physiopathologie des infections à p. aeruginosa du antibiothérapie st louis-mars 2008 b. guery ea...
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Physiopathologie des infections à P. aeruginosa
DU AntibiothérapieSt Louis-Mars 2008
B. GueryEA 2689
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La virulence de P.aeruginosa
Biofilm Alginate Lectines
SSTT Pili Flagelle
Mécanismes intriqués
QUORUM
SENSING
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Infection aiguë Infection chronique
Infection invasive caractérisée par la sécrétion de nombreuses toxines (injectisome)
Infection inflammatoire associée à la capacité de P. aeruginosa à former une communauté appelée biofilm
Les deux modes de virulences de P. aeruginosa
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Col
onis
atio
n in
itia
le
Étape infectieuse
Infection aiguë Infection chronique
Le choix
Les deux modes de virulences de P. aeruginosa
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Lung infection model inLung infection model in Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa
TTSS switched off
Active TTSS
Toxiceffectors
Lung epithelium
TTSS switched on
Polack et al
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Adhésion Adhésion
Reconnaissance de Reconnaissance de structures glycaniques structures glycaniques
épithéliales et muciniques épithéliales et muciniques via des lectines via des lectines
Colonisation pulmonaire Colonisation pulmonaire
Formation du biofilmFormation du biofilm
Étape d’adhésion initiale
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- L’expression de LecA et LecB est régulée par le système du quorum sensing et par le facteur RpoS
(Cioci et al., 2003)(Cioci et al., 2003)
LecA (PA-IL)LecA (PA-IL)
(Loris et al., 2003)(Loris et al., 2003)
LecB (PA-IIL)LecB (PA-IIL)
Les lectines de P. aeruginosa
D-galactose L-fucose
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Implication des lectines LecA et LecB dans la pathogénie de P. aeruginosa
Etudes in vitro LecA: activité cytotoxique (Bajolet-
Laudinat et al., 1994; Wu et al., 2003)
LecA et LecB: formation du biofilm (Tielker, al., 2005 ; Diggle et al., 2006)
LecA et LecB: inhibition des battements ciliaires (Mewe et al., 2005)
Etudes in vivo
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Chemani et al, Soumis
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Chemani et al, Soumis
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Chemani et al, Soumis
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Chemani et al, Soumis
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Chemani et al, Soumis
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Chemani et al, Soumis
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Sonawane et al, Inf Imm 2006
Capacité à former un biofilm
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Facteurs extracellulaires de virulence
Lazdunski Ann Fr Anesth Réanim 2003,22,523
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ExoU
ExoY ExoT
ExoS
ExoU
ExoT
ExoS
PopBPopD
ExoY
PcrV
Membrane interne
Membrane externe
ExoS
Membrane cytoplasmique
Type I Type II Type III
P. aeruginosa
Cellule eucaryote
ToxAAprA
PcsC
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Elastase et fonction pulmonaire
Alcorn et al, J Biol Chem 2004
The SP-D fragment fails to bind or aggregate bacteria that are aggregated by intact SP-D
Dose Time
T°
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TTSS: a needle
Kubori Kubori et al.et al. Science 1998, Science 1998,280280,602,602
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E. Kipnis et al., Med Mal Infect
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Exo T
ExoT inhibe l’internalisation de PA103 par les cellules épithéliales polarisées et les macrophages
Action liée à une structure en doigt d’arginine, mutation: Diminue l’activité anti-internalisation Altération de la capacité à altérer le
squelette actino-myosique
Garrity-Ryan et al, Inf Imm 2000
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Exo S et lésion alvéolaire
Percentage of alveolar tracerPercentage of alveolar tracer
Lung (% inst)Lung (% inst) Blood (% inst)Blood (% inst)
CtrCtr 93+/-293+/-2 3+/-23+/-2
PAK PAK (A+,S+)(A+,S+) 80+/-480+/-4 16+/-416+/-4
PAKexsA PAKexsA (A+,S-)(A+,S-) 91+/-291+/-2 6+/-16+/-1
PA103 PA103 (A+,S+)(A+,S+) 56+/-256+/-2 21+/-721+/-7
PA103exsA PA103exsA (A-,S-)(A-,S-) 89+/-389+/-3 5+/-35+/-3
PA103tox@ PA103tox@ (A+,S+)(A+,S+) 54+/-1254+/-12 27+/-1227+/-12
(Kudoh et al, Am J Physiol 1994)(Kudoh et al, Am J Physiol 1994)
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Shaver & Hauser, Inf Imm 2004Mutation sur l’activité ADRBT
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Phillips et al, JBC 2003CHO cell
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Phillips et al, JBC 2003
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(Sawa et al, Nature Med 1999)(Sawa et al, Nature Med 1999)
0
5
10
15
20
25
30
No Bac
teria
PA103
dPcrV
dPcr/p
UCPpcrV
dPcrV/p
UCP
*
*
Lung epithelial injuryLung epithelial injury(%(%131131I-Alb)I-Alb)
0102030405060708090
100
PA103
exoU
:Tn5T
c
dPcrV
dPcrV/p
UCPpcrV
dPcrV/p
UCP
**
Cytotoxicity (%)Cytotoxicity (%)
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40
50
60
70
80
90
100
110
120
130
0 1 2 3 4 5 6 7
CtrPA103dUT
40
50
60
70
80
90
100
110
120
130
0 1 2 3 4 5 6 7
CtrPA103dUT
MAPMAP(mmHg)(mmHg)
Cardiac OutputCardiac Output(% baseline)(% baseline)
Time (hours)Time (hours) Time (hours)Time (hours)
(Kurahashi et al, J Clin Invest 1999)(Kurahashi et al, J Clin Invest 1999)
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40
50
60
70
80
90
100
110
120
130
0 1 2 3 4 5 6 7
PA103
PA103+rhIL10
PA103+antiTNF
40
50
60
70
80
90
100
110
120
0 1 2 3 4 5 6 7
PA103
PA103+rhIL10
PA103+antiTNF
MAPMAP(mmHg)(mmHg)
Cardiac OutputCardiac Output(% baseline)(% baseline)
Time (hours)Time (hours) Time (hours)Time (hours)
(Kurahashi et al, J Clin Invest 1999)(Kurahashi et al, J Clin Invest 1999)
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0
5
10
15
20
25
0 1 2 3 4 5 6 7
CtrPA103dUT
0
5
10
15
20
25
0 1 2 3 4 5 6 7
PA103
PA103+rhIL10
PA103+antiTNF
Time (hours)Time (hours) Time (hours)Time (hours)
125125I-alb in blood (%)I-alb in blood (%) 125125I-alb in blood (%)I-alb in blood (%)
(Kurahashi et al, J Clin Invest 1999)(Kurahashi et al, J Clin Invest 1999)
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Surmortalité et SST III
SSTT [+] SSTT [-]
Mortalité
21% 3%
RR décès
PcrV seule 7,4
PcrV + toxine(s)
8,7
(Roy Burman et al, J Infect Dis. 2001 )(Roy Burman et al, J Infect Dis. 2001 )
Infection aiguë
Infection chronique
SSTT [+]
89% 41%
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35 patients ventilés35 patients ventilésPneumonie à Pneumonie à P.aeruginosaP.aeruginosa
Production de ProtéinesProduction de ProtéinesIssues du système de sécrétionIssues du système de sécrétion
de type III de type III
++27/3527/35
--8/358/35
22 Sévère22 Sévère 5 Modérées5 Modérées 3 Sévères3 Sévères 5 Modérées5 Modérées(81%)(81%) (19%)(19%) (38%)(38%) (62%)(62%)
ExoU : 10/35 (29%) associée à 90% de formes sévèresExoU : 10/35 (29%) associée à 90% de formes sévères
(Hauser et al, Crit Care Med 2002)(Hauser et al, Crit Care Med 2002)
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Flagelle et SSTT
Macnab Annu Rev Microbiol 2003,Macnab Annu Rev Microbiol 2003,5757:77:77
![Page 35: Physiopathologie des infections à P. aeruginosa DU Antibiothérapie St Louis-Mars 2008 B. Guery EA 2689](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022062621/551d9d7d497959293b8b4d95/html5/thumbnails/35.jpg)
La flagelline (FliC)
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Arora et al, Inf Imm 2005
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PILI
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Retraction des pilis
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Tang H et al, Infect Immun 1995
infant BALB/cByJ
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alginate
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Alginate mAb humanisé
Strain MAb Survie Ctr Survie mAb
N13 F4291 0/6 6/6
N13 F4281 0/10 8/10
PAO1 F4291 0/6 4/6
PA14 F4291 0/6 5/5
PAO1 ExoU+
F4291 0/5 6/6
B312 F4291 0/6 6/6
Non mucoide
Pier et al, J Immunol 2004
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Quorum Sensing
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luxR luxI
LuxILuxR
AHL
Faible Concentration en AHL
AHL
Operon lux
RNA polymérase
luxR luxI
LuxILuxR
AHL
Forte Concentration en AHL
AHL
Operon lux
RNA polymérase
AHL
AHL
AHL
AHL
LuxRAHL
Transcription & translation
Luminescence
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RhlR RhlI
lasR lasIRsaL
LasILasR
RhlIRhlR
C4
C12
C4
C12
RsaL
PQS
Vfr
QscR
pqsA pqsB pqsC pqsD pqsE
pqsR PqsR
pqsH
VqsR
ActivationInhibition
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Mort
Pneumonie
Bactériémie
H18*
*
*
Pearson et al , Inf Imm 2000
109 CFU/souris
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Modèle de souris brûlée
s/c : Injection 102 CFU
Rumbaugh et al, Inf Imm 1999
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Souris BALBc
Instillation intratrachéale de bactérie + 125 I-Alb
125 I-Alb
125 I-Alb Trouble de
perméabilité
= 125 I-Alb plasmatique
Œdème pulmonaire
= mouillé/secH4
+ Hémocultures
Etude Pyopneumagen
5 souris/souche
(280 souris)
+ cytotoxicité sur A549
LeBerre et al
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Le Berre et al, CMI 2008
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0
2
4
6
8
10
12
14
16
% o
f I 1
25
0
1
2
3
4
5
6
7
8
W/D
*
*
*
58 isolats non clonaux
LeBerre et al
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RESULTATS
% I125 W/D hémoc+ 50%
Ni UST 4,3 4,27
ExoST 6,6 * 4,44 OR= 2,19
ExoU 12,6 * 5,22 * OR= 9 *
* p< 0,05 versus ni USTLeBerre et al
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Communication inter espèce
0
10
20
30
40
50
60
70
80
P. aeruginosa
Oral Flora
P.aeruginosa+Oral flora
0,E+001,E+052,E+053,E+054,E+055,E+05
6,E+057,E+058,E+059,E+051,E+06
P. ae
rugin
osa
Oral F
lora
P. ae
rugin
osa+
Oral fl
ora
PAOF
% c
on
solid
ati
on
Duan et al, Molec Microb 2003
4% des gènes de Pseudomonas répondent à OF Rôle de AI2
CFU
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Super nertwork
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Adenylate cyclase CyaB CyaA
AMPc
Régulateur transcriptionnel Vfr
Expression de plus de 100 gènes SSTT Pili type IV Exotoxin A via LasR/LasI …..
Cofacteur
Super régulateur
Smith et al, Inf Imm 2004
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EA 2689 Karine Faure Rozen Le Berre Maud Pierre Chanez Chemani
IFR 14 Xavier Leroy
GREPI Grenoble Bertrand
Toussaint Olivier Epaulard Benoit Polack
Genève Christian
Vandelden
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Lau et al, Inf Imm 2004
16h pi