시 태를 가진

건 심 주 낮시간만가동

는사 실 소규모상가등 시간냉, 12

를 가동 는 군 과 시간(N=32) (group) 24

계속 여가동 는군( N=36) (group)

병원 등 심 다, .

냉각탑 일 염 인자(2)

냉각탑 염인자 에 탁도는

탁도계(HACH 2100P Turbidmeter, USA),

잔 염소량 잔 염소 계(HACH

pocket ColorimeterTM

는, USA), pH pH

meter(CE 를, ORION 420A, Bosoton, USA)

사용 다 속 가운데 철 구. (Fe),

리 납 농도는 원자 도계(Cu), (pb)

(Atomic absorption spectrometer, Perkin-

분Elmer 3300, Norwalk, USA)

다 엔도톡신 용 인. (Kinetic

Microplate Reader(Vmax ; Molecular Devi-

사용ces Corp, Menlo Park. Calif. USA)

다.

냉각탑 특 시스(3)

본연구 개냉각탑 구조 식68 ,

공 름에 구분 열 달 식 소독, ,

여부 그리고 건 내 냉각탑 리함

에 있어 용역 자체 리 등 조사,

후 지 라 일 양 결과, PCR

법 검출결과에 향 조사

다.

(4) 내독소엔도톡신 처( : endotoxin)

리 분

그람 균들이 생(Gram negative)

는 내독소이 엔도톡신는 냉각탑( )

원 인 벌크시료를 과sonication

거 지 고 에 분 동1,000rpm 15

원심분리 후 상 사용 며 공,

시료는 카 트 여과지를 원심분

리용 튜 재질(50 ml, Polypropylene )

겨 처리를 시작 다. LAL(Limulus

를각각 튜Amebocyte Lysate)water 15ml

에 고 4.8 KHz sonicator bath(Branson

에 시간 동 추출 다 심8510) 1 .

분리용 튜 를 원심분리 (Hanil Union

에 고 에 분 동 원55R) 1,000rpm 15

심분리 다 심분리 상등 일.

량약 도 취 여엔도톡신( 2 ml )

분 시료 사용 다.

시료 충 조시 시

료는 사에 조Endosafe 10ng/vial

품(Control Standard endotoxin, E. coli

과055: B5, Lot #EX14032) LAL reagent

이용 여 조water(Lot #99732003)

다 품이 들어있는 병에. 10ng

를 첨가 여LAL water 3.6ml 2.7778 ng/ml

엔도톡신 분 용 원 (stock solution)

조 며 원 농도는,

산시 이었Endotoxin Unit 50 EU/ml

다 원 단.(1ng = 18EU). 10

계별 희 여 시료(standard solu-

를 조 며 시료 농도범tion) ,

는 에 다0.01 EU/ml 100 EU/ml .

편 모든시료에첨가 는 충 용,

개2 LAL(KTA2 에No 1197 50-test)

각각 든 를 첨가, 5.2ml specific buffer

여 조 다 공시료 용 처리. , ,

시료 를 에100 96 well(Costar 3599)㎕

마이크 펫 후 용

포함 모든 시료는 (vortex mixer)

동 강 게 합 며 시료30 ,

용 자 구 라스틱 용 는 멸균

거나 멸균용 재질 사용 다 동욱(

등, 2001).

엔도톡신 분①

엔도톡신 분 Kinetic Microplate

Reader(Vmax; Molecular Devices Corp.,

행 다Menlo Park. Calif.) . 96 well

내 에 분동 미incubator 37 , 15℃

리 엔도톡신 시킨 후 96well

꺼낸 다 개 마이크 펫8 (Biowhi-

충 모든 시료ttaker) 100㎕

에 첨가 고 각각 에96 well 340nm

분 동 마다 에 도달75 3 OD

는데 소요 는 시간 분 다.

값 각각 과OD “0.03” “0.05"

구분 여 분 다 검량 상

4 신 송재철 이 진 욱 태열 원 이철민⋅ ⋅ ⋅ ⋅ ⋅ ⋅ ⋅

계 가 큰 값 택 여 엔도톡신OD

양 량 다 동욱 등( , 2001).

통계는 통계 그램SAS (ver. 8.1)

이용 고 향인자 등, Sapiro-Wilk

를 변 는 분산분test t-test ,

다 분(ANOVA) (multi-com-

실시 며 변 간미parison test) ,

는 향 상 분 회귀(Correlation)

분 실시 다(Regression) .

분3.

냉각탑 일 양①

채취 냉각탑 는 양 여과 에 여과

지 를통과시 균 모 후여과(0.2 )㎛

지를 잘게 잘라 생리식염 에 부20ml

시 다 지 라균 양 여. ,

부 취 여 에 분0.1ml 50 30℃

간열처리 후 천 지에각, BCYE-α

각 를각각획 도말 고0.1ml 0.01ml

종 여 37 , 5% CO℃ 2 에 일간5 7～

양 다 양조건 이고습.

가 많 잘 증식 므 내부 고습,

도를 지 해 별도 에

어고습 지시 다 일째부 자란. 3

집락 회 색 약간 명감이 있고 습,

집락 특 신 냄새가 있 면

지 라균 추 다 독립집락.

여러개를 천 지 천BCYE-α

지 에 계 양 고 그람염색(BCP)

다 등 천( , 1999). BCYE-α

지에 고 천 지 에(BAP)

지 는 그람 간균 지

라균 추 고 그람 염색, ,

등BCYE , oxidase, catalase, urease

생 상 이용 다.

생 검사②

천 지에 종 지상에BCYE-α

집락 떼어 내여 그람염색 실시

후 인그람 간균인것 차, 1

천 지에 양 여 증식 지

균주를 상 동 간단 생

감별 실험 실시 다.

oxidase test: 0.5% tetramethyl paraphy-

용nylenediamine dihydrochoride

히고 여 에 시험균 집락 습식도말

여 이내에청색이 는것 양10

다.

시험균집락 멸균 슬catalase test :

라이드에 습식도말 후 과산3%

소를 떨어뜨리고 포가 생 는 것 양

다.

에 시험균Indole test : tryptone broth

식균 고 시간 양후24 48 Kovac`s～

reagent (amyl alcohol 150ml, P-dimethyla-

minobenzaldehyde 10g, concentrated hydro-

고 분 이chloric acid 50ml) 0.5ml

나 색 나타내는 것 양

다.

지 를 가 분해urease test : urea (urea

여 ammonia CO2가 어 지가

카리 어 지시약에 해phenol red

분 색 변색 니들 균) (needle)

시간 양후 분 색 나타내는것24 ,

양 다(Chemical Micro-

biology, 1995).

청 분 (Sero Grouping)③

분리 지 라 균주를 분리․

여 양 후, serotying kit(Seiken,

를 이용 여 청 구분 다Japan) .

균 특 과 생 특 에 해

지 라균 분리 시험 균주

그룹 별 분 는 다 과 같이 실시

다. 생리식염 에 시험균 고농도가

도 탁시키고 에 시간 는100 1℃

에 분간가열처리 후각칸에120 15℃

항 청 울 떨어뜨리고 마지막

칸에는 생리식염 를 떨어뜨 다 각 칸.

에항원부 울 떨어뜨린다

항원 과항 청 잘 합 고 슬라,

이드 라스를 뒤 울여 집

를 찰 며 이 조군 집,

도 동시에 찰 여 생리식염 항

원 에 자가 집이 일어나지

고 항 청항원 에 분 이내에- 1

강 집 일 키는 청

청그룹 인 다(typing group) (

등, 1999).

합효소 연쇄 분(PCR)④

일 양과 동일 게 처리 시료를

이용 여 는, Multiplex PCR (BIO-RAD

Gene cyclerTM

품 분, USA)

며, AP-PCR (Perkin-Elmer 9600, USA)

각각 사용 다, .

냉각탑 분①

분 해상 법 처리PCR

냉각 원 를 취 여 에1ml 4℃

분간 원심분리 여 상12,000rpm 20

거 고 침 를취 여, 100㎕

사용 다.

공 시료 분②

택 지인 천 지BCYE- , DGVPα

지를 사용 여 실내 공조 시스,

에어컨 주변에 포집 시료를 이용

여 Legionella균 검출가능 여부를조

사 다.

③다 합효소연쇄 (Multiplex PCR)

는모든 지 라균종에공통Primer

존재 는 자에5S-rRNA

래 5S-1(5'TCT-TGG-CGA-CTA-TAG-

CGA-TTT 3'), 5R-2(5'ATC-CTG-GCC-

과ATG-ACC-TAC-TTT 3') Legionella

pneumophila 청군에특이 자mip

에 래 mip-X(5' GAT- GTT-ATT-

CCG-GAA-GCA-ATG 3') , mip-Y(5'TTG-

CAA-AGC-TTC-TGT-CCA-TCC 3')

부분 합 고 동시에 사,

용 는 시행 여Multiplex PCR 118bp

증폭 이생 도 다383bp .

는 경 침Template 50 pro-㎕

를 함 충 처리 여te-nase-K

직 사용 는 데 침 에 50㎕

가 여 재부 시키고Tris-HCl(pH 8.0)

를첨가 여잘lysozyme(100mg/ml)5㎕

합 후 에 분간 다 여37 30 .℃

에 충100 K- [(100mM Tris-HCl㎕

울시 일부 냉각탑 지 라 동 법별 향인자 연구 5

(pH8.0), 1mM EDTA(pH 8.0), 1% Tween

20(wt/vol)] 2 proteinase K(20mg/ml)㎕

를가 고 에 시간동 시킨55 2℃

다 분간 끓여 를 불, 10 proteinase K

며 에 분간 원심, 12,000 rpm 2

분리 뒤상 를취해10 template㎕

사용 다.

에PCR template 10 10×PCR㎕

충 5 , 10mM dNTPs 1 , 20 M㎕ ㎕ μ

각primers(5R-1, 5R-2, mip-X, mip-Y) 1 ,㎕

0.5U Taq polymerase(Boehringer Mann-

당량 증 를 가heim, Germany)

여 체가 게 조 후50 DNA㎕

를 사용Thermal Cycler (Bio-Rad, USA)

여 행 다 조건 에PCR . 94℃

분 동 시킨 후 에4 denaturation , 94℃

분간 에 분간1 denaturation, 56 1℃

에 분간annealing, 72 2 extension 35℃

회 복 후 종 에, extension 72℃

분간시행 다 종료후 를10 . 10㎕

취 여 에 동1.5% agarose gel

고 염색 여ethidium bromide UV

에illuminator Polaroid 667 film

다 염 소. PCR

여 검체 조작과 시약 는 각각

분리 에 시행 고 각 마다

지 라 균주 가 외DNA

조를 같이 포함시 다.

polymerase(Boehringer Mannheim, Germ-

당량 증 를 가 여 체any)

만든 후50 DNA Thermal Cycler㎕

를 사용 여 시행(Bio-Rad, USA) PCR

다 조건 에 분간 회. 94 4℃

후 에 분간denaturation , 94 1 dena-℃

에 분간turation, 56 1 annealing, 72℃ ℃

에 분간 회 복 후2 extension 35 ,

종 에 분간시행extension 72 10℃

다 종료 후 를 취 여. 10 1.5%㎕

에 동 고agarose gel ethidium

염색 여 에bromide UV illuminator

다Polaroid 667 film .

염 소 여검체PCR

조작과 시약 는 각각 분리 에

시행 고 각 마다 지 라균

가 외 조를 같이 포함시DNA

다 권범 울시보건 경연구( , 1998;.

원, 2000)

Ap-PCR (Arbitrarily primed - PCR )④

특이 인 를Ap-PCR primer DNA

내 임 염 열에 결합시 증폭시

키는 법 신속 고 간편 다는

과분 고자 는균주 염DNA

열에 보가없 라도시행 있

어 그사용이 산 고있다. Wel

등이 시 법sh (Welsh et al, 1990)

다소변 여 시행 고AP-PCR , Pri

는mer M13 reverse primer(5'CAG-GAA-A

를사용 다CA-GCT-ATG-AC 3') . BCY

천 지에 시간이상 양 여E- 72α

자란균 집락 취 여 McFarland Nephel

에 맞추어 포 부ometer Standard I

이 3×108CFU/ 도 조 다 균/ml . 1

겨 에ml Eppendorf tube 13.000 rpm

분간 원심분리 고 상 거2

후 침 에50 Tris-HCl(pH 8.0) 50㎕ ㎕

를가 여재부 시키고 lysozyme (100mg

를가 여잘 후 에/ml) 2 37 3㎕ ℃

분간 시 다 에 사용 충0 . K-

를100 proteinase K(20mg/ml) 2㎕ ㎕

가 여잘 합 고 에 시간55 2℃

시킨 후 에 같이 proteinas

를 불 시키고 에e K 12,000 rpm 2

분간원심분리 여 얻 상 를10 t㎕

사용 다emplate .

는PCR template DNA 10

충, 10× PCR 5 , 10mM dNTPs 1㎕ ㎕

, 20 M M13 reverse primer 2.5 , l umit㎕ μ ㎕

Taq polymerase(Boehringer Mannheim,

Germany), 25mM MgCl2 를 고8㎕

당량 증 를 가 여 체가 가50㎕

게 조 다 에. PCR 94℃

간 회 후 에 분4 denaturation 94 1℃

간 에 분간denaturation, 37 5 annealing,℃

에 분간 회 복시72 1 extension 35℃

행 고 에 분간 종, 72 10 extension℃

시행 다 종료 후 를. 10㎕

취 여 에 시1.5% agarose gel 150V 1

간 분동 동 고30 ethidium

염색 후 에bromide UV illuminator

찰 다.

재 찰 여 Ap-PCR

동일균주에 각각 회이상 복 시행, 3

다(Welsh et al, 1990; Cynthina et al,

권범 등1997; , 1998).

연 결과.Ⅲ

냉각탑수 양 결과1.

시료를 채취 상 냉각탑 개68

에 지 라균주가 분32.35%(22/68)

리 었 며 집락 분포는 1,000 CFU/

이 는ml 5.88%(4/68), 1,000-9,999 CFU/

인 곳ml 17.60%(12/68), 10,000 CFU/ml

이상 이었다8.82%(6/68) .

사 실에 는 에 지13.33%(2/15)

라균이 검출 었 며 100-999 CFU/ml

에 각각 개 집락10,000 CFU/ml , 1

가 검출 었다 소규모 상가(6.67%(1/15)) .

는 에 검출 었 며63.63%(7/11) , 1,000

에 가장-9,999 CFU/ml 45.45%(5/11)

많이검출 었다 조공장 상결과.

는 가 이었고1,000-9,999 CFU/ml 20%(1/5) ,

나 지 군데에 는검출 지 다4 .

타극장 곳에 는분리 지 다1 .

에 는 곳 에11 9.09%(1/11)

검출 었 며 집락 는, 1,000-9,999

이었 며 병원 곳CFU/ml , 16

에 검출 었 며 집락25.00%(4/16) ,

는 1,000-9,999 CFU/ml 10,000 CFU/ml

이상에 각각 검출 었다, 12.5%(2/16) .

이외에 경우에는 25.00%

에 지 라균이검출 었고집(9/36)

락 는 가1,000-9,999 CFU/ml 33.33%(3/9)

가장 검출 이 높 며, 100-999

가 이CFU/ml 22.22%(2/9), 10,000 CFU/ml

상이 곳 조사 었다1 (Table 1).

냉각탑 에 지 라균종 분

리 균주는 천 지에BCYE- 3 5α ～

일 양 후집락 다 그림. 1

등 과buffered charcoal yeast agar cystine

철 합 이 들어 있는 검 색 띈(Fe)

6 신 송재철 이 진 욱 태열 원 이철민⋅ ⋅ ⋅ ⋅ ⋅ ⋅ ⋅

지 에(BCYE) 양 지 라균

태 를 나타낸 것이다(morphology) .

일 인균종 생 동 상

는 지 라균 감별 시험

종목 그람염색 실시 결과 그람,

간균 인 태를 띠고 있었

나 태는일 장균등 그람 간,

균 과는 다소 차이가있는가(Figure. 2 B)

늘고 끝이 특징 인 태를 나타내고

있었다(Figure 2 A).

일부시도 검사종목 등( , 1986)

시험에 는모 양, oxidase catalse

나타낸 면 시험에, urease Indole

는 모 가 나타내었다(Table 2).

이는 인 지 라균 상 나

타내고 있 나 일 그람 간균과,

식별에 것이라 보다는 동시에 사

Cooling towerNo. ofsamples

Distribution of positive for Colony count (CFU/ml)

NG*

10-99 100-999 1.000-9,999 10,000〉

12 hrs operation

officesmall marketfactoryTheatresub total

15115132

1334121

-----

11--2

-51-6

12--3

24 hrs operation

Big HotelHospitalDepartment storesub total

1116936

1012325

----

--22

1236

-213

* : No Growth

(A) (B)

울시 일부 냉각탑 지 라 동 법별 향인자 연구 7

용 균주를사용함에있어감별목

실시 다 양 균주.

집락 에 본법 태, (morpho-

찰목 자 미경 실시logy)

여 며 상균주는, flage-

가 없는 균종이었다 이 사lla (Figure 3).

용 균주는 Legionella pneumophila

고ATCC 33155(S/G 3), ATCC 27853

부 생명과 연구소 국립보건

원에 각각 분양 사용 다.

공기 중 결과2.

개 건 내 냉 에어컨 주68

변지 실내에 공 시료 포집 인,

에oxoid air sampler(M.A.Q.S. ) BCYE-Ⅱ α

천 지 지를 사용 여, DGVP

공 결과에 지 라균,

분리 지 다.

CharacteristicsIsolated no.

BCYE-α BAP Gram stain Oxidase Catalase Urease Indole

Standard strain(ATCC#33155, SG/3)

＋ － － ± ＋ － －

12345678910111213141516171819202122

＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋

－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－

－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－

＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋

＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋

－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－

－－`－

－－－－－－－－－－－－－－－－－－－

8 신 송재철 이 진 욱 태열 원 이철민⋅ ⋅ ⋅ ⋅ ⋅ ⋅ ⋅

혈청형 분 결과3. (Sero typing)

개 냉각탑 시료 양검사68

에 지 라균 주 가 분22 (32.35%)

리 어 청 에 른 지 라 균주

를분 결과분리 균주 Legionella

이Serogroup I 86.4%(19/22), Serogroup Ⅵ

가 검출 어13.6%(3/22) , Legionella

인serogroupⅠ Legionella pneumophil가

다 를 차지 고 있었다(Table 3).

4. 양(Conventional culture)

분 결과Multiplex PCR .

체 검사 상 곳 지 라균68

이 일 양 곳 이며32.35%(22/68) ,

결과가 양 검출 곳PCR

이었다 이 사 실인 경48.53%(33/68) .

우 일 양 결과13.33%(2/15), PCR

양 인 곳 며 소규모26.67%(4/15)

상가는 에 일 양이72.73%(8/11)

었 나 결과 양 나타난 곳PCR

이었다 공장에 는 일81.82%(9/11) .

양에 양 보 며20.00%(1/5) ,

결과는 이었 나 극장에PCR 40.00%(2/5) ,

는 일 양과 결과 모PCR

나타냈다 에 는 곳. 11

에 지 라균이 일9.09%(1/11)

양에 검출 면 결과는PCR

에 양 나타났다 병27.27%(3/11) .

원에 는 에 일 양에25.00%(4/16)

검출 었고 결과 양 인 곳, PCR

이었다 이외에 일50.00%(8/16) .

양 결과 에 양 나66.67%(6/9)

타낸 면 결과 양 인 곳PCR

조사 었다77.78%(7/9) .

냉각 탑 시간 가동군에 른

Legionella 균 분리결과는일 양결

과 시간 가동군과 시간가동군각각12 24 ,

각각 에16.18%( , 11/32, 11/36) Legionella

균이 분리 었 며 결과에 는, PCR 12

시간 가동군 과 시간 가22.06%(15/32) 24

동군 에 양 나타26.47%(18/36)

내었다 지 라균이분(Table 3).

리동 장소에 결과는 모22 PCR․

양 보 며 다른 곳 결, 11 PCR

과 역시 양 이었 나 일 양에 는,

나타냈다 편 지 라균. ,

분리를 해사용 법 이multi-PCR

용 결과 Legionella pneumophila(mip-X,

mip-Y) Legionella 이species(5R-1, 5R-2)

각각 에 각각 증폭산383bp 118bp

찰 었다.

분 결과5. Ap-PCR .

에 양 나타낸Multiplex PCR

주를 상 분 에33 Ap-PCR

별 분 에 Ia, Ib, Ic, , , ,Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ

개 별 구분 다 독7 .

등이 분 참고 법 인용Welsh

등 권범 등 이 경(Welsh , 1990; 1998;

등 며 자 동일 균주나2001) ,

연 이 있는 균주에 이 직

립 어 있지 에,

주요 편들 양상이 일 경우 부분

연 이 있는 것 구분(Ia-Ic)

고 양상이다른경우는연 이없,

는 균주 구분 다( - ) .ⅡⅤ Legionella

pneumophila 주 편양serogroup 30Ⅰ

상 주 주 주Ia 17 , Ib 2 , Ic 7 , 2Ⅱ

주 주등 개 구분 었, 2 5Ⅲ

고 주는, Legionella serogroup 3Ⅵ Ⅳ

이 주 주 편 양상 나타내2 , 1Ⅴ

었다(Figure 5, Table 4).

Ap-PCR pattern DNA fragment

동상 에 라 400～

사이에 개 개에 걸3000bp 3 11 band～

를 각 나타내었다 이 분. band

보다 용이 고 객 띠 해

Molecular analysis system (Bio1D Version

99 software, BIO-PROFIL® 이용,USA)

여 분 다. (Figure 6 - 7)

냉각탑수 향6.

냉각탑 염인자 지 라

검출에 향 미 것 단 는 요

Cooling towerNo.ofsamples

No. of Total positivity (%) Legionellae, Sero-Group

Conventional- culture

multiplexPCR

GroupⅠ GroupⅥ

12 hrs operation

officesmall marketfactoryTheatresub total

15115132

2 (13.33)8 (72.73)1 (20.00)

-11 (34.38)

4(26.67)9(81.82)2(40.00)

-15 (46.88)

181-10

1---1

24 hrs operation

HotelHospitalDepartment storesub total

1116936

1(9.09)4(25.00)6(66.67)11(30.56)

3(27.27)8(50.00)7(77.78)18(50.00)

14410

--21

Total 68 22 (32.35) 33(48.53) 19 3

울시 일부 냉각탑 지 라 동 법별 향인자 연구 9

인 에 탁도인 경우 시간과(agents) 12

시간 가동 군에 평균 각각24 ,

통계1.02 ± 2.20, 0.69 ± 1.87

차이를 보 며 구리농도(p<0.05),

역시 시간가동군과 시간가동군에12 24

각각 0.10 ± 통계2.14, 0.06 ± 2.20

차이를 나타내었다(p<

0.05) (Table 5).

연구 상 냉각탑 특 종 에

른 지 라균 분리 양 에 미

는 결과 특 다 과 같 다

탑 체가 사각(Table 6). 25%

원 연결(17/68), 66.2%(45/68), 8.8%

원 라운드이주 를이루고(6/68) ( )

있었 며 일 양결과 결과에, PCR

각각 양45.5%(14/68), 30.8% (21/68)

나타내고 있었 며 냉각탑 식,

에 른차이는일 양결과 결PCR

과 모 통계 지 다.

공 름 구분에 른 것 냉각,

탑 과 부에 라 는 공 가

직 이동 는 태 향 (Cou-

개nter flow type; Figure 8) 45 (66.2%),

냉각탑 과 면에 들어 는 공

가 차 는 태인 직90。

개(Cross flow type: Figure 9) 23 (33.8%)

일 양 결과 결과에 각각, PCR

양 나20.5%(14/68), 30.8%(21/68)

타내고 있었 며 개 구분에 른 차이, 2

는역시 지 다 열 달 식.

개 과 폐 에 동일 양상 나

타내고 있었다.

건 냉각탑 리상태를 자체

리 는곳 용역 리 는76.4%(52/68),

곳 나타났 며 일23.5%(16/68) ,

양 결과 결과에 각각PCR , 25%

양 나타내(17/68), 39.7%(27/68)

고 있었 며 리 태에 른 차이는,

지 다.

냉각 소독상태는 미실시 는 곳

실시 는 곳44.1%(30/68), 55.9%

나타났 며 소독 미실시(38/68) ,

는 경우 일 양 결과 결과에PCR

각각 양, 16.1%(11/68), 27.9%(19/68)

383bp →

118bp →

M Ia Ia V Ic Ic V Ic Ib Ia Ic Ia Ia Ia Ia IaⅤ Ⅲ Ⅱ Ⅲ

3000bp →

500bp →

100bp →

10 신 송재철 이 진 욱 태열 원 이철민⋅ ⋅ ⋅ ⋅ ⋅ ⋅ ⋅

나타내고 있었 며 리 태에,

른 차이는 일 양결과에 는 통계

차이를 보이지 면

결과에 는 차이를 보 다PCR

(p<0.05)

지 라균 일 양검사결과에

양 나타낸 결과 상 사업장

염 질 에 통계

차이를 보인 향인자는 없었다(Table 7).

결과에 양 보인 사업, PCR

장 별 각 염인자에 는 탁도 결과에

각 장소별 차이를 보 며

나 지 염인자에 는(p<0.05),

차를 보이지 다(Table 8).

그람 간균 간 염지 가

는 엔도톡신 체 곳 에 는68 300-

이 곳 에 검출 었500 EU/ml 23 (33.82%)

다 시간 가동군인 사 실인 경우. 12 300-

이 체 곳 곳 에500 EU/ml 15 6 (40%)

검출 었 며 소규모 상가는, 100-500

이 곳 공장 곳EU/ml 6 (54.54%), 5

이 각각 곳<100, 300-500 EU/ml , 2

극장 이 곳(40.00%), 100-300 EU/ml

에 검출 었다 시간 가동 군에 는. 12

이 체 곳 곳300-500 EU/ml 32 11

가장 많 다 시간 가동군(34.38%) . 24

인 인 경우 체 곳 곳에11 4

이가장많 곳에300-500 EU/ml(36.36%)

검출 었 며 병원 체 곳, 16 6

곳 에 이(37.50%) 100-300 EU/ml ,

체 곳 병원과 마찬가지 곳9 4

에 이가장많이(44.44%) 300-500 EU/ml

검출 었다 (Table 9).

장소별 사업장별 엔도톡신 농도를

살펴본 결과 소규모 상가에 평,

균이 시간가동군에409.53 ± 2.18 12

가장 높게 나 며 시간 가동 군, 24

에 는 평균 903.31 ± 4.03

가장 높게 나 다 시간 가동 군에. 12

는 사업장별 엔도톡신 농도 차이가 없

었지만 시간 가동 군에 는 사업장별, 24

Isolate no. Area of isolation SerogroupAp-PCR

Molecular type

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233

Daeho plazaPoongsung Elec,Kangnam CenterH Hospital (Seo)HY dongmoonH hospital (bon)Shin Se (food))Kangnam hospitalIilsan Dep, #1Iilsan Dep #3Kyoung Dep, #1Kyoung Dep, #2Kyoung Deo, #3Min J hospitalSam hospitalHae plazaShi townVictor HotelAcade houseMeo towerBumse BLDLo Dep,Miji plazaCMC InstituteHankook Cap,HY Lib #2Kang hospital #1Walker (duty free)Dong hospitalIL san Lo #2Hy guri hospitalKyoung hospital #1Kyoung hospital #2

L. pneumophila SG*1

L. pneumophila SG*1

L. pneumophila SG*6

L. pneumophila SG*1

L. pneumophila SG*1

L. pneumophila SG*6

L. pneumophila SG*1

L. pneumophila SG*1

L. pneumophila SG*1

L. pneumophila SG*1

L. pneumophila SG*1

L. pneumophila SG*6

L. pneumophila SG*1

L. pneumophila SG*1

L. pneumophila SG*1

L. pneumophila SG* 1L. pneumophila SG* 1L. pneumophila SG* 1L. pneumophila SG* 1L. pneumophila SG* 1L. pneumophila SG* 1L. pneumophila SG* 1No Growth in BCYE-αNo Growth in BCYE-αNo Growth in BCYE-αNo Growth in BCYE-αNo Growth in BCYE-αNo Growth in BCYE-αNo Growth in BCYE-αNo Growth in BCYE-αNo Growth in BCYE-αNo Growth in BCYE-αNo Growth in BCYE-α

IaIaVIcIcVIcIbIaIcIa

Ia

IaIaIa

IaIbIaIaIaIaIcIaIaIcIcIaIa

울시 일부 냉각탑 지 라 동 법별 향인자 연구 11

엔도톡신 농도간에 통계

차이가 있는 것 나타났다(p<0.05)

(Table 10).

엔도톡신농도 염인자

조사 결과 잔 염소농도(r=

구리 탁도 에 양0.41), (r=0.39), (r=0.28)

상 나타냈 며(p<0.05), pH, pb, Fe

경우 통계 지 다

(Table 11).

고 찰.Ⅳ

지 라증 검출 진단 크게

가지 검체 부 균 직 분리,

거나 자 청에 특이 항체를 검

출 는 것이다조규 등 냉각탑( , 1997).

부 일 양법에 결과는 양

이 이며 그동 국내에32.3%(22/68) ,

다 자료 등( ,

종 등 등 들1986; 1988; , 1999)

이 이내 검출 에 해높고 외국20% ,

연구자들이 등(Barbaree , 1987)

에 면 낮 편이었다40% .

본 조사에 양 이 높

있었 요인 나는 지 라균,

습도 조건 거 포 상태를 쾌 조

건 좋 는 습 에 양시 인

베이 내부 습도도 별도 포 습

도 조건 지 고 있다 라 본 연.

구 간 동 도 집 장마철이어 채취

간동 습도가 높 간이었고,

나는 국가 구청에 채

경우는사 에염소등 집 소독

factorsCooling tower

Turbidity (NTU) PH

Na GM GSDb Na GM GSD

12 hrs operation24 hrs operation

3236

1.020.69

2.201.87

3236

8.248.36

1.041.03

Total 68 0.92 2.07 68 8.30 1.03

factorsCooling tower

Cl2 Pb Cu Fe

Na GM GSDb Na GM GSDb Na GM GSDb Na GM GSDb

12 hrs Op24 hrs Op

2730

0.040.04

2.354.26

3127

0.030.03

2.352.10

3232

0.10*0.06*

2.142.20

2122

0.020.02

2.202.01

Total 57 0.04 3.32 58 0.03 2.02 64 0.08 2.27 43 0.02 2.08

a : Number of sampling

b : Geometric standard deviation

* : p<0.05 compared with 24 hrs operating system by t-test

12 신 송재철 이 진 욱 태열 원 이철민⋅ ⋅ ⋅ ⋅ ⋅ ⋅ ⋅

(A)

(B)

울시 일부 냉각탑 지 라 동 법별 향인자 연구 13

MethodCooling Tower

Nconventional culture method multiplex PCR method

positive negative P-value positive negative P-value

Typerectangularroundconnect

17 (25.0)45 (66.2)6 (8.8)

6 (8.8)14 (20.5)2 (2.9)

11 (16.1)31 (45.5)4 (5.8)

0.9510 (14.7)21 (30.8)2 (2.9)

7 (10.2)24 (35.2)4 (5.8)

0.51

Air Flowcounter-flowcross flow

45 (66.2)23 (33.8)

14 (20.5)8 (11.7)

31 (45.5)15 (22.0)

0.7521 (30.8)12 (17.1)

24 (35.2)11 (16.1)

0.66

Thermal typeopenclosed

45 (66.2)23 (33.8)

14 (20.5)8 (11.7)

31 (45.5)15 (22.0)

0.7521 (30.8)12 (17.6)

24 (35.2)11 (16.1)

0.66

Manage-mentselfservice

52 (76.4)16 (23.5)

17 (25.0)5 (7.3)

35 (51.4)11 (16.1)

0.9127 (39.7)6 (8.8)

25 (36.7)10 (14.7)

0.31

Disinfectionnon- executionexecution

30 (44.1)38 (55.9)

11 (16.1)11 (16.1)

19 (27.9)27 (39.7)

0.4919 (27.9)14 (20.5)

11 (16.1)24 (35.2)

0.03

( ) : %

Site

Effectives

Conventional culture method

office smallmarket

factory Hotel Hospital Departmentstore

Theatre P-value

2(13.3) 8(72.7) 1(20.0) 1(9.1) 4(25.0) 6(66.7) -

turbiditypHCl2PbCuFe

endotoxin

0.868.110.020.020.200.02

1136.30

1.348.230.020.030.140.03

411.80

0.658.150.020.020.040.10

366.00

1.447.560.020.030.110.05

801.50

0.668.290.030.010.070.03

371.80

0.568.400.020.020.050.02

331.50

-------

0.0950.3380.7600.4340.1500.5730.522

Site

Effectives

Multiplex PCR method

office smallmarket

factory Hotel Hospital Departmentstore

TheatreP-value

4(26.7 9(81.8) 2(40.0) 3(27.3) 8(50.0) 7(77.8) -

turbiditypHCl2PbCuFe

endotoxin

0.738.260.020.020.130.02

433.49

1.488.260.030.030.140.03

392.11

0.468.250.030.070.100.02

370.97

0.757.990.040.030.100.03

625.93

0.678.310.020.020.060.02

306.55

0.578.380.020.030.040.02

345.89

-------

0.0060.6010.8140.7200.0590.8490.885

14 신 송재철 이 진 욱 태열 원 이철민⋅ ⋅ ⋅ ⋅ ⋅ ⋅ ⋅

거나 돗 어 채 는

사 가 지 라균 국가 결과

에 낮 분리 원인이 닌가 사료

어진다 지 라균 일 인생.

상 는 buffered charcoal yeast agar

등 과철 합 등에 해검cystine (Fe)

색 띈 지 에 만이 증식이(BCYE)

는독특 특 갖고있 며 이들이,

들어있지 천 지 등에 는

증식 지 는 균 지 라균

심 있고 시험, oxidase catalase

에 양 나타내며 에, urease

나타내 도 며 일부 균종, hippurate

를 가 분해 며 부분 균종이, β

를 생 다 지 라 워크샵-lactamas ( ,

1994; Chemical Microbiology procedure

본 연구에 는 실험실Handbook, 1995).

여건상 분해능과 는hippurate -lactamaseβ

실시 지 못 나, oxidase catalase

시험 양 시험에 는, urease indole

모 가 나타낸 결과는 종 등

연구 결과 일 고 있었다 종(

등, 1988).

그러나 이 균 양 차가 다롭

고 여러가지행태 상이다르,

에 일 생 시험만 균속

균종 실 동(genus) (species)

Cooling towerNo.ofsample

Concentration of Endotoxine (EU/ml)

100〈 100-300 300-500 500-700 700-900 900-1100 1100-1300 1300-1500 1500-1700 >1700

12 hrsoperation

nofficesmall marketfactorytheatresub- total

15115132

312-6

13-15

632-11

11--2

111-3

-----

-2--2

-----

1---1

2---2

24 hrsoperation

HotelHospitalDepartmentstoresub- total

11169

36

-2-

2

162

9

444

12

111

3

22-

4

--1

1

---

-

-1-

1

1--

1

2--

2

unit : Eu/ml

cooling tower sampling site N GM GSD P-value

12 hrs operation

officesmall marketfactorytheatresub total

15115132

352.67409.53190.17265.10334.20

3.982.184.16265.103.25

0.6929

24 hrs operation

hotel*

hospitaldepartment storesub total

1116936

903.31299.30455.36465.87

4.032.171.822.88

0.0237

endotoxin Cl2 Tubidity pH pb Cu Fe

endotoxinCl2

TubiditypHpbCuFe

1.00 0.41*

1.00*0.28*

0.37*

1.00*

0.01-0.00-0.061.00

-0.010.180.07-0.041.00

0.39*

0.07*

0.23*

-0.06*

-0.20*

1.00*

0.00*

0.05*

0.17*

-0.15*

0.32*

0.48*

1.00*

울시 일부 냉각탑 지 라 동 법별 향인자 연구 15

이 지 에 등( , 1986),

지 라속 균 상에 특

신속 동 법에 감별 인․

목 연구가 욱 진행 어야

것이다황 등 균 특( , 1999).

과 생 특 에 해 지 라균

분리 시험 균종 청군에

항 청 집 이용 여 청, ,

군 동 게 며 등 본( , 1999).

연구결과에 분리 주22 (32.35%)

지 라균주 상 청 결

과는 Legionella 이Serogroup I 86.4%

가 검(19/22), Serogroup 13.6%(3/22)Ⅵ

출 어, Legionella 인serogroupⅠ Legio-

nella pneumophil가 부분 차지 고있

었 며 이는 과, group 77.3% groupⅠ Ⅵ

권범등 슷 결과18.2%( , 1998)

등 일 는것87.4%( , 1999)

나타나 우리나라 지 라균,

분포는 거 Legionella 분리serogroupⅠ

도가 높 것 사료 어진다 지.

라증 거 는85 90%～ L. Pne-

umophila가 원인이라고 보고 고 있 며,

그 는65 70% L.～ Pneumophila sero-

에 며 지 라균 어도group I ,

종 과 가지 이상 청41 (sero-group) 60

군이 인 고있고 일부 청 에는여,

러 이 있 며 특히(subtype) L. Pne-

umophila 에는 어도 개serogroup I 50

이 존재 여 우 이질 인 청 군

있 나 지 라균,

양조건에 라 는 monoclonal anti-

양상이 다르게 나타날 있다body

권범 등( , 1998). L. Pneumophila

이외 청군 들에serogroup I

들 잘 립 지monoclonal antibody

다 그러므 지 라증 행.

역 조사에 경분리 균주 지

라증 자에 분리 균 사이 연계를

인 해 는 청 구분만

는불충분 며 지 라균 진단검사,

가일상 가능 지 고 소,

에 행 고 있는 청 진단검사

가 자 진단에 그다지 도움이

지 는 등 진단상 어 움이 있

므 히 도를 없는실 이다

민자( , 1995; Cynthina et al, 1997).

본 연구에 시도 존 일 양

법과 매우 민감 법조규 등( , 1997;

조소헌 지고있는, 1998) PCR

법 동시에 시도 는데 이 조, PCR

건 신속 과 도향상 해 primer

를 실시 는 multiplex PCR

사용 며 이 이용 는, primer

mip-X mip-Y, 과 를 사용5R-1 5R-2

다 일 양검사에 인. 11 (16.2%)

개 시료에 에 해 지 라균PCR

주가 검출 므 실 일PCR

양 법에 해 양 이 높 입증

있었다. non-pneumophila Legionella

species Legionella pneumophila를 검출

함과 동시에 구별 목 사

용 법 일 양, multiplex PCR

시 지소모 다 운조건등에 면,

훨 간편 고 신속함등 장 이우,

이 있는 것 단 어 진다.

법 에multiplex PCR 48.5%(33/60)

양 나타내어 이러 결과는

보고 손장욱 등 결과( , 1998)

는 사 나 등(45%) 59.8%

결과 경 등 보다는 다소 낮( , 1988)

것이었다.

에 양 보인다고 해 모PCR

감염 험이 있는 생균에 염인지

여부는 직 불 실 며 냉각탑,

검출결과는보다신 히 단 어야PCR

다고 시 고 있다(Field et al, 1997).

이에 해 법 통 검출법이 증PCR

식 감염능 과 사능 이 있는 생균

과 소독 처리 후 증식 이 없어진 생,

균 감별이 가능 지 여부 임상,

가 없는 죽 균 지도 검출 는

지 여부를 인 는 실험 연구에

법 증폭산 이 찰PCR-gene probe

경우 생균이 존재 다는 것 미

다고 보고 있다(Bej et al, 1991).

근에는 사용 는 Ap-PCR(Arbitrarily pri-

이란 단일med Polymerase Chain reaction)

내 복 역 동시에primer genome

증폭 는 에1990 Welsh Mc-

가 개 것이다 국내에 는Clelland .

직 도입단계에 있지만 이 법 가장,

큰특징 주 인 가복잡genome DNA

고 특히 열 보가 없어도 증폭산PCR

얻 있다는 이다 근 신속.

면 도 분별 이 높 새 운 분자 역

법 각 고있다 지.

라균에 분자역 조사도구

분 근거 는DNA finger printing

ribotyping, pulsed-field gel electrophoresis

(PFGE), random amplified fragment length

등 여러 법들이polymorphism(AFLP)

시도 고있 나 각각고가 장, ,

소요시간 염 등 면에 있어,

장단 지니고있다. Escherichia coli

M13 reverse primer T7 promoter

를 각각 시험 사용 여primer

시도Ap-PCR , M13 reverse

를 사용 경우 증폭 편들primer

크 에 있어 결과 해 에

용이 여 가 택 었M13 reverse primer

다 본연구에 분리 지 라균주.

들 에 가장 분리 도가 높 L.

pneumohila 주를 상sero-group 1 30

실시 결과에 개AP-PCR 7

구분 므 우리나라 냉각탑 에

는 여러 태 이 존재

고 있 인 있었 며 이는,

직 지 국내에 자료가 이

는 지만 권범등 결과 사,

양상 나타내고 있었다 권범 등( ,

향후 다양 분 결과를1998).

체계 이고 부 축 여 지, ,

라균종 역 보자료 용

여야 것 사료 다.

본 연구에 시도 시Ap-PCR 5 6～

간이내에결과 인이가능 고 회3

이상 복 시행 도 본 실험에

는 재 양 다 라.

본실험에 시도 를m13 reverse primer

사용 법 지 라증Ap-PCR

행 생시에 감염원 인에 사용

있는 효 인 별검사 사료 었

다 그러나 분자 별 분 에 직 동.

일 균주나 역 연 이 있는 균주를

몇 개 편 차이 지 인 것인지

에 이 립 지 므 (

권범 등 추후, 1998; Cynthina, 1997),

16 신 송재철 이 진 욱 태열 원 이철민⋅ ⋅ ⋅ ⋅ ⋅ ⋅ ⋅

많 지 라균주 타미생

검출목 에 용 시도 므

이에 분 립 통 재평

가가 요 것이 경 등 이며( , 2001) ,

직 지는 국내외에 시도 사 가

므 이분야에 연구검토가계속

진행 어야 것이며 신속 장 있,

나 일 에 재, band pattern

이 가있고 존재 는,

많 분자 별에 이 시

여 좀 연구가 행 어야,

것 사료 다 이러 단 등 소.

해 각종 시약Ap-PCR

질 농도 등에 향 크게,

에 장 간 연구결과 축 과 특히

복실험 자주 는 경우에는 에 사PCR

용 는 시약 를 번에 량 조

후 분주 여 에보존해 는재freezer

지 해 리 다.

본 연구에 는 지 라균 장에

향 미 가능 이 있는 일 인

염인자를 며 그 에 잔,

소독 부재는 존재나 cross-

등에 염 등 나타낼connection

있는 것 있다(EPA: 1989)

가장많이쓰이고있는소독 인염소소

독 법 지 라균이 상

내 이 있 므 항균 효과 염

소농도를 지 어 고 특히 자부,

품회사 도체회사등 생산품 손상, ,

연공 시스 부식등 향 염

소 사용 고 있었다 지.

라균 검출결과에 향 가능 이

높 염 인자 에 철 구리(mgFe/L),

잔 염소량 등외(mgCu/L), (mgCl/L)

에 납 종목 추가 고 철(mgPb/L) , (Fe)

지 라균 장 진시키는

것 있 며 특히산 철,

번식 는데 도움이 다 미( , 1996),

구리 염소는잔 소독 를 량(Cu)

목 고 납 일, (pb)

염농도를 단 본자료

용 고자 다 지 라균이검.

출 탁도 평균 0.87 ± 1.85

낮 결과 며 결과가 양, PCR

나 곳 탁도 평균 0.80 ±

지 라균이 검출 었 경1.83

우 탁도 슷 결과를 나타내었다.

탁도 L. pneumophila 상 계를 통

계 살펴보면 상 도가 0.2811

통계 결과를 보(p<0.05)

다 이용우 등 보고에 질.

염농도가높 질 지 라균증,

식 진시킨다는 결과 사 결과

를 나타내고 있어 탁도 역시 지 라

균 증식에 요 경인자 생각

며 냉각탑 자체 내에 있는 부 철가루,

청결 상태불량 등 냉각탑

질 염이 지 라 균 증식

진시키고 있는 것 여겨지므 이,

에 다 이용시 등 냉각탑에

리 책이 요 다고 생각 다 일.

양 양 에 염소농도 평균

양 에 는0.02 ± 1.54, PCR 0.03 ± 2.05,

구리농도 평균 양양 에

양 에 이0.08 ± 2.53, PCR 0.09 ± 2.31

었다.

편일본등외국 경우냉각탑 등

에 법 철 히 리

고있지만 직우리나라에 는 직냉,

각탑 리 등 이 미 상태이

며 보 부식 스 일, ,

지 조차 일본 사용 고 있

는 상태이므 냉각탑 를 상,

는 속에 평가는향후좀 리

차원에 연구 어야 는 부분 사

료 다.

건 내 냉각탑 특 에 른 지

라균 검출 결과에 미 는지 여부에

여 시도 었 결과에 는 구조,

모양에 라 평면상 탑 체가 사각인

사각 평면상 탑 체가25%(17/68),

거나 각 이상 다면체 태 원8

계속이어붙여갈66.2%(45/68),

있는연결 태 분 어8.8%(6) ,

원 이 주 를 이루고있었다(round type) .

공 름에 른구분 는충진부

에 공 름이 직 상 향 움

직여 냉각 마주 차 며 열

는 태 향 (counter flow type)

충진부에 공 름이66.2%(45/68),

평 향 움직여냉각 공 가직

각 차 며 열 는 태 직

(Cross flow type) 33.8%(23/68)

태를띄고있 며 열 달 식에,

개 폐66.2% (45/68), 33.8%

분 고있었다 리(23/68) .

상태에 있어 는 자체 리가 76.4%

용역 리가(52/68), 23.5% (16/68)

리 고 있었 나 양 에 미 는 향,

지 다 소독 실시여부를.

미실시 는 는곳 실시44.1%(30/68),

는곳 며 소독 미55.9%(38/68) ,

실시 경우일 양에 는 지 라

균 양 이 동 나타났16.1%(11)

나 법에 는 소독, PCR 27.9%(19),

실시 경우에는 나타나20.5%(14/68)

소독 지 경우에 법, PCR

양 이높 며 이는소독,

는 것이 지 라균 억 에 도움이

다는 간 인 자료 사료 어 진다.

소독에 보는 질 얻 자

료이었고 신뢰 여부에 것 검증,

지 며 소독 법에 자료는,

본연구에 는 실히규명 지못

므 다량 냉각탑 를 연구자,

료 보 여시도 다면 욱나 결,

과가 다고 사료 어진다.

본 연구 공 시료채취 인oxoid

를사용 여 공조시스M.A.Q.S. ,Ⅱ

에어컨 주변에 시도 공

지 라균 검출 목

나 균 검출해 낼 가 없었다,

동일장소에 천 지, (BAP;

를 사용 여 공blood agar plate) ,

염상태를 여 보 나 미 있는,

균 집락 는 나타나지 다 공.

에 지 라균 분리 사 가

보고 사 도 있 므(Robert et al, 1990)

향후 좀 면 공조 시스 과

함께 경 추 연구가 진행

어야 것 사료 다.

그람 간균 간 염지 가

며 조사 상 냉각탑 이,

상이 그람 간균인 지 라균에

염 어 있어 주요 생태계 염인자,

여겨지는 엔도톡신(bacterial endotoxin)

염지 지 라균 양

울시 일부 냉각탑 지 라 동 법별 향인자 연구 17

결과에 향 것인가에 목

다 일 엔도톡신.

그람 간균 리 포외벽에

존재 는 질 리 가 살 있는

동 에는 지 지만 리 가

증식 거나 사멸 포 벽이 깨지

면 외부 출 는 내독소(Heine,

만 지염 열2001) , , ,

폐 천식 등 장해가 생 는,

것 있다(Liu AH, 2002; Barun

et al, 2002; Gehring U et al, 2002;

ju-Hyeong park et al, 2000).

본조사에 시도 엔도톡신 농도는

냉각탑 곳 에 는 이68 300-500 EU/ml

곳 에 검출 었 며 체 냉23 (33.82%) ,

각 내 농도 평균endotoxin (

편차 나타나) 398.46(3.07) EU/ml ,

국 인 이 종목별 미 어

있어 어 우나 삭 에, ,

평균 6,791EU/ml(Donguk park, 2000)

에 면낮 것이 이었다 상상태에.

는 불검출 어야(Not detected)

므 향후 냉각탑 에 엔도톡신,

농도 생태 특 이 지 라

과함께 게연구(Donato, 1980)

어야 것 사료 어진다.

냉각탑 내 농도에 향endotoxin

주는 인자 탁도 염소(p<0.05), (p<0.01)

구리농도 다 시간 가동군(p<0.01) . 12

인 사 실인 경우 이 체300-500 EU/ml

곳 곳 에 검출 었 며15 6 (40%) , 24

시간가동군인 인경우 체 곳11

곳에 이 가장4 300-500 EU/ml(36.36%)

많 곳에 검출 었다 지 라균.

양 결과 엔도톡신과는 통계

결과를 찾 없었고 본연,

구 나인 지 라균

단일 엔도톡신에 분 이 재 분

법 는 어 에 향후 엔도

톡신에 좀 인 연구가

어야 것 사료 어진다.

결 론.Ⅴ

울시 일 건 에 어 임

개 건 냉각탑68

에 월 일에 월(cooling tower) 7 30 9 15

일 지 지 라균 상

동 법별 검출 지 라

검출 에 미 는 향인자를 조사

며 결과를 요약 면 다 과 같다, .

냉각탑 지 라균 검출 에1.

있어 일 양법 법에 른PCR

검출결과는 각각 과, 32.5%(22/68) 48.5%

양 나타냈 며 분 소(33/68) ,

요시간 시간 이상과 시간 이내72 12

었다.

일 양법 법2. Multiplex PCR

양 결과는 각각, 32.4%(22/68) 48.5%

며 일 양법에 양(33/68) ,

보인시료는모 법에 양PCR

나타냈다.

3. 일 양 분리 지 라균

주 에 청 분22 (32.35%) (sero

그룹결과는grouping) Legiononella Sero-

이 가group I 86.4%(19/22), Serogroup Ⅵ

검출 어13.6%(3/22) , Legionella sero-

인groupⅠ Legionella pneumophila가 다

균종 차지 고 있었다.

4. 일 양에 양 보인 22

균주 에 양Multiplex PCR

나타낸 균주를 합 주 결과를11 33

상 실시 결과는Ap-PCR Ia,Ib,Ic,

개 별 구분 다, ,VI, 7 .ⅡⅢ Ⅴ

소요시간 시간이내이었 며 청5 6 ,～

분 결과는 Legionella pneumophila

주 편양상serogroup 30 Ia 17Ⅰ

주 주 주 주 주, Ib 2 , Ic 7 , 2 , 2Ⅱ Ⅲ

등 개 구분 었고5 , Legione-

lla 주는 이 주serogroup 3 VI 2 ,Ⅵ Ⅴ

주 다양 편양상 나타내1

고 있었다.

이상 결과를 요약 면

지 라균 검출 양 과 신속

에 일 양법에 해 법이우PCR

므 향후 지 라균 등 동,

법 법도 합 것 사PCR

료 다.

이용Ap-PCR molecular type

다양 며 신속간편 고, ,․

변별 이 양 므 향후,

분자역 도구 사용이 매우 용

것 사료 어진다.

존재 는 향 질 염도 분포 등

과 지 라균 양 간

연구 법 결과에 탁도PCR

소독실시 여부가 향 주는 것(p<0.01)

나타나 향후 냉각탑 지,

라균 리에는 탁도 소독실시 여부

가 요 향인자임 시사 고 있다.

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