pengaruh ekstrak daun pepaya terhadap spermatogenesis

7/30/2019 Pengaruh ekstrak daun pepaya terhadap spermatogenesis

1/24

BAB I

PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Indonesia sebagai salah satu negara tropis mempunyai beragam jenis

tumbuhan yang berpotensi untuk dikembangkan menjadi bahan obat. Salah satu

tumbuhan yang banyak tumbuh di Indonesia dan dimanfaatkan untuk obat

tradisional adalah pepaya (Carica papaya L.). Hasil uji fitokimia menunjukkan

bahwa daun pepaya mengandung senyawa alkaloid karpain, flavonoid dan tannin

(OGTR, 2008). Alkaloid adalah suatu golongan senyawa basa bernitrogen yang

kebanyakan heterosiklik dan paling banyak terdapat pada tumbuh-tumbuhan

Konsentrasi senyawa alkaloid ini paling banyak terdapat pada bagian hijau dari

tumbuhan pepaya (daun) dan bijinya (C.P. Khare, 2004). Golongan alkaloid ini

diketahui dapat mempengaruhi spermatogenesis dengan menekan sekresi hormon-

hormon yang diperlukan untuk berlangsungnya spermatogenesis (Winarno dan

Sundari, 1997).

Spermatogenesis adalah proses pembentukan sperma yang terjadi di tubulus

seminiferus testis. Spermatogenesis normal tergantung pada kadar LH

(Luteinizing Hormone) dan FSH(Follicle stimulating hormone). LH merangsang

sel-sel leydig untuk memproduksi testosteron. Sedangkan FSH merangsang sel

sertoli untuk menghasilkan protein pengikat androgen yang mengikat testosteron.

Kadar testosteron tinggi diperlukan untuk spermatogenesis normal. Hasil

penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa golongan alkaloid biji pepaya dapat

menurunkan kadar LH dan testosteron serum (P.B. Udoh et al, 2009), mencegah
http://id.wikipedia.org/wiki/Basahttp://id.wikipedia.org/wiki/Heterosiklikhttp://id.wikipedia.org/wiki/Basahttp://id.wikipedia.org/wiki/Heterosiklik


2/24

fertilisasi ovum, mengurangi jumlah sel sperma dan menyebabkan degenerasi sel

sperma (F.V. Udoh dan E.E. Umoh, 2005).

Peningkatan jumlah penduduk yang cukup pesat membuat pemerintah

Indonesia terus berupaya untuk meningkatkan kualitas program Keluarga

Berencana. Namun kita tidak bisa menutup mata bahwa selama kurun waktu 30

tahun terakhir, keberhasilan program KB masih banyak didukung oleh peran serta

wanita dalam penggunaan alat dan metode kontrasepsi. Hal ini dibuktikan dengan

hasil Survei Demografi dan Kesehatan Indonesia (SDKI) tahun 2007 bahwa

persentase peserta KB pria secara nasional baru mencapai sekitar 2,5%,

sedangkan yang 97,5% adalah peserta KB wanita. Untuk itu, keterlibatan pria

dalam program ini harus diupayakan secara intensif oleh semua pihak dengan

mencari bahan untuk kontrasepsi. Saat ini alat kontrasepsi pria hanya terbatas

pada kondom dan vasektomi (BKKBN, 2008).

Sejauh penelusuran kepustakaan penulis, belum ditemukan hasil penelitian

mengenai pengaruh alkaloid daun pepaya terhadap spermatogenesis. Berdasarkan

hal tersebut, maka timbullah keinginan penulis untuk meneliti pengaruh ekstrak

daun pepaya terhadap spermatogenesis tikus, mengingat daun pepaya merupakan

bagian yang paling tinggi kandungan alkaloid karpainnya disamping biji pepaya.

Apabila dari hasil penelitian ini didapatkan bahwa konsumsi daun pepaya juga

dapat menurunkan spermatogenesis tikus, diharapkan lebih dapat memberikan

sumbangan pikiran sebagai salah satu pertimbangan dalam pengembangan

program KB terutama pada pria sekaligus meningkatkan pendayagunaan sumber

daya alam nabati sebagai bahan obat.

2


3/24

1.2. Rumusan Masalah

Apakah pemberian ekstrak daun pepaya (Carica papaya L.) berpengaruh

pada spermatogenesis tikus putih (Rattus novergicus L.) ?

1.3. Tujuan Penelitian

1.3.1. Tujuan Umum

Mengetahui pengaruh pemberian ekstrak daun pepaya (Carica papaya

L.) terhadap spermatogenesis tikus putih (Rattus novergicus L.)

1.3.2. Tujuan Khusus

1. Mengetahui spermatogenesis tikus putih yang tidak diberikan

ekstrak daun pepaya.

2. Mengetahui spermatogenesis tikus putih yang diberi ekstrak daun

pepaya.

3. Mengetahui pengaruh variasi dosis ekstrak daun pepaya yang

diberikan pada tikus putih terhadap spermatogenesis.

1.4. Manfaat Penelitian

1. Memberikan informasi apakah alkaloid yang terkandung dalam daun

pepaya berpengaruh terhadap spermatogenesis.

2. Memberi masukan kepada pengembangan Keluarga Berencana untuk

menggali lebih banyak lagi informasi yang berhubungan dengan daun

pepaya dan efeknya terhadap fertilitas.

3. Sebagai bahan dasar dan acuan pada penelitian selanjutnya.

3


4/24

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Spermatogenesis

Spermatogenesis adalah proses pertumbuhan dan perubahan dari

spermatogonia sampai spermatozoa yang terjadi di tubulus seminiferus testis.

Epitel tubulus seminiferus terdiri atas dua jenis sel yaitu sel sertoli yang

berfungsi untuk menunjang, melindungi, dan mengatur nutrisi spermatozoa yang

berkembang, dan sel yang kedua, sel spermatogenik yang akan menjadi

spermatozoa. Celah diantara tubulus seminiferus dalam testis berisi jenis sel lain

yang disebut sel leydig. Sel ini merupakan sel pensekresi steroid (Junqueira dan

Carneiro, 1997).

Proses spermatogenesis meliputi tiga fase yaitu :

1) Spermatositogenesis, selama fase ini spermatogonium membelah secara

mitosis, menghasilkan generasi sel baru yang nantinya akan menghasilkan

spermatosit primer.

2) Meiosis, Terdiri dari miosis I dan miosis II. Selama fase miosis I, spermatosit

primer mengalami pembelahan serta mereduksi sampai setengah jumlah

kromosom dan jumlah DNA per sel, menghasilkan spermatosit sekunder,

kemudian spermatosit sekunder mengalami meiosis II menghasilkan

spermatid.

3) Spermiogenesis, spermatid mengalami proses sitodiferensiasi menghasilkan

spermatozoa (Junqueira dan Carneiro, 1997).


5/24

Gambar 2.1. Histologi testis (Junqueira dan Carneiro, 1997)

Proses spermatogenesis dimulai dengan sel benih primitif, yaitu

spermatogonium, yang berkumpul tepat di tepi lamina basal dari epitel

germinativum. Sel spermatogonium relatif kecil, bergaris tengah sekitar 12 m,

dan intinya mengandung kromatin pucat. Pada keadaan kematangan kelamin, sel

ini mengalami sederetan mitosis, dan sel-sel yang baru dibentuk dapat mengikuti

satu dari dua jalur yaitu mereka dapat berlanjut, setelah satu atau lebih

pembelahan mitosis, sebagai sel induk yang disebut spermatogonium tipe A,

atau mereka dapat berdiferensiasi selama siklus mitotik yang progresif menjadi

spermatogonium tipe B (Junqueira dan Carneiro, 1997).

Spermatogonium tipe A adalah sel induk untuk garis keturunan

spermatogenik, sementara spermatogonium tipe B merupakan sel progenitor yang

berdiferensisasi menjadi spermatosit primer. Segera setelah sel spermatogonium

A dan B, sel tersebut memasuki tahap profase dari pembelahan miosis pertama.

Pada saat ini, spermatosit primer memiliki 46 kromosom dan diploid (2N). Dalam

5


6/24

tahap profase ini, sel melewati 4 tahap yaitu leptoten, zigoten, pakiten, dan

diploten. Kemudian mengalami diakinesis, yang menghasilkan pemisahan dari

kromosom (Junqueira dan Carneiro, 1997).

Persilangan gen kromosom terjadi pada tahap miosis I ini. Sel kemudian

memasuki metafase, dan kromosom bergerak menuju kutub masing-masing pada

tahap anafase berikutnya. Karena profase pembelahan ini memakan waktu lebih

kurang 22 hari, maka hampir seluruh sel yang tampak pada potongan berada

dalam fase ini. Spermatosit primer adalah sel terbesar dalam garis turunan

spermatogenik ini dan ditandai adanya kromosom dalam tahap proses

penggelungan yang berbeda di dalam intinya (Junqueira dan Carneiro, 1997).

Dari pembelahan miosis I ini timbul sel yang lebih kecil disebut spermatosit

sekunder dengan hanya 23 kromosom dan haploid (1N). Spermatosit sekunder

sulit diamati dalam sedian testis karena merupakan sel berumur pendek yang

berada dalam fase interfase yang sangat singkat dan dengan cepat memasuki

pembelahan miosis II. Pembelahan spermatosit sekunder menghasilkan

spermatid, sel yang mengandung 23 kromosom dan haploid. Spermatid ini dapat

dikenali melalui ukurannya yang kecil (garis tengah 7-8 m), inti dengan daerah-

daerah kromatin padat dan lokasi jukstaluminal di dalam tubulus seminiferus.

(Junqueira dan Carneiro, 1997).

Proses selanjutnya adalah spermiogenesis, yang mencakup pembentukan

akrosom, pemadatan dan pemanjangan inti, pembentukan flagelum, dan

pengurangan sebagian besar sitoplasmanya. Hasil akhirnya adalah spermatozoa

matang, yang kemudian dilepaskan ke dalam lumen tubulus seminiferus

(Junqueira dan Carneiro, 1997).

6


7/24

Gambar 2.2. Urutan peristiwa dan waktu dalam spermatogenesis

(GSNU, 2009).

Keseluruhan proses spermatogenesis, dari spermatogonia menjadi

spermatozoa, membutuhkan waktu sekitar 74 hari pada manusia dan 36 hari pada

tikus jantan (Guyton & Hall, 2007).

Spermatogenesis dirangsang oleh faktor-faktor hormonal. Beberapa hormon

yang mempengaruhinya antara lain :

1. Testosteron, yang disekresikan oleh sel-sel leydig yang terletak di

intertisium testis, penting bagi pertumbuhan dan pembelahan sel-sel

germinal testis, yang merupakan tahap pertama pembentukan sperma.

2. Luteinizing hormone, yang disekresikan oleh kelenjar hipofisis anterior,

merangsang sel-sel leydig untuk menyekresikan testosteron.

7

B

A

25 days

28 days

21 days


8/24

3. Follicle stimulating hormone, yang juga disekresikan oleh sel-sel kelenjar

hipofisis anterior, merangsang sel-sel sertoli, tanpa rangsangan ini,

pengubahan spermatid menjadi sperma (proses spermiogenesis) tidak akan

terjadi.

4. Estrogen, yang dibentuk dari testosteron oleh sel-sel sertoli ketika sel

sertoli dirangsang oleh FSH, mungkin juga penting untuk spermiogenesis.

5. Hormon Pertumbuhan, diperlukan untuk mengatur latar belakang fungsi

metabolisme testis. Hormon ini secara spesifik meningkatkan pembelahan

awal spermatogonia (Guyton & Hall, 2007).

Bila terjadi gangguan dalam hormon-hormon tersebut maka proses

spermatogenesis akan terganggu dan kualitas sperma akan berubah. Misalnya, jika

tidak ada FSH maka spermatogenesis tidak akan terjadi. Akan tetapi, FSH tidak

dapat bekerja sendiri menyelesaikan spermatogenesis. Agar spermatogenesis

berlangsung sempurna, memerlukan testosteron yang dihasilkan oleh sel

interstisial leydig. Produksi testosteron sendiri dirangsang oleh LH. (Guyton &

Hall, 2007). Kombinasi kadar FSH dan LH yang tinggi dan kadar testosterone

yang rendah menyebabkan adanya kegagalan testis. Kadar FSH yang tinggi

dengan kadar LH dan testosteron yang normal menyebabkan kegagalan sel

germinal terisolasi, fungsi sel leydig yang normal dan terandrogenisasi normal

tetapi mengalami azoospermia atau oligospermia (DeCherney et al, 1997).

Selain hormon, suhu yang sesuai di dalam testis penting untuk

spermatogenesis, biasanya sekitar 2-30 C dibawah suhu badan (Victor P.E, 2003).

Malnutrisi, alkoholisme, dan kerja obat atau senyawa tertentu mengakibatkan

gangguan pada spermatogonia, yang kemudian menyebabkan penurunan produksi

8


9/24

spermatozoa. Radiasi sinar-X dan garam kadmium cukup toksik terhadap sel

turunan spermatogenik, dapat menyebabkan kematian sel tersebut dan sterilisasi.

Akan tetapi, tidak perlu diragukan lagi, bahwa faktor endokrin mempunyai efek

paling penting terhadap spermatogenesis (Junqueira dan Carneiro, 1997).

2.2. Tinjauan Umum Pepaya

2.2.1. Taksonomi Tanaman Pepaya

Divisio : Spermatophyta

Sub divisio : Angiospermae

Klassis : Dicotyledonae

Ordo : Cistales

Familia : Caricacecae

Genus : Carica

Species : Carica papaya L. (Van Steenis, 2002).

2.2.2. Sejarah Singkat Tanaman Pepaya

Tanaman pepaya (C. pepaya) aslinya berasal dari dataran rendah bagian timur

Amerika Tengah, dari Mexico sampai ke Panama (Nakasone & Paull, 1998). Biji-

bijinya didistribusikan ke Karibia dan Asia Tenggara selama penjelajahan

Spanyol di abad ke-16, kemudian menyebar dengan cepat ke India, Pasifik dan

Afrika (Villegas 1997). Pepaya kini tumbuh di semua negara-negara tropis dan

sub-tropis di dunia (OGTR, 2008).

Pepaya asli dari Amerika tengah adalah tanaman yang tinggi dan ramping

yang hampir tidak bisa dimakan. Selama penyebaran dan domestikasi, spesiesnya

9


10/24

mengalami perubahan ukuran buah, warna buah, sistem kawin dan perilaku

tumbuh (Manshardt & Moore, 2003).

2.2.3. Nama Lain Pepaya

Pepaya disebut juga gedang (Sunda), kates (Jawa), peute, batiak, ralempaya,

punti kayu (Sumatra), pisang malaka, bandas, manjan (Kalimantan), kalujawa

(Kalimantan) serta kapalaya kaliki dan uti jawa (Sulawesi). Selain nama daerah

pepaya juga mempunyai nama asing yaitu : papaw tree, papaya, papayer,

melonenbaum,fan mu gua (H. Wijayakusuma dan Dalimartha, 1998).

2.2.4. Syarat Tumbuh

Tanaman pepaya tumbuh subur pada daerah yang memilki curah hujan 1000-

2000 mm/tahun. Suhu udara optimum 22-26 derajat C dengan kelembaban udara

sekitar 40% (Kemal Prihatman, 2000).

Tanah yang baik untuk tanaman pepaya adalah tanah yang subur dan banyak

mengandung humus. Tanah itu harus banyak menahan air dan gembur. Derajat

keasaman tanah (pH tanah) yang ideal adalah netral dengan pH 6-7. Kandungan

air dalam tanah merupakan syarat penting dalam kehidupan tanaman ini. Tinggi

air yang ideal tidak lebih dalam dari pada 50150 cm dari permukaan tanah.

Pepaya dapat ditanam di dataran rendah sampai ketinggian 700 m 1000 m dpl

(Kemal Prihatman, 2000).

2.2.5. Morfologi Tanaman

Pohon biasanya tidak bercabang, batang berbentuk bulat,

berongga, tidak berkayu, dan terdapat benjolan-benjolan bekas

10


11/24

tangkai daun yang sudah rontok. Daun tunggal, berbentuk

menjari, tangkai daun yang panjang dan terkumpul di ujung

batang. Buah berbentuk bulat memanjang, bergantung di

batang, saat muda berwarna hijau dan kuning kemerahan jika

sudah matang, berongga besar di tengahnya dengan tangkai

buah yang pendek. Di dalam buah terdapat biji dalam jumlah

yang banyak dan diselimuti lapisan tipis, berwarna hitam, dan

berbentuk bulat kecil. Bagian tanaman yang bisa dimanfaatkan

sebagai obat adalah daun, buah, biji, dan getahnya (Yellia

Mangan, 2003).

Gambar 2.3. Pohon pepaya (Caricapapaya L.)

2.2.6. Kandungan Kimia

11


12/24

Bagian hijau dari tanaman dan biji pepaya mengandung

alkaloid tetapi kandungan alkaloidnya lebih terkonsentrasi pada

daun pepaya (C.P. Khare, 2004). Selain alkaloid, daunnya

mengandung karpain, dehidrokarpain, flavonoid, dan tannin

(OGTR, 2008). Bijinya juga mengandung saponin, flavonoid,

polifenol, plobatanins dan hidroksimetil-antrakuinons (Udoh &

Kehinde, 1999). Getahnya mengandung enzim papain dan

pseudokarpain. Buahnya mengadung enzim proteolitik, papain

dan kimopain. (C.P. Khare, 2004).

Alkaloid pada biji pepaya telah diketahui memiliki efek

antifertilitas. Pada penelitian sebelumnya, hasil uji efek alkaloid

ekstrak biji pepaya terhadap kadar serum hormon seks tikus

jantan menunjukkan bahwa terjadi penurunan kadar serum

hormon testosteron selama 3 hari pemberian dengan dosis 10

mg/kg, 50 mg/kg, dan 150 mg/kg. Selain itu, kadar serum LH

mengalami penurunan yang signifikan secara statistik (P.B. Udoh

et al, 2009). Ekstrak alkaloid tersebut juga dapat mengurangi

jumlah sperma, menyebabkan degenerasi spermatozoa dan

menekan spermatogenesis secara keseluruhan (F.V. Udoh dan E.E.

Umoh, 2005).

2.2.7. Khasiat Tanaman

Pepaya bersifat manis dan netral. Akar berguna sebagai

peluruh kencing (diuretik), obat cacing, penguat lambung, serta

12


13/24

perangsang kulit. Biji dapat dipakai untuk obat cacing dan

peluruh haid. Buah matang dapat memacu enzim pencernaan,

peluruh empedu (cholagogue), menguatkan lambung (stomakik),

dan anti skorbut. Buah mengkal bermanfaat sebagai pencahar

ringan (laxative), peluruh kencing, pelancar keluarnya ASI, dan

abortivum. Daun dapat menambah nafsu makan, meluruhkan

haid dan menghilangkan sakit (H. Wijayakusuma dan Dalimartha, 1998).

BAB III

KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS

3.1. Kerangka Konsep Penelitian

Keterangan :

= menurunkan

= mempengaruhi

13

Ekstrak

Daun Pepaya

LH

Testosteron

Hormonlain

Spermatogenesis


14/24

3.2. Hipotesis

Pemberian ekstrak daun pepaya (Carica papaya L.) berpengaruh terhadap

spermatogenesis tikus putih (Rattus novergicus L.).

14


15/24

BAB IV

METODE PENELITIAN

4.1. Lokasi dan Waktu Penelitian

Penelitian akan dilaksanakan di Laboratorium Farmakologi Fakultas Farmasi

UNAND dan Laboratorium Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan

Alam UNAND pada bulan Desember 2009-April 2010.

4.2. Jenis Penelitian

Jenis penelitian yang digunakan adalah penelitin eksperimental dengan

rancanganPost-Test Randomized Control Group Design .

4.3. Populasi, Sampel, Besar Sampel, dan Teknik Pengambilan Sampel

Populasi yang akan digunakan dalam penelitian ini adalah tikus putih (Rattus

novergicus L.) jantan, sehat, umur 1,5-2 bulan dengan berat antara 150-200 gram.

Tikus putih diperoleh dari Laboratorium Farmakologi Fakultas Farmasi

Universitas Andalas.

Sampel penelitian yang digunakan adalah 28 ekor tikus putih yang diambil

secara simple random sampling dari populasi dan dibagi menjadi 4 kelompok,

yaitu :

1. Kelompok I : kontrol dengan pemberian akuades

2. Kelompok II : perlakuan dengan pemberian ekstra daun Carica papaya

L. dosis 10 mg/kgBB/hari


16/24

3. Kelompok III : perlakuan dengan pemberian ekstra daun Carica papaya


4. Kelompok IV : perlakuan dengan pemberian ekstra daun Carica papaya


Setiap satu ekor mencit yang diambil dimasukkan ke kelompok yang

berbeda-beda sampai jumlah tiap kelompok mencukupi.

Besar sampel pada penelitian ini didapatkan dengan rumus Federer, yaitu :

( t-1 ) ( n-1 ) 15

Keterangan : t = jumlah kelompok percobaan

n = besar sampel setiap kelompok perlakuan

Dengan rumus ini didapat n 6 untuk masing-masing kelompok. Penulis

mempertimbangkan adanya kemungkinan drop outsampel penelitian

sebesar 10% sehingga jumlah sampel menjadi 7 ekor tikus putih untuk masing-

masing kelompok percobaan. Total besar sampel adalah 28 ekor tikus putih.

Pemberian dosis ekstrak daun Carica papaya L. berdasarkan rumus Metoda

Thomson yaitu metoda yang digunakan untuk menentukan tingkat dosis antara

dosis tertinggi dan dosis terendah dalam suatu percobaan. Metoda thomson

menggunakan rumus :

F =

Keterangan : F = kelipatan dosis

N = jumlah kelompok yang mendapatkan perlakuan (3)

DT = dosis tertinggi (150 mg/kgBB)


17/24

DR = dosis terendah (10 mg/kgBB)

Dari hitungan rumus di atas didapatkan bahwa kelipata dosis yang digunakan

dalam penelitian ini adalah 3,87.


18/24


19/24

4.4. Variabel Penelitian dan Defenisi Operasional

4.4.1. Variabel Penelitian

1. Variabel bebas : Pemberian ekstrak daun pepaya dengan dosis 10

mg/kgBB/hari, 50 mg/kgBB/hari, dan 150

mg/kgBB/hari.

2. Variabel terikat : Spermatogenesis tikus putih.

4.4.2. Definisi Operasional

1. Ekstraksi daun pepaya

Sari pati dari daun pepaya yang diambil dengan teknik maserasi metanol

yang dipekatkan dengan rotary evaporator.

2. Spermatogenesis

Proses pembentukan sperma yang dinilai dari jumlah rata-rata sel

spermatogenik per tubulus seminiferus yaitu sel spermatogonia,

spermatosit, dan spermatid serta lapisan sel spermatogeniknya.

3. Maserasi

Cara ekstraksi yang paling sederhana dimana daun pepaya yang telah halus

direndam dengan bahan pengekstraksi (etanol 95%) sampai meresap dan

melunakkan susunan sel daun sehingga zat-zat yang mudah larut akan

melarut.


20/24

4.5. Bahan Penelitian

1. Ekstrak daun pepaya (Carica papaya L.)

2. Tikus putih (Rattus novergicus L.) jantan, sehat, umur 1,5-2 bulan, dengan

berat 150-200 gram sebanyak 28 ekor.

3. Etanol 95%

4. Akuades steril

5. Pakan tikus putih berupa pelet

6. Eter anastetik

7. Minyak imersi

8. Pewarna Hematoksilin-Eosin

10.Parafin

11.Xilol dan xilol alkohol

12.Kloroform

4.6. Instrumen Penelitian

1. Kandang tikus putih 4 buah

2. Tempat makan dan minum tikus putih 4 buah

3. Spuit oral

4. Timbangan Ohaus untuk mengukur berat badan tikus putih

5. Rotary evaporator

6. Kapas

7. Botol bewarna gelap

8. Mikroskop cahaya

9. Kaca objek dan kaca penutup


21/24

10.Gunting bedah dan alat bedah lainnya

11.Mikrotom

12.Mikrometer

13.Label

4.7. Prosedur Pengambilan dan Pengumpulan Data

1. Persiapan Hewan Percobaan

Tikus putih (Rattus novergicus L.) jantan sebanyak 24 ekor dikelompokkan

sesuai kategori kemudian dipelihara dahulu selama 15 hari untuk aklimatisasi.

Selama masa ini, tikus percobaan diberi makanan dan minuman standar. Hewan

dinyatakan sehat jika tidak mengalami perubahan berat badan lebih dari 10% dan

secara visual menunjukkan perilaku normal. Sebelum perlakuan dimulai tikus

percobaan ditimbang dan dilabel dengan spidol sebagai penanda agar tidak salah

dalam memberikan perlakuan.

2. Proses Pembuatan Ekstrak Daun Pepaya (Ekstraksi)

Satu kg sampel daun pepaya lokal yang ada di Sumatera Barat diiris tipis atau

dihaluskan. Untuk ekstraksi sampel digunakan metode maserasi. Sampel yang

telah diiris tipis dimaserasi dengan etanol 95% sehingga terendam seluruhnya

selama 5 hari dengan sekali-kali diaduk, kemudian disaring dengan kapas. Hasil

saringan disimpan dalam botol berwarna gelap terhindar dari cahaya. Ulangi

maserasi ini selama 3 kali dengan sampel yang sama. Hasil maserasi dipekatkan

denganRotary Evaporatorsehingga didapat ekstrak daun pepaya.


22/24

3. Proses pengenceran ekstrak daun pepaya

Ekstrak daun pepaya diencerkan dengan akuades. Pada kelompok II

pengenceran dilakukan hingga kosentrasi ekstrak menjadi 1%, sehingga setiap 0,1

ml terdapat 1 mg ekstrak daun pepaya. Pada kelompok III pengenceran dilakukan

hingga kosentrasi ekstrak menjadi 5%, sehingga setiap 0,1 ml terdapat dalam 5

mg ekstrak daun pepaya. Pada kelompok IV pengenceran dilakukan hingga

konsentrasi ekstrak menjadi 15 % sehingga setiap 0,1 ml terdapat 15 mg ekstrak

daun pepaya yang beratnya konstan.

4. Cara Kerja

Tikus putih dibagi menjadi 4 kelompok, masing-masing terdiri dari 6 ekor tikus

putih yang dikandangkan secara terpisah. Setelah itu tiap kelompok diberi

perlakuan sesuai dengan kategorinya. Pemberian ekstrak daun pepaya dilakukan

dengan spuit oral 1 x sehari pada jam yang sama selama 36 hari.

Pada hari ke-37 tikus putih dimatikan dengan eter, kemudian tikus dibedah,

diambil testisnya dan dibuat preparat histologis dengan metode parafin dan

pewarnaan HE. Preparat ini digunakan untuk mengetahui jumlah rata-rata sel

spermatogenik per tubulus seminiferus dengan menggunakan mikroskop cahaya

perbesaran 200 kali.

Data diperoleh dari pemeriksaan terhadap 48 tubulus (24 tubulus dari testis

kanan dan 24 tubulus dari testis kiri). Data tersebut berupa data kuantitatif

meliputi jumlah rata-rata sel-sel spermatogonia, sel-sel spermatosit, sel-sel

spermatid dan lapisan sel spermatogenik. Evaluasi dilakukan pada stadium VII

siklus spermatogenesis tikus dimana pada stadium tersebut telah terbentuk

spermatid.


23/24

4.8. Pengolahan dan Analisa Data

Data yang diperoleh diolah dengan komputer menggunakan program EpiData

dan SPSS 13, kemudian dianalisis dengan menggunakan uji statistik berupa :

1. Uji normalitas Kolmogorov Smirnov Goodness of Fit Test dan uji

homogenitas varians Barlett

2. Jika data berdistribusi normal dan homogen dilanjutkan dengan uji

Analysis of Variance (ANOVA) untuk mengetahui perbedaan rerata antar

kelompok, dan jika terdapat perbedaan bermakna dilanjutkan dengan uji

beda nyata terkecil (BNT). Sebaliknya, jika data tidak berdistribusi

normal dan homogen dilakukan transformasi data (x= ). Jika dianalisis

kembali ternyata data tetap tidak normal dan homogen maka dilakukan uji

statistik non parametrik Kruskal-Wallis untuk menentukan apakah data

tersebut memperlihatkan perbedaan yang bermakna atau tidak. Taraf

kemaknaan yang digunakan adalah 5%.


24/24

pengaruh ekstrak daun pepaya terhadap spermatogenesis

Documents