Evaluación de la actividad antagónica de diferentes cepas de bacterias contra Clavibacter michiganensis in vitro

Sánchez-Sánchez-J.B* , Rosales-Colunga-L.M

Área Agroindustrial. Facultad de Ingeniería

Universidad Autónoma de San Luis Potosí

Solanum lycopersicum

•Origen

•Especie hortícola más importante para el consumo

humano

• Generador de empleos• Forma parte de la dieta del ser humano

(Secretaría de Agricultura, 2016)

LA HORTALIZA CON LA MAYOR SUPERFICIE SEMBRADA EN TODO EL MUNDO

(SECRETARÍA DE AGRICULTURA, 2016)

PRODUCCIÓN DE TOMATE EN MÉXICO

Principales productores de tomate:

•Sinaloa

•San Luis Potosí

•Baja California

•Zacatecas

•Michoacán

Fuente: SAGARPA, 2017

(Hausbeck MK et al., 2000)

Clavibacter michiganensis subespecie

michiganensis , principal patógeno del

jitomate

No hay tratamiento efectivo, es necesario encontrar un

control biológico con cepas antagonistas .

Algunas cepas de Bacillus son antagonistas de Cmm

(Boudyach et al 2001)

(Jung et al 2014)

HIPÓTESIS

Evaluación del antagonismo de cepas morfológicamente similares a Bacillus, aisladas del efluente de una planta tratadora de aguas contra Cmm.

Las cepas morfológicamente similares a Bacillus presentaran actividad inhibitoria contra Cmm.

OBJETIVO

METODOLOGÍA

Aislamiento Bacteriano

Análisis antagónico en medio solido

Análisis antagónico en medio liquido

Identificación de Cmm

AISLAMIENTO BACTERIANO

Aislamiento bacteriano

Bacterias morfológicamente similares a Bacillus

Efluente de planta tratadora de

agua, industria papelera

CmmTallo enfermo de

cáncer bacteriano

AISLAMIENTO BACTERIANO

ANÁLISIS ANTAGÓNICO EN MEDIO SÓLIDO

Siembra de Cmmen medio líquido

Preparación de medio sólido LB en

cajas de Petri

Agregar 250 μl de Cmm a cajas de

petri

Tomar 4 trozos de papel filtro

Empapar los papeles filtro con las

bacterias sembradas

anteriormente

Colocarlos en las cajas con Cmm

sembrado

ANÁLISIS ANTAGÓNICO EN MEDIO SOLIDO

Cepa Halo de

inhibición (Diámetro)

Crecimiento

Bacteriano (Diámetro)

Cepa A 1.60 cm 0.90 cm de la bacteria A.

Cepa B No se presenta

1.25 cm de bacteria B.

Cepa C 1.22 cm 1.22 cm de bacteria C.

Tabla 1. Evaluación de inhibición de Cmm por diferentes cepas

aisladas

Cepa D 1.8 cm de

D.

1.07 cm de

bacteria D.

Cepa E No presenta

0.62 cm de bacteria E.

Cepa F 1.7cm de D 0.65 cm de bacteria F.

Cepa G 5.5 cm de D

1.35 cm de bacteria G.

ANÁLISIS ANTAGÓNICO EN MEDIO LÍQUIDO

Se cultivan bacterias en

medio líquido LB

Densidad óptica cada 24

hrsCentrifugación

Preparación de suspensiones

Densidad óptica cada 24

hrs

Elaboración de curva de

crecimiento

ANÁLISIS ANTAGÓNICO EN MEDIO LIQUIDO

Grafico 1. Densidad Óptica de las diversas cepas de bacterias a

190 hrs

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

4

OD

600 n

m

Cepas

Bacteria A

Bacteria B

Bacteria C

Bacteria D

Bacteria E

Bacteria F

Bacteria G

CONTROL

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

4

0 25 50 75 100 125 150 175 200

OD

60

0 n

m

Tiempo (h)

Bacteria A Bacteria B Bacteria C Bacteria D

Bacteria E Bacteria F Bacteraia G CONTROL

Identificación de Cmm

Preparación de medio sólido LB

Siembra de bacterias en

medio solido LB

Incubación Identificación de

las bacterias morfológicamente

Identificación de Cmm

CONCLUSIÓN

➢ De las cepas evaluadas en medio sólido LB, 5 presentan halos de inhibición del crecimiento

del patógeno.

➢ En los ensayos de inhibición en medio liquido 2 cepas inhibieron fuertemente el crecimiento

del patógeno.

➢ La cepa que mostró resultados positivos en ambos ensayos fue la cepa C.

➢ Al identificar la bacterias en medio sólido, se pudo apreciar que la bacteria que estaba

presente efectivamente es Clavibacter michiganensis

REFERENCIAS

• Secretaría de Agricultura, G. D. (12 de Noviembre de 2016). ¿Tomate o jitomate? Recuperado el 15 de Noviembre de 2017, de Secretaría de Agricultura, Ganadería, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentación: https://www.gob.mx/sagarpa/articulos/tomate-o-jitomate?idiom=es

• E. H. Boudyach , M. Fatmi , O. Akhayat , E. Benizri & A. Ait Ben Aoumar Selection of Antagonistic Bacteria of Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis and Evaluation of Their Efficiency Against Bacterial Canker of Tomato, Biocontrol Science and Technology.(2001).

• W.J. Jung , F. Mabood , A. Souleimanov , L.G. Whyte, T.D. Niederberger , D.L. Smith. Antibacterial activity of antagonistic bacterium Bacillus subtilis DJM-51 against phytopathogenic Clavibactermichiganense subsp. Michiganense ATCC 7429 in vitro (2014).

• Hausbeck MK, Bell J, Medina-Mora C, Podolsky R, Fulbright DW. Effect of bactericides on population sizes and spread of Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis on tomatoes in the greenhouse and on disease devel- opment and crop yield in the field. (2014)