LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA

PERCOBAAN II

KARBOHIDRAT I

NAMA : ILHAM ARIPANDI

NIM : 013021211012

DOSEN : LELA LAILATUL M.Si

ASISTEN : CITRA IBDAU RAHMAH

TANGGAL : 23 APRIL 2015

PROGRAM STUDI KIMIA

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SUKABUMI

2015

1. TUJUAN

Untuk mengetahui beberpa sifat-sifat karbohidrat dengan berbagai uji-uji

yang menyertainya.

2. DASAR TEORI

Secara biokimia, karbohidrat adalah polihidroksil-aldehid atau

polihidroksil-keton, atau senyawa yang menghasilkan senyawa-senyawa ini bila

dihidrolisis. Karbohidrat mengandung gugus fungsi karbonil (sebagai aldehid atau

keton) dan banyak gugus hidroksil (Fessenden 1986). Karbohidrat dapat

digolongkan berdasarkan jumlah monomer penyusunnya. Ada 3 jenis karbohidrat

berdasarkan penggolongan ini, yaitu, monosakarida, disakarida (Oligosakarida),

dan polisakarida. Baik pada hewan maupun manusia, energi disimpan sebagai

glikogen dan pada tanaman sebagai pati. Kedua jenis karbohidrat tersebut

merupakan polisakarida (Sumarlin 2006).

a. Monosakarida

Monosakarida merupakan senyawa karbohidrat yang paling sederhana yang

tidak dapat dihidrolisis lagi. Umumnya senyawa ini adalah aldehid atau keton yang

mempunyai 2 atau lebih gugus hidroksil. Monosakarida yang paling kecil n = 3

adalah gliseraldehid dan dihidroksiaseton.

b. Disakarida (Oligosakarida)

Disakarida merupakan karbohidrat yang terbentuk dari 2 sampai 10

monosakarida. Yang termasuk kelompok ini adalah disakarida, trisakarida, Dan

seterusnya. Disakarida terdiri dari 2 monosakarida yang terikat dengan O-

Glikosidik. 3 senyawa disakarida utama yang penting dan melimpah di alam yaitu

sukrosa, laktosa dan maltosa. Ketiga senyawa ini memiliki rumus molekul yang

sama (C12H22O11) tetapi struktur molekul berbeda.

c. Polisakarida

Polisakarida tersusun oleh monosakarida yang tergabung dengan ikatan

glukosida. Pati merupakan salah satu contoh polisakarida yang tersusun oleh

glukosa. Dipandang dari strukturnya, butir butir pati terdiri atas 2 bagian yaitu:

Bagian amilosa yang merupakan rantai lurus polimer glukosa, dan bagian

amilopektin yang terdiri atas rantai bercabang polimer glukosa jika dihidrolisis

sempurna akan dihasilkan molekul molekul glukosa.

Polisakarida yang merupakan karbohidrat kompleks mempunyai sifat yang

sukar larut dalam air dingin. Pemanasan suspensi pati secara bertahap dapat

membentuk larutan koloid dan akhirnya menjadi pasta. Berdasarkan ruang lingkup

yang luas dari polisakarida tersebut maka pengetahuan dasar mengenai sifat fisik

dan kimia karbohidrat sangat diperlukan.

Identifikasi monosakarida dilakukan berdasarkan sifat kemampuannya

mereduksi, yang dilakukan menggunakan uji Benedict, dimana larutan tembaga

yang basa bila direduksi oleh karbohidrat yang memiliki gugus aldehid atau keton

bebas akan membentuk kupri oksida. Pembentukan ini ditandai dengan

pembentukan endapan merah bata. Uji Molicsch dipergunakan untuk mengenal

karbohidrat yang mudah mengalami dehidrasi membentuk furfural maupun

dihidrosifurfural yang lebih lanjut berkondensasi dengan resorsinol, orsinol

ataupun a-naftol. Pereaksi molish terdiri dari larutan 5 % -naftol dalam alkohol 95

%. Reagen Seliwanof dipergunakan untuk mengenal adanya karbohidrat yang

mengandung gugus fungsional aldehid seperti fruktosa dan sukrosa. Pereaksi

barfoed digunakan secara umum untuk mengenal adanya monosakarida. Dan uji

iodin secara khusus dipergunakan untuk mengidentifikasi adanya polisakarida

amilum.

OH

O

CH O2

OH

OH

OH

H

H

H

H

+ 2CuO

O

CH O2

OH

OH

OH

H

H

H

H

OH

O

CH O2

OH

OH

OH

H

H

H

H

O

CH O2

OH

OH

OH

H

H

H

H

Cu O2 Merah bata+

3. HASIL DAN PEMBAHASAN

3.1 Uji Benedict

Tujuan dari uji Benedict adalah untuk mengidentifikasi gula pereduksi.

Gugus pereduksi ini berupa aldehid dan keton (Murray dkk 2009). Dalam uji ini,

suatu gula reduksi dapat dibuktikan dengan terbentuknya endapan yang berwarna

merah bata. Akan tetapi tidak selamanya warna larutan atau endapan yang terbentuk

berwarna merah bata, hal ini bergantung pada konsentrasi atau kadar gula reduksi

yang dikandung oleh tiap-tiap larutan uji.

Tabel 1. Hasil uji Benedict

Jenis karbohidrat Hasil pengamatan

Glukosa 0,1 M Hijau,endapan merah bata

Glukosa 0,5 M Hijau,endapan merah bata

Glukosa 0,02 M Hijau,endapan merah bata

Glukosa 0,01 M Biru (tidak ada perubahan)

Glukosa 0,0001 M Biru (tidak ada perubahan)

Fruktosa Hijau

Sukrosa Biru (tidak ada perubahan)

Pati 1% Biru (tidak ada perubahan)

Larutan tembaga alkalis akan direduksi oleh gula yang mempunyai gugus

aldehid atau keton bebas dengan membentuk kuprooksida yang berwarna. Gula

pereduksi bereaksi dengan pereaksi menghasilkan endapan merah bata (Cu2O).

Pada gula pereduksi terdapat gugus aldehid dan OH laktol. OH laktol ini merupakan

OH yang terikat pada atom C pertama yang menentukan karohidrat sebagai gula

pereduksi atau bukan.

Hasil positif ditunjukkan oleh glukosa yang berkonsentrasi besar juga oleh

fruktosa dan sukrosa. Meskipun fruktosa bukanlah gula pereduksi, namun karena

memiliki gugus alpha hidroksi keton, maka fruktosa akan berubah menjadi glukosa

dan mannosa dalam suasana basa dan memberikan hasil positif dengan pereaksi

benedict. Berikut reaksinya :

HH

H

O

O

CH OH2

H H

H

H

H

OH

OH

OH

HOCH2O

CH OH2HO

HO

Pati, sukrosa, glukosa 0,01 dan glukosa 0,0001 M menunjukkan hasil

negatif. Hal ini disebabkan karena pati merupakan polisakarida dan tidak

mempunyai gugus aldehid ataupun keton bebas. Pada sukrosa, walaupun tersusun

oleh glukosa dan fruktosa, namun atom karbon anomerik keduanya saling terikat,

sehingga pada setiap unit monosakarida tidak lagi terdapat gugus aldehida atau

keton yang dapat bermutarotasi menjadi rantai terbuka, hal ini menyebabkan

sukrosa tak dapat mereduksi pereaksi benedict (Fessenden 1986).

Stuktur sukrosa

Gambar 1. Hasil uji benedict

3.2 Uji Molish

Uji molish adalah reaksi yang paling umum untuk mengidentifikasi adanya

karbohidrat. Pada percobaan ini asam sulfat pekat menghidrolisis ikatan glikosidik

(ikatan yang menghubungkan monosakarida satu dengan monosakarida yang lain)

menghasilkan monosakarida yang selanjutnya didehidrasi menjadi fultural dan

turunannya. Hasil pengamatan ditunjukan pada table 2.

Tabel 2. Hasil uji Molish

Jenis karbohidrat Hasil pengamatan

Glukosa Terbentuk cincin ungu (+)

Fruktosa Terbentuk cincin ungu (+)

Sukrosa Terbentuk cincin ungu (+)

Pati 1 % Terbentuk cincin ungu (+)

Keempat sampel yang telah ditetesi dengan pereaksi molish selanjutnya

dihidrolisis dengan asam sulfat pekat (H2SO4) mengalami pemutusan ikatan

glikosidik dari rantai karbohidrat polisakarida menjadi disakarida dan

monosakarida. Dimana berdasarkan hasil yang didapatkan menunjukkan bahwa

semua larutan yang diuji (glukosa, fruktosa, sukrosa, dan pati) adalah karbohidrat.

Hal ini terlihat jelas dengan adanya perubahan warna pada keempat tabung reaksi

yang berisikan larutan karbohidrat tersebut.

Gambar 2. Hasil uji molish

Diperkirakan, asam sulfat pekat bertindak sebagai agen dehidrasi yang

bertindak pada gula untuk membentuk furfural dan turunannya yang kemudian

dikombinasikan dengan alfa-naftol untuk membentuk produk berwarna.

Reaksi :

OO

CH OH2

H H

H

H

H

OH

OH

OH OH

O

CH OH2

H H

H

H

H

OH

OH

+ CuSO NaOH4

H OH

O

CH OH2

H H H

OH OHH

+ 2Na SO + Cu O2 4 2

OH

Warna yang sebenarnya dalam uji molisch terhadap glukosa, larutan

fruktosa dan larutan sukrosa, yang sebenarnya adalah warna ungu,namun pada

percobaan kali ini menghasilkan warna merah. Ini dikarenakan asam pekat yang

digunakan dalam percobaaan kali ini kemungkinan memiliki kadar kepekatan yang

rendah sehingga tidak terjadi reaksi kondensasi antara -naftol dan furfural

(furfural terbentuk akibat dehidrasi glukosa dalam asetat yang panas).

3.3 Uji Trommer

Reaksi Trommer digunakan untuk analisis kuantitatif disakarida. Dalam

reaksi trommer, terjadi hidrolisis oleh adanya basa yaitu NaOH yang menghasilkan

monosakarida.

Table 3. Hasil uji trommer

Perlakuan Pengamatan

2 ml glukosa + 2 ml NaOH + 1 ml CuSO4 Jingga

2 ml glukosa + 2 ml NaOH + 2 ml CuSO4 Dua fase, atas bening dan bawah

toska

2 ml glukosa + 2 ml NaOH + 3 ml CuSO4 Dua fase, atas bening dan bawah

biru muda

Hasil positif dari uji trommer ini ditandai dengan adanya perubahan warna

menjadi jingga. Hal ini dibuktikan pada tabung pertama dengan penggunaan

CuSO4 sebanyak 1 ml. Akan tetapi pada penggunaan CuSO4 2 mL dan 3 mL larutan

tidak mengalami perubahan menjadi jingga. Hal ini dikarenakan banyaknya

pereaksi yang tidak sebanding dengan sampel yang diuji. Sehingga perubahan

warna tidak terlihat.

Gambar 3. Hasil uji trommer

4. KESIMPULAN

Karbohidrat dapat diidentifikasi berdasarkan sifat-sifatnya menurut

pembagian jenisnya, yaitu monosakarida, oligosakarida dan polisakarida.

Karbohidrat secara umum dapat di identifikasi dengan cara uji molish,

dimana hasil yang positif dibuktikan dengan terbentuknya cincin berwarna

ungu kemerahan.

Uji benedict memberikan hasil positif pada monosakarida dan beberapa

disakarida dengan adanya perubahan membentuk endapan merah bata.

Akan tetapi sukrosa bukan merupakan gula pereduksi sehingga hasil negatif

didapatkan.

Uji trommer memberikan hasil positif dengan perubahan warna menjadi

jingga pada karbohidrat.

DAFTAR PUSTAKA

Fessenden R, Fessenden J. 1986. Kimia Organik. Edisi ketiga. Erlangga : Jakarta.

Murray, R. K. dkk. 2009. Biokimia Harper. Jakarta : Penerbit Buku Kedokteran

EGC

Sumarlin L. 2006. Penuntun Praktikum Biokimia. Program Studi Kimia Universitas

Muhammadiyah Sukabumi : Sukabumi.

PERTANYAAN

1. Mengapa uji Molisch disebut uji yang bukan spesifik untuk karbohidrat?

2. Apa perbedaan uji Barfoed dengan uji Benedict?

3. Bagaimanakah sifat kelarutan pati dalam air?

4. Berdasarkan percobaan, bentuk ikatan apakah yang terjadi antara pati

dengan iod?

5. Gambarkan rumus bangun dari struktur pati!

JAWAB

1. Uji Molisch disebut uji yang bukan spesifik karena prinsip uji ini adalah

pembentukan furfural atau turunan-turunan dari karbohidrat. Sehingga

karbohidrat tidak secara langsung terdeteksi melainkan didehidrasi terlebih

dahulu menjadi monosakarida. Tetapi hasil reaksi yang negatif

menunjukkan bahwa larutan yang diperiksa tidak mengandung karbohidrat.

2. Perbedaan uji Barfoed dan uji Benedict :

- Pada uji Benedict, teori yang mendasarinya adalah gula yang

mengandung gugus aldehid atau keton bebas akan mereduksi ion Cu2+

dalam suasana alkalis (basa), menjadi Cu+ yang mengendap sebagai

Cu2O (kupri oksida) berwarna merah bata.

- Pada uji Barfoed, ion Cu2+ dalam suasana asam akan direduksi lebih

cepat oleh gula reduksi monosakarida dari pada disakarida dan

menghasilkan Cu2O (kupri oksida) berwarna merah bata.

3. Pati kurang larut dalam air dingin. Pemanasan suspensi dapat melarutkan

pati dan bila dipanaskan secara bertahap dapat membentuk larutan koloid

dan akhirnya menjadi pasta.

4. Dalam larutan pati terdapat unit-unit glukosa yang membentuk rantai heliks

karena adanya ikatan dengan konfigurasi pada tiap unit glukosanya. Bentuk

ini menyebabkan pati dapat membentuk kompleks dengan molekul iod yang

dapat masuk ke dalam spiralnya.

5.

H O

OH

H

OHH

OH

CH2OH

HO H

H

OHH

OH

CH2OH

H

O

HH H O

OH

OHH

OH

CH2OH

HH H

O

H

OHH

OH

CH2OH

H

OH

HH O

OH

OHH

OH

CH2OH

H

O

H

1

6

5

4

3

1

2

amylose