Break dosage, cell cycle stage and DNA replication influence DNA double strand break response

PresentaElizabeth Sosa CastilloBreak dosage, cell cycle stage and DNA replication influence DNA double strand break (DSB) response. Christian Zierhut1 and John FX Diffley

The EMBO JournalIntroduccinLa interrupcin de la doble cadena de ADN es un potente inductor de cambios perjudiciales del genoma y muerte celular.Origen de las roturas Radiacin ionizante Agentes oxidantesErrores en la replicacinAlgunos productos derivados del metabolismo de la clula

mecanismos que evitan la rotura de los cromosomasUnin no homloga de extremos Los extremos rotos se yuxtaponen y se ligan Generalmente supone la prdida de uno o varios nucletidos en el sitio de uninMecanismo comn en mamferos

mecanismos que evitan la rotura de los cromosomasUnin homloga de extremos (en clulas diploides) Se utiliza el otro cromosoma para reparar sin prdida de nucletidosSe utiliza un mecanismo relacionado con los procesos de recombinacin de DNA Si el dao ocurre despus de la replicacin del DNA pero antes de la mitosis, puede utilizarse la cromtida hermana para proceder a la reparacinOcurre en humanos, pero es mucho ms frecuente en Drosophila, Levaduras y en Bacterias

RESPUESTA AL DAO DEL ADN

Meiotic DSB repair in yeastEsta no es indipensable6

Double-strand break repair in S. cerevisiae with hand-off of intermediates between Rad52 group proteins.

Esta no es indipensable

DNA damage and replication block checkpoints in S. cerevisiae and the functions of checkpoint proteins.

DNA Breaks and the Cell Cycle: Checkpoints and Cell Cycle ArrestObjetivoDescribir un anlisis cuantitativo del procesamiento de DSB en Saccharomyces cerevisiae.MetodologaEnsayo de inmunoblot y ensayo de autocinasa Rad53.

Citometra de flujo y microscopia de fluorescencia .

Extraccin de AND y preparacin para qPCR.

Cuantificacin por PCR tiempo realENSAYO PARA LA CUANTIFICACIN DEL ssDNA Y EXPERIMENTOS CONTROL

Anlisis del procesamiento de DSB y activacin del punto de control (checkpoint)

Anlisis del procesamiento de DSB y activacin del punto de control (checkpoint)LA ACTIVACION DEL PUNTO DE CONTROL Y LA RESECCIN DE DBS SON PROCESOS DEPENDIENTES DE DOSIS

La reseccin de dsb es regulada por mecanismos dependientes e independientes de nhej en fase g1

La reseccin de dsb es regulada por mecanismos dependientes e independientes de nhej en fase g1La Replicacin de adn es necesaria para la activacin eficiente del checkpoint y la estimulacin para el procesamiento de dsb

El incremento de la activacin del checkpoint por dsbs durante la replicacin es dependiente en rad9 PERO NO DE MRC1

Conclusiones