plant tissue culture.pdf
TRANSCRIPT
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
1/76
1. Suhu Ruang Kultur
Peran suhunsangat kritisvitro >> invivo , MENGAPA??
Suhu Optimum tidak berlaku uiversaltergantung target
Suhu yang umum digunakan20-27 oC Biasanya lebih tinggi 3-4 derajat dari suhu invivo kenapa??
suhu wadah = suhu ruang???
Faktor Lingkungan yang berpengaruh
terhadap perkembangan kultur
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
2/76
Kontrak Kuliah
Kehadiran 10%
Kuis 20 %
Tugas 30%
UTS 40%
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
3/76
Pertemuan
Pendahuluan
Pengertian, Manfaat dan macam-macam kultur jaringan
tumbuhan serta Fasilitas Yang diperlukan dalam KJT
Penjelasan Tentang medium dan komposisi medium dalam KJTserta macam-macam medium dalam KJT
Persentasi dan diskusi kelompok
Biosintesis Metabolit sekunder
Biosintesi Metabolit sekunder
Persentasi dan diskusi kelompok
UTS
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
4/76
Biotecnology:Plant Tissue Culture(Biosynthesis)
Oktober 2014
Laida Neti Mulyani, M.Si.
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
5/76
Biotechnology?
Bioteknologi adalah cabang ilmu yang
mempelajari pemanfaatan makhluk hidup
(bakteri, fungi, virus, dan lain-lain) maupunproduk dari makhluk hidup (enzim, alkohol)
dalam proses produksi untuk menghasilkan
barang dan jasa
http://id.wikipedia.org/wiki/Bakterihttp://id.wikipedia.org/wiki/Fungihttp://id.wikipedia.org/wiki/Virushttp://id.wikipedia.org/wiki/Enzimhttp://id.wikipedia.org/wiki/Alkoholhttp://id.wikipedia.org/wiki/Alkoholhttp://id.wikipedia.org/wiki/Enzimhttp://id.wikipedia.org/wiki/Virushttp://id.wikipedia.org/wiki/Fungihttp://id.wikipedia.org/wiki/Bakteri -
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
6/76
Successful Clone
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
7/76
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
8/76
Jenis Bioteknologi
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
9/76
Jenis Bioteknologi
Bioteknologi merah (red biotechnolog y)
Aplikasi bioteknologi di bidang medis pengobatan manusia, mulai dari
tahap preventif, diagnosis, dan pengobatan. Contoh organisme untuk
menghasilkan obat dan vaksin.
Bioteknologi putih/abu-abu (wh ite/gray biotechno logy)
Dengan memanipulasi mikroorganisme untuk memudahkan proses
produksi dan pengolahan limbah industri
http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Preventif&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Preventif&action=edit&redlink=1 -
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
10/76
Jenis Bioteknologi
Bioteknologi biru (blue biotechno logy)
Disebut juga bioteknologi akuatik atau perairan yang
mengendalikan proses-proses yang terjadi di lingkungan
akuatik.
contoh : akuakultura, menumbuhkan ikan bersirip atau kerang-
kerangan dalam kondisi terkontrol sebagai sumber makanan
Bioteknologi hijau (green biotechnolog y)
Mempelajari aplikasi bioteknologi di bidang pertanian danpeternakan
Contoh : bidang pertanian, bioteknologi telah berperan dalam
menghasilkan tanaman tahan hama, bahan pangan dengan
kandungan gizi lebih tinggi
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
11/76
Bioteknologi Konvensional Bioteknologi konvensional merupakan bioteknologi yang
memanfaatkan mikroorganisme untuk memproduksi alkohol,
asam asetat, gula, atau bahan makanan
Tidak aseptis, belum menggunakan enzim,
Bioteknologi Modern Memanfaatkan prinsip-prinsip ilmiah melalui penelitian untuk
menghasilkan produk secara efektif dan efisien melibatkan
rekayasa genetika
Aseptis dan menggunakan enzim
Perkembangan Bioteknologi
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
12/76
Bioteknologi
Konvensional
Ciri-ciri
kurang steril, jumlah sedikit (terbatas)
kualitas belum terjamin.
Memakai mahluk hidup secara langsung
Tidak didasari prinsip imiah
berdasarkan keterampilan turun temurun
Olahan
Susu
Olahan
non Susu
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
13/76
Bioteknologi
Modern
Kultur
Jaringan
HibridomaTeknologi
DNA
Rekombinan
Ciri-ciri
Steril
Produksi dalam jumlah banyak (massal),
Kualitas standar dan terjamin
Aplikasi metode-metode mutakhir bioteknologi
Didasari prinsip ilmiah
Produksi secara massal
Menggunakan mahluk hidup dan komponenya
Kloning
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
14/76
Kultur Jaringan
Adalah isolasi bagia tanaman
seperti jaringan, organ, maupun
embrio lalu dikultur pada medium
buatan yang steril sehinggabagian-bagian tanaman tersebut
mampu bergenarsi dan
berdiferensiasi menjadi tanaman
lengkap
Jaringan tanaman : kalus, sel
protoplas
Organ tanaman : Pucuk, bunga,
daun dan akar
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
15/76
Terminologi
Mikropropagasi
Pemanfaatan kultur jaringan dalam upaya perbanyakan tanaman
dimulai dari pengkulturan bagian tanaman yang sangat kecil
(eksplan)secara aseptik didalam suatu tabung kultur Kultur meristem
Perbanyakan tanaman dengan mengkulturkan potongan tunas
dengan ukuran sangat kecil (satu kubah meristem dengan dua atau
tiga priordia daun dibawahnnya)
Proliferasi pucuk aksilarPerkembangan pucuk pada titik tumbuh lateral atau tunas samping
dimana pertumbuhan tunas terminal tertekan atau hiang sama skali
sementara pertumbuhan tunas samping meningkat.
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
16/76
Induksi Tunas adventif
Inisiasi tunas-tunas adventif baik secara langsung pada permukaan
eksplan yang dikulturkan atau secara tidak lagsung pada
pemukaan eksplan yang terbentuk.
Kalus
Massa Sel yang berdiferensiasi dan tumbuh dari proliferasi sel-sel
yang tidak terorganisasi akibat perlukaan dan pengaturan zat
tumbuh.
Organogenesis
Proses perkembangan pucuk,daun atau akar adventif dari dalam
masa sel kalus
Embriogenesis somatik
Proses Perkembangan embrio lengkap dari sel vegetatif atau sel
somatik dari suatu ekspplan
Terminologi
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
17/76
Perkembangan Jaringan
Meristem merupakan jaringan yang sel-selnya mempunyai
kemampuan untuk membelah
Proses tumbuh dan terjadinya perbedaan dalam morfologi serta
fisiologi sel jaringan disebut diferensiasi
Menurut teori, jaringan yang mengalami diferensiasi akankehilagan sifat meristematiknya secara bertahap dan akhirnyamencapai taraf dewasa (disebut jaringan DEWASA)
Hingga taraf tertentu semua sel yang memiliki inti mampu
tumbuh, membelah, serta berdiferensiasi kembali jika menerimarangsang yang tepat.
10/16/2014 Free Template fromwww.brainybetty.com
17
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
18/76
Keistimewaan Sel Jaringan Tumbuhan
Sel-sel jaringan tumbuhan baik dari akar, batang dan daun
dapat ditumbuhkan menjadi individu yang utuh.
Kemampuan sel/ Jaringan untuk tumbuh menjadi individu baru
disebut TOTIPOTENSI
10/16/2014 Free Template fromwww.brainybetty.com
18
Kemampuan sel/ jaringan tumbuhan untuk tumbuhmenjadi
individu baru(TOTIPOTENSI) inilah yang menjadi dasar untuk
melakukan teknik KULTUR JARINGAN
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
19/76
Tipe Kultur jaringan
Kultur embrio
Eksplan berupa embrio tanaman. Contohnya perbanyakan kelapa.
Kultur jaringan sel atau kultur kalus
Eksplan berupa sel untuk perbanyakan klon melalui pembentukan
organ dan embrio.Contoh pada perbanyakan tanaman anggrek,kacang hijau jagung dan gandum
Kultur meristem
Eksplan berupa jaringan muda. Misalnya pucuk barang atau tunas.
Kultur pollen
Eksplan berupa benang sari Kultur protoplas
Eksplan berupa sel jaringan hidup tanpa dinding sel. Hibridaisasisomatik melalui fusi protoplas.
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
20/76
Manfaat Kultur Jaringan
Perbayakan Tanaman secara Cepat
Dalam waktu singkat dihasilkan individu tanaman dalam jumlah
yang sangat besar
Keseragaman Genetik
Tanaman yang dihasilkan akan identik dengan induknya
Kondisi Aseptik
Meregenerasikan tanaman bebas virus
Seleksi Tanaman
Adanya variasi genetik dari induksi kimiawi terhadap eksplanmemungkinkan untuk melakukan seleksi terhadap genotip genotip
superior
Stok tanaman mikro
Stok Tanaman induk dapat dipelihara secara invitro
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
21/76
Lingkungan terkendali
Produksi tanaman sepanjang tahun
Memperbanyak tanaman yang sulit diperbanyak secara
tradisional Pelestarian plasma nutfah
Substansi pembawa sifat keturunan yang dapat berupa organutuh
atau bagian dari tumbuhan atau hewan serta mikroorganisme
http://id.wikipedia.org/wiki/Organhttp://id.wikipedia.org/wiki/Mikroorganismehttp://id.wikipedia.org/wiki/Mikroorganismehttp://id.wikipedia.org/wiki/Organ -
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
22/76
Prinsip dasar Dalam Kultur jaringan
1. Totipotensi Sel
Embriogenesis somatikekspresi totipotensi sel
Dipengaruhi
Keadaaan lingkungan hidup dari induk
Hormon tumbuh
Genotipe sumber eksplan
Embrio muda?? Batang atau daun??
Umbi lapisan luar atau dalam?? Sel tanaman dapat kehilangan sifat totipotensi selnya. Kapan??
Eleusine coracana165-180 hari dalam kultur
Galur yang mengalami habituasi dan pucuk yang mengalami
virtifikasi
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
23/76
Prinsip dasar Dalam Kultur jaringan
1. Regenerasi Pucuk dan Akar akibat hormon
Adanya pengaruh zat pengatur tumbuh :auksin dan sitokinin
Auksin : pemanjangan pucuk
Sitokinin : pembelahan sel dalam jaringan
Penting dalam mengatur pembelahan, pemanjangan dan
diferensiasi sel, serta pembentukan organ
Selain itu???
Giberelin
Asam absisat : meningkatkan embriogenesis. Selalu???
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
24/76
Prinsip dasar Dalam Kultur jaringan
3. Organogenesis dan embriogenesis
OrganogenesisProses dimana organ berkembang dari
dalam massa sel-sel kalus
EmbriogenesisProses perkembangan sel menjadi embrioid(menyerupai embrio)
Tanaman yang diregenerasikan melalui embriogenesis somatik
memperlihatkan karakteristik morfologi yang normal.
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
25/76
Prinsip dasar Dalam Kultur jaringan
4. Kompetensi dan Determinasi
Kontrol terhadap proses perkembangan jaringan
Kompetensi : Kemampuan jaringan berkembang secara
internal Sel yang memiliki kompetensi akan mengalami determinasi
yg arah perkembangannya irreversible
Menentukan apakah sel dapat mengalami embriogenesis
dan organogenesis dan apakah pembentukan akar, daun
batang dapat diinisiasi
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
26/76
Pengaturan Ruang dan Alat- Alat
Laboratorium
1. Ruang Laboratorium
Ruang preparasi
Pembuatan dan penyimpanan stock
Pembuatan media Sterilisasi medium alat
Sterililsasi eksplan
Pencucian dan pegerinngan alat
Peralatan : otoklaf, ph meter, glassware (cawan petri, botol kultur),
kulkas, stock akuadest, stock alkohol
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
27/76
Pengaturan Ruang dan Alat- Alat
Laboratorium
Ruang transfer
Transfer
Inokulasi atau pengkulturan
(Menanamkan eksplan pada medium cair dan padat )Peralatan : LAF, mikroskop, lampu spiritus, alat inokulasi,
lampu UV, lampu neon
Ruang Kultur
Untuk menempatkan botol-botol eksplan
Minimalisasi kontaminasibubuk formalin
Dilengkapi dengan AC dan orbital shaker untuk kultur cair
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
28/76
Pengaturan Ruang dan Alat- Alat
Laboratorium
Ruang Stock
Menyimpan stok medium
Dilengkapi rak untuk menyimpan medium
Ruang timbang Menimbang eksplan dan bahan kimia
Ruang aklimatisasi
Menempatkan tanaman hasil perbanyak sebelum ke
lapangan
Penyesuaian invivo : kelembapan, intensitas cahaya
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
29/76
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
30/76
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
31/76
Pengaturan Ruang dan Alat- Alat
Laboratorium
pH meter
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
32/76
Pengaturan Ruang dan Alat- Alat
Laboratorium
Otoklaf
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
33/76
Pengaturan Ruang dan
Alat- Alat Laboratorium
LAFC
Vertical???
Atau
Horizontal??
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
34/76
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
35/76
Pengaturan Ruang dan Alat- Alat
Laboratorium
Shaker Hot Plate stirrer
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
36/76
Pengaturan Ruang dan Alat- Alat
Laboratorium
Neraca Analitik
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
37/76
Pengaturan Ruang dan
Alat- Alat Laboratorium
Inkubator
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
38/76
Pengaturan Ruang dan Alat- Alat
Laboratorium
Mikroskop mikrofotografi dan mikroskop diseksi
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
39/76
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
40/76
Regenarasi
Organogenesis? Atau embriogenesis somatik?
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
41/76
Pembentukan embrio somatik dapat digambarkan melalui
beberapa tahap, yaitu: Tahap globular (A), Tahap hati, Tahap
torpedo (B), Tahap kotiledon (C), Tahap kecambah, dan Tahap
planle
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
42/76
Type regenerasi
a) Calus tidak terorganisasi
b) Regenarasi pucuk
based on a unipolar structurewith a shoot apical meristem
c) Regenarasi akar
essentially a unipolar structure
with a root apical meristem
d) Embriogenesis somatik
bipolar structure
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
43/76
Faktor yang mempengaruhi
keberhasilan teknik kultur jaringan
Kultur jaringankultur aseptik terkendali
Karna sel diinduksimengekspresikan totipotensidipengaruhi
faktor????
Eksplan Medium
Zat Pengatur tumbuh
Stimulus fisik (cahaya, suhu dan kelembapan)
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
44/76
Seleksi Bahan Eksplan
tanaman dikotil lebih mudah berproliferasi secara invitro
Jaringan yang aktif tumbuh pada awal pertumbuhanbahan
eksplan yang baik. Jaringan yang tidak aktif ??? Kemampuan regeneratif yg tinggijaringan muda (juvenil).
Kapan?? Dan bagaiman cirinya
Bagian vegetatif?? Atau generatif??
Kondisi fisiologis berpengaruh. Apa saja?
Ukuran eksplan. Besar atau kecil?? kenapa?
Kecilvariasi genetik>> akibat kimera
kimera???
Faktor yang mempengaruhi
keberhasilan teknik kultur jaringan
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
45/76
Sterilisasi bahan eksplan
Kontaminan dari eksplan sulit untuk diatasimetode
sterllisasi harus efektif.
Kontaminannya?? Jamur dan bakteri Samakah penanganan jaringan lunak dan keras??
Zatnya?? Yang harus diperhatikan??
Toksisitas zat terhadap eksplan
Konsentrasi
waktu
Hipoklorit 0.3-0.6%, 15-30
0.5% HgCl2Tapi beracunpilihan terahir
Faktor yang mempengaruhi
keberhasilan teknik kultur jaringan
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
46/76
Etil isopropil alkohol
Etil dan isopropil alkoholbeberapa detikuntuk
permukaan
Eksplan kerasdesinfektan
Faktor yang mempengaruhi
keberhasilan teknik kultur jaringan
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
47/76
Zat pengatur tumbuh
Fitohormon : senyawa dihasilkan tanaman tingkat tinggi secara
endogen untuk meningkatkan pertumbuhan serta perkembangan
sel jaringan dan organ tanaman menuju arah diferensiasi tertentu
Zat pengatur tumbuheksogen
Auksin : merangsang pemanjangan sel pucuk,
pembentukan akar adventif
Sitokinin : Meningkatkan pembelahan sel pada
jaringan,pertumbuhan serta perkembangan
Pada KJTpembelahan sel, proliferasi pucuk,
morfogenesis pucuk
Auksin dan sitokinin dapat bereaksi dengan senyawa kimia
lain???
Faktor yang mempengaruhi
keberhasilan teknik kultur jaringan
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
48/76
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
49/76
Giberelin
Terdapat 60 senyawa kimia. Tidak tahan panas. Sterilisasi???
Meningkatakan perkecambahan biji, pemanjangan ruas,
pemanjangan pucuk yang sangat kecil, dan merangsang
pembentukan embrio kallus
Asam Absisat
Jaranng digunakan. Menghambat pertumbuhan, kemampuan
terkait denga sintesis sitokinin dan antagonis thd giberelin
EtilenBerupa gas, pengatur pertumbuhan, diproduksi tanaman
sebagai respon kelebihan air.
Faktor yang mempengaruhi
keberhasilan teknik kultur jaringan
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
50/76
Karakteristik Nutrisi dan Komposisi
medium dasar
Eksplan dikulturkanperubahantekanan akar krisis
kehilangan supply air , mineralkarbohidrat
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
51/76
Hara tanaman
1. Vitamin
Memiliki fungsi katalitik pada sistim enzim
Vitamin essensial secara umum B1 (thiamin) dan B6 (niasin)
Vitamin C bersama asam organik anti oksidant pencoklatan
medium oleh eksplan
2. Asam amino
Ditambahkan jika perlu nitrogen organik pada konsentrasi 0.5-0.1%.
Terkait dengan biosintesis senyawa tertentu3. Suplemen Organik Kompleks
Yang umum : Pepton, ekstrak ragi, malt
Ekstrak alami yang mentah : (jus jeruk, ekstrakt buah pisang, emulsi
daging ikan pada medium kultur)
Karakteristik Nutrisi dan Komposisi
medium dasar
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
52/76
4. Arang aktif
Mengurangi kontaminan dalam media (absorbsi) dan met. sekunder
Mengatur supplay tumbuh senyawa endogen tertentu
Merangsang embriogenesis
Menghambat pertumbuhan dan morfogenesis
5. Sumber Karbon
Ditambahkan sukrosa atau D- glukosa, etilen glikol atau myoinositol
Sukrosa lebih menunjukkan hasil optimum untuk pertumbuhan namun
labil terhadap panas. Sumber karbon tergantung bagian yg diinduksi6. Osmotikum
Penggunaan agar, asam-asam organik dan non metabolit
mempengaruhi potensi air antara vakuola dan cairan medium
gula lemah (sorbitol, manitol )dan PEG
Karakteristik Nutrisi dan Komposisi
medium dasar
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
53/76
7. Air
Sebaiknya didemineralisasi terlebih dahulu.
Untuk penyimpanan lama tidak dianjurkan dalam wadah pyrex????
Karakteristik Nutrisi dan Komposisi
medium dasar
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
54/76
Medium dalam Kultur Jaringan
1. Matriks medium
eksplan dapat dikultur pada medium setengah padat
kontaminan dapat berasal dari nutrisi yg digunakan
media padat : agar-agar lebih baik sintetikbacto agar
yang tersedia dipasaran untuk keperluan RT ?????
kopolimer pati dapat digunakan sbg pengganti dan
Polimer sukrosamatriks pendukung
Pemadat sintetik menimbulkan vitrifikasi ???????
Karakteristik Nutrisi dan Komposisi
medium dasar
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
55/76
2. Pemilihan komposisi medium dasar
Medium tidak berlaku universal
Medium MS (murashi dan skoog)paling luas penggunaannya
MSmikropropagasi tanaman dikotil
MSmemiliki kandungan garam-garam dan nitrat yang tinggi
Apa saja konten medium MS???
Media Lain
Medium Vacin dan Wen (VW, 1949)
Medium B5 (gamborg et.al, 1968)
Medium WPM (wood plant medium ) (Lloyd dan MC cown 1968)
Medium dengan arang aktif?
Medium dengan pH rendah
Bedanyaa??????
Karakteristik Nutrisi dan Komposisi
medium dasar
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
56/76
3. Keasaman medium
pH pada kisaran 5,6-5,8
Pengaruh terhadap eksplan jika terlalu asam atau terlalu basa???
Mengapa??
Adakah pengaruh pH terhadap pemadatan??
Karakteristik Nutrisi dan Komposisi
medium dasar
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
57/76
1. Suhu Ruang Kultur
Peran suhunsangat kritisvitro >> invivo , MENGAPA??
Suhu Optimum tidak berlaku universaltergantung target
Suhu yang umum digunakan20-27 oC
Biasanya lebih tinggi 3-4 derajat dari suhu invivo kenapa??
suhu wadah = suhu ruang???
Faktor Lingkungan yang berpengaruh
terhadap perkembangan kultur
Pada arabidopsis pucuk dan akar
kalus >>>4oC selama 3-6 harimedium regenerasi 25oC
Contoh fase yang teramati selama
kultur
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
58/76
2. Cahaya
Cahaya fotomorfogenesis bukan fotosintesis
Fotosintesis secara invitro
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
59/76
Pengaruh fotoperiodisitas
Pada umumnya 14-16 jam perhari, namun tidak berlakuk universal
Pada anggur invitro 10 jam perhari
4. Karbondioksida Konsentrasi CO2 didalam wadah kultur mempengaruhi pertumbuhan
sejumlah spesies tanaman
CO2terkait dengan fotosintesis
5. Oksigen
Kondisi lingkungan dengan oksign >>> pertumbuhan dan
penyerapan oksigenn kalus Solanum tuberosum
Selama fase diferensiasi sel produksi embriosomatik
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
60/76
5. Etilen
Pengaruh etilan juga tergantung dari spesies tanaman
Kadar etilen berlebihanmenghambat morfogenesis
Mengurangi dengan mengeluarkan komponen dari wadah dengan
KMNO4atau dengan menambahkan penghambat etilen AgNO3
6. Kelembapan
Berperan penting pada kultur invitro
Kelembapan relatif diruangan 70% didalam wadah 90%
Kadar kelembapan yang terlalu tinggi menyebabkan terbentuknyadaun-daun pucuk yang mengalami vitrivikasi
Faktor Lingkungan yang berpengaruh
terhadap perkembangan kultur
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
61/76
1. Habituasi sitokinin
Terjadi karena konsentrasi sitokinin yang tinggi
Proliferasi terus berlanjut terjadi penghambatan pada pembentukan
akar dan hambatan pada proses pembungaan serta penundaanpertumbuhan generatif
2. Vitrifkasi
Ketidaknormalan morfologi serta fungsi fisiologi dari organ atau
jaringan tertentu (hiperhidrisitas)
Atau bisa juga berarti transisi keadaan cair ke keadaan padat sepertiterbentuknya es ketika cryopreservasi
timbulnya gejala tembus cahaya pada pucuk sulit berproliferasi
mati saat berproliferasi
Fenomena Umum pada Kultur jaringan
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
62/76
Habituasi Sitokinin
A. Representative habituated callus
culture maintained in the presence
of cytokinin (benzyl adenine) for 3
weeks.B. Representative habituated callus
culture maintained in the absence
of cytokinin for 3 weeks.
C. Representative nonhabituated
callus culture maintained in the
presence of cytokinin for 6 weeks.D. Representative nonhabituated
callus culture maintained in the
absence of cytokinin for 6 weeks.
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
63/76
Vitrifikasi
Dipengarhi oleh : sitokinin terlalu tinggi, potensial matriks rendah,
meningkatnya konsentrasi etilen,kadar amonium, dan kandungan uap
air
Kelembapanbiosintesis za tlilin terhambatkandungan zat lilin
rendah.
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
64/76
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
65/76
3. Nekrosis
Matinya jaringan pada tepi dan pucuk
Diawali dengan nekrosis berwarna coklat pada pucuk sampai ahirnya
merata pada seluruh meristem yang berwarna hitam
Diakibatkan karena defisiensi boron dan kalsium Cara mengatasimenuang medium cair diatas agar setelah
subkultur
Atau membalik tabung kultur yg berisi kalsium glukonat/ 7 hari
Fenomena Umum pada Kultur jaringan
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
66/76
(a) control explants
(b) shoot regeneration
(c) shoot induction
(d) necrosis occurred
(e-f) complete necrosis
Necrosis
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
67/76
3. Fasiasi
Menyatunya dua planlet atau lebih pada embrio somatik karena
berdekatan
Disebabkan tingginya kerapatan populasi embrio somatik
Penanganan dengan subkultur atau shaking kultur pada media cairuntuk memisahkan embrio
4. Keragaman somaklon
Merupakan keragaman genetik dan situgenetik yang diinduksi oleh
kultur jaringan
Disebabkan adannya interaksi atara faktor genetik, fisiologis dan
patologis eksplan dengan lingkungan kultur selam proses subkultur
yang berkelanjutan
Kelebihan dan kekurangan?????
Fenomena Umum pada Kultur jaringan
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
68/76
Keragaman
somaklon
A. Callus mass,
B. Shoot primordia
C. Formation of plantlet
D. Development of
plantlet in rooting
media
E. Hardening of
plantlets in SandJars
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
69/76
Aplikasi Kultur jaringanpada Arabidopsis thal iana
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
70/76
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
71/76
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
72/76
Regenarasi Arabidobsis
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
73/76
Micropropagation of Alpinia calcarata on
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
74/76
p p g p
MS medium (a) Axillary shoot bud
initiation on explants grown on medium
with 2.0 mg/l BAP after 14 - 16 days; (b)
Vigorous growth of axillary shoot bud on
medium with 1.0 mg/l TDZ; (c) Fully
grown axillary shoots initiated on
explants in the optimal medium with 2.0
mg/l BAP and 0.2 mg/l IAA after 8
weeks; (d) Response of aseptic explants
with multiple shoot initials,meristemoids, solitary axillary shoots in
medium with 2.0 mg/l BAP and 0.2
mg/IAA; (e) Prolific multiple shoot
initials; (f) Shoot initiation from
meristemoids during 3rd subculture in
medium with 1.0 mg/l BAP; (g) Rootinitiation on shoots on half-strength liquid
medium with 0.2 mg/l IAA; (h) Shoot
multiplication in liquid medium with 1.0
mg/l BAP; (i) Acclimatized 4 week old
plants in mist chamber; (j) 8-Weeks old
plants in shade house
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
75/76
-
7/23/2019 Plant Tissue Culture.pdf
76/76
Tugas Kelompok
Aplikasi kultur jaringan
Tanaman apa? Bagaimana prosesnya
Jenis jenis Kultur jaringan tanamanPerbedaan menyangkut proses, kelebihan
dan kekurangan
Jenis- jenis media yang digunakan dancara pembuatan media, tujuan masing2
dari media