praktikum labfor

LABORATORIUM KEDOKTERAN LABORATORIUM KEDOKTERAN FORENSIK SEDERHANAFORENSIK SEDERHANA

Ilmu Kedokteran Forensik & Medikolegal Ilmu Kedokteran Forensik & Medikolegal

FKUIFKUI

Ilmu Kedokteran ForensikIlmu Kedokteran Forensik

Bidang Kerja :

• Patologi Forensik

• Forensik Klinik

• Forensik Laboratoris

Forensik LaboratorisForensik LaboratorisKasus Kejahatan dengan kekerasan Fisik

TKP

Bukti Biologis : Darah, Cairan Mani,

Sperma, Saliva, Rambut

Pemeriksaan Laboratorium Forensik

Pelaku

Korban

Objek

Pengungkapan Secara Ilmiah

Pemeriksaan Laboratorium Pemeriksaan Laboratorium Kedokteran ForensikKedokteran Forensik

• Darah• Cairan mani dan Spermatozoa• Golongan darah (darah, cairan mani, rambut,

kuku, dan kerokan kuku)• Gonokok • Toksikologi• DNA• Dan Lain-lain

PEMERIKSAAN DARAHPEMERIKSAAN DARAH

Tujuan pemeriksaan:• IDENTIFIKASI darah pelaku/korban

Darah kering/bercak darah:• Darah/bukan• Darah manusia/binatang• Golongan Darah• Darah menstruasi

Alur Pemeriksaan DarahAlur Pemeriksaan Darah

Bercak ?Penyaring

+ -

Teichmann/Takayama/Wagenaar

Bukan darah

Pasti darah

Benzidin/Phenolpthalin

Penentuan

Precipitat testManusia

- +

- + Gol. Darah

PEMERIKSAAN DARAHPEMERIKSAAN DARAH

1. Mikroskopis

2. Kimiawi :

a. Penyaring

b. Penentuan

3. Spektroskopis

4. Serologik

PEMERIKSAAN MIKROSKOPISPEMERIKSAAN MIKROSKOPISTujuan : - Morfologi SDM- menentukan darah berasal dari kelas

mamalia

-”drum stick” pada sel lekosit berinti banyak

- Sel pseudodecidua

Bahan :

Darah masih basah atau baru mengering

PEMERIKSAAN MIKROSKOPISPEMERIKSAAN MIKROSKOPIS

Cara Kerja :• Letakkan pada kaca obyek, tambahkan 1 tetes

garam faal, tutup dengan kaca penutup• Buat sediaan apus, dengan pewarnaan

Giemsa atau Wright

Hasil :

• Mamalia SDM, cakram & tidak berinti

• kelas lain oval / elips & berinti

• Onta : oval / elips & tidak berinti

Pemeriksaan Kimiawi DarahPemeriksaan Kimiawi Darah

• PEMERIKSAAN PENYARING :PEMERIKSAAN PENYARING :

– BenzidineBenzidine

– PhenolphthalinPhenolphthalin

• PEMERIKSAAN PENENTUAN :PEMERIKSAAN PENENTUAN :

– Reaksi TakayamaReaksi Takayama

– Reaksi TeichmannReaksi Teichmann

– Reaksi WagenaarReaksi Wagenaar

PEMERIKSAAN PENYARINGPEMERIKSAAN PENYARING

BENZIDINE :BENZIDINE :

• reagen : lar. Jenuh kristal benzidine dalam reagen : lar. Jenuh kristal benzidine dalam

as.acetat glacialas.acetat glacial

(+) biru gelap

PHENOPHTHALIN :PHENOPHTHALIN :

• reagen : phenophthalin 2 gr + 100 ml NaOH 20%, reagen : phenophthalin 2 gr + 100 ml NaOH 20%,

dipanaskan dg butiran Zndipanaskan dg butiran Zn

(+) merah muda(+) merah muda

Reaksi Benzidine/ PhenolphtalinReaksi Benzidine/ PhenolphtalinPrinsip :

Darah + H2O2 H2O + On

On + Reagen perubahan warna

Prosedur :1. Gosok kertas saring pada darah/bercak yang dicurigai.

2. Tambahkan 1 tetes H2O2 20% dan 1 tetes reagen pada kertas tersebut.

3. Munculnya warna merah menunjukkan hasil positif

Interpretasi :Hasil (+) mungkin darahHasil (-) PASTI BUKAN DARAH

PemeriksaanPemeriksaan PenentuanPenentuan

Tujuan :

Memastikan darah atau bukan

Bahan Pemeriksaan :

Darah kering pada senjata, lantai, kursi, dll/bercak

pada pakaian

Pemeriksaan :• Reaksi Takayama • Reaksi Teichmann• Reaksi Wagenaar

Reaksi TakayamaReaksi Takayama

Prinsip :

Pembentukan kristal Pyridine Hemochromogen

Hasil positif tampak :– kristal Pyridine Hemochromogen – berwarna merah dadu/jingga – berbentuk seperti bulu-bulu.

Interpretasi :

Hasil (+) PASTI DARAH

Reaksi TakayamaReaksi Takayama

Reaksi TeichmannReaksi Teichmann

Prinsip :Pembentukan pigmen/kristal Hematin HCl

Hasil positif tampak :• kristal hemin hidroklorida • berbentuk batang-batang warna coklat.

Interpretasi :Hasil Positif PASTI DARAH

Reaksi WagenaarReaksi Wagenaar

Prinsip :Prinsip :

Pembentukan kristal Aceton-heminPembentukan kristal Aceton-hemin

Hasil positif tampak :Hasil positif tampak :

• kristal aceton-hemin, kristal aceton-hemin,

• berbentuk batang warna coklatberbentuk batang warna coklat

PEMERIKSAAN SEROLOGIKPEMERIKSAAN SEROLOGIK

Tujuan :

• Menentukan species darah

• Golongan Darah

Prinsip Pemeriksaan :

• Reaksi antara antigenantigen (bercak darah) dengan antibodiantibodi (antiserum)

Penentuan species darahPenentuan species darah

• Reaksi Cincin (Reaksi precipitin dalam tabung)

• Reaksi precipitin dalam agar

• Immuno-electrophoresis dalam agar

Penentuan Golongan DarahPenentuan Golongan DarahDarah Kering :

• SDM utuh• SDM rusak : - Aglutinin +

Antigen +- Aglutinin - Antigen +- Aglutinin - Antigen -

• Paling lama bertahan sistem Golongan ABO

PEMERIKSAAN CAIRAN MANI & PEMERIKSAAN CAIRAN MANI & SPERMASPERMA

Tujuan :

• Menentukan sperma dalam vagina untuk membuktikan adanya persetubuhan

Bahan :

• Forniks posterior vagina

• Bercak pada pakaian

ALUR PEMERIKSAAN CAIRAN MANI DAN SPERMAALUR PEMERIKSAAN CAIRAN MANI DAN SPERMA

Sampel

Bilas & Swab Vagina

Bercak

Sperma Mani Mani Sperma

Malachite green

BerberioFlorence

Fosfatase Asam BaecchiLangsung

Pemeriksaan SpermatozoaPemeriksaan Spermatozoa

- Pemeriksaan Langsung

-Pewarnaan Malachite Green

- Pewarnaan Baecchi

Pemeriksaan LangsungPemeriksaan Langsung

Cara Pemeriksaan :• Satu tetes lendir vagina diletakkan pada kaca

objek, lihat dibawah mikroskop• Perhatikan adanya sperma/pergerakkan

Bahan dari swab/bilas vaginal • Buat ekstrak dalam tabung reaksi + garam

fisiologis• Sentrifuge 1000 rpm selama 2 menit• Endapan diperiksa dibawah mikroskop

Pemeriksaan LangsungPemeriksaan Langsung

Malachite greenMalachite green Reagen :Larutan Malachite green 1%Larutan Eosin Yellowish 1%

Cara kerja :

• Bahan diletakkan pada kaca objek, biarkan mengering di udara, Bahan diletakkan pada kaca objek, biarkan mengering di udara,

atau fiksasi dengan api kecilatau fiksasi dengan api kecil

• Pulas dengan lar.Pulas dengan lar.malachite green 1%malachite green 1% selama 10 – 15 menit, lalu selama 10 – 15 menit, lalu

cuci dengan aircuci dengan air

• Pulas lagi dengan larPulas lagi dengan lar.eosin yellowish 1%.eosin yellowish 1% selama 1 detik, keringkan selama 1 detik, keringkan

di udaradi udara

• Lihat dengan mikroskop

Malachite greenMalachite green

Malachite greenMalachite green

Hasil :

• Kepala sperma tampak berwarna merah,

• leher warna merah muda dan

• ekornya berwarna hijau

BAECCHIBAECCHIReagen Baecchi• Asam Fuschin 1 % 1 tetes• Biru Methylen 1% 1 tetes• Asam klorida 1 % 40 tetes

Cara Kerja :• Gunting pakaian yang mengandung bercak sebesar 5 mm X

5 mm, lalu masukkan ke dalam reagen selama 3-5 menit, masukkan ke dalam HCl 1% sebentar

• Dehidrasi berturut dalam alkohol 70%, 85% & absolut, jernihkan dengan Xylol sebanyak 2 kali

• Ambil 1-2 helai benang dan uraikan menjadi serabut halus, lihat dengan mikroskop

BAECCHIBAECCHI

BAECCHIBAECCHI

Hasil :

• Kepala spermatozoa berwarna merah,

• ekor merah muda,

• menempel pada serabut benang

PEMERIKSAAN CAIRAN MANI PEMERIKSAAN CAIRAN MANI

Sampel :

1. Forniks posterior vagina

Fosfatase asam, PAN, Berberio, Florence

2. Bercak pada pakaian

Pemeriksaan Taktil, Visual, Sinar UV,

Fosfatase asam, PAN, Berberio, Florence

PEMERIKSAAN CAIRAN MANIPEMERIKSAAN CAIRAN MANI

Pemeriksaan Bercak Cairan Mani pada pakaianPemeriksaan Bercak Cairan Mani pada pakaian• Pemeriksaan TaktilPemeriksaan Taktil Bercak pada pakaian teraba kaku seperti kanji

• Pemeriksaan VisualPemeriksaan Visual Bercak segar permukaannya mengkilat dan

transulen, lama kelamaan akan berwarna kuning sampai coklat

• Pemeriksaan Sinar UVPemeriksaan Sinar UV Bercak akan berfluoresensi putih

Reaksi Fosfatase AsamReaksi Fosfatase Asam

Dasar Reaksi :

• Fosfatase asam menghidrolisis Na-Alfa-naftil fosfat dibebaskan Alfa-naftol

• Alfa-naftol + Brentamin fast blue menghasikan zat warna azo berwarna merah ungu


Cara kerja :

• Kertas saring dibasahkan dengan air, letakkan pada bercak/kapas lidi dan tekan dengan tangan

• Setelah 5-10 menit teteskan reagen FA

• (+) muncul warna ungu, < 30 detik

Uji PAN Uji PAN Cara kerja :• Bercak pada pakaian diekstraksi dengan cara

menempelkan kertas saring Whatman no.2 yang dibasahi dengan aquadest, selama 10 menit

• Biarkan kertas mengering pada suhu ruangan

• Teteskan reagen PAN pada bercak

• Catat warna yang terbentuk

• Hasil (+) warna merah jambu

Uji BerberioUji Berberio

Dasar Reaksi :

• Spermin dalam cairan mani dengan asam pikrat jenuh menghasilkan kristal spermin pikrat.

• Reagen : larutan asam pikrat jenuh


Cara Kerja :• Ekstraksi bercak dengan aquadest, taruh taruh

di kaca obyek, biarkan mengering di di kaca obyek, biarkan mengering di udara, lalu tutup dengan kaca penutupudara, lalu tutup dengan kaca penutup

• 1 tetes Reagen dialirkan di bawah kaca 1 tetes Reagen dialirkan di bawah kaca penutup pada satu sisipenutup pada satu sisi

• Lihat di bawah mikroskopLihat di bawah mikroskop


Hasil :• Kristal spermin pikrat berwarna

kekuningan berbentuk jarum dengan ujung tumpul

• Kadang-kadang tedapat garis refraksi terletak longitudinal

• Kristal kadang berbentuk ovoid

Reaksi FlorenceReaksi FlorenceDasar reaksi :• adanya kholin dalam cairan mani, merupakan

produk degradasi dari lechitin, dengan larutan lugol, kholin bereaksi dengan cholin membentuk kristal kholin peryodida

Reagen :Larutan Lugol dibuat dari :• Kalium Iodida 1,5 gram• Yodium 2,5 gram• Aquadest 30 ml

Reaksi FlorenceReaksi Florence

Cara Kerja :• Ekstraksi bercak dengan aquadest, taruh taruh

di kaca obyek, biarkan mengering di di kaca obyek, biarkan mengering di udara, lalu tutup dengan kaca penutupudara, lalu tutup dengan kaca penutup

• 1 tetes Reagen dialirkan di bawah kaca 1 tetes Reagen dialirkan di bawah kaca penutup pada satu sisipenutup pada satu sisi

• Lihat di bawah mikroskopLihat di bawah mikroskop

Uji FlorenceUji Florence

Reaksi FlorenceReaksi Florence

Hasil :

• Tampak kristal kholin peryodida

• berwarna coklat berbentuk jarum dengan ujung sering terbelah

Pemeriksaan GonokokPemeriksaan Gonokok Tujuan :

Menentukan adanya bakteri Gonokok

Alat/bahan :1. Larutan Methylen Blue 1%2. Larutan Eosin/Acid Fuchin 1% 3. Alkohol 70%

Pemeriksaan GonokokPemeriksaan Gonokok

Hasil pemeriksaan :

• Tampak bakteri gonokok, bentuk kokus berpasangan seperti biji kopi

TOKSIKOLOGITOKSIKOLOGI

• Alkohol darah/urine• Narkoba urine• Karbonmonoksida

Pemeriksaan Alkohol darahPemeriksaan Alkohol darah

Alat/bahan:Mangkuk Conway

Pemeriksaan Alkohol darahPemeriksaan Alkohol darahCara kerja :

• Letakkan 2 ml reagen anti kedalam ruang tengah

mangkuk conway

• Sebarkan 1 ml darah/urine kedalam ruang sebelah luar

• 1 ml Kalium karbonat jenuh dalam ruang sebelah luar

pada sisi yang berlawanan

• Tutup sel mikrodifusi, goyangkan

• Biarkan berdifusi selama 1 jam pada suhu ruang

• Amati perubahan warna pada reagen anti


Hasil Pemeriksaan :

• Warna kuning kenari berarti hasil (-)

• Perubahan warna kuning kehijauan menunjukkan kadar etanol sekitar 80%,

• sedangkan warna hijau kekuningan sekitar 300%

Pemeriksaan Narkoba UrinePemeriksaan Narkoba Urine

Alat/bahan :• Urine sample• Test Kit urine

Pemeriksaan Narkoba UrinePemeriksaan Narkoba Urine

Cara Kerja/Hasil :

Pemeriksaan COPemeriksaan CO

• Uji Dilusi Alkali/pengenceran alkali

• Uji Formalin (Eachlolz-Liebmann)

• Uji Paladium Clorida

Uji Dilusi AlkaliUji Dilusi AlkaliDasar reaksi :Dasar reaksi :COHb resisten terhadap alkali sehingga pembentukan hematin alkali lebih lambat

Alat/Bahan :Alat/Bahan :• 2 tabung reaksi• Aquadest• Larutan NaOH 10%• Darah sampel dan darah kontrol

Uji Dilusi AlkaliUji Dilusi Alkali

Cara Kerja :• Setiap tabung diisi 5 ml aquadest

• Tambahkan 5 tetes darah sampel pada tabung I, dan 5 tetes darah kontrol pada tabung II

• Masing-masing tabung teteskan NaOH 10% hingga tabung II berubah warna menjadi coklat (warna hematin-alkali)

Uji Dilusi AlkaliUji Dilusi AlkaliHasil :• Bila tabung berisi darah sampel tidak

berubah warna sedangkan tabung kontrol telah berubah warna menjadi coklat (+)

• (+) Co-Hb > 30% saturasi

• Bila tabung berisi darah sampel berubah warna sesuai tabung kontrol telah berubah warna menjadi coklat (-)

Uji Formalin (Uji Formalin (Eachlolz-LiebmannEachlolz-Liebmann))

Dasar reaksi :Dasar reaksi :• Terbentuknya Terbentuknya koagulat berwarna merah koagulat berwarna merah

terangterang pada darah dengan COHb >30% pada darah dengan COHb >30% saturasisaturasi

Alat/Bahan :Alat/Bahan :• 2 tabung reaksi• Larutan Formalin 40%• Darah sampel dan darah kontrol

Uji Formalin (Uji Formalin (Eachlolz-LiebmannEachlolz-Liebmann))Cara Kerja :• Masing-masing tabung diisi 5 ml darah sampel

dan darah kontrol• Tambahkan 2 ml Formalin 40% ke tiap tabung• Biarkan beberapa saat hingga terbentuk

koagulat/endapan

Hasil :• (+) endapan berwarna merah terang• (-) endapan berwarna kecoklatan

PENUTUPPENUTUP

• Kedokteran Forensik Laboratoris membantu pembuktian tindak pidana terhadap tubuh dan nyawa manusia secara ilmiah

praktikum labfor

Documents