ISSN 1822-1823 Žmogaus ir gamtos sauga 2013, ASU

106

Paprastojo putino Viburnum opulus vaisių sulčių antibakterinių savybių tyrimai

1Laima Česonienė,

1Remigijus Daubaras,

2Antanas Šarkinas

1Vytauto Didžiojo universiteto Kauno botanikos sodas,

2Kauno technologijos universiteto Maisto institutas

Paprastojo putino Viburnum opulus L. vaisiai sukaupia didelius kiekius biologiškai aktyvių junginių, kurie yra labai vertinami maisto ir farmacijos

pramonėje. Šio darbo tikslas buvo nustatyti paprastojo putino vaisių sulčių poveikį įvairioms pavojingas ligas sukeliančioms bakterijoms, kurios daţnai

aptinkamos maisto produktuose. Įvertinus agrobiologines savybes, VDU Kauno botanikos sodo pomologinėje kolekcijoje buvo atrinktos paprastojo putino veislės, klonai ir varietetai. Antibakteriniai tyrimai patvirtino, kad paprastojo putino vaisių sultys stipriai slopina tiek gram-teigiamų, tiek gram-

neigiamų patogeninių bakterijų augimą. Ypač stiprus šių vaisių sulčių poveikis nustatytas bakterijoms Salmonella typhimurium, S. aguona,

Staphylococcus aureus, Lysteria monocytogenes ir Enterococcus faecalis. Antibakterinės savybės, patogeninės bakterijos, vaisiai

Įvadas

Paprastasis putinas V. opulus L. yra priskiriamas

Caprifoliaceae šeimai. Ši rūšis yra plačiai paplitusi Rytų,

Vakarų ir Pietų Europoje bei Vakarų ir Rytų Sibire

(Osipova, 2001). Atlikti biocheminės vaisių sudėties

tyrimai patvirtino, kad juose yra dideli kiekiai fenolinių

rūgščių, antocianinų ir proantocianinų (Van et al., 2009;

Burns Kraft et al., 2008). Kai kurie autoriai nurodo V.

opulus vaisių gydomąsias savybes, kurias lemia juose

sukaupti fenoliniai junginiai ir askorbo rūgštis (Rop et al.,

2010), flavonoidai ir antocianinai (Velioglu et al., 2006;

Deineka et al., 2005).

V. opulus vaisiai nuo seno naudojami liaudies

medicinoje. Jie teigiamai veikia sergančiųjų širdies

ligomis ligonių savijautą, taip pat juos vartoja peršalus,

esant virškinimo sistemos sutrikimams, sergant

neurozėmis (Van, 2009; Zayjachkivska et al., 2006).

Tačiau V. opulus vaisių panaudojimo galimybės

farmacijoje ir maisto pramonėje nėra išsamiai tyrinėtos,

moksliniuose ţurnaluose kol kas yra paskelbta nedaug

tyrimų rezultatų. Rusijoje, taip pat ir Sibiro tautose putino

vaisiai yra įprastas gėrimų, padaţų, kepinių komponentas

(Osipova, 2001; Velioglu et ai., 2006). Paprastasis putinas

Viburnum opulus - pripaţintas vaistinis augalas ir

mokslinėje medicinoje. Putino ţievėje yra rasta 11

fenolinių rūgščių, todėl ţievės vaistinės ţaliavos

preparatais yra gydomi skrandţio veiklos sutrikimai

(Deineka, 2005).

Mikrobiologinis maisto produktų uţterštumas sukelia

daug sveikatos ir ekonominių problemų. Todėl antriniai

augalų metabolitai yra ypač intensyviai tyrinėjami

pastaraisiais metais. Didelis dėmesys yra skiriamas

tiems augalams, kurie sukaupia daug įvairių fenolinių

junginių, pasiţyminčių antimikrobinėmis savybėmis

(Cavanagh, et al., 2003; Rauha et al., 2000; Magarinos et

al., 2008).

Šių tyrimų tikslas buvo nustatyti skirtingų V.

opulus genotipų vaisių sulčių poveikį įvairioms

patogeninėms bakterijoms, kurios sukelia pavojingas ligas

ir yra aptinkamos įvairiuose maisto produktuose.

Tyrimų metodika

VDU Kauno botanikos sode, vykdant Valstybinę

augalų genetinių išteklių mokslinių tyrimų programą buvo

sukaupta paprastojo putino V. opulus veislių ir klonų

kolekcija. Atlikus išsamius agrobiologinius tyrimus,

atrinktos trys perspektyvios veislės 'Kijevskaja Sadovaja',

'Krasnaja Grozd', 'Šukšinskaja', paprastojo putino

varietetai V. opulus var. americanum ir V. opulus var.

sargentii bei vietinės kilmės klonas P3 (Cesonienė et al.,

2010).

Visi vaisių pavyzdţiai buvo surinkti nuo krūmų

masinio nokimo stadijos metu. Pirmiausia buvo pašalintos

sėklos, po to vaisiai homogenizuoti. Vaisiai buvo lengvai

sutraiškyti ir rankiniu presu išspaustos sultys. Kiekvienam

vaisių pavyzdţiui paruošta po 3 pakartojimus.

Paprastojo putino vaisių sulčių antimikrobinis

aktyvumas nustatytas, naudojant dešimt gram-teigiamų ir

gram-neigiamų testavimo kultūrų : Listeria monocytogenes

ATCC 19117, Staphylococcus aureus (ATCC 25923),

Enterococcus faecalis, Staphylococcus epidermidis,

Micrococcus luteus (ATCC 9341), Escherichia coli

(ATCC 25922), Bacillus subtilis (ATCC),

Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853), Salmonella

typhimurium (ATCC 14028) ir Salmonella agona PT 43.

Antibakterinį aktyvumą vertinant difuzijos j agarą

metodu, bakterijų kultūros 18 valandų augintos 37 °C

temperatūroje ant nuoţulnaus agaro. Nuplauta bakterijų

suspensija praskiesta pagal Mc Farland standartą Nr. 0.5,

gerai permaišyta mini purtykle, ir atitinkamas ląstelių

skaičius supiltas į ištirpintą bei atvėsintą iki 47 °C

temperatūros agarizuotą terpę bendram bakterijų skaičiui

nustatyti, dar kartą gerai permaišyta, kad ląstelės tolygiai

pasiskirstytų. Tokiu būdu paruoštas bakterijų ląstelių

suspensijos mišinys su terpe išpilstytas po 10 ml į 90

mm skersmens stiklines Petri lėkšteles. Terpei sustingus,

joje padarytos 6 įdubos (8 mm skersmens), į kurias įpilta

50 µl tiriamų sulčių. Antimikrobinis poveikis bakterijų

kultūroms įvertintas po 24 val. kultivavimo, matuojant

skaidrių zonų, susidariusių aplink įdubas, skersmenį,

išreiškiant milimetrais. Jei aplink įdubas skaidrios zonos

nesusidaro, daroma išvada, kad tirta medţiaga ar jos

koncentracija neturi baktericidinio poveikio tiriamai

kultūrai. Antibiotikas Ceftazidime/clavulanic acid 30/10

µg (Becton, Dickinson and Co., Franklin Lakes, N.J.,

U.S.A.) buvo panaudotas kaip teigiama kontrolė.

Atlikta duomenų statistinė analizė, naudojant

ANOVA, statistiškai patikimi skirtumai apskaičiuoti,

naudojant Duncan kriterijų, esant P≤0,01.

ISSN 1822-1823 Žmogaus ir gamtos sauga 2013, ASU

107

Rezultatai

Nustatyta, kad įvairių paprastojo putino veislių, klonų

ir varietetų vaisių sulčių antimikrobinis aktyvumas

statistiškai patikimai skyrėsi. Tačiau bakterijų kultūros taip

pat buvo nevienodai jautrios sulčių poveikiui. Didţiausia

gram-neigiamos bakterijos S. typhimurium augimo

slopinimo zona siekė nuo 25,3±0,40 iki 30,3±0,47mm (l

lentelė). Bakterijos S. agona augimas taip pat buvo stipriai

slopinamas, o slopinimo zona siekė nuo 23,3±0,47 iki

27,7±0,41 mm. E. coli kultūra pasiţymėjo didesniu

atsparumu paprastojo putino vaisių sulčių poveikiui.

Testuojama P. aeruginosa bakterijų kultūra buvo pati

atspariausia putino sulčių poveikiui, o jos augimo

slopinimo zona siekė nuo 17,8±0,40 iki 20,3±0,46 mm.

Lyginant paprastojo putino genotipų poveikį, nustatyta,

kad maţiausios gram-neigiamų bakterijų augimo zonos

susidarė, testuojamąsias kultūras veikiant veislės 'Krasnaja

Grozd' vaisių sultimis.

1 lentelė. Paprastojo putino V. opulus vaisių sulčių antibakterinis poveikis gram-neigiamų bakterijų kultūroms

Table 1. The antibacterial activity of V. opulus fruits juices on Gram-negative bacteria test cultures

Pavyzdys

Accession

Slopinimo zona, mm

Inhibition zone, mm

P. aeruginosa E. coli S. typhimurium S. agona

'Kijevskaja Sadovaja' 18,0+0,10ab

24,0±0,81d 27,0±0,00

b 26,0±0,00

b

V. opulus var. sargentii 18,0±0,10ab

23,0±0,12b 28,0±0,00

C 27,6±0,37

C

'Krasnaja Grozd' 17,8±0,40a 18,6±0,47

a 25,3±0,42

a 27,7±0,41

C

P3 20,3±0,46C 22,3±0,32

b 27,5±0,17

b 23,3±0,47

a

V. opulus var. americanum 18,0±0,10ab

23,7±2,49C 29,0±0,23

d 27,0±0,10

bc

'Šukšinskaja' 18,3±0,50b 23,0±0,81

b 30,3±0,47

e 25,3±0,26

b

Antibiotikas Ceftazidime nenustatyta 38,0±0,00 34,0±0,06 35,0±0,06 Pastaba. Vidurkiai, kurie stulpeliuose yra paţymėti ta pačia raide, statistiškai patikimai nesiskiria (Duncan kriterijus), esant P≤0,01

Note.The means in a column followed by the šame letter sho\vedno significant difference (Duncan 's multiple range tęst), significant at P≤0.01

Paprastojo putino vaisių sultys pasiţymėjo slopinančiu

poveikiu ir gram-teigiamų bakterijų L. monocytogenes, E.

faecalis ir S. aureus atţvilgiu, o vidutinės slopinimo zonos

siekė, atitinkamai 26,5±0,35 mm, 25,7±0,28 mm ir

24,1±0,34 mm. Didţiausiu atsparumu sulčių poveikiui

pasiţymėjo bakterijų M. luteus ir S. epidermidis kultūros,

kurių augimo slopinimo zonos siekė atitinkamai, nuo

15,0±0,00 iki 18,0±0,13 mm ir nuo 15,0±0,19 iki

18,2±0,21mm (2 lentelė).

2 lentelė. Paprastojo putino V. opulus vaisių sulčių antibakterinis poveikis gram-teigiamų bakterijų kultūroms

Table 2. The antibacterial activity of V. opulus fruit juices on Gram-positive bacteria test cultures

Pavyzdys

Accession

Slopinimo zona, mm

Inhibition zone, mm

S. aureus B. subtilis L. monocytogenes E. faecalis S. epidermidis M. luteus

'Kijevskaja

Sadovaja' 23,7±l,88

b 17,0±0,00

b 26,0±0,00

b 25,3±0,47

a 15,0±0.00

a 16,0±0,00

b

V. opulus var.

sargentii 26,0±0,00 20,3±0,47

d 24,6+1, 69

a 28,0±0,00

C 17,00±0,00

bc 18,0±0,13

d

'Krasnaja Grozd' 22,0±l,41a 21,7±0,47

e 26,3+0,47

c 24,6+0,47

a 16,6±0,47

b 17,6±0,47

C

P3 25,7±0,47d 16,3±0,47

a 27,6±0,47

d 25,0±0,47

a 15,7±0,47

a 15,4±0,07

ab

V. opulus var.

americanum 24,0±0,00

C 18,0±0,00

C 29,0±0,00

e 25,0±0,00

a 18,2±0,21

d 15,0±0,00

a

'Šukšinskaja' 23,3±0,47b 17,3±0,47

b 25,3±0,47

ab 26,3±0,47

b 17,3±0,47

C 15,2±0,47

ab

Antibiotikas

Ceftazidime 27,0±0,00 31,0±0,00 32,0+0,00 30,6+0,00 nenustatyta 40,1+0,21

Pastaba. Vidurkiai, kurie stulpeliuose yra paţymėti ta pačia raide, statistiškai patikimai nesiskiria (Duncan kriterijus), esant P≤0,01

Note. The means in a column followed by the same letter showed no significant difference (Duncan 's multiple range test), significant at P≤0.01

Lyginant paprastojo putino genotipus, nustatyta, kad

V. opulus var. americanum vaisių sultys pasiţymėjo stipriu

antibakteriniu poveikiu gram-teigiamai bakterijai 5.

epidermidis. V. opulus var. sargentii sultys stipriausiai

slopino E. faecalis ir S. aureus bakterijų kultūrų augimą.

Visos tirtos gram-teigiamos ir gram-neigiamos

bakterijos jautriausios buvo pusiau sintetinio antibiotiko

Ceftazidime, kuris buvo naudojamas kaip kontrolė,

poveikiui. Tačiau galima teigti, kad paprastojo putino

vaisių sultys taip pat pasiţymėjo efektyviu bakterijų

augimo slopinimu. Ypač svarbu paţymėti stiprų slopinantį

sulčių poveikį patogeninės bakterijos S. aureus augimui.

Aktyviausiai testuojamos S. aureus kultūros augimą

slopino V. opulus var. sargentii (26,0 mm) ir vietinės

kilmės klono P3 (25,7 mm) vaisių sultys. Antibiotiko

Ceftazidime poveikyje šios bakterijos augimo slopinimo

zona siekė 27,0 mm.

ISSN 1822-1823 Žmogaus ir gamtos sauga 2013, ASU

108

Aptarimas

Pastaraisiais metais ypač domimasi augalų

natūralių junginių funkcionaliosiomis savybėmis, nes jie

gali pakeisti iki šiol plačiai maisto pramonėje naudotas

įvairias sintetines chemines medţiagas. Vaisių vartojimas

yra labai svarbus saugant ţmonių sveikatą. Kadangi

paprastojo putino vaisiai sukaupia didelius kiekius

fenolinių junginių ir antocianinų, jie gali būti naudojami

įvairių ligų prevencijai bei gydymui (Česonienė et al.,

2010).

Ankstesnių tyrimų, atliktų VDU Kauno botanikos sode

metu buvo nustatyta, kad V. opulus pavyzdţiai labai

skiriasi bendru fenolinių junginių ir antocianinų kiekiu

(Česonienė et al., 2008; Česonienė et al., 2010; Cam et al.,

2007; Jordheim et al., 2007). Literatūroje yra duomenų

apie fenolinių junginių kiekius putino vaisių minkštime

tyrimus, kurie patvirtina mūsų duomenis (Deineka et al.,

2005; Sagdic et al., 2006; Rop et al., 2010). Kitų autorių

duomenimis, putinų vaisiai taip pat yra biologiškai

aktyvių medţiagų chlorogeninės rūgšties ir flavonoidų

(Velioglu et al., 2006), lipidų ir lipofilinių componentų

(Paredes-Lό pez et al., 2010) šaltinis. Šiame darbe pristatyti tyrimai patvirtina, kad kai kurie

liaudies medicinoje nuo seno vartojami augalai yra

vertingų antimikrobinėmis savybėmis pasiţyminčių

fitocheminių junginių šaltinis. Šie augalai galėtų būti

naudojami maisto produktų kokybės gerinimui, apsaugant

juos nuo uţteršimo patogeninėmis bakterijomis (Rauha et

al., 2000).

Mokslinėje literatūroje yra paskelbta nedaug tyrimų

rezultatų apie antimikrobines paprastojo putino vaisių

savybes. Sagdic ir kt. (2006) įrodė, kad bakterija

Aeromonas hydrophila yra labai jautri putino vaisių

ekstraktui, o Yersinia enterocolitica išskyrė kaip

atspariausią.

Šiame darbe palygintas skirtingų paprastojo putino

veislių, klonų ir varietetų vaisių sulčių poveikis tiek gram-

neigiamų, tiek gram-teigiamų patogeninių bakterijų

dauginimuisi. Nustatyta, kad visos testuojamos bakterijų

kultūros buvo jautrios paprastojo putino vaisių sulčių

poveikiui, tačiau skyrėsi slopinimo zonų dydţiu. Kaip

atspariausias paprastojo putino vaisių sulčių poveikiui

reikia išskirti bakterijas M. luteus ir S. epidermidis.

Tyrimų rezultatai patvirtina, kad sultys ypač efektyviai

slopina patogeninių -S. typhimurium, L. monocytogenes, S.

agona, E. faecalis ir S. aureus bakterijų augimą.

Šie tyrimų rezultatai taip pat tampa pagrindu

atrinkti tolimesniems biocheminiams ir

mikrobiologiniams tyrimams vertingiausias paprastojo

putino veisles ar klonus, kurių vaisių sultys sukaupia

didesnius kiekius biologiškai aktyvių medţiagų ir

efektyviausiai slopina patogeninių bakterijų augimą.

Siekiant išsamiai įvertinti paprastojo putino vaisių

antimikrobines savybes, būtina nustatyti atskirų vaisiuose

esančių biologiškai aktyvių medţiagų kiekius ir jų poveikį

įvairiems patogeniniams mikroorganizmams. Tuomet bus

galima išsamiau pagrįsti paprastojo putino vaisių

panaudojimą tiek farmacijos, tiek maisto pramonėje.

Išvados

1. Paprastojo putino vaisių sultys stipriausiai

slopino patogeninių bakterijų S. typhimurium, S. agona, L

monocytogenes, E. faecalis ir S. aureus augimą.

2. Testuojamosios P. aeruginosa, M. luteus ir S.

epidermidis bakterijų kultūros pasiţymėjo didţiausiu

atsparumu paprastojo putino vaisių sulčių poveikiui.

3. Išskirti du varietetai V. opulus var. sargentii ir V.

opulus var. americanum, kurių vaisių sultys buvo

efektyviausios, vertinant jų poveikį gram-neigiamų ir

gram-teigiamų bakterijų kultūrų augimui.

Literatūra

1. Burns Kraft, TF., Dey, M., Rogers, RB., Ribnicky, DM., Gipp, DM., Cefalu, WT. Phytochemical composition and metabolic performance-enhancing activity of dietary berries traditionally used by native North American. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2008, Vol. 56, Iss. 3, p. 654-660. 2. Cam, M., Hisl, Y, Kuscu, A. Organic acid, phenolic content, and antioxidant capacity of fruit flesh and seed of Viburnum opulus. Chemistry of Natural Compounds, 2007, Vol. 43, Iss. 4, p. 460- 461. 3. Cavanagh, HMA., Hipwell, M., Wilkinson, JM. Antibacterial activity of berry fruits used for culinary purposes. Journal of Medicinai Food, 2003,Vol. 6. Iss. l, p. 57-61. 4. Česonienė, L.; Daubaras, R.; Viškelis, P. Evaluation of productivity and biochemical components in fruit of different Viburnum accessions. Biologija, Vol. 54, No. 2, p. 93-96. 5. Česonienė, L, Daubaras, R., Venclovienė, J., Viškelis, P. Biochemical and agro-biological diversity of Viburnum opulus genotypes. Central European Journal of Biology, 2010, Vol. 5, Iss. 6, p. 864-871. 6. Deineka, VI., Sorokopudov, VN., Deineka, LA., Shaposhnik, EI., Kol’tsov, SV. Anthocyans from fruit of some plants of the Caprifoliaceae family. Chemistry of Natūrai Compunds, 2005, Vol 41, Iss. 2, p. 162-164. 7. Jordheim, M., Giske, NH., Andersen, 0M. Anthocyanins in Caprifoliaceae. Biochemical Systematics and Ecology, 2007, Vol. 35, Iss. 3, p. 153-159. 8. Magariňos, HLE., Sahr C., Selaive, SDC., Costa, ME., Figuerola,

FE., Pizarro, OA. In vitro Inhibitory Effect of Cranberry

(Vaccinium macrocarpum Ait.) Juice on Pathogenic Microorganisms. Applied Biochemistry and Microbiology, 2008,

Vol. 44, Iss. 3, p. 300-304.

9. Osipova, I. Allelopathic properties of European cranberry bush (Viburnum opulus L.) - valuable decorative, medicinal and fruit

plant, In: P. Salaš (Ed), Proceedings of 9th International

Conference of Horticulture, Lednice, Czech Republic, 2001,

September 3-6, p. 146-152.

10. Paredes-Lό pez, O., Cervantes-Ceja, ML., Vigna-Pėrez, M., Hernández-Pérez, T. Berries: Improving human health and healthy aging, and promoting quality life - a review. Plant Foods for

Human Nutrition, 2010, No. 65, p. 299-308.

11. Rauha, JP., Remes, S., Heinonen, M., Hopia, A., Kähkönen, M., Kujala, T., Pihlaja, K.., Vuorela, H., Vuorela, P. Antimicrobial

effect of Finnish plant extracts containing flavonoids and other phenolic compounds. International Journal of Food Microbiology,

2000, No. 56, p. 3-12.

12. Rop, O., Reznicek, V., Valsikova, M., Jurikova, T., Mlcek, J., Kramarova, D. Antioxidant Properties of European Cranberrybush

Fruit (Viburnum opulus var. edule). Molecules, 2010, Vol. 15, Iss.

6, p. 4467^477.

13. Sagdic, O., Aksoy, A., Ozkan, G. Evaluation of the antibacterial

and antioxidant potentials of cranberry (gilaburu, Viburnum opulus

L.) fruit extract. Acta Alimentaria, 2006, Vol 35, iss. 4, p. 487- 492.

14. Van, Q., Nay, BN., Reimer, M., Jone,s PJH., Fulcher, RG.,

Rempel, CB. Anti-inflamatory effect of Inonotus obliquus. Polygala senega, and Viburnum trilobum in a cell screening assay.

Journal of Ethncpharmacology, 2009, No. 125, p. 487-493.

15. Velioglu, YS., Ekici, L., Poyrazoglu, ES. Phenolic composition of

ISSN 1822-1823 Žmogaus ir gamtos sauga 2013, ASU

109

European cranberrybush (Viburnum opulus L.) berries and astringency removal of its commercial juice. InternationalJournal of Food Science

and Technologies, 2006, No.41, p. 1011-1015 16. Zayachkivska, OS., Gzegotsky, MR., Terletska, OI., Lutsyk, DA., Yaschenko, AM., Dzhura, OR. Influence of Viburnum opulus

proanthocyanins on stress induced gastrointestinal mucosal damage.

Journal of Physiology and Pharmacology, 2006, Vol. 57, Iss. 5, p. 155-

167.

Laima Česonienė, Remigijus Daubaras, Antanas Šarkinas

Investigations of antibacterial properties of Viburnum opulus fruit juice

Summary

Viburnum opulus L. s a plant with fruits that are rich in biologically active substances, making it valuable to the food and pharmaceutical

industries. Here, we present our investigations of antibacterial activity in the fruit juice of six V. opulus accessions. The results of this study confirmed

that the juice of V. opulus fruits strongly inhibited the growth of a wide range of human pathogenic bacter ia, both Gram-negative (Salmonella typhimurium and S. agond) and Gram-positive (Staphylococcus aureus, Lysteria monocytogenes, and Enterococcus faecalis) organisms.

Antibacterial properties, pathogenic bacteria, fruits

Gauta 2013 m. kovo mėn., atiduota spaudai 2013 m. balandžio mėn.

Laima ČESONIENĖ. Vytauto Didţiojo universiteto Kauno botanikos sodo biomedicinos mokslų daktarė. Adresas: Ţ.E. Ţilibero 6, LT-46324, Kaunas,

tel.(8 37) 298272, el. paštas; l.cesoniene@bs.vdu.lt. Remigijus DAUBARAS. Vytauto Didţiojo universiteto Kauno botanikos sodo biomedicinos mokslų daktaras. Adresas: Ţ.E. Ţilibero 6, LT-46324,

Kaunas, tel. (8 37) 298272, el. paštas; r.daubaras@bs.vdu.lt. Antanas ŠARKINAS. Kauno technologijos universiteto Maisto instituto technologijos mokslų daktaras. Adresas: Taikos pr. 92, LT-51180, Kaunas, tel. (837) 312393, el. paštas: direktorius@lmai.lt. Laima ČESONIENĖ.Kaunas Botanical Garden of Vytautas Magnus University, doctor of biomedical sciences. Address: Ţ.E. Ţilibero 6, LT-46324,

Kaunas, phone: (8 37) 298272, e-mail: l.cesoniene@bs.vdu.lt. Remigijus DAUBARAS. Kaunas Botanical Garden of Vytautas Magnus University, doctor of biomedical sciences. Address: Ţ.E. Ţilibero 6, LT-

46324, Kaunas, phone: (8 37) 298272, e-mail; r.daubaras@bs.vdu.lt. Antanas ŠARKINAS. Food Institute of Kaunas University of Technology, doctor of technological sciences. Address: Taikos pr. 92, LT-51180, Kaunas, phone:(8 37) 312393, e-mail: direktorius@lmai.lt