optimasi metode penetapan kadar kurkumin dalam … · optimasi metode penetapan kadar kurkumin...
TRANSCRIPT
OPTIMASI METODE PENETAPAN KADAR KURKUMIN DALAMSEDIAAN CAIR OBAT HERBAL TERSTANDAR (OHT) MERK
“KIRANTI®” DENGAN METODE KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS(KLT)-DENSITOMETRI
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu SyaratMemperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:
Dewi Elizabeth Himawan
NIM : 078114077
FAKULTAS FARMASIUNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA2011
i
OPTIMASI METODE PENETAPAN KADAR KURKUMIN DALAMSEDIAAN CAIR OBAT HERBAL TERSTANDAR (OHT) MERK
“KIRANTI®” DENGAN METODE KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS(KLT)-DENSITOMETRI
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu SyaratMemperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:
Dewi Elizabeth Himawan
NIM : 078114077
FAKULTAS FARMASIUNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA2011
ii
iii
iv
Halaman Persembahan
Ability is what you're capable of doing. Motivation determines what
you do. Attitude determines how well you do it. -Lou Holtz! ~
Upsets and failures always contain the gift of
learning. Stay strong to unwrap the package. Be
thankful and keep moving! JC bless
God is a friend who is close beside us.Everytime you’re feeling lost,
Keep your faith strong and believe thatHis light will surely guide you!
Karya ini aku dedikasikan kepada:
My Great DAD and MOM
My lovely brother, Adde
Almamaterku
And last but not least, to Myself
v
vi
v
PRAKATA
Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa atas anugrah dan bimbingan-
Nya yang penuh kasih, sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan
penyusunan skripsi berjudul ”Optimasi Metode Penetapan Kadar Kurkumin dalam
Sediaan Cair Obat Herbal Terstandar (OHT) Merk Kiranti® dengan Metode
Kromatografi Lapis Tipis (KLT)-Densitometri”.
Penulis menyadari bahwa penulis tidak dapat menyelesaikan skripsi ini
sendiri tanpa bantuan, dukungan, bimbingan, arahan, kritik, dan saran dari
berbagai pihak. Maka pada kesempatan ini penulis hendak menyampaikan
ungkapan terimakasih yang sebesar-besarnya kepada:
1. Bapak Ipang Djunarko, M. Sc., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Sanata Dharma.
2. Ibu Christine Patramurti, M.Si., Apt selaku dosen pembimbing skripsi
yang telah memberikan bimbingan, saran dan evaluasi kepada penulis
sejak penyusunan proposal hingga selesainya penulisan skripsi ini.
3. Jeffry Julianus, M.Si., selaku dosen penguji, atas bimbingan, arahan, dan
penjelasannya.
4. Yohanes Dwiatmaka, M.Si., selaku dosen penguji dan dosen pembimbing
akademik yang telah memberi bimbingan dan arahan pada penulis selama
menjalani masa kuliah.
5. Prof. Dr. Sudibyo Martono, M. S., Apt. yang telah bersedia memberikan
senyawa baku yang berguna dalam penelitian.
vi
6. Dr. C.J. Soegihardjo, Apt. yang telah bersedia meluangkan waktunya
untuk berdiskusi.
7. Segenap dosen dan karyawan atas ilmu dan pengalaman yang berharga
sehingga berguna dalam proses penyusunan skripsi.
8. Yunita dan Veny sebagai rekan kerja, terima kasih atas kerja sama yang
solid, atas kebersamaannya untuk membantu kerja penulis di laboratorium.
9. Seno, Tere, Lilis, Pakdhe, Katrin, Upil, Pace, Benny, Lala sebagai teman
satu lantai yang sering melakukan penelitian bersama, terima kasih atas
kebersamaan dan dukungan yang diberikan.
10. Mas Bimo, Mas Wagiran, Mas Parlan, Mas Kunto dan seluruh staf laboran
yang telah bersedia membantu penulis mengerjakan penelitian.
11. Venny, Nana, Vivi, Sasa, Frissa, Helen, terima kasih telah menjadi sahabat
yang baik penulis dan atas semangat dan pengertian yang telah diberikan
dari awal perkuliahan hingga penyusunan skripsi.
12. Ci Eva telah menjadi kakak kos yang baik dan atas berbagai pengalaman
yang telah dibagikan pada penulis.
13. Nana, Evina, Mala, Daniel, Ridho, Andy, Wawan, Mba Ririn sebagai
teman yang sering satu kelompok telah memberikan pengetahuan,
pengalaman berharga dan semangat.
14. Teman-teman FST 07 yang luar biasa kekompakannya, serta terima kasih
atas kebersamaan dan kegilaan bersama kalian, kalian memberi warna
dalam hidupku.
15. Dika yang telah meluangkan waktunya untuk berdiskusi.
vii
16. Ci Kaka, Ci Iren, Ci Reni, Ci Wiwit, Ci Linda, Ci Nisia, Ci Eka, Ci Nana
dan teman-teman kos dewi yang menjadi teman seperjuangan penulis
terima kasih atas semangat dan dukungan yang diberikan.
17. Teman-teman KKN kel 1 XL yang telah menjadi teman yang baik selama
1 bulan KKN di Pailihan, Bantul.
18. Seluruh teman angkatan 2007, atas suka duka, kenangan dan kebersamaan
yang membuat saat-saat kuliah menjadi saat-saat yang indah.
19. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu, atas segala
bantuannya hingga penulis menyelesaikan skripsi ini, terima kasih atas
semua bantuannya.
Penulis menyadari bahwa penulis tidak luput dari kekurangan dalam
penulisan naskah skripsi ini mengingat segala keterbatasan wawasan dan
kemampuan penulis. Untuk itu, penulis membuka diri untuk adanya kritik dan
saran yang membangun sehingga skripsi ini menjadi lebih baik. Akhir kata,
dengan segala kerendahan hati penulis berharap semoga tulisan ini berguna bagi
semua pihak, terutama untuk kemajuan pengetahuan dalam bidang ilmu Farmasi.
Penulis
viii
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ................................................................................................. i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ....................................................... ii
HALAMAN PENGESAHAN..................................................................................... iii
HALAMAN PERSEMBAHAN ................................................................................. iv
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ...................................................................... v
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ...................... vi
PRAKATA................................................................................................................. vii
DAFTAR ISI................................................................................................................ x
DAFTAR TABEL...................................................................................................... xii
DAFTAR GAMBAR ................................................................................................ xv
DAFTAR LAMPIRAN............................................................................................ xivi
INTISARI.................................................................................................................. xvi
ABSTRACT............................................................................................................... xvii
BAB I PENGANTAR.................................................................................................. 1
A. Latar Belakang................................................................................................ 1
1. Perumusan Masalah .................................................................................... 4
2. Keaslian Penelitian .................................................................................... 4
3. Manfaat Penelitian ...................................................................................... 5
B. Tujuan Penelitian ........................................................................................... 5
ix
BAB II PENELAAHAN PUSTAKA.......................................................................... 6
A. Kurkumin ....................................................................................................... 6
B. Obat Herbal Terstandar (OHT) .................................................................... 11
1. Tinjauan Umum ....................................................................................... 11
2. Standarisasi Simplisia ............................................................................... 12
C. Kiranti® ....................................................................................................... 13
D. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ................................................................. 13
1. Tinjauan Umum ....................................................................................... 13
2. Kromatografi Lapis Tipis ......................................................................... 14
3. Sistem KLT .............................................................................................. 16
4. KLT-Densitometri ................................................................................... 19
5. Optimasi Metode ...................................................................................... 19
E. Landasan Teori ............................................................................................. 23
F. Hipotesis ...................................................................................................... 24
BAB III METODOLOGI PENELITIAN................................................................... 25
A. Jenis dan Rancangan Penelitian .................................................................... 25
B. Variabel Penelitian ....................................................................................... 25
C. Definisi Operasional .................................................................................... 26
D. Bahan dan Alat Penelitian............................................................................. 26
1. Bahan penelitian ....................................................................................... 26
x
2. Alat penelitian........................................................................................... 27
E. Tata Cara Penelitian...................................................................................... 27
1. Pembuatan Fase Gerak.............................................................................. 27
2. Pembuatan Metanol p.a. pH 4 ................................................................. 28
3. Pembuatan Larutan Baku Kurkumin ........................................................ 28
4. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum ............................................ 28
5. Preparasi Sampel ...................................................................................... 29
6. Optimasi Metode Kromatografi Lapis Tipis Densitometri ...................... 29
F. Analisis Data................................................................................................. 30
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................................... 32
A. Pembuatan Fase Gerak.................................................................................. 32
B. Pembuatan Metanol p.a. pH 4 ...................................................................... 34
C. Pembuatan Larutan Baku Kurkumin ........................................................... 35
D. Optimasi Pemisahan Kurkumin dalam Sampel OHT Cair Merk
“Kiranti®” secara KLT-Densitometri............................................................ 36
1. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Kurkumin ........................... 36
2. Preparasi Sampel ...................................................................................... 39
3. Optimasi Pemisahan Kurkumin pada Masing-Masing Fraksi Metanol
OHT Cair Merk “Kiranti®” ...................................................................... 39
xi
a. Pemisahan Kurkumin dengan Fase Gerak Kloroform p.a. : Etanol
p.a. : Aquadest dengan Perbandingan 25:0,96:0,04 ........................... 41
b. Pemisahan Kurkumin dengan Fase Gerak Kloroform p.a. : Asam
Asetat Glasial p.a. dengan Perbandingan 9,75:0,25 ........................... 43
c. Pemisahan Kurkumin dengan Fase Gerak Kloroform p.a. : Asam
Asetat Glasial p.a. dengan Perbandingan 9,50:0,50 ........................... 44
d. Pemisahan Kurkumin dengan Fase Gerak Kloroform p.a. : Asam
Asetat Glasial p.a. : Heksana p.a. dengan Perbandingan
8,50:1,00:0,50 ..................................................................................... 45
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN..................................................................... 50
A. Kesimpulan ................................................................................................... 50
B. Saran ............................................................................................................. 50
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................ 51
LAMPIRAN............................................................................................................... 55
BIOGRAFI PENULIS ............................................................................................... 79
xii
DAFTAR TABEL
Tabel I. Fase Diam dan Substansi yang Dipisahkan ................................................. 17
Tabel II. Indeks Polaritas Larutan Kimia...................................................................18
Tabel III. Hubungan antara Peak Asymmetry Factor dan Tailing Factor ............... 21
Tabel IV. Perbandingan Fase Gerak.......................................................................... 27
Tabel V. Perbandingan Fase Gerak dan Indeks Polaritas......................................... 32
Tabel VI. Hasil Pengukuran Panjang Gelombang Maksimum Seri Larutan Baku . 38
Tabel VII. Tabel Nilai Rf dan Resolusi Larutan Sampel Kurkumin pada BerbagaiKomposisi Fase Gerak............................................................................ 41
xiii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Struktur kurkumin, demetoksikurkumin dan bis-demetoksi kurkumin.. 6
Gambar 2. Isomer geometrik cis-trans dari bis-demetoksikurkumin....................... 7
Gambar 3. Struktur kimia kurkumin dalam berbagai pH.......................................... 8
Gambar 4. Contoh produk degradasi kurkumin pada pH alkali …………............. 9
Gambar 5. Produk fotodegradai kurkumin............................................................. 10
Gambar 6. Logo obat herbal terstandar (OHT)........................................................ 12
Gambar 7. Sampel OHT cair merk “Kiranti®”........................................................ 13
Gambar 8. Pengukuran tailing peak....................................................................... 20
Gambar 9. Pemisahan dua senyawa....................................................................... 22
Gambar 10. Gugus metilen aktif pada kurkumin .................................................. 35
Gambar 11. Gugus kromofor dan auksokrom pada kurkumin................................ 37
Gambar 12. Pola spektra seri larutan baku pada pengukuran panjang gelombangmaksimum ........................................................................................ 38
Gambar 13. Gugus nonpolar dan polar kurkumin.................................................. 40
Gambar 14. Interaksi kurkumin dengan fase diam .................................................. 40
Gambar 15. Pemisahan kurkumin dari berbagai senyawanya dengan fase gerakkloroform p.a. : etanol p.a : aquadest (25:0,96:0,04) ......................... 42
Gambar 16. Pemisahan kurkumin dari berbagai senyawanya dengan fase gerakkloroform p.a. : asam asetat glasial p.a (9,75:0,25) ............................ 43
Gambar 17. Pemisahan kurkumin dari berbagai senyawanya dengan fase gerakkloroform p.a. : asam asetat glasial p.a. (9,50:0,50) ............................45
Gambar 18. Pemisahan kurkumin dari berbagai senyawanya dengan fase gerakkloroform p.a. : asam asetat glasial p.a : heksana p.a.(8,50:1,00:0,50).................................................................................. 46
Gambar 19. Pemisahan kurkumin dari berbagai senyawanya dengan fase gerakkloroform p.a. : asam asetat glasial p.a. (9,50:0,50) ......................... 48
Gambar 20. Interaksi kurkumin dengan fase gerak kloroform p.a. : asam asetatglasial p.a. (9,50:0,50) ....................................................................... 49
xiv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat Pernyataan Jaminan Keaslian Bahan Kurkumin Standar HasilSintesis................................................................................................. 56
Lampiran 2. Data Penimbangan Bahan..................................................................... 57
Lampiran 3. Spektrum Stabilitas Kurkumin pada pH 4............................................ 58
Lampiran 4. Perhitungan Kepolaran Fase Gerak ......……........................................ 60
Lampiran 5. Sistem KLT-Densitometri yang Digunakan....................................... 61
Lampiran 6. Kromatogram pada Fase Gerak Kloroform p.a. : Etanol p.a. :Aquadest (25: 0,96 : 0,04)................................................................... 63
Lampiran 7. Kromatogram pada Fase Gerak Kloroform p.a. : Asam Asetat Glasialp.a. (9,75 : 0,25) ................................................................................. 65
Lampiran 8. Kromatogram pada Fase Gerak Kloroform p.a. : Asam Asetat Glasialp.a. (9,50 : 0,50) ................................................................................. 67
Lampiran 9. Kromatogram pada Fase Gerak Kloroform p.a. : Asam Asetat Glasialp.a. : Heksana p.a. (8,50 : 1,00 : 0,50) ................................................ 69
Lampiran 10. Kromatogram Pemisahan Kurkumin dengan Fase Gerak OptimumKloroform p.a. : Asam Asetat Glasial p.a. (9,50 : 0,50) Replikasi I.. 71
Lampiran 11. Kromatogram Pemisahan Kurkumin dengan Fase Gerak OptimumKloroform p.a. : Asam Asetat Glasial p.a. (9,50 : 0,50)Replikasi II ........................................................................................ 73
Lampiran 12. Kromatogram Pemisahan Kurkumin dengan Fase Gerak OptimumKloroform p.a. : Asam Asetat Glasial p.a. (9,50 : 0,50)Replikasi III ...... ..................................... .......................................... 75
Lampiran 13. Contoh Perhitungan As (Peak Asymmetry Factor), ResolusiPemisahan Campuran Kurkumin dengan Fase Gerak Kloroformp.a. : Asam Asetat Glasial p.a. (9,50 : 0,50) dan Perhitungan CV.... 77
xv
INTISARI
Kurkumin merupakan zat warna kuning yang berasal dari tanaman kunyit(Curcumae domesticae Val.). Dalam rimpang kunyit terdapat senyawa aktif yangsering digunakan sebagai obat tradisional berupa kurkuminoid yang bergunauntuk mengatasi analgesik misalnya nyeri haid. Kurkuminoid terdiri dari tigasenyawa yaitu kurkumin, demetoksikurkumin dan bis-demetoksikurkumin. Dariketiga senyawa kurkuminoid tersebut, kurkumin merupakan senyawa terbesar,yaitu 50- 60% dari total kurkuminoid. Kurkumin memiliki sifat fisika-kimia yangkurang stabil terhadap suhu, cahaya dan pH.
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental deskriptif dua tingkatkarena pada subyek uji diberikan dua perlakuan berupa perbedaan jenis danperbandingan komposisi fase gerak. Sistem KLT yang digunakan adalah fasenormal menggunakan fase diam lempeng KLT silika gel G60 dan fase gerakberupa kloroform p.a. : asam asetat glasial p.a. dan kloroform p.a. : asam asetatglasial p.a. : heksana p.a. dengan berbagai komposisi.
Parameter yang dioptimasi adalah jenis dan komposisi fase gerak.Kondisi optimum hasil penelitian yang diperoleh adalah fase gerak kloroform p.a.: asam asetat glasial p.a. (9,5 : 0,5) ditunjukkan dengan bentuk peakkromatogram yang runcing dilihat dari nilai peak asymmetry factor (As) antara0,9-1,2, nilai retardasi faktor (Rf) antara 0,2-0,8 , resolusi ≥ 1,5 dan CV ≤ 2.
Kata kunci : kurkumin, obat tradisional, KLT-densitometri, optimasi metode.
xvi
ABSTRACT
Curcumin is the yellow pigment derived from turmeric plant (Curcumaedomesticae Val.). In turmeric rhizome contained active compounds that are oftenused as traditional medicine in the form of curcuminoids are useful to overcomethe analgesic such as menstrual pain. Curcuminoids consists of three components,namely curcumin, demetoksikurkumin and bisdemetoksikurkumin. Of the threecompounds are curcuminoids, curcumin is the largest component, 50-60% of totalcurcuminoids. Curcumin has the physical-chemical properties that are less stableto temperature, light and pH.
This study is a descriptive experimental two levels because the testsubjects are given two treatments consisted of different types and comparison ofmobile phase composition. TLC system used was a normal phase using thestationary phase TLC plate silica gel G60 and a mobile phase chloroform p.a. :acetic acid glacial p.a. and chloroform p.a. : acetic acid glacial p.a. : hexane p.a.with various compositions.
The parameters optimized are the type and composition of mobile phase.The optimum conditions obtained research results are a mobile phase ofchloroform p.a. : acetic acid glacial p.a. (9,5 : 0,5), indicated by the shape of apointy peak chromatogram that the value of peak asymmetry factor (As) between0.9-1.2, the value of retardation factor (Rf) between 0.2 to 0.8, resolution ≥ 1.5and CV ≤ 2.
Key words: curcumin, traditional medicine, TLC-densitometry, optimizationmethods.
1
BAB IPENGANTAR
A. Latar Belakang
Kurkumin merupakan zat warna kuning yang berasal dari tanaman
kunyit (Curcumae domesticae Val.) (Chattopadhyay, Biswas, Bandyopadhyay,
Banerjee, 2004). Dalam tanaman kunyit khususnya pada rimpang kunyit terdapat
senyawa aktif yang sering digunakan sebagai obat tradisional berupa kurkuminoid
yang terdiri dari 3 senyawa yaitu kurkumin (diferuloilmetan), demetoksikurkumin
dan bis-demetoksikurkumin yang diindikasikan sebagai analgesik (Gaikar, Dandekar,
2001). Pemakaian kurkuminoid sebagai bahan obat sudah dikenal sejak dahulu
dalam berbagai sediaan obat tradisional dan telah dikonsumsi oleh masyarakat
luas misalnya untuk mengurangi nyeri haid (Orang Tua Group, 2005).
Penggunaan kurkumin sebagai bahan obat atau campuran obat dalam
sediaan obat tradisional harus diberikan dengan dosis tepat mengingat kebanyakan
sediaan obat tradisional yang beredar di pasaran hanya mencantumkan jumlah
simplisia dalam satuan bobot tertentu sehingga tidak diketahui secara pasti
kandungan kurkumin yang memberikan aktivitas farmakologis. Selain itu,
kurkumin memiliki sifat fisika-kimia yang kurang stabil terhadap cahaya dan pH.
Oleh karena itu, harus diketahui kadar kurkumin secara tepat dengan
menggunakan metode analisis yang tepat (Martono, 1996).
Salah satu obat tradisional yang diindikasikan sebagai analgesik serta
mengandung kurkumin sebagai senyawa aktif adalah obat herbal terstandar
(OHT) merk “Kiranti®”. OHT merupakan bentuk pengembangan dalam
2
pemanfaatan obat tradisional (OT) yang berupa sediaan obat bahan alam yang
telah dibuktikan keamanan dan khasiatnya secara ilmiah dengan uji praklinik dan
bahan bakunya telah distandarisasi. Kiranti® merupakan sediaan cair yang
mengandung berbagai ekstrak yaitu Curcumae domesticae Rhizoma (30g),
Tamarindi Pulpa (6g), Kaempferiae Rhizoma (3g), Arengae pinnata Fructose
(3g), Zingiberis Rhizoma (0,8g), Paullinia cupana (0,23g) dan Cinnamomi
Cortex (0,1g). Dalam OHT cair merk “Kiranti®” belum dilakukan penjaminan
mutu berupa penetapan kadar bahan berkhasiatnya yaitu kadar kurkumin. Dengan
adanya alasan tersebut, maka perlu dilakukan analisis terhadap kadar kurkumin
dalam OHT cair merk “Kiranti®”. Penjaminan mutu perlu dilakukan agar kadar
kurkumin dalam OHT yang telah diuji praklinik dapat memenuhi persyaratan
kadar sehingga dapat dipertanggungjawabkan khasiat dan keamanannya.
Metode yang dapat digunakan untuk menetapkan kadar kurkumin yang
terdapat dalam ekstrak Curcumae domesticae Rhizoma adalah metode
Kromatgrafi Lapis Tipis (KLT)-Densitometri dan Kromatografi Cair Kinerja
Tinggi atau lebih dikenal dengan High Performance Liquid Chromatography
(Martono, 1996; Zhang, Jinnnai, Ikeda, Wada, Hayashida, Nakashima, 2009).
Dalam penelitian ini dipilih analisis dengan metode KLT-Densitometri karena
metode KLT-Densitometri merupakan metode analisis kualitatif dan kuantitatif
yang digunakan untuk analisis senyawa multikomponen dalam sampel berupa
campuran senyawa. KLT cocok untuk analisis obat di laboratorium farmasi
karena metodenya sederhana, cepat dalam pemisahan, sensitif serta kecepatan
pemisahan tinggi (Khopkar, 1990).
3
Sebelum dilakukan penetapan kadar kurkumin yang terdapat dalam
sampel, perlu dilakukan optimasi untuk mengetahui sistem optimum untuk
penetapan kadar kurkumin dari berbagai senyawa dalam OHT cair merk
“Kiranti®”. Penelitian ini merupakan penelitian berkelanjutan berupa optimasi,
validasi dan penetepan kadar kurkumin dalam sediaan cair OHT merk “Kiranti®”
secara KLT - Densitometri.
Optimasi ini perlu dilakukan terutama karena dalam penelitian ini
menggunakan metode KLT-Densitometri dengan sistem yang baru yaitu
penggunaan komposisi fase gerak yang belum pernah dilakukan sebelumnya. Hal
tersebut karena OHT cair merk “Kiranti®” yang digunakan sebagai sampel belum
pernah diteliti sebelumnya sehingga untuk pemisahan kurkumin dari senyawa lain
dibutuhkan sistem baru pula. Kondisi sistem KLT-Densitometri yang optimum
perlu dicari agar diperoleh hasil pemisahan yang baik dari campuran kurkumin
dan senyawa lain. Kondisi optimum dapat diperoleh dengan optimasi fase gerak
yang digunakan dalam sistem KLT-Densitometri. Optimasi fase gerak yang dalam
hal ini adalah optimasi jenis dan komposisi dari fase gerak.
Pemilihan fase gerak untuk pemisahan kurkumin dari berbagai senyawa
dalam OHT cair merk “Kiranti®” berdasarkan penelitian sebelumnya yang
melakukan pemisahan kurkumin yang tercampur dengan turunan demetoksinya
dalam sampel serbuk kunyit dan E. Merck menggunakan fase gerak campuran
kloroform : etanol : aquadest (25:0,96:0,04) yang memiliki indeks polaritas 4,15
(Martono, 1996). Menurut Sherma dan Fried (2003) pada sistem KLT fase
normal, kekuatan interaksi dari pelarut dilakukan dengan cara pengurangan
4
kepolaran dengan penambahan heksana p.a. atau peningkatan kepolaran dengan
penambahan aquadest atau asam asetat glasial p.a.
Parameter dari kondisi optimum dari sistem KLT yang diteliti adalah
diperoleh hasil peak kromatogram runcing dilihat dari harga peak asymmetry
factor (As = b/a) antara 0,9-1,2 (Synder, Kirkland, Glajh, 1997), kemiripan Rf
sampel-baku dan nilai Rf antara 0,2-0,8 (Sherma,J., et.al., 2003). Dari Rf sampel
didapat resolusi ≥ 1,5 (Sherma,J., et.al., 2003) serta dari resolusi dihitung CV ≤ 2
(Harmita, 2004) pada tiga kali replikasi pada komposisi fase gerak optimum yang
didapat.
1. Perumusan masalah
Berdasarkan latar belakang di atas, maka permasalahan yang muncul
adalah bagaimana jenis dan perbandingan komposisi fase gerak dari sistem KLT
yang diteliti sehingga didapatkan parameter optimum berupa bentuk peak
kromatogram yang runcing dilihat dari nilai peak asymmetry factor (As) antara
0,9-1,2, Rf antara 0,2-0,8, resolusi (Rs) ≥ 1,5, dan CV ≤ 2 untuk memisahkan
kukumin dari berbagai senyawa dalam OHT cair merk “Kiranti®”.
2. Keaslian penelitian
Sejauh pengamatan penulis, penelitian tentang penetapan kadar kurkumin
secara KLT-Densitometri pernah dilakukan oleh Sudibyo Martono (1996) berupa
penentuan kadar kurkumin yang tercampur dengan turunan demetoksinya dalam
sampel serbuk kunyit dan E.Merck dengan fase gerak kloroform : etanol :
5
aquadest (25:0,96:0,04) dan fase diam silica gel 60 F254 diketahui memiliki
selektivitas, sensitivitas dan ketelitian yang cukup tinggi. Paramasivam et al.
(2008) pernah melakukan penelitian mengenai Occurrence of curcuminoids in
Curcuma longa : A quality standardization by HPTLC. Gupta et al. (1999)
melakukan penelitian tentang Simultaneous determination of curcuminoids in
curcuma samples using HPTLC. Penelitian mengenai kurkumin dalam OHT cair
“Kiranti®” menggunakan metode KLT-Densitometri belum pernah dilakukan.
3. Manfaat penelitian
a. Manfaat metodologis. Hasil penelitian ini diharapkan mampu
menambah khasanah pengetahuan mengenai penggunaan metode penetapan kadar
kurkumin secara KLT-Densitometri khususnya optimasi.
b. Manfaat praktis. Hasil penelitian ini diharapkan dapat digunakan
sebagai metode untuk analisis campuran multikomponen kurkuminoid dalam
suatu obat tradisional.
B. Tujuan Penelitian
Berdasarkan latar belakang dan permasalahan yang muncul maka
penelitian ini bertujuan untuk mengetahui jenis dan perbandingan komposisi fase
gerak dari sistem KLT yang diteliti sehingga didapatkan parameter optimum
berupa bentuk peak kromatogram yang runcing dilihat dari nilai peak asymmetry
factor (As) antara 0,9-1,2, Rf antara 0,2-0,8, resolusi (Rs) ≥ 1,5, dan CV ≤ 2 untuk
memisahkan kukumin dari berbagai senyawa dalam OHT cair merk “Kiranti®”.
6
BAB IIPENELAAHAN PUSTAKA
A. Kurkumin
Kurkumin merupakan zat warna kuning yang berasal dari tanaman kunyit
(Curcumae domesticae Val.). Kurkumin (diferuloilmetan) memiliki turunan/
derivat berupa demetoksikurkumin dan bis-demetoksikurkumin. Ketiga senyawa
ini disebut kurkuminoid secara keseluruhan. Dalam kurkuminoid, kandungan
kurkumin sebesar 77%, demetoksikurkumin 17% dan bis-demetoksikurkumin 3%
(Anggarwal, 1995). Sifat kepolaran dari yang paling polar sampai yang non polar
adalah sebagai berikut kurkumin, demetoksikurkumin, kemudian bis-
demetoksikurkumin (Aggarwal, et.al., 2006).
Gambar 1. Struktur kurkumin, demetoksikurkumin dan bis-demetoksikurkumin (Aggarwal, et.al., 2006)
7
Kurkumin yang memiliki nama lain 1,7-bis-(4`-hidroksi-3`-metoksifenil)
-1,6-heptadiena-3,5-dion, merupakan senyawa hasil isolasi dari tanaman Curcuma
sp dan telah berhasil dikembangkan sintesisnya oleh Pabon (1964). Kurkumin
telah diketahui memiliki aktivitas biologis seperti analgesik, antioksidan,
antikanker dan antimutagenik (Gaikar et al., 2001).
Sifat-sifat kurkumin adalah memiliki berat molekul = 368,37 g/mol (C =
68,47 %; H = 5,47 %; O = 26,06 %), berwarna kuning muda, titik lebur 1830 C
dan larut dalam pelarut organik (metanol, etanol atau benzena), asam asetat glasial
serta tidak larut dalam air (Tonnesen, Karlsen, 1985).
Selain konstituen mayor (kurkumin, demetoksi kurkumin dan bis
demetoksi kurkumin), konstituen minor juga dapat diisolasi yang memiliki bentuk
isomer geometrikal dari bis-demetoksikurkumin (Gambar 1). Satu diantaranya
berbentuk isomer geometrik cis-trans (Gambar 2) memiliki titik lebur, stabilitas
dalam larutan dan cahaya yang lebih rendah (Stankovic, 2004).
Gambar 2. Isomer geometrik cis-trans dari bis-demetoksikurkumin (Stankovic, 2004)
Kinetika reaksi degradasi hidrolisis dari senyawa cis-trans (Gambar 2)
terjadi pada rentang pH 1-11. Pada pH <1, diferuloilmetan pada larutan berair
8
berwarna merah yang diindikasikan terjadi protonasi dengan membentuk (H4A+).
Pada pH 1-7, sebagian besar diferuloilmetan berada dalam bentuk netral (H3A).
Pada pH ini kelarutannya dalam air sangat rendah dan larutan berwarna kuning.
Pada pH >7,5 warna berubah menjadi merah. Nilai pKa untuk disosiasi tiga
proton asam pada senyawa kurkumin (bentuk H2A-, HA2- dan A3-) secara berturut-
turut adalah 7,8; 8,5 dan 9,0 (Stankovic, 2004).
OHO
OCH3
OH
H3CO
HO
OHOH
OCH3
O
H3CO
HO H
OHO
OCH3
O
H3CO
HO
OHO
OCH3
O
H3CO
O
OO
OCH3
O
H3CO
O
H4A+
H3A
H2A-
HA2-
A3-
Gambar 3. Struktur kimia kurkumin dalam berbagai pH (Stankovic, 2004)
Prinsipnya kurkumin relatif stabil pada pH asam, tetapi akan
terdekomposisi secara cepat pada pH di atas netral. Pada penelitian degradasi
9
kimia pada pH basa terhadap senyawa kurkumin (Tonnesen,et.al., 1985), produk
dekomposisi pada pH 7-10 ditentukan secara HPLC. Produk degradasi terbentuk
setelah 5 menit dan kromatogram diperoleh setelah 28 jam pada pH 8,5
menunjukkan degradasi alkali sehingga terbentuk asam ferulat dan feruloilmetan.
Feruloilmetan secara cepat terbentuk produk kondensasi warna kuning sampai
kuning kecoklatan. Produk degradasi pada pH alkali yang terbentuk adalah
feruloilmetan adalah vanilin dan aseton serta jumlahnya meningkat seiring
bertambahnya waktu (Stankovic, 2004).
Gambar 4. Contoh produk degradasi kurkumin pada pH alkali (Stankovic, 2004)
Selain pH lingkungan, sifat kurkumin yang tidak kalah penting adalah
sensitivitasnya pada cahaya. Bila kurkumin terkena cahaya, akan terjadi
dekomposisi struktur berupa degradasi fotokimia senyawa tersebut. Prinsipnya,
kurkumin tidak stabil terhadap cahaya terutama dalam bentuk larutan. Produk
10
fotodegradasi kurkumin misalnya adalah asam vanilat, vanilin dan asam ferulat
(Sasaki, Sat, Abe, Sugimoto, Maitani, 1998).
Gambar 5. Produk fotodegradasi kurkumin (Tonnesen, Greenhill, 1992)
Karena sifatnya yang tidak stabil, kurkumin harus segera diukur
menggunakan densitometer (TLC Scanner) sesaat setelah pengembangan selesai.
Analisis penetapan kadar kurkumin dilakukan pada panjang gelombang
maksimum (λmaks) visibel yaitu pada 425 nm (Mohammad, Ahmad, Daud, 2007).
Pengukuran pada daerah visibel dikarenakan kurkumin memiliki warna (kuning)
sehingga panjang gelombang terletak antara 400-800 nm, memiliki gugus kromofor
yang panjang dan gugus auksokrom serta memiliki bentuk molekul.
11
B. Obat Herbal Terstandar (OHT)
1. Tinjauan Umum
Obat herbal terstandar (Scientific based herbal medicine) adalah sediaan
obat bahan alam yang telah dibuktikan keamanan dan khasiatnya secara ilmiah
dengan uji praklinik dan bahan bakunya telah distandarisasi. OHT harus
memenuhi kriteria:
a. Aman sesuai dengan persyaratan yang ditetapkan. Aman memiliki arti berada
di dalam jendela terapi antara kadar efek maksimum (KEM) dan kadar toksik
minimum (KTM).
b. Klaim khasiat dibuktikan secara ilmiah/pra-klinik. Pembuktian ilmiah ini
berupa penelitian pra-klinik meliputi standarisasi kandungan bahan berkhasiat,
standarisasi pembuatan ekstrak tanaman obat, standarisasi pembuatan obat
tradisional yang higienis serta uji toksisitas akut maupun kronis.
c. Telah dilakukan standardisasi bahan baku yang digunakan dalam produk jadi.
d. Memenuhi persyaratan mutu yang berlaku.
e. Jenis klaim penggunaan sesuai dengan tingkat pembuktian yaitu tingkat
pembuktian umum dan medium (Badan POM RI, 2004).
Standarisasi dan pengukuran regulasi digunakan untuk kontrol kualitas
dari OHT. Mutu suatu sediaan obat bahan alam tidak dapat terjadi begitu saja
tetapi perlu dilakukan suatu langkah yang menyeluruh meliputi :
a. Mutu harus direncanakan. Hal ini diwujudkan dengan penetapan metode dan
proses fabrikasinya
12
b. Mutu harus dibangun selama proses fabrikasi berjalan, yaitu sejak dari bahan
baku sampai terbentuknya sediaan obat bahan alam yang dimaksud.
c. Melakukan kontrol (Depkes RI, 1987).
Gambar 6. Logo obat herbal terstandar (OHT) (PT Phapros, 2010)
2. Standarisasi Simplisia
Salah satu cara untuk mengendalikan mutu simplisia adalah dengan
melakukan standarisasi simplisia dan ekstrak (sediaan galenik), karena khasiat
suatu tanaman tergantung pada kandungan kimianya, dimana kandungan kimia ini
dipengaruhi oleh banyak faktor antara lain tempat tumbuh, iklim, curah hujan,
panen. Standarisasi diperlukan agar dapat diperoleh bahan baku yang seragam
yang akhirnya dapat menjamin efek farmakologi tanaman tersebut (Hanani,
2009).
Standarisasi bahan baku simplisia yang dilakukan meliputi penetapan
kadar minyak atsiri, penetapan kadar abu, penetapan kadar abu yang tidak larut
dalam asam, penetapan kadar abu larut air, penetapan kadar air, penetapan susut
pengeringan, penetapan kadar sari yang larut dalam air, penetapan kadar sari
yang larut dalam etanol, penetapan bahan organik asing dan penetapan kadar tanin
(Dirjen POM RI, 1995b).
Dengan standarisasi pemerintah melakukan fungsi pembinaan dan
pengawasan serta melindungi konsumen untuk tegaknya trilogi “mutu, keamanan
dan manfaat”. Pengertian standarisasi juga berarti proses menjamin bahwa produk
13
akhir mempunyai nilai parameter tertentu yang konstan dan ditetapkan terlebih
dahulu (Badan POM RI, 2005).
C. Kiranti®
Kiranti®merupakan Obat Herbal Terstandar yang memiliki indikasi untuk
mengatasi rasa nyeri, perasaan letih, bau badan tak sedap saat haid serta keputihan
(Orang Tua Group, 2010).
Gambar 7. Sampel OHT cair merk “Kiranti®” (Orang Tua Group, 2010)
Kiranti merupakan sediaan cair yang mengandung berbagai ekstrak yaitu
Curcumae domesticae Rhizoma (30g), Tamarindi Pulpa (6g), Kaempferiae
Rhizoma (3g), Arengae pinnata Fructose (3g), Zingiberis Rhizoma (0,8g),
Paullinia cupana (0,23g) dan Cinnamomi Cortex (0,1g) (Orang Tua Group,
2010).
D. Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
1. Tinjauan Umum
Kromatografi didefinisikan sebagai prosedur pemisahan zat terlarut oleh
suatu proses migrasi diferensial dinamis oleh sistem yang terdiri dari dua fase atau
lebih, salah satu diantaranya bergerak secara berkesinambungan dalam arah
14
tertentu dan di dalamnya zat-zat itu menunjukkan perbedaaan mobilitas
disebabkan perbedaan dalam adsorpsi, partisi, kelarutan, tekanan uap, ukuran
molekul, atau kerapatan muatan ion (Dirjen POM RI, 1995a).
Teknik kromatografi umumnya membutuhkan zat terlarut terdistribusi di
antara dua fase, satu diantaranya diam (fase diam), yang lainnya bergerak (fase
gerak). Fase gerak membawa zat terlarut melalui media, hingga terpisah dari zat
terlarut lainnya, yang terelusi lebih awal atau lebih akhir. Umumnya zat terlarut
dibawa melalui media pemisah oleh aliran suatu pelarut berbentuk cairan atau gas
yang disebut eluen. Fase diam dapat menjadi zat penjerap, seperti halnya penjerap
alumina yang diaktifkan, silika gel dan resin penukar ion. Dalam praktek, sering
kali pemisahan disebabkan oleh suatu kombinasi efek adsorpsi dan partisi (Dirjen
POM RI, 1995a).
Kromatografi merupakan cara pemisahan yang berdasarkan partisi
cuplikan antara fase gerak dan fase diam. Kromatografi mempunyai beberapa
keuntungan antara lain:
a. Metode pemisahan cepat dan mudah
b. Menggunakan peralatan yang murah dan sederhana
c. Membutuhkan campuran cuplikan yang sedikit
d. Pekerjaan dapat diulang (Hardjono, 1983).
2. Kromatografi Lapis Tipis
Kromatografi lapis tipis adalah suatu cara pemisahan yang berdasarkan
pada pembagian campuran senyawa dalam dua fase, dimana fase gerak bergerak
terhadap fase diam dan fase diam berupa suatu bidang datar. Analisis dengan
15
kromatografi lapis tipis (KLT) sering digunakan karena prosedurnya sederhana,
pemisahan lebih cepat dan baik serta dapat memisahkan dalam jumlah yang relatif
kecil sampai beberapa mikrogram (Stahl, 1969).
Dalam pemisahan suatu senyawa harus dipilih fase diam, fase gerak dan
cara kerja yang sesuai. Pemisahan yang lebih baik dapat diperoleh dengan
mengadakan perubahan-perubahan pada fase diam, fase gerak dan cara kerja yang
antara lain meliputi kejenuhan, temperatur dalam bejana kromatografi, cara
pengembangan dan keadaan permukaan (Stahl, 1969).
Fase diam yang digunakan dalam KLT adalah bahan penjerap
(adsorbent). Dua sifat penting yang harus diperhatikan untuk KLT adalah besar
dan kecilnya partikel penyerap serta homogenitasnya. Sebab daya lekat pada
pendukung sangat ditentukan oleh kedua sifat tersebut. Fase gerak adalah suatu
medium angkut dan terdiri atas satu atau beberapa pelarut. Pemilihan suatu pelarut
untuk digunakan sebagai fase gerak sama pentingnya dengan pemilihan fase diam.
Fase gerak tidak hanya tersusun sebagai sarana pengangkutan tetapi juga
mempengaruhi koefisien pembagian melalui daya larutnya. Di samping kelarutan
relatif zat terlarut dalam fase gerak perlu dipertimbangkan pula persaingan antara
zat terlarut dengan pelarut terhadap bidang adsorbsi pada permukaan fase diam.
Pelarut yang mengelusi terlalu cepat tidak akan dapat memisahkan dengan baik,
sebaliknya pelarut yang bergerak terlalu lambat akan memberikan waktu elusi
yang terlalu panjang (Stahl, 1969).
Pada kromatogram KLT dikenal istilah atau pengertian faktor retardasi
(Rf) untuk tiap-tiap noda kromatogram didefinisikan sebagai perbandingan antara
16
jarak migrasi senyawa dengan jarak migrasi fase gerak. Baik untuk analisis
kualitatif maupun kuantitatif dapat ditentukan kebenaran analit dengan
membandingkan harga Rf standar dan baku. Harga Rf ini adalah tetapan fisika
yang dipengaruhi oleh beberapa faktor seperti tebal lapisan, kelembaban udara,
fase gerak, bahan penyerap, dan suhu (Sastrohamidjojo, 1985). Harga Rf dapat
ditentukan dengan:
Angka Rf berkisar antara 0,00 dan 1,00 dan hanya dapat ditentukan dua
desimal. hRf adalah angka Rf dikalikan faktor 100 (h), menghasilkan nilai
berjangka 0 sampai 100 (Stahl, 1985).
3. Sistem KLT
a. Fase diam. Fase diam yang sering digunakan dalam KLT adalah
bahan penjerap (adsorben). Silika gel merupakan penjerap yang paling banyak
digunakan dalam KLT. Pada umumnya ditambah dengan bahan pengikat untuk
memberikan kekuatan perlekatan pada pendukungnya. Bahan pengikat yang
sering digunakan adalah gipsum, dan silika gel yang diberikan tambahan senyawa,
ini dikenal dengan istilah ”silika gel G”. Bahan penjerap lain yang digunakan
adalah alumina, selulosa, sefadex, poliamida, kieselguhr, dan amilum (Harborne,
1973).
Beberapa substansi bahan kimia dapat dipisahkan dengan fase diam
seperti pada tabel berikut sebagai salah satu alternatif.
17
Tabel I. Fase diam dan substansi yang dipisahkan (Mulja, Suharman, 1995)
Adsorben Mekanismepemisahan
Substansi yang dapat dipisahkan
Silika gel Absorpsi Steroid, asam amino, lemak, alkohol,hidrokarbon, alflatoksin, asam empedu,vitamin, alkaloida
Silika gel-reve rsed phase RP Asam lemak, vitamin, hormon steroid,karotenoid
Selulosa, kilserguhr Partisi Karbohidrat, gula, alkohol, asamkarboksilat, asam lemak
Aluminium oksida Adsorpsi Amina, alkohol, steroid, lemak, aflatoksin,asam empedu, vitamin, alkaloid
Poliamide (Floresie) selulosa Pertukaran ion Asam nukleat, nukleotida, purin, pirimidinMg silikat Absorpsi Steroid pestisida, lemak alkaloid
b. Fase gerak. Fase gerak adalah medium angkut yang terdiri atas satu
atau beberapa pelarut. Fase gerak bergerak di dalam fase diam yaitu lapisan
berpori karena ada gaya kapiler. Yang digunakan adalah pelarut bertingkat mutu
analitik dan bila diperlukan sistem pelarut multikomponen, maka harus berupa
suatu campuran sederhana terdiri atas maksimum tiga komponen (Stahl, 1985).
Komposisi fase gerak yang digunakan dapat mempengaruhi variasi
retensi analit untuk pemisahan yang optimum. Sehingga fase gerak dapat
disesuaikan komposisinya agar diperoleh kepolaran relatif yang mirip dengan
sampel untuk memperoleh pemisahan yang optimum (Willard, Merrit, Dean,
Settle, 1988).
Kepolaran pelarut merupakan ukuran kekuatan pelarut untuk mengelusi
suatu senyawa. Kepolaran pelarut dinyatakan dalam bentuk indeks polaritas (IP).
Besarnya polaritas campuran pelarut dapat dihitung dengan persamaan berikut:
dengan adalah fraksi pelarut dalam campuran dan n adalah jenis pelarut yang
digunakan (Skoog, Hooler, Nieman, 1988).
18
Tabel II. Indeks Polaritas Larutan Kimia (Burdick, Jackson, 2010)
Indeks Polaritas (IP)Pentana 0,0Heptana 0,1Heksana 0,1Iso-oktana 0,1Petroleum eter 0,1Sikloheksana 0,2n-butil klorida 1,0Toluen 2,4Metil t-butil eter 2,5Klorobenzena 2,7o-diklorobenzena 2,7Diklorometana 3,1Etilen diklorida 3,5n-butil alkohol 3,9Isopropil alkohol 3,9n-butil asetat 4,0Isobutil alkohol 4,0Tetrahidrofuran (THF) 4,0Kloroform 4,1Metil isobutil keton 4,2Etil asetat 4,4Metil n-propil keton 4,5Metil etil keton 4,71,4-dioksan 4,8Aseton 5,1MetanolEtano
5,15,2
Piridin 5,32-metoksietanol 5,5Asetonitril 5,8Propilen karbonat 6,1Asam asetat glasial 6,2Dimetil asetamid 6,5N-metil pirolidon 6,7Dimetil sulfoksida 7,2Air 10,2
Untuk KLT fase normal, kekuatan interaksi dari pelarut dilakukan dengan
pengurangan kepolaran dengan pelarutan heksana p.a. atau peningkatan dengan
penambahan air atau asam asetat glasial p.a. sehingga nilai Rf berada dalam range
optimum antara 0,2-0,8 (Sherma,et.al., 2003).
19
4. KLT-Densitometri
KLT-Densitometri merupakan salah satu metode analisa kuantitatif.
Penetapan kadar suatu senyawa dengan metode ini dilakukan dengan mengukur
kerapatan bercak senyawa yang dipisahkan dengan cara KLT. Pada umumnya
pengukuran kerapatan bercak tersebut dibandingkan dengan kerapatan bercak
senyawa standar yang dielusi bersama-sama (Hardjono, 1985).
Metode densitometri mempunyai cara kerja yang sederhana dan cepat.
Pada metode densitometri diperlukan adsorben dan fase gerak yang murni. Untuk
memperoleh hasil yang baik lazimnya digunakan adsorben siap pakai yang telah
mengalami pra pencucian (Gritter, 1991).
Penelusuran bercak akan mendapatkan hasil yang baik apabila dilakukan
pada panjang gelombang maksimum, karena perubahan konsentrasi pada bercak
sedikit saja sudah terdeteksi (Mintarsih, 1990). Bercak yang kecil dan intensif
akan menghasilkan suatu puncak kurva absorbsi yang sempit dan tajam,
sebaliknya bercak yang lebar akan menghasilkan puncak kurva absorbsi yang
melebar dan tumpul (Sudjadi, 1988).
5. Optimasi Metode
Parameter – parameter yang digunakan untuk optimasi metode dalam
KLT-Densitometri adalah :
a. Sensitivitas (sensitivity) adalah kemampuan untuk mendeteksi atau mengukur
analit yang berukuran mikro (kecil).
b. Selektivitas (selectivity) adalah kemampuan sistem kromatografi untuk
memproduksi nilai Rf berbeda untuk tiap senyawa dalam suatu campuran.
20
c. Efisiensi (efficiency) adalah keruncingan peak dibandingkan panjangnya waktu
dari senyawa kontak dengan fase diam. Analisis KLT-Densitometri mencari
kondisi yang menghasikan puncak simetris karena puncak yang asimetris dapat
menghasilkan perhitungan yang tidak teliti, penurunan derajat resolusi serta
waktu keluarnya peak yang tidak reprodusibel.
Gambar 8. Pengukuran tailing peak (Synder et.al., 1997)
Parameter yang digunakan untuk menilai bentuk peak kromatogram adalah peak
asymmetry factor (As) yang diukur pada 10% tinggi puncak.
Puncak yang simetri memiliki nilai As sama dengan 1, sedangkan puncak dengan
nilai As pada rentang 0,9-1,2 masih dikatakan baik. Parameter lain yang dapat
digunakan yaitu peak tailing factor (Tf) yang diukur pada 5% tinggi puncak.
21
Untuk nilai keasimetrisan kurang dari 2, As dan Tf nilainya mirip. Berikut tabel
hubungan antara As dan Tf (Synder et.al., 1997).
Tabel III. Hubungan antara peak asymmetry factor dan tailing factor (Synder, et.al., 1997)
Peak asymmetry factor(pada 10%)
Peak tailing factor(pada 5%)
1,0 1,01,3 1,21,6 1,41,9 1,62,2 1,82,5 2,0
d. Nilai retardasi faktor (Rf) adalah nilai rasio dari jarak migrasi center of a zone
analit dibagi jarak migrasi pelarut, keduanya diukur dari permulaan perambatan.
Rf dapat dihitung dengan persamaan:
Harga Rf yang baik antara 0,2-0,8. Hal ini dikarenakan pada Rf ini didapatkan
resolusi optimum dimana peningkatan resolusi pada KLT dalam
pengembangan satu dimensi untuk meningkatkan selektivitas dengan berbagai
komposisi fase gerak (Sherma, et.al., 2003).
e. Faktor resolusi (Rs) adalah ukuran pemisahan dari dua puncak yang berdekatan
dapat diukur dengan persamaan:
Pemisahan dua senyawa dapat digambarkan sebagai berikut:
22
Gambar 9. Pemisahan dua senyawa (Johnson dan Stevenson, 1978)
Harga Rs ≥ 1,5 disebut baseline resolution, yaitu pemisahan sempurna dari dua
puncak yang berdekatan. Dalam prakteknya, pemisahan dengan harga Rs = 1,0
(kedua puncak berhimpit lebih kurang 2%) dianggap memadai (Pescok,
Shields, Caims, 1976). Untuk pemisahan yang baik Rs harus ≥ 1,5 karena
berarti pemisahan kedua senyawa ≥ 99,7% (Sastrohamidjojo, 2002).
f. Coefficient of corelation (CV) adalah nilai absolut dari standar deviasi, nilainya
biasa dalam bentuk persentase. CV ini biasa digunakan dalam kimia analisis
untuk mengekspresikan presisi dan keterulangan dari suatu analisis. Cara
menghitungnya adalah standar deviasi dari seri replikasi analisis sampel dibagi
rata-rata, hasilnya dikali 100. Rumusnya :
CV yang baik bila ≤ 2 (Sherma,et.al., 2003).
23
E. Landasan Teori
Kurkumin merupakan zat warna kuning yang terdapat dalam tanaman
kunyit. Stabilitas dari kurkumin sangat dipengaruhi oleh pH lingkungan dan
cahaya sehingga kurkumin harus dijaga pada pH kurang dari 7 dan diperhatikan
sensitivitasnya terhadap cahaya. Kurkumin merupakan salah satu contoh senyawa
kimia yang terkandung dalam OHT. Kurkumin banyak digunakan dalam OHT
karena memiliki aktivitas farmakologis yang bermacam-macam, misalnya
analgesik, antioksidan, antikanker dan antimutagenik. OHT dapat dibuktikan
keamanan dan khasiatnya secara ilmiah dengan uji praklinik, telah mengalami
standarisasi bahan baku, memenuhi kriteria aman, memenuhi persyaratan mutu
yang berlaku serta jenis klaim penggunaan sesuai tingkat pembuktian umum dan
medium. Kiranti® merupakan OHT cair yang mengandung kurkumin sebagai
senyawa aktif dan diindikasikan sebagai analgesik.
Kurkumin yang terdapat dalam OHT cair merk “Kiranti®” dianalisis
menggunakan metode KLT-Densitometri, yang merupakan metode analisis
kualitatif dan kuantitatif yang dapat digunakan untuk analisis senyawa
multikomponen dalam sampel yang berupa campuran senyawa. Metodenya
sederhana, kecepatan pemisahan tinggi, sensitif artinya dapat menganalisis suatu
senyawa dengan kadar yang sangat kecil dan selektif terhadap senyawa yang akan
dianalisis. Parameter yang optimum dari optimasi metode ini adalah hasil peak
kromatogram runcing dilihat dari nilai peak asymmetry factor (As) antara 0,9-1,2;
nilai Rf antara 0,2-0,8; resolusi ≥ 1,5 serta CV ≤ 2.
24
F. Hipotesis
Kurkumin yang terdapat dalam OHT cair merk “Kiranti®” dapat
dipisahkan dari berbagai senyawa lainnya dengan metode KLT-Densitometri
dengan menggunakan jenis dan perbandingan komposisi fase gerak optimum dari
sistem KLT yang diteliti dengan parameter bentuk peak kromatogram yang
runcing dilihat dari nilai peak asymmetry factor (As) antara 0,9-1,2; nilai Rf
antara 0,2-0,8; resolusi ≥ 1,5 dan CV ≤ 2.
25
BAB IIIMETODOLOGI PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental deskriptif dua
tingkat karena pada subyek uji diberikan dua perlakuan berupa perbedaan jenis
dan perbandingan komposisi fase gerak.
B. Variabel Penelitian
1. Variabel bebas
Variabel bebas pada penelitian ini adalah jenis dan perbandingan
komposisi fase gerak yaitu kloroform p.a. : asam asetat glasial p.a. dan kloroform
p.a. : asam asetat glasial p.a. : heksana p.a.
2. Variabel tergantung
Variabel tergantung pada penelitian ini adalah bentuk peak kromatogram
yang runcing dilihat dari nilai peak asymmetry factor (As) antara 0,9-1,2, nilai
retardasi faktor (Rf) antara 0,2-0,8, resolusi ≥ 1,5, dan CV ≤ 2.
3. Variabel pengacau terkendali
Variabel pengacau terkendali pada penelitian ini adalah:
a. Kemurnian pelarut. Untuk mengatasinya, digunakan pelarut pro analysis yang
memiliki kemurnian tinggi.
b. pH larutan. Untuk mengatasinya dilakukan pengaturan pH larutan baku
kurkumin, yaitu pada pH 4.
26
c. Cahaya. Untuk mengatasinya, pengerjaan dilakukan diruangan dengan
intensitas cahaya yang terbatas serta dengan penggunaan alumunium foil.
C. Definisi Operasional
1. Sistem KLT fase normal yang digunakan dalam penelitian adalah fase diam
berupa lempeng KLT silika gel G60 dan fase gerak dengan perbandingan
kloroform p.a. : asam asetat glasial p.a. (9,75: 0,25; 9,50: 0,50; dan 9,00:1,00)
serta kloroform p.a. : asam asetat glasial p.a. : heksana p.a. (9,75: 0,125:0,125;
9,25: 0,25: 0,50; 8,50: 1,00: 0,50; dan 8,00: 0,50: 1,50).
2. Kadar kurkumionid yang terhitung sebagai kadar kurkumin dinyatakan dalam
satuan part per million (ppm).
3. Parameter optimasi yang digunakan adalah bentuk peak kromatogram yang
runcing dilihat dari nilai peak asymmetry factor (As) antara 0,9-1,2, nilai
retardasi faktor (Rf) antara 0,2-0,8, resolusi ≥ 1,5, dan CV ≤ 2.
D. Bahan dan Alat Penelitian
1. Bahan penelitian
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah baku kurkumin (hasil
sintesis Prof. Dr. Sudibyo Martono, M. S., Apt. yang telah dikonfirmasi
strukturnya dengan metode spektroskopi H-NMR dan Mass Spectra, serta
memiliki titik lebur 181,2-182,40C), metanol p.a. EMSURE® ACS,ISO,Reag. Ph
Eur (E. Merck), kloroform p.a. EMSURE® ACS,ISO,Reag. Ph Eur (E. Merck),
etanol p.a. EMSURE® ACS,ISO,Reag. Ph Eur (E.Merck), asam asetat glasial p.a.
27
EMPARTA® ACS (E. Merck), heksana p.a. EMSURE® ACS (E. Merck), lempeng
KLT silika gel G60 (E. Merck), aquadest, metanol teknis, sampel OHT cair merk
“Kiranti®” yang mengandung kurkumin.
2. Alat penelitian
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah neraca analitik (Scaltec
SBC 22 max 60/210 g; min 0,001 g; d=0,01/0,1 mg; e=1 mg), ultrasonikator
(Retsch tipe T460 Schwing1 PXE, FTZ-Nr.C-066183, HF-Freq = 35 kHz), fase
diam lempeng KLT silika gel G60 (E. Merck), bejana kromatografi, densitometer
(CAMAC TLC Scanner 3 CAT. No. 027.6485 SER. No.160602), pipet mikro 1-5
µL, pipet mikro 100-1000 µL, pipet mikro 0,5-5 ml, labu ukur 5 ml (Pyrex), labu
ukur 10 ml (Pyrex), labu ukur 25 ml (Pyrex), flakon, pengaduk, gelas arloji, pipet
tetes, corong, Beaker glass, magnetic stirer dan Hotplate Stirer Lab. Tech Model:
LMS-1003, V OHS = 220 V 50 Hz, Wats = 500 W 3A. Serial No. 08210004.
E. Tata Cara Penelitian
1. Pembuatan fase gerak
Pada penelitian ini perbandingan jenis dan komposisi fase gerak yang
digunakan untuk optimasi adalah sebagai berikut:
Tabel IV. Perbandingan Fase Gerak
Komposisi fasegerak
kloroformp.a.
etanolp.a.
aquadest heksanap.a.
asam asetatglasial p.a.
Komposisi I 25 0,96 0,04 - -Komposisi II 9,75 - - - 0,25Komposisi III 9,50 - - - 0,50Komposisi IV 8,50 - - 0,50 1,00
28
2. Pembuatan metanol p.a. pH 4
Membuat metanol p.a. pH 4 sebagai pelarut dengan perbandingan
metanol p.a. : asam asetat glasial p.a. (9:1), kemudian diukur pH menggunakan
kertas indikator pH. Apabila pH masih > 4 maka ditambahkan asem asetat glasial
p.a. hingga pH 4, sebaliknya bila pH < 4 ditambahkan metanol p.a.
3. Pembuatan larutan baku kurkumin
a. Pembuatan larutan stok. Menimbang seksama lebih kurang 10,0 mg
baku kurkumin dilarutkan dengan metanol p.a. pH 4 dalam labu takar 10,0 ml
hingga tanda.
b. Pembuatan seri larutan baku. Membuat konsentrasi seri larutan baku
kurkumin rendah, sedang, tinggi (25, 100, 175 ppm) dengan mengambil 0,125,
0,500, dan 0,875 ml larutan baku kurkumin, masukkan masing-masing dalam
labu takar 5,0 ml dilarutkan dengan metanol p.a. pH 4 hingga tanda.
4. Penentuan panjang gelombang maksimum
Penentuan panjang gelombang maksimum menggunakan seri larutan
baku dengan salah satu fase gerak pada point 1 (komposisi I). Ketiga larutan baku
kurkumin konsentrasi rendah, sedang, tinggi (25, 100, 175 ppm) masing-masing
ditotolkan sebanyak 3 μl pada lempeng KLT silika gel G60, dikembangkan dalam
bejana kromatografi yang telah dijenuhi oleh fase gerak komposisi I.
Pengembangan dilakukan setinggi 10 cm. Segera setelah selesai pengembangan
dikeringkan secara cepat. Bercak yang timbul dibaca absorbansinya pada daerah
29
panjang gelombang 400-500 nm. Didapatkan panjang gelombang maksimum
larutan baku kurkumin pada berbagai konsentrasi.
5. Preparasi sampel
Sebanyak 1,0 ml sampel OHT cair merk “Kiranti®” yang sudah
dihomogenkan menggunakan stirer selama 15 menit dimasukkan ke dalam labu
takar 10,0 ml kemudian diencerkan dengan metanol p.a. pH 4 hingga tanda.
Larutan kemudian disari menggunakan ultrasonikator selama 15 menit dan
disaring kemudian diencerkan dengan metanol p.a. pH 4 dalam labu takar 10,0 ml
hingga tanda.
6. Optimasi metode Kromatografi Lapis Tipis Densitometri
Larutan baku kurkumin dengan konsentrasi 25, 100, 175 ppm dan sampel
ditotolkan sebanyak 3 μl pada lempeng KLT silika gel G60 kemudian segera
dikembangkan dalam bejana kromatografi yang telah dijenuhi fase gerak yang
sudah dibuat pada point 1. Pengembangan dilakukan setinggi 10 cm. Segera
keluarkan lempeng KLT silika gel G60, dikeringkan dan secepatnya discanning
dengan KLT-densitometer pada panjang gelombang maksimum yang diperoleh
pada point 4. Data kromatogram yang didapat, dilihat kemiripan antara Rf baku
dan Rf sampel. Pada kromatogram larutan sampel dianalisis sehingga didapat
sistem KLT yang dapat memberikan pemisahan kurkumin dari berbagai senyawa
dalam OHT cair merk “Kiranti®” yang baik dengan parameter hasil peak
30
kromatogram yang runcing dilihat dari nilai peak asymmetry factor antara 0,9-1,2,
Rf antara 0,2-0,8 serta resolusi ≥ 1,5.
Komposisi fase gerak optimum yang didapat dilakukan replikasi
sebanyak 3 kali untuk melihat keterulangan sistem KLT yang digunakan.
Paramater untuk melihat keterulangan sistem KLT yang digunakan adalah nilai
koefisien korelasi (CV) ≤ 2.
F. Analisis Data
Data hasil optimasi pemisahan kurkumin dalam OHT merk “Kiranti®”
dengan berbagai jenis dan komposisi fase gerak dapat dianalisis dengan :
1. Dipilih hasil kromatogram yang memberikan peak paling runcing dengan
menghitung nilai peak asymmetry factor (As) yang diukur pada 10% tinggi
puncak. Puncak yang simetri memiliki nilai As sama dengan 1, namun puncak
dengan nilai As pada rentang 0,9-1,2 masih dikatakan baik.
2. Kemiripan nilai Rf sampel dan nilai Rf baku dengan nilai Rf antara 0,2-0,8.
3. Resolusi (Rs) dihitung pada masing-masing fase gerak pada larutan sampel
dengan membandingkan peak kurkumin dan peak senyawa lain di sampingnya
menggunakan rumus dan dipilih kromatogram pada fase gerak yang
resolusinya ≥ 1,5.
31
4. Dihitung CV dari nilai Rs pada tiga kali replikasi larutan sampel pada fase
gerak optimum terpilih dengan menggunakan rumus dan diperoleh CV ≤ 2.
32
BAB IVHASIL DAN PEMBAHASAN
A. Pembuatan Fase Gerak
Sistem kromatografi yang digunakan dalam analisis senyawa kurkumin
dari berbagai senyawa lainnya dalam OHT cair merk “Kiranti®” adalah sistem
kromatografi fase normal yang artinya fase diam lebih polar daripada fase gerak.
Kurkumin merupakan analit yang bersifat non polar sehingga mempunyai afinitas
yang lebih besar terhadap fase gerak dibandingkan dengan fase diam dan akan
dielusi lebih cepat daripada analit yang bersifat polar. Fase gerak yang akan
dioptimasi dalam penelitian ini ada empat yaitu:
Tabel V. Perbandingan Fase Gerak dan Indeks Polaritas
Komposisifase gerak
kloroformp.a.
etanolp.a.
aquadest heksanap.a.
asam asetatglasial p.a.
Indekspolaritas
Komposisi I 25 0,96 0,04 - - 4,15Komposisi II 9,75 - - - 0,25 4,15Komposisi III 9,50 - - - 0,50 4,21Komposisi IV 8,50 0,50 1,00 4,11
Pemilihan komposisi fase gerak didasarkan pada penelitian sebelumnya
yaitu pemisahan kurkumin yang tercampur dengan turunan demetoksinya dalam
sampel serbuk kunyit dan E. Merck menggunakan fase gerak campuran kloroform
: etanol : aquadest (25:0,96:0,04) yang memiliki indeks polaritas 4,15 (Martono,
1996). Modifikasi yang dilakukan ditujukan untuk meningkatkan atau
menurunkan polaritas dari fase gerak. Modifikasi ini diperlukan karena pada
penerapan fase gerak kloroform : etanol : aquadest (25:0,96:0,04) pada sampel
merk “Kiranti®” hasil pemisahan tidak tercapai baseline. Modifikasi komposisi
berupa kenaikan polaritas fase gerak yaitu kloroform p.a. : etanol p.a. : aquadest
33
(20:2:1) memiliki IP=4,45 dan kloroform p.a. : etanol p.a. : aquadest (30:1:1)
yang memiliki IP=4,32. Pada pembuatan kedua fase gerak ini telah dilakukan tiga
kali, tetapi campuran fase gerak yang dihasilkan membentuk emulsi sehingga
modifikasi komposisi fase gerak tidak dapat dilakukan.
Menurut Sherma, et.al., (2003) pada sistem KLT fase normal, kekuatan
interaksi dari fase gerak dilakukan dengan pengurangan kepolaran dengan
pelarutan heksana p.a. atau peningkatan dengan penambahan air atau asam asetat
glasial p.a. sehingga nilai Rf berada dalam range optimum antara 0,2-0,8. Untuk
melakukan modifikasi fase gerak, peneliti mencari fase gerak lain yang memiliki
indeks polaritas sama dengan indeks polaritas Martono (1996) yaitu berupa
kloroform p.a. : asam asetat glasial p.a. (9,75:0,25) yang memiliki indeks
polaritas 4,15. Pada fase gerak kedua ini dihasilkan peak yang tidak runcing
sehingga dilakukan modifikasi dengan menambah kepolaran yaitu fase gerak
kloroform p.a. : asam asetat glasial p.a. (9,50:0,50) dengan IP=4,21. Pada fase
gerak keempat dilakukan penelitian dengan penambahan heksana p.a. untuk
menaikkan kenonpolaran dari fase gerak. Hal ini hubungannya dengan sampel
yang bersifat non polar sehingga lebih banyak berinteraksi dengan fase gerak
yang menyebabkan makin cepat terelusi. Pada optimasi metode dicari kondisi
optimum dari sistem KLT untuk pemisahan kurkumin, sehingga diperlukan
optimasi kombinasi dari fase gerak non polar dan polar. Jika hanya memakai fase
gerak polar atau non polar maka polaritas tidak sesuai kurkumin.
Pembuatan fase gerak dengan menggunakan prinsip like dissolves like,
prinsip perbandingan volume dan teknik doubling. Pada prinsip like dissolves like,
34
pelarut polar akan larut/bercampur dengan pelarut polar, demikian sebaliknya
pada pelarut non polar akan larut/bercampur dengan pelarut non polar. Pada
prinsip perbandingan volume, pembuatan campuran fase gerak berdasarkan
volume dimana fase gerak yang memilki volume paling kecil terlebih dahulu
dimasukkan labu takar sebagai tempat pembuatan fase gerak. Sedangkan pada
teknik doubling pada pembuatan fase gerak adalah penambahan salah satu
komposisi larutan fase gerak dalam labu takar dalam jumlah yang sama banyak
hingga pembuatan fase gerak selesai.
B. Pembuatan Metanol p.a. pH 4
Pada penggunaan metanol p.a. sebagai pelarut untuk larutan baku dan
larutan sampel diperlukan pengaturan pada pH 4 karena menurut Stankovic
(2004) kurkumin stabil pada pH 1-7. Berdasar data orientasi stabilitas kurkumin
terhadap 3 variasi pH yaitu 3,4 dan 5 pada larutan konsentrasi rendah, sedang dan
tinggi yaitu 0,4 ppm, 1,0 ppm dan 1,6 ppm menggunakan alat Milton Ray
Spectronic 3000 Array diperoleh hasil kurkumin paling stabil pada pH 4. Pada pH
4 ketiga konsentrasi diperoleh panjang gelombang yang stabil. Pengaturan
metanol pada pH 4 dilakukan dengan menambahkan asam asetat glasial p.a. ke
dalam metanol p.a. dengan perbandingan (9:1).
Pengaturan pH ini dilakukan karena kurkumin bersifat pH-sensitive. Hal
ini disebabkan adanya gugusan metilen aktif pada kurkumin (Tonnesen et al.,
1985). Adanya gugus OH fenolik yang bersifat asam menyebabkan lepasnya H+
dalam suasana basa, sehingga menyebabkan terjadinya resonansi. Akibat
35
resonansi ini, gugus metilen aktif menjadi mudah bereaksi dengan gugus hidroksi
dari basa sehingga menyebabkan kurkumin terdegradasi menjadi asam ferulat dan
feruloil metana. Apabila kurkumin terdegradasi, maka kadar yang diperoleh
berkurang sehingga tidak dapat merepresentasikan kadar yang sebenarnya.
Gambar 10. Gugus metilen aktif pada kurkumin
Penggunaan metanol p.a. sebagai pelarut karena dapat melarutkan
dengan baik kurkumin dan berbagai senyawanya dalam OHT cair merk
“Kiranti®”. Selain itu, metanol p.a. akan menguap setelah penotolan serta
memiliki panjang gelombang 205 nm yang berbeda dengan panjang gelombang
kurkumin 425 nm sehingga tidak ikut terdeteksi pada alat densitometer.
C. Pembuatan Larutan Baku Kurkumin
Larutan baku kurkumin dibuat dengan melarutkan baku kurkumin dalam
pelarut metanol p.a. yang telah diatur pada pH 4 untuk menjaga stabilitas
kurkumin. Pembuatan larutan baku kurkumin berupa larutan stok dan seri larutan
baku. Seri larutan baku dibuat pada tiga level konsentrasi yaitu rendah, sedang
dan tinggi (25,100, 175 ppm). Pembuatan tiga level konsentrasi seri larutan baku
ini dilakukan untuk melihat respon detektor terhadap sinyal (peak) yang
dihasilkan. Apabila sinyal yang dihasilkan terlalu kecil maka sinyal tersebut dapat
terganggu oleh noise yang dihasilkan oleh alat. Sehingga pemilihan konsentrasi
harus melihat rasio analit terhadap sinyal (respon detektor). Selain itu, untuk
H3CO
HO
OCH3
OH
O O
36
mengetahui bahwa pada ketiga level konsentrasi diperoleh hasil pemisahan
kurkumin yang baik dan reprodusibel dengan menganalisis bentuk peak
kromatogram yang runcing dilihat dari nilai peak asymmetry factor serta
kemiripan nilai Rf pada berbagai konsentrasi. Larutan baku yang dibuat ini
digunakan untuk analisis pemisahan campuran kurkumin dari berbagai
senyawanya dengan metode KLT-Densitometri fase normal.
D. Optimasi Pemisahan Kurkumin dalam Sampel OHT Cair Merk
“Kiranti®” secara KLT-Densitometri
1. Penentuan panjang gelombang maksimum kurkumin
Panjang gelombang yang digunakan untuk analisis kualitatif dan
kuantitatif adalah panjang gelombang yang mempunyai absorbansi maksimal.
Alasan penggunaan panjang gelombang maksimal (λmaks), yaitu :
a. Pada panjang gelombang maksimal, kepekaannya juga maksimal karena pada
panjang gelombang maksimal tersebut, perubahan absorbansi untuk setiap
satuan konsentrasi adalah yang paling besar.
b. Disekitar panjang gelombang maksimal, bentuk kurva absorbansi datar dan
pada kondisi tersebut hukum Lambert-Beer akan terpenuhi.
c. Jika dilakukan pengukuran ulang maka kesalahan yang disebabkan oleh
pemasangan ulang panjang gelombang akan kecil sekali.
Penentuan λmaks menggunakan tiga seri kadar dengan tujuan dapat
meyakinkan bahwa panjang gelombang yang diperoleh adalah senyawa kurkumin
dibuktikan dengan panjang gelombang yang diperoleh pada ketiga konsentrasi
37
reprodusibel. Pengukuran λmaks dilakukan pada salah satu fase gerak kloroform
p.a. : etanol p.a. : aquadest (25:0,96:0,04) karena yang diukur hanya satu analit
berupa baku kurkumin yang akan menghasilkan satu bercak dari satu totolan dan
didapatkan satu panjang gelombang.
Penentuan λmaks dengan cara mengukur pada daerah panjang gelombang
400-500 nm dengan detektor sinar visibel. Hasil pengukuran dibandingkan dengan
panjang gelombang maksimum literatur yaitu 425 nm (Mohammad, dkk., 2007).
Suatu senyawa dapat diukur dengan spektrofotometri visibel jika senyawa
tersebut berwarna, panjang gelombang 400-800 nm, memiliki kromofor yang
panjang, memiliki auksokrom serta memiliki bentuk molekul. Gambar gugus
kromofor dan auksokrom dari kurkumin dapat dilihat pada gambar berikut:
Gambar 11. Gugus kromofor dan auksokrom pada kurkumin
= gugus kromofor= gugus auksokrom
Berikut ini adalah pola spektra seri larutan baku pada pengukuran
panjang gelombang maksimum:
H3CO
HO
OCH3
OH
O O
38
Gambar 12. Pola spektra seri larutan baku pada pengukuran panjang gelombangmaksimum
Tabel VI. Hasil pengukuran panjang gelombang maksimum pada seri larutan baku
Dari tabel di atas dapat disimpulkan serapan maksimum larutan baku
kurkumin pada ketiga konsentrasi adalah 425 nm. Pengukuran panjang gelombang
maksimum dalam Farmakope Indonesia edisi IV (1995) dimaknai memenuhi
syarat jika tepat atau dalam batas 2 nm dari panjang gelombang yang ditentukan.
Dengan demikian panjang gelombang maksimum kurkumin sesuai dengan
39
panjang gelombang teoritis. Sehingga dapat dipastikan senyawa tersebut adalah
kurkumin.
2. Preparasi Sampel
Sampel “Kiranti®” yang terdiri dari kurkumin dan berbagai senyawanya
yaitu Curcumae domesticae Rhizoma, Tamarindi Pulpa, Kaempferiae Rhizoma,
Arengae pinnata Fructose, Zingiberis Rhizoma, Paullinia cupana dan
Cinnamomi Cortex perlu diisolasi terlebih dahulu sebelum dilakukan analisis.
Oleh karenanya, perlu dilakukan preparasi sampel. Tujuan dari preparasi sampel
adalah untuk mendapatkan sampel OHT cair merk “Kiranti®” dengan konsentrasi
tertentu yang homogen. Untuk menghomogenkan sampel dilakukan pengadukan
menggunakan magnetic stirer selama 15 menit. Pada sampel perlu dilakukan
penarikan senyawa kimia berupa kurkumin sehingga sampel disari menggunakan
ultrasonikator selama 15 menit. Tujuan dari menyari adalah penarikan senyawa
kimia dalam sampel OHT cair merk “Kiranti®” yang dapat larut sehingga terpisah
dari bahan yang tidak dapat larut.
3. Optimasi pemisahan kurkumin pada masing-masing fraksi metanol OHT
cair merk “Kiranti®”
Kurkumin dalam larutan baku dan sampel dianalisis menggunakan alat
KLT-Densitometer dengan pelarut metanol p.a. pH 4 diukur menggunakan
panjang gelombang maksimum kurkumin yang didapat yaitu 425 nm. Sistem KLT
40
yang digunakan adalah fase normal. Berikut ini gambar gugus nonpolar dan gugus
polar dari kurkumin:
Gambar 13. Gugus nonpolar dan polar kukuminKeterangan : = gugus non polar
= gugus polarKurkumin memiliki sifat non polar dikarenakan bentuknya simetris
antara kanan dan kiri struktur sehingga memiliki momendipol nol. Polaritas
kurkumin sesuai dengan polaritas komposisi fase gerak optimum yaitu kloroform
p.a. : asam asetat glasial p.a. (9,50:0,50) yang dapat memisahkan kurkumin
dengan parameter-parameter optimum.
Pemisahan dalam kromatografi dipengaruhi oleh interaksi suatu analit
dengan fase diam dan fase geraknya. Interaksi kurkumin dengan fase diam
sebagai berikut:
H3CO
O
CH3O
O
O O
H H
Si
O
O
O O
SiHO
O
O
H
Si
O
O
O
SiO
O
O
HO
H
Si OO
O
O
Si
O
O
O
H H
Gambar 14. Interaksi kurkumin dengan fase diam
H3CO
HO
OCH3
O
O O
H
41
Mengacu pada gambar 14 dapat diketahui bahwa terjadi interaksi antara
kurkumin dengan fase diam berupa lempeng KLT silika gel G60. Kurkumin
memiliki gugus polar dan gugus non polar. Gugus polar dari kurkumin akan
berinteraksi dengan fase diamnya berupa silika gel G60 dengan ikatan hidrogen.
Antara kurkumin dengan fase diam terdapat banyak interaksi hidrogen sehingga
diperlukan fase gerak yang lebih banyak interaksi dengan kurkumin sehingga
dapat membawa analit dan waktu elusi lebih cepat. Berbagai komposisi fase gerak
dan pengaruhnya terhadap sampel akan dijelaskan lebih lanjut pada tabel VII.
Tabel VII. Tabel nilai Rf dan resolusi larutan sampel kurkumin pada berbagaikomposisi fase gerak
Komposisi fasegerak
Nilai Aspeak
Nilai Rf
kurkuminResolusi
pemisahanKeterangan
kloroform p.a. :etanol p.a. :
aquadest (25 : 0,96: 0,04)
0,5 0,43 1,71 Hasil peak kromatogramasimetris belum memenuhi
syarat As antara 0,9-1,2,belum tercapai baseline
kloroform p.a. :asam asetat glasialp.a. (9,75 :0:25)
0,8 0,52 2,71 Hasil peak kromatogramasimetris belum memenuhi
syarat As antara 0,9-1,2,belum tercapai baseline
kloroform p.a. :asam asetat glasial
p.a. (9,5 :0:5)
0,95 0,50 2,00 Hasil peak kromatogramsimetris, runcing memenuhi
syarat As antara 0,9-1,2,tercapai baseline, Rf antara
0,2-0,8,resolusi ≥1,5
kloroform p.a. :asam asetat glasialp.a : heksana p.a..(8,5 : 1,00 : 0,50)
0,67 0,62 1,92 Hasil peak kromatogramasimetris belum memenuhi
syarat As antara 0,9-1,2,tidak tercapai baseline
Berikut ini kondisi yang digunakan untuk pemisahan senyawa kurkumin
dan berbagai senyawanya:
a. Pemisahan kurkumin dengan fase gerak kloroform p.a. : etanol p.a :
aquadest dengan perbandingan 25:0,96:0,04. Pemilihan fase gerak ini berdasarkan
penelitian Martono (1996) yang memisahkan kurkumin yang tercampur dengan
42
turunan demetoksinya dalam sampel serbuk kunyit dan E. Merck menggunakan
fase gerak campuran kloroform p.a. : etanol p.a. : aquadest (25:0,96:0,04) yang
memiliki indeks polaritas 4,15.
Gambar 15. Pemfase
i. Bii. Sa
Pemisa
kloroform p.a.
didapatkan hasi
Pada keruncing
(tidak memenuh
0,2-0,8. Resolus
isahan kurkumin dari berbagai senyawa dalam Ogerak kloroform p.a. : etanol p.a : aquadest (25:0aku kurkumin konsentrasi 175 ppm (konsentrasimpel OHT merk “Kiranti®” yang mengandung k
han kurkumin dari berbagai senyawanya
: etanol p.a : aquadest dengan perband
l pemisahan yang kurang sempurna pada kr
an peak diperoleh nilai peak asymmetry fact
i syarat As yang baik 0,9-1,2). Nilai Rf sudah
i yang didapat juga sudah cukup baik (≥ 1
B
i
ii
B
HT “Kiranti” dengan,96:0,04)tinggi)urkumin
dengan fase gerak
ingan 25:0,96:0,04
omatogram sampel.
or (As) sebesar 0,5
baik terletak antara
,5). Kesimpulannya
43
perlu dilakukan modifikasi fase gerak agar didapat peak yang runcing. Pada
penelitian ketika dilakukan modifikasi komposisi fase gerak diperoleh emulsi
pada pencampuran fase gerak sehingga tidak dapat dilakukan modifikasi.
b. Pemisahan kurkumin dengan fase gerak kloroform p.a. : asam asetat
glasial p.a dengan perbandingan 9,75:0,25. Pemilihan fase gerak ini dilakukan
berdasarkan penelitian sebelumnya menggunakan kloroform : etanol : aquadest
(25 : 0,96 : 0,04) yang sama-sama memiliki indeks polaritas 4,15. Pemilihan
kloroform p.a. dan asam asetat glasial p.a dikarenakan sifat dari kloroform p.a.
dan asam asetat glasial p.a. yang dapat melarutkan kurkumin dan
kenonpolarannya untuk mengelusi kurkumin.
Gambar 16. Pemisahan kurkumin dari berbagai senyawa dafase gerak kloroform p.a. : asam asetat glasiali. Baku kurkumin konsentrasi 175 ppm (konse
ii. Sampel OHT merk “Kiranti®” yang mengand
B B
i
lam OHT “p.a (9,75:0,ntrasi tingung kurku
ii
Kiranti” dengan25)gi)min
44
Penggunaan fase gerak kloroform p.a : asam asetat glasial p.a. dengan
perbandingan 9,75:0,25 seperti tampak pada gambar 16 menunjukkan hasil
pemisahan yang kurang baik. Komposisi fase gerak yang kurang cocok
menyebabkan analit tidak terelusi secara serentak sehingga tidak tercapai
baseline. Peak yang keluar terlalu cepat atau keluar dalam waktu yang hampir
bersamaan akan membentuk peak-peak kromatogram yang hampir menyatu yang
juga menyebabkan tidak tercapai baseline. Baseline menandakan analit sudah
habis terelusi. Pada baku kurkumin terdapat peak kecil selain kurkumin
dikarenakan adanya pengotor pada plat KLT. Pada sampel dihasilkan peak
kurkumin yang asimetris dan bentuk tidak runcing dengan nilai As = 0,8 (tidak
memenuhi syarat antara 0,9-1,2). Nilai Rf yang diperoleh sudah memenuhi syarat
antara 0,2-0,8. Resolusi juga sudah memenuhi syarat (≥ 1,5). Perlu dilakukan
modifikasi dengan meningkatkan kepolaran agar pemisahan analit memenuhi
parameter optimum.
c. Pemisahan kurkumin dengan fase gerak kloroform p.a. : asam asetat
glasial p.a dengan perbandingan 9,50:0,50. Hasil pemisahan fase gerak kedua
menunjukkan peak kurkumin asimetris yang menunjukkan fase gerak kurang
cocok, oleh karenanya perlu dilakukan pengaturan komposisi fase gerak agar
diperoleh pemisahan yang optimum misalnya dengan menaikkan kepolaran.
Berikut ini hasil pemisahan kurkumin dari berbagai senyawanya dalam bentuk
kromatogram.
45
Gambar 17. Pemisahan kurkumin dari berbagai senyawa dalam OHT “Kiranti”dengan fase gerak kloroform p.a. : asam asetat glasial p.a (9,50:0,50)
i. Baku kurkumin konsentrasi 175 ppm (konsentrasi tinggi)ii. Sampel OHT merk “Kiranti®” yang mengandung kurkumin
Pada pemisahan kurkumin dari berbagai senyawanya menggunakan fase
gerak kloroform p.a. : asam asetat glasial p.a. (9,50:0,50) dengan indeks polaritas
4,21 diperoleh hasil yang baik dan tercapai baseline karena analit terelusi secara
serentak. Data kromatogram menunjukkan peak baku kurkumin hanya terdapat
satu peak dan pada sampel didapat peak kurkumin yang runcing dilihat dari nilai
As = 0,95 (memenuhi syarat 0,9-1,2) dengan Rf antara 0,2-0,8. Resolusi yang
diperoleh pada sampel OHT cair merk “Kiranti®” adalah 2 (sudah memenuhi
parameter optimum).
BB
i
ii
46
d. Pemisahan kurkumin dengan fase gerak kloroform p.a. : asam asetat
glasial p.a : heksana p.a. dengan perbandingan 8,50:1,00:0,50. Pada fase gerak
keempat dilakukan perubahan komposisi fase gerak dengan penambahan heksana
p.a. Hal ini dilakukan untuk meningkatkan kenonpolaran fase gerak (IP = 4,11).
Analit kurkumin bersifat non polar sehingga diharapkan lebih banyak berinteraksi
dengan fase gerak yang menyebabkan makin cepat terelusi. Pada optimasi metode
dicari kondisi optimum dari sistem KLT untuk pemisahan kurkumin, sehingga
diperlukan optimasi kombinasi dari fase gerak non polar dan polar. Jika hanya
memakai fase gerak polar atau non polar maka polaritas tidak sesuai kurkumin.
Gambar 18. Pemisahan kurkumin dari berbagai senyawa dalam OHT “Kiranti”dengan fase gerak kloroform p.a. : asam asetat glasial p.a : heksana p.a. (8,50:1,00:0,50)
i. Baku kurkumin konsentrasi 175 ppm (konsentrasi tinggi)ii. Sampel OHT merk “Kiranti®” yang mengandung kurkumin
B
ii
i
B
47
Pemisahan dengan fase gerak ini diperoleh hasil peak kromatogram
kurkumin yang tidak runcing dan tidak tercapai baseline baik pada standar
maupun sampel kurkumin. Pada sampel kurkumin diperoleh nilai As = 0,67 (tidak
memenuhi syarat antara 0,9-1,2). Nilai Rf dan resolusi yang diperoleh pada sampel
kurkumin adalah 0,62 dan 1,92 (sudah memenuhi syarat). Pada polaritas yang
lebih rendah dengan adanya kombinasi heksana p.a., menurut teori, baku maupun
sampel kurkumin seharusnya terelusi lebih cepat tetapi hasil yang diperoleh
sebaliknya. Hal ini dikarenakan pada fase gerak komposisi empat memiliki
polaritas yang lebih rendah daripada polaritas kurkumin. Komposisi fase gerak
kloroform p.a. : asam asetat glasial p.a : heksana p.a. (8,50:1,00:0,50) tidak sesuai
untuk mengelusi kurkumin karena tidak dapat membawa kurkumin dengan baik.
Sehingga metode dengan komposisi fase gerak kloroform p.a. : asam asetat glasial
p.a : heksana p.a. (8,50:1,00:0,50) tidak dapat diaplikasikan untuk OHT cair merk
“Kiranti®”.
Berdasarkan data hasil optimasi fase gerak diperoleh kesimpulan bahwa
fase gerak komposisi kloroform : asam astetat (9,50:0,50) memenuhi parameter
optimasi berupa hasil peak kromatogram yang runcing dengan nilai peak
asymmetry factor antara 0,9-1,2, Rf antara 0,2-0,8. nilai resolusi = 2,00. Oleh
karenanya dilakukan replikasi tiga kali untuk melihat reprodusibilitasnya. Berikut
ini hasil pemisahan kurkumin dari berbagai senyawanya dalam bentuk
kromatogram dengan fase gerak kloroform p.a. : asam asetat glasial p.a
(9,50:0,50) replikasi 1, 2 dan 3:
48
Replikasi 2
Replikasi 3
Gambar 19. Pemisahan kurkumin dari berbagai senyawa dalam OHT “Kiranti” denganfase gerak kloroform p.a. : asam asetat glasial p.a (9,50:0,50)
i. Replikasi Iii. Replikasi II
iii. Replikasi III
i
ii
iii
49
Pada tiga kali replikasi diperoleh nilai As dan Rf dari sampel kurkumin
berturut-turut adalah 0,95; 0,90 dan 0,91 serta 0,50; 0,48 dan 0,49. Resolusi untuk
ketiga replikasi adalah 2,00 sehingga diperoleh nilai CV 0% (memenuhi syarat
kurang dari 2%). Jadi dapat disimpulkan fase gerak komposisi III yaitu kloroform
p.a. : asam asetat glasial p.a.(9,50:0,50) merupakan jenis dan perbandingan
komposisi fase gerak optimum dari sistem KLT yang diteliti.
Gambar 20. Interaksi kurkumin dengan fase gerak kloroform p.a. : asam asetat glasialp.a (9,50:0,50)
Gugus non polar kurkumin akan berinteraksi dengan fase gerak
kloroform p.a. melalui interaksi Van der Waals, sedangkan asam asetat glasial
p.a. berinteraksi hidrogen dengan gugus polar dari kurkumin seperti tampak pada
gambar 20. Fungsi dari asam asetat untuk mempertahankan stabilitas kurkumin.
Dari keseluruhan interaksi kurkumin dengan fase diam dan fase geraknya dapat
diketahui bahwa interaksi dengan fase gerak lebih kuat dibanding dengan fase
diam. Analit kurkumin sifatnya non polar sehingga interaksi dengan fase gerak
semakin kuat dan terelusi secara serentak sehingga terbentuk peak yang simetris.
OCH3
HO
O O
OCH3
OH
CCl
Cl
Cl
C Cl
Cl
Cl
CCl
Cl
Cl
C Cl
Cl
Cl
C
ClCl
Cl
C
ClCl
Cl
H3C C
O
O
H
H
H
H
H
H
H
C
ClCl
ClH
interaksi hidrogendengan asam asetat glasial
interaksiVan der Waals
interaksiVan der Waals
interaksiVan der Waals
interaksiVan der Waals
interaksiVan der Waals
interaksiVan der Waals
interaksiVan der Waals
50
BAB VKESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian, dapat diambil kesimpulan bahwa metode
KLT-Densitometri dapat digunakan untuk memisahkan kurkumin dari berbagai
senyawanya dalam OHT cair merk “Kiranti®” dengan menggunakan
perbandingan komposisi fase gerak kloroform p.a. : asam asetat glasial p.a.
(9,50:0,50) dengan parameter bentuk peak kromatogram yang runcing dilihat dari
nilai peak asymmetry factor berturut – turut 0,95, 0,90 dan 0,91; nilai Rf 0,50, 0,48
dan 0,49; resolusi 2,00 dan CV 0%.
B. Saran
Perlu dilakukan validasi metode dan penetapan kadar kurkumin dari
berbagai senyawanya dalam OHT cair merk “Kiranti®” dengan menggunakan
metode KLT-Densitometri dengan perbandingan komposisi fase gerak kloroform
p.a. : asam asetat glasial p.a. (9,50:0,50).
51
DAFTAR PUSTAKA
Aggarwal, B.B., 1995, Curcumin Analogues of Curcumin and Novel UsesThereof, http://www.thepowerhour.com/curcumin/Turmeric.pdf, diaksestanggal 20 September 2010
Aggarwal, B., Bhatt,I.D., Ichikawa, H., Ahn, K.S., Sethi, G., Sandur,S.K., Sundaram, C., Seeram, N., Shishodia, S., 2006, Curcumin – Biological and
Medicinal Properties, http:www.sabinsa.com/products/circumin_book.htm;Piscataway,NJ, diakses tanggal 20 September 2010
Badan POM RI, 2004, SK Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan RepublikIndonesia, Nomor HK.00.05.4.2411, Departemen Kesehatan RI, Jakarta
Badan POM RI, 2005, Standarisasi Ekstrak Tumbuhan Obat Indonesia, SalahSatu Tahapan Penting dalam Pengembangan Obat Asli Indonesia, InfoPOM, 6(4), 1-5
Burdick, Jackson, 2010, Tabel Indeks Polaritas Larutan Kimia,http://macro.lsu.edu/howto/solvents/Polarity%20index.htm, diakses tanggal9 Desember 2010
Chattopadhyay L., Biswas K., Bandyopadhyay U., Banerjee R. K., 2004, TurmericAnd Curcumin : Biological Actions And Medicinal Applications. Curr. Sci., 87,44-53, http://www.charakayurveda.com/Article/SPICE%20OF%20LIFE.pdf,;diakses tanggal 28 November 2010
Depkes RI, 1987, Analisis Obat Tradisional, jilid I, Dirjen POM, Jakarta, 1-131
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995a, FarmakopeIndonesia, jilid IV, Departemen Kesehatan RI, Jakarta, 1002-1005
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995b, Materia MedikaIndonesia, edisi VI, Departemen Kesehatan RI, Jakarta, 148-152
Gaikar, V.G., and Dandekar, D.V., 2001, Process for Extraction of Curcuminoidsfrom Curcuma Species, United States Patent, 6, 224,87
Gritter, R. J., Bobbit, J. M., Schwarting, A. E., 1991, Pengantar Kromatografi,diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata, terbitan ke-2, ITB Press,Bandung, 107-155
Gupta, A. P., dkk, 1999, Simultaneous determination of curcuminoids in curcumasamples using high performance thin layer chromatography,http://203.190.147.121/bitstream/123456789/80/1/J_Journal_Liquid_Chrom
52
atography_Related_Technologies_22_1561.pdf , diakses tanggal 10 Februari2010
Hanani, 2009, Standarisasi Simplisia dan Ekstrak Daun Handeuleum(Graptophyllum Pictum),http://www.lontar.ui.ac.id//opac/themes/libri2/detail.jsp?id=76802&lokasi=lokal, diakses tanggal 24 Januari 2010
Harborne, 1973, Phtochemical methods, diterjemahkan oleh KosasihPadmawinata dan Iwang Soediro, Terbitan II, Institut Teknologi Bandung,Bandung, 10-11
Hardjono, S., 1983, Kromatografi, Laboratorium Analisa Kimia Fisika Pusat,UGM, Yogyakarta, 32-34
Harmita, 2004, Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara Perhitungannya,Majalah Ilmu Kefarmasian, 121-126
Kementerian Kesehatan RI, 1994, Keputusan Menteri Kesehatan RINomor:661/MENKES/VII/1994, Departemen Kesehatan RI, Jakarta.
Khopkar, 1990, Concepts of Analytical Chemistry, diterjemahkan oleh SaptoRaharjo, UI Press, Jakarta
Majeed, M., Badmaev, V., Shirakumar U., and Rajendran, R., 1995,Curcuminoids antioxidant phytonutrients, NutriScience Publisher Inc.,PisCataway, New Jersey, pp.3-80
Martono, S., 1996, Penentuan Kadar Kurkumin secara Kromatografi Lapis TipisDensitometri, Buletin ISFI, DIY 2 (4), 11-21
Mintarsih, 1990, Penetapan Kadar Alkaloid Kininda dalam Akar, Batang, danDaun Chinchona Succirubra Pavon et Klotzsch dari Daerah KaliurangSecara Spektrodensitometri (TLC-Scanner), Skripsi, Universitas GadjahMada, Yogyakarta
Mohammad, R., Ahmad, M., Daud, J.M., 2007, Potensi Kurkumin SebagaiPenunjuk pH Semulajadi Untuk Pembangunan Sensor Optik pH, TheMalaysian Journal of Analytical Science, Vol 11 No 2, 351-360
Mulja, H.M. dan Suharman, 1995, Analisis Instrumental, Airlangga UniversityPress, Surabaya
Orang Tua Group, 2005, Kiranti Sehat Datang Bulan,http://www.ot.co.id/images/kiranti.pdf, diakses tanggal 24 Desember 2010
53
Orang Tua Group, 2010, Kiranti Sehat Datang Bulan,http://diarykiranti.com/kiranti-funfact-sdb/, diakses tanggal 8 Januari 2011
Pabon, H.J.J., 1964, A Synthesis of curcumin and related compounds, Recl. Trav.Chem., pp.23, 379-386
Paramasivam, M., dkk, 2008, Occurrence of curcuminoids in Curcuma longa : Aquality standardization by HPTLC,http://www.banglajol.info/index.php/BJP/article/viewFile/833/913, diaksestanggal 10 Februari 2010
Pescok, R.L., Shields, L.D., Caims, T., 1976, Modern Methods of ChemicalAnalysis,2nd ed., John Wiley & Sons, Canada, pp. 51
PT Phapros, 2010, Obat Herbal Terstandar,http://www.ptphapros.co.id/article.php?&m=Article&aid=19&lg, diaksestanggal 13 November 2010
Rohman, 2009, Kromatografi untuk Analisis Obat, Graha Ilmu, Yogyakarta
Sasaki, S.S., Sat, K., Abe, M., Sugimoto, N., Maitani, T., 1998, Components ofTurmeric Oleoresin Preparations and Photo-Stability of Curcumin, Jpn J.Food Chem., 5(1)
Sherma, J. and Fried, B., 2003, Handbook of Thin-Layer Chromatography, 3rded., Marcel Dekker, Inc., USA
Sastrohamidjojo, H., 1985, Kromatografi, edisi I, Liberty, Yogyakarta, 26-30
Sastrohamidjojo, H., 2002, Spektroskopi, Penerbit Liberty , Yogyakarta, 11, 22-32
Skoog, D.A., Holler, F.J., Nieman, T.A., 1988, Principles of InstrumentalAnalysis, 5th ed., Harcourt bace College, Philadelphia, pp.329-351
Srijanto, B., Rosidah, I., Rismana, E., Syabirin, G., Aan, Mahreni, PengaruhWaktu, Suhu Dan Perbandingan Bahan Baku-Pelarut Pada EkstraksiKurkumin Dari Temulawak (Curcuma Xanthorriza Roxb.) Dengan PelarutAseton, Prosiding Seminar Nasional Rekayasa Kimia dan Proses, ISSN :1411 – 4216, 1
Stahl, E., 1969, Thin Layer Chromatography :A laboratoy Handbook, 2th ED,Springer Verlag, Berlin, pp.97-101
Stahl, E., 1985, Analisis Obat Secara Kromatografi dan Mikroskopik,diterjemahkan oleh Padmawinata, K., Soediro, I., ITB Press, Bandung, 190-191
54
Stankovic, I., 2004, CURCUMIN Chemical and Technical Assessment (CTA), 61st
JECFA
Sudjadi, 1988, Metode Pemisahan, cetakan pertama, Penerbit Kanisius,Yogyakarta
Sumiati T., Adyana I. K., 2004, Kunyit, Si Kuning yang Kaya Manfaat,http://iirc.ipb.ac.id/jspui/bitstream/123456789/26968/2/2010mnr.pdf,diakses tanggal 17 Juni 2010
Synder, L. R., Kirkland, J. J., Glajh, J., L., 1997, Practical HPLC MethodDevelopment, 2nd ed, John Willey Sons, Inc., New York, pp.211, 236
Tonnesen, H.H. and Karlsen, J., 1985. Studies On Curcumin and CurcuminoidsAlkaline Degradation of Curcuming Z.Lebens, Unters, Forsch, 180 : 132-134
Willard, H.H., Merrit, Jr, Dean, J.A., Settle, Jr, F.A., 1988, Instrumental Methodsof Analysis, 7th ed, Wadworth Publishing Company, California, pp.525-529,580, 619
Zhang, J., Jinnai, S., Ikeda, R., Wada, M., Hayashida, S., Nakashima, K., ASimple HPLC-fluorescence Method for Quantitation of Curcuminoids andIts Application to Turmeric Products, Analytical Sciences, Vol. 25, pp.385-388
55
56
Lampiran 1. Surat Pernyataan Jaminan Keaslian Bahan Kurkumin Standar
Hasil Sintesis
57
Lampiran 2. Data Penimbangan Bahan
Replikasi Bobot kurkumin (g)
I 0,0100
II 0,0100
III 0,0101
Perhitungan seri larutan baku
Konsentrasi stok =
Konsentrasi baku yang dibuat adalah 25, 100 dan 175 ppm
a. 25 ppm
C1.V1 = C2.V2
1000 ppm. V1 = 25 ppm. 5mL
V1 = 0,125 mL
b. 100 ppm
C1.V1 = C2.V2
1000 ppm. V1 = 100 ppm. 5mL
V1 = 0,500 mL
c. 175 ppm
C1.V1 = C2.V2
1000 ppm. V1 = 175 ppm. 5mL
V1 = 0,875 mL
58
Lampiran 3. Spektrum Stabilitas Kurkumin pada pH 4
1. Konsentrasi 0,4 ppm (konsentrasi rendah) pH 4
2. Konsentrasi 1,0 ppm (konsentrasi sedang) pH 4
59
3. Konsentrasi 1,6 ppm (konsentrasi tinggi) pH 4
4. Konsentrasi 0,4; 1,0 dan 1,6 ppm pada pH 4
60
Lampiran 4. Perhitungan Kepolaran Fase Gerak
Diketahui : Kloroform p.a. indeks polaritas = 4,1
Etanol p.a. indeks polaritas = 5,2
Aquadest indeks polaritas = 10,2
Asam asetat glasial p.a. indeks polaritas = 6,2
Heksana p.a. indeks polaritas = 0,1
Fase gerak :
1. kloroform p.a. : etanol p.a. : aquadest = 25 : 0,96 : 0,04
Indeks polaritas = = 4,15
2. kloroform p.a. : asam asetat glasial p.a. = 9,75 : 0,25
Indeks polaritas = = 4,1525
3. kloroform p.a. : asam asetat glasial p.a. = 9,50 : 0,50
Indeks polaritas = = 4,205
4. kloroform p.a. : asam asetat glasial p.a. : heksana p.a. = 8,50 : 1,00 : 0,50
Indeks polaritas = = 4,11
61
Lampiran 5. Sistem KLT-Densitometri yang Digunakan
62
63
Lampiran 6. Kromatogram pada Fase Gerak Kloroform p.a. : Etanol p.a. :
Aquadest (25: 0,96 : 0,04)
1. Kromatogram konsentrasi rendah kurkumin (25 ppm)
2. Kromatogram konsentrasi sedang kurkumin (100 ppm)
3. Kromatogram konsentrasi tinggi kurkumin (175 ppm)
64
4. Kromatogram sampel OHT cair merk “Kiranti®” yang mengandung kurkumin
65
Lampiran 7. Kromatogram pada Fase Gerak Kloroform p.a. : Asam Asetat
Glasial p.a. (9,75 : 0,25)
1. Kromatogram konsentrasi rendah kurkumin (25 ppm)
2. Kromatogram konsentrasi sedang kurkumin (100 ppm)
3. Kromatogram konsentrasi tinggi kurkumin (175 ppm)
66
4. Kromatogram sampel OHT cair merk “Kiranti®” yang mengandung kurkumin
67
Lampiran 8. Kromatogram pada Fase Gerak Kloroform p.a. : Asam Asetat
Glasial p.a. (9,50 : 0,50)
1. Kromatogram konsentrasi rendah kurkumin (25 ppm)
2. Kromatogram konsentrasi sedang kurkumin (100 ppm)
3. Kromatogram konsentrasi tinggi kurkumin (175 ppm)
68
4. Kromatogram sampel OHT cair merk “Kiranti®” yang mengandung kurkumin
69
Lampiran 9. Kromatogram pada Fase Gerak Kloroform p.a. : Asam Asetat
Glasial p.a. : Heksana p.a. (8,50 : 1,00 : 0,50)
1. Kromatogram konsentrasi rendah kurkumin (25 ppm)
2. Kromatogram konsentrasi sedang kurkumin (100 ppm)
3. Kromatogram konsentrasi tinggi kurkumin (175 ppm)
70
4. Kromatogram sampel OHT cair merk “Kiranti®” yang mengandung kurkumin
71
Lampiran 10. Kromatogram Pemisahan Kurkumin dengan Fase Gerak
Optimum Kloroform p.a. : Asam Asetat Glasial p.a. (9,50 : 0,50) Replikasi I
1. Kromatogram konsentrasi rendah kurkumin (25 ppm)
2. Kromatogram konsentrasi sedang kurkumin (100 ppm)
3. Kromatogram konsentrasi tinggi kurkumin (175 ppm)
72
4. Kromatogram sampel OHT cair merk “Kiranti®” yang mengandung kurkumin
73
Lampiran 11. Kromatogram Pemisahan Kurkumin dengan Fase Gerak
Optimum Kloroform p.a. : Asam Asetat Glasial p.a. (9,50 : 0,50) Replikasi II
1. Kromatogram konsentrasi rendah kurkumin (25 ppm)
2. Kromatogram konsentrasi sedang kurkumin (100 ppm)
3. Kromatogram konsentrasi tinggi kurkumin (175 ppm)
74
4. Kromatogram sampel OHT cair merk “Kiranti®” yang mengandung kurkumin
75
Lampiran 12. Kromatogram Pemisahan Kurkumin dengan Fase Gerak
Optimum Kloroform p.a. : Asam Asetat Glasial p.a. (9,50 : 0,50) Replikasi III
1. Kromatogram konsentrasi rendah kurkumin (25 ppm)
2. Kromatogram konsentrasi sedang kurkumin (100 ppm)
3. Kromatogram konsentrasi tinggi kurkumin (175 ppm)
76
4. Kromatogram sampel OHT cair merk “Kiranti®” yang mengandung kurkumin
77
Lampiran 13. Contoh Perhitungan As (Peak Asymmetry Factor), Resolusi
Pemisahan Campuran Kurkumin dengan Fase Gerak Kloroform p.a. : Asam
Asetat Glasial p.a. (9,50 : 0,50) dan Perhitungan CV
a. Diketahui : a = 0,23
b = 0,21
Perhitungan As (Peak Asymmetry Factor):
b. Diketahui : Rf kurkumin = 0,49
Rf senyawa disampingnya = 0,31
Perhitungan Resolusi (Rs):
diukur pada 10% tinggi puncak
78
c. Diketahui : resolusi replikasi I = 2,00
resolusi replikasi II = 2,00
resolusi replikasi III = 2,00
Perhitungan CV:
79
BIOGRAFI PENULIS
Penulis skripsi berjudul “Optimasi Metode
Penetapan Kadar Kurkumin dalam Sediaan Cair Obat
Herbal Terstandar Merk Kiranti® dengan Metode
Kromatografi Lapis Tipis-Densitometri memiliki nama
lengkap Dewi Elizabeth Himawan. Penulis lahir di
Purwokerto pada tanggal 29 Juni 1989, merupakan
anak pertama dari pasangan Eddy Himawan dan Inge
Francisca Himawan serta memiliki satu orang adik.
Pendidikan formal yang pernah ditempuh penulis
adalah TK Santa Maria Purwokerto (1994-1995), SD Santa Maria Purwokerto
(1995-2001), SLTP Susteran Purwokerto (2001-2004), SMA Negeri 1 Purwokerto
(2004-2007), kemudian tahun 2007 penulis melanjutkan pendidikan di Fakultas
Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Selama kuliah, penulis aktif
mengikuti berbagai kegiatan kemahasiswaan, diantaranya menjabat sie. Humas
Panitia Pelepasan Wisuda Farmasi November 2008, Sekretaris Panitia Pelepasan
Wisuda November 2009, dan anggata divisi Penelitian dan Pengembangan Dewan
Perwakilan Mahasiswa Fakultas Farmasi periode 2009-2010. Selain itu, penulis
pernah menjadi asisten Praktikum Kimia Dasar (2008), Praktikum Kimia Analisis
(2009 dan 2010), Praktikum Kromatografi (2010). Penulis juga pernah menjadi
juara III pada Chinese Writing Competition International degree dengan judul
tulisan 难忘的一件事 (Nan Wang de Yi Jian Shi) pada Mei 2006 serta pemenang
tim PKM “Nicojelly, Produk Pengganti Rokok” pada tahun 2009 yang
diselenggarakan DIKTI.