presentación de powerpoint · 2019. 4. 14. · reina teresa martinez1, xiomara cayetano1, domingo...
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Reina Teresa Martinez1, Xiomara Cayetano1, Domingo Renjifo 1, Rosalba Rodriguez2
Luis Minier2 & Pierre-Yves Teycheney4
1IDIAF, 2Ministerio de Agricultura, 3CIRAD
Cinética de activación de alelos infecciosos de Banana Streak Virus (BSV-OL1 y BSV-GF7) en
FHIA-21 y MxH en República Dominicana
7mo Congreso SODIAF del 10-12 de noviembre, 2016. Puntacana, República Dominicana
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1. Introducción 2. Virus del rayado del banano (BSV) 3. Evaluación de la activación de eBSV infecciosas de BSV 4. Conclusiones
Plan de la presentación
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• El Virus del rayado del banano, esta presente en la mayoría de las plantaciones de banano • Pertenece al genero Badnavirus de la familia Caulimoviridae
• Partículas baciliformes • Genoma ADN doble cadena circular, 7.3 kbp • Utiliza una etapa de transcripción inversa del genoma
ORF 1
ORF2
ORF3
200 nm © J. Vo, the University of Queensland
• Mode de transmisión semi persistente , trasmitido al menos por 6 especies de cochinillas
• Existen 9 especies de BSV distinta, reconocida por el comité international de taxonomía de virus (ICTV)
Virus del rayado del banano (BSV)
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© P
.-Y.
Tey
chen
ey, C
IRA
D
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.-L.
Isk
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ana,
CIR
AD
Síntomas: • Foliares (rayado clorótico) y rajadura del pseudotallo (frecuentes)
• Emergencia abnormal de inflorescencias y síntomas en frutos
Virus del rayado del banano (BSV)
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Dallot et al. (2000). Arch. Virol. 146: 2179–2190 Meyer et al. (2008). Plant Dis. 92:1158-1163. Côte F. et al (2010). Mol. Plant Pathol. 11, 137–144
Híbrido interespecífico
(AAB / AAAB)
Riesgo de epidemia
eBSV infecciosas
integradas en el
genoma de M.
balbisiana
Estrés
Cultivo in vitro, diferencia de temperatura
Partículas virales
© J
. Vo
, QA
AFI
© P
.-Y.
Tey
chen
ey,
CIR
AD
Síntomas
Transmisión por cochenilla
• Presencia en el genoma de eBSV 1990 y 1999 su naturaleza infecciosa
Lafleur et al., (1996). Phytopathology 86:100-101 Harper et al. (1999) Virology 255:207-213. Ndowora et al. (1999) Virology 255: 214-220
La activación de secuencias endógenas infecciosas originan infecciones espontáneas en híbridos interespecíficos de banano
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Gayral et al. (2010) J. Virol 84: 7346-59
Chabannes et al. (2013). J Virol, 87, 8624-37
ORF1
ORF2
ORF3 Génome viral
Allèle infectieux Allèle non infectieux
eBSMysV-1 (BAC 29H14) 11.3 kb
eBSMysV-2 (BAC 86I03)
12 kb
✖ 2 loci / 1 allèle
eBSGFV-7 (BAC 71C19)
eBSGFV-9 (BAC 94I16)
13.3 kb
15.6 kb
eBSOlV -1 (BAC 310O7) 22.9 kb
23.2 kb eBSOlV-2 (BAC 73B22)
✖ 1 locus / 2 allèles
eBSImV (BAC 68C24)
15.8 kb
✖ 1 locus / 1 allèle
15.8 kb
Cuatro secuencias endógenas diferentes en los alelos del genoma de la especie modelo PKW
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• Calidad organoléptica de la fruta • Resistencia a enfermedades
Musa acuminata (A)
• Resistencia , robutez • Resistencia a enfermedades y sequía
Musa balbisiana (B)
X
• Las eBSV se expresan en las variedades híbridas interespecíficas naturales o creadas
riesgo de brotes por la siembra a gran escala Riesgo de introducción especies de BSV exóticas
Dallot et al. (2000). Arch. Virol. 146: 2179–2190 Côte F. et al (2010). Mol. Plant Pathol. 11, 137–144
Las secuencias integradas infecciosas en el genoma de M. balbisiana, es la principal limitante para la creación y difusión de variedades
híbridas de banano
El riesgo BSV de difusión asociado con el cultivo de variedades híbridas que albergan secuencias endógenas del BSV no ha sido evaluado
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Evaluar la activation de los alelos infecciosos OL1 y GF7 en MxH y FHIA-21
Evaluación de la activación de las
secuencias infecciosas
Impacto de la infección por BSV sobre el
crecimiento y rendimiento
Ensayo de campo
Objetivo del estudio
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80 bloques al azar de 5 plantas (factorial 2x2) Material vegetal indexado Cinco tratamientos T0…T5 Una planta =una unidad estadística Indexación cada 3 meses
Macho x Hembra v vitroplantas
FHIA-21 cormo Macho x Hembra cormo
Wiliams vitroplantas FHIA-21 vitroplantas
N° 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44
l igne
1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Cav
2
3 1 FHIA*VP MxH*VP FHIA*S Cav MxH*S MxH*VP Cav FHIA*S FHIA*VP MxH*S FHIA*S MxH*VP MxH*S Cav FHIA*VP FHIA*VP MxH*VP FHIA*S Cav MxH*S 1
4 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 4 4 4 4 4
5 1 MxH*VP Cav FHIA*VP FHIA*S MxH*S FHIA*VP MxH*VP FHIA*S Cav MxH*S FHIA*S FHIA*VP MxH*VP Cav MxH*S Cav FHIA*VP MxH*S FHIA*S MxH*VP 1
6 5 5 5 5 5 6 6 6 6 6 7 7 7 7 7 8 8 8 8 8
7 1 MxH*S Cav MxH*VP FHIA*S FHIA*VP MxH*VP FHIA*S MxH*S Cav FHIA*VP FHIA*S MxH*VP MxH*S FHIA*VP Cav FHIA*VP Cav FHIA*S MxH*S MxH*VP 1
8 9 9 9 9 9 10 10 10 10 10 11 11 11 11 11 12 12 12 12 12
9 1 MxH*VP Cav FHIA*S MxH*S FHIA*VP MxH*S MxH*VP FHIA*S Cav FHIA*VP MxH*VP FHIA*S Cav MxH*S FHIA*VP MxH*VP FHIA*VP FHIA*S MxH*S Cav 1
10 13 13 13 13 13 14 14 14 14 14 15 15 15 15 15 16 16 16 16 16
11 1 FHIA*S MxH*VP Cav FHIA*VP MxH*S Cav MxH*VP FHIA*S MxH*S FHIA*VP FHIA*VP MxH*VP Cav MxH*S FHIA*S FHIA*S FHIA*VP MxH*VP Cav MxH*S 1
12 17 17 17 17 17 18 18 18 18 18 19 19 19 19 19 20 20 20 20 20
13 1 MxH*VP Cav MxH*S FHIA*S FHIA*VP FHIA*S Cav MxH*S MxH*VP FHIA*VP Cav FHIA*VP FHIA*S MxH*VP MxH*S MxH*S FHIA*VP FHIA*S Cav MxH*VP 1
14 21 21 21 21 21 22 22 22 22 22 23 23 23 23 23 24 24 24 24 24
15 1 MxH*VP FHIA*VP MxH*S FHIA*S Cav Cav FHIA*S MxH*S MxH*VP FHIA*VP MxH*VP MxH*S FHIA*S Cav FHIA*VP Cav MxH*VP FHIA*S MxH*S FHIA*VP 1
16 25 25 25 25 25 26 26 26 26 26 27 27 27 27 27 28 28 28 28 28
17 1 FHIA*S FHIA*VP MxH*VP MxH*S Cav MxH*S Cav FHIA*S FHIA*VP MxH*VP MxH*VP FHIA*S FHIA*VP Cav MxH*S Cav FHIA*S MxH*S MxH*VP FHIA*VP 1
18 29 29 29 29 29 30 30 30 30 30 31 31 31 31 31 32 32 32 32 32
19 1 FHIA*VP MxH*VP Cav FHIA*S MxH*S Cav FHIA*VP FHIA*S MxH*VP MxH*S FHIA*S MxH*S Cav MxH*VP FHIA*VP MxH*VP FHIA*VP Cav MxH*S FHIA*S 1
20 33 33 33 33 33 34 34 34 34 34 35 35 35 35 35 36 36 36 36 36
21 1 FHIA*VP FHIA*S Cav MxH*VP MxH*S FHIA*VP MxH*VP FHIA*S Cav MxH*S MxH*S FHIA*S Cav MxH*VP FHIA*VP MxH*S FHIA*S FHIA*VP MxH*VP Cav 1
22 37 37 37 37 37 38 38 38 38 38 39 39 39 39 39 40 40 40 40 40
23 1 MxH*S FHIA*S MxH*VP Cav FHIA*VP MxH*VP FHIA*S MxH*S Cav FHIA*VP MxH*VP Cav MxH*S FHIA*S FHIA*VP MxH*VP MxH*S Cav FHIA*S FHIA*VP 1
24 41 41 41 41 41 42 42 42 42 42 43 43 43 43 43 44 44 44 44 44
25 1 FHIA*VP Cav MxH*VP FHIA*S MxH*S MxH*VP MxH*S Cav FHIA*S FHIA*VP Cav MxH*S FHIA*VP MxH*VP FHIA*S FHIA*VP Cav FHIA*S MxH*S MxH*VP 1
26 45 45 45 45 45 46 46 46 46 46 47 47 47 47 47 48 48 48 48 48
27 1 MxH*S Cav MxH*VP FHIA*VP FHIA*S Cav MxH*VP MxH*S FHIA*VP FHIA*S FHIA*S MxH*S FHIA*VP Cav MxH*VP FHIA*VP FHIA*S MxH*S Cav MxH*VP 1
28 49 49 49 49 49 50 50 50 50 50 51 51 51 51 51 52 52 52 52 52
29 1 FHIA*VP MxH*VP FHIA*S MxH*S Cav FHIA*S MxH*VP MxH*S Cav FHIA*VP MxH*S MxH*VP FHIA*S Cav FHIA*VP Cav MxH*S FHIA*VP FHIA*S MxH*VP 1
30 53 53 53 53 53 54 54 54 54 54 55 55 55 55 55 56 56 56 56 56
31 1 MxH*S Cav MxH*VP FHIA*VP FHIA*S MxH*S FHIA*S FHIA*VP Cav MxH*VP MxH*VP FHIA*VP Cav FHIA*S MxH*S MxH*S MxH*VP FHIA*VP FHIA*S Cav 1
32 57 57 57 57 57 58 58 58 58 58 59 59 59 59 59 60 60 60 60 60
33 1 FHIA*VP MxH*S Cav FHIA*S MxH*VP FHIA*VP FHIA*S MxH*S MxH*VP Cav FHIA*VP Cav MxH*S FHIA*S MxH*VP MxH*S FHIA*VP FHIA*S Cav MxH*VP 1
34 61 61 61 61 61 62 62 62 62 62 63 63 63 63 63 64 64 64 64 64
35 1 FHIA*S MxH*VP Cav FHIA*VP MxH*S Cav FHIA*VP FHIA*S MxH*VP MxH*S MxH*S Cav FHIA*S FHIA*VP MxH*VP Cav FHIA*VP MxH*VP FHIA*S MxH*S 1
36 65 65 65 65 65 66 66 66 66 66 67 67 67 67 67 68 68 68 68 68
37 1 MxH*S Cav MxH*VP FHIA*VP FHIA*S MxH*S Cav MxH*VP FHIA*S FHIA*VP MxH*S MxH*VP FHIA*VP FHIA*S Cav MxH*VP MxH*S Cav FHIA*S FHIA*VP 1
38 69 69 69 69 69 70 70 70 70 70 71 71 71 71 71 72 72 72 72 72
39 1 Cav FHIA*VP MxH*VP FHIA*S MxH*S MxH*VP Cav FHIA*S MxH*S FHIA*VP MxH*VP MxH*S FHIA*VP Cav FHIA*S MxH*S MxH*VP Cav FHIA*S FHIA*VP 1
40 73 73 73 73 73 74 74 74 74 74 75 75 75 75 75 76 76 76 76 76
41 1 Cav FHIA*S FHIA*VP MxH*VP MxH*S MxH*VP Cav FHIA*VP MxH*S FHIA*S Cav MxH*S FHIA*S FHIA*VP MxH*VP FHIA*S MxH*VP FHIA*VP Cav MxH*S 1
42 77 77 77 77 77 78 78 78 78 78 79 79 79 79 79 80 80 80 80 80
43 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
Ensayo de campo (Barranca, La Vega)
-
Indexado del virus
Multiplex-IC-PCR (LeProvost et al., 2006)
2. Immunocaptura 30 min a TA
1. Absorción de Ag O/N , 4C
3 - PCR Monkeys
retrotransposons
Primers -específicos
+
Tramiento con DNAsa antes de la
PCR
-
© M.-L. Iskra-Caruana
Primer diseñados sobre la base de la estructura de los alelos de PKW
Gayral P et al. (2008) J Virol. 82: 6697-710.
Gayral P et al. (2010) J. Virol 84: 7346-59
Chabannes et al. (2014). J Virol, 87, 8624-37
OB
INO
L’E
WA
I
eBSOlV-1
eBSOlV-2
GO
LDFI
NG
ER
eBSGFV-7
eBSGFV-9
eBSImV-1
IMO
VE
eBSImV-2
- Structures
- Integrations
- Allèles
Perfil alélico de las secuencias endógenas en MxH y FHIA-21
Extracción de ADN de muestras de hojas de MXH (24) y FHIA-21 (25) (Plant DNeasy minikit, QIAGEN)
Los alelos GF9/GF7 se
diferenciaron por PCR, utilizando los iniciadores específicos DifGf, seguido de mapa de restricción (RFLP) y la enzima Taa1
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• La 49 muestras presentaron un perfil alelico identico : • Ambos híbridos portan los alelos infecciosos OL1 y GF7 • Ausencia de secuencias BSIMV
• MxH/FHIA-21 se infectaron por BSOLV y/o BSGFV vía la activation de alélos infecciosos (OL1 y GF7)
Perfil alélico de las secuencias endógenas de MxH y FHIA-21
-
0%
2%
4%
6%
8%
10%
12%
14%
16%
18%
20%
22%
24%
0 3 6 9 12 15
% d
e p
lan
ts in
fect
és p
ar B
SOLV
meses
MxH*VP MxH*S FHIA*VP FHIA*S
la infección por BSOLV después de 15 meses llegó a la máxima para ambos
materiales
la transmisión del virus de la planta madre a su descendecia fue de un 100%
Cinética de activación del alelo infeccioso OL1 en MxH y FHIA-21
-
El % de infección por BSGFV después de 15 meses continuó en aumento
El % mas alto de infección se observa en FHIA-21*VP (19,76%)
la transmisión del virus a su descendencia fue de un 100%
0%
2%
4%
6%
8%
10%
12%
14%
16%
18%
20%
22%
24%
0 3 6 9 12 15
% d
e p
lan
ts in
fect
és p
ar B
SGFV
Meses
MxH*VP MxH*S FHIA*VP FHIA*S
Cinética de activación del alelo infeccioso G7 en MxH y FHIA-21
-
280.0
285.0
290.0
295.0
300.0
305.0
310.0
MxH*VP MxH*S
FHIA*VP FHIA*S
Altura de plantas (cm)
Sanas infectadas 46.00
48.00
50.00
52.00
54.00
56.00
58.00
60.00
MxH*VP MxH*S
FHIA*VP FHIA*S
Diametro del pseudotronco (cm)
sanas infectadas 11.00
12.00
13.00
14.00
15.00
16.00
MxH*VP MxH*S
FHIA*VP FHIA*S
Peso del racimo (kg)
sanas infectadas
En el primer ciclo, 2 plantas infectadas (BSOLV) y 15 (BSGFV)
La altura, diamétro del pseudotronco y peso del racimo sugieren un bajo efecto
de las infecciones sobre el rendimiento
No fue posible realizar un analisís estadístico confiable
Efecto de la infeccion por BSOLV y BSGFV sobre el rendimiento
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El porcentaje más alto de activación del alelo infeccioso GF7, se observó en FHIA-21 y en menor proporción en MxH la multiplicación del material vegetal influenció el nivel de activación
El alelo infeccioso OL1 tuvo un nivel más bajo de activación que el alelo GF7, no importando el método de multiplicación
No se observó diferencia significativa del cultivo sobre el rendimiento de las plantas infectadas por BSOLV o BSGFV No se detectó infección por la especie BSIMV
En general estos resultados sugieren:
• Un efecto de fondo genético de los niveles de activación alelo infeccioso GF7: factores del
hospedero implicados?
• El modo de multiplicación influyó sobre los niveles de activación del alelo infeccioso GF7
• El efecto de la infección por BSOLV o BSGFV sobre crecimiento y rendimiento de los híbridos
MXH y FHIA-21 fue bajo
Conclusiones
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Agradecimientos
Muchas gracias!!