proposal ta mey

8/19/2019 Proposal TA Mey

1/32

1

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Preeklamsia adalaah perkembangan hipertensi yang disertai proteinuria,

edema yang berlebihan, atau keduanya. Preeklampsia terjadi setelah 20 minggu

kehamilan dan umumnya terjadi pada ; primigravida, khususnya pada usia ! tahun ; ri"ayat pree#lampsia dalam keluarga ; kehamilan kembar;

mola hidatidosa. $sar"ono,2007%

&asil 'urvey (emogra)i *esehatan +ndonesia $'(*+% tahun 2011

menunjukkan *+ di +ndonesia sebesar 10 per 1000 kelahiran hidup dan ngka

*ematian -ayi $*-% per 1000 kelahiran hidup. 'alah satu penyebab tertinggi

kematian ibu adalah penyakit hipertensi dalam kehamilan

$preeklampsia/eklampsia% selain perdarahan dan in)eksi. Penyebab kematian

maternal di seluruh rumah sakit di +ndonesia tahun 2011 di dominasi oleh

perdarahan $27% dan eklampsia $2% $*ementerian *esehatan +, 2011%.

egara maju seperti di ustralia dan +nggris, penyakit preeklampsia ini

merupakan penyebab utama kematian maternal. ngka kejadian preekalmpsia di

ustralia sebesar 1032!, di +nggris sebesar 100 per 1 juta kehamilan, sedangkan

di +ndonesia sepanjang tahun 2012 terdapat 0 kematian akibat preeklampsia.

Preeklamsia berat $P4-% dan eklampsia merupakan risiko yang membahayakan


2/32

2

ibu dan juga janin melalui plasenta $o5ikhan, 2011%. 'ekitar !0.000 ibu

meninggal dunia setiap tahun karena eklampsia. +nsiden eklampsia di negara

berkembang berkisar dari 16100 sampai 161700 $o5ikhan, 2011%.

'istem imun di dalam tubuh adalah untuk mendeteksi dan menetralisir

atau melenyapkan patogen yang masuk ke dalam tubuh, seperti virus, bakteri,

jamur, dan parasit. 'elain itu, sistem kekebalan tubuh bertugas untuk

menghilangkan sel3sel yang sudah tua dan rusak. ada dua jenis respon imun yang

sudah berkembang, keduanya diklasi)ikasikan sebagai imun ba"aan dan imun

adapti). espon imun ba"aan juga disebut nonspesi)ik karena mereka dapat

dipi#u oleh pola molekul tertentu dan umum untuk semua kelas patogen, serta

tidak ada variasi dalam pertemuan berikutnya dengan antigen yang sama.

mekanisme tama kekebalan ba"aan adalah )agositosis, peradangan, aktivasi

komplemen, dan induksi kematian sel. *elas tama )agosit, yaitu, sel yang

mampu menelan bakteri seluruh atau partikel, mereka adalah neutro)il dan

makro)ag. Pemba"a 5at kimia dan beberapa jenis sel yang lain memiliki peran

penting dalam inisiasi respon in)lamasi. Pembunuhan sel yang terin)eksi virus dan

sel kanker melalui induksi terhadap sel dimana kematian sel tersebut sudah

diren#anakan atau apoptosis dilakukan oleh 'el NK (Natural Killer).

Pada "anita sehat yang tidak hamil, ada keseimbangan antara respon 8h1

dan 8h2 $'argent et al.,2009%. amun dalam kehamilan, keseimbangan ini se#ara

signi)ikan diubah oleh kehadiran plasenta, karena progesterone dan sitokin

memodulasi sel3sel kekebalan tubuh melalui respon 8h2 $Pi##ini et al., 2000%. 'el

imun memproduksi sitokin yang terdiri dari lim)osit 8 helper31 $8h3l% atau 8


3/32

3

helper32 $8h32% sebagai #ontoh, lim)osit 8h3l mensekresikan interleukin32 $l:32%,

8umor e#rosis a#tor $83% dan inter)eron3= $+3=% sebagai pro in)lamasi.

'ebaliknya, lim)osit 8h32 mensekresikan sitokin anti in)lamasi seperti l:3, l:310

dan +:31 yang se#ara predominan dibutuhkan pada pembentukan antibodi diikuti

dengan perubahan antigen. ekanisme kerja dari kedua tipe lim)osit ini hampir

sangat mirip, keduanya bekerja bersama dan menanggapi e)ek penghitungan

sitokin se#ara teratur. 'ebagai #ontoh sitokin 8h31 menghasilkan sitokin pro3

in)lamasi yang jika bereaksi memperkuat respon imun sitotik, juga menurukan

regulasi produksi sitokin tipe 8h32. asing3masing komponen berbeda interaksi

sistem imun dengan tro)oblas pada derajat yang berbeda $?usta)sson, 2007%.

Pada "anita dengan pree#lampsia, pro)il sitokin dalam darah peri)er

terutama 8h1, menunjukkan peningkatan += dan penurunan +:3 $rriaga3

Pi5ano et al., 200!%. 'elain itu, juga terjadi penurunan +:310 dalam serum dan

plasenta pada pasien ini $&ennessy et al.,1@@@%. 'itokin pro3in)lamasi memi#u

akti)asi dari koagulasi yang menyebabkan vaskulitis dan in)ark, selanjutnya dapat

merusak perkembangan plasenta a"al dan menghambat invasi tro)oblas. :im)osit

8h17 merupakan subpopulasi yang diproduksi + dimana mengekspresikan +:3

2A, BB9A dan menghasilkan +:317 $Bosmi et al., 200C%.

Spirulina adalah sebutan yang umum digunakan, tetapi penggunaan

sebutan ini sebenarnya tidaklah tepat, karena sebutan tersebut digunakan untuk

beberapa jenis #yanoba#teria $ganggang hijau3biru%. ntuk menghindari

kebingungan, kita akan mengikuti istilah umum yang menyebutnya Spirulina

daripada Arthrospira. 8iga spesies alga ini digunakan dalam per#obaan yang


4/32

4

dijelaskan di sini6 '. platensis, fusiformis S., dan S. maxima. 'pirulina

mengandung protein sekitar 90, berbagai jenis polisakarida, asam lemak

esensial, vitamin dan mineral, dan senya"a )enolik. 'alah satu protein utama yang

terkandung dalam 'pirulina $1! 320 dari berat kering alga% adalah C-

phycocyanin, yang terdiri dari apoprotein dan chromophores phycocyanobilin

yang terikat kovalen, yang menyebabkan "arna biru pada #yanoba#teria. 'elain

Spirulina se#ara keseluruhan, beberapa bagian dari polisakarida dan B3

phy#o#yanin sudah diteliti karena mampu mempengaruhi )ungsi kekebalan tubuh.

$?resh"in,200C%

B. Rumusan Masalah

-agaimanakah pengaruh pemberian spirulina terhadap sekresi interleukin3

10 pada "istar pre3eklampsiaD

C. Tujuan Penelitian

1. Tujuan umum

engetahui pengaruh pemberian spirulina terhadap sekresi interleukin310

pada "istar pre3eklampsia

. Tujuan khusus

1. ntuk mengetahui apakah ada perbedaan kadar +:310 antara pre3eklapsia

dan kontrol sehat


5/32

5

2. ntuk mengatahui apakah tedapat perbedaan rasio +:310 antara pre3

eklampsia dan #ontrol sehat

. ntuk mengetahui adanya peningkatan +:310 pada "istar yang terpapar

pre3klampsia pada pemberian spirulina

D. Man!aat "enelitian

1. Man!aat Te#ri

ntuk memperoleh pengetahuan tentang pengaruh pemberian spirulina

terhadap sekresi +:310 pada "istar pre3eklampsia

. Man!aat Praktis

Penelitian ini ditujukan untuk menjadi dasar penelitian3penelitian

selanjutnya untuk pengembangan dan penggunaan suplemen spirulina

untuk meningkatkan kualitas hidup pasien pre3eklampsia yang hingga saat

ini belum memuaskan.


6/32

6

BAB II

TIN$AUN PU%TA&A

A. Preeklam"sia

1. De!inisi Preeklam"sia

Preeklampsia adalah sindroma klinis penurunan per)usi organ akibat

vasospasme dan akti)itas endotel yangditandai dengan hipertensi, edema, dam

proteinuria yang timbul pada umur kehamilan di atas 20 minggu atau dijumpai

dalam12 minggu stelah persalina. Proteinuria merupakan tanda penting pada

pereeklampsia dan diagnosis preeklampsia diprtanyakan bila tidak ada proteinuria.

Preeklampsia merupakan kondisi medis, dimana hipertensi timbul pada kehamilan

dihubungkan dengan proteinuria. -ukti lain menyatakan bah"a bukan janin,

melainkan plasenta3lah yang menyebabkan gangguan ini. *urangnya per)usi pada

saluran uteroplacental menjadi salah satu #iri pada semua sindrom preeklampsia,

beberapa hasil juga menyebutkan gangguan ini disebabkan oleh vaskulopati yang

pernah terjadi sebelumnya dan yang lain dikarenakan tidak sempurnanya

perubahan arteri desidua oleh trophoblast pada daerah implantasi. -eberapa

mekanisme juga memiliki implikasi pada patogenesis preeklampsia, seperti

dis)ungsi endotelial, jalur in)lamasi, stres oksidati) serta '. $ngsar,200;

Breasy dan esnik,200; Bunningham et al,. 200!%

. Pat#genesis "re'eklam"si


7/32

7

-anyak teori yang berusaha untuk menerangkan pato)isiologi terjadinya

preeklampsia, tetapi tidak satupn yang dianggap benar mutlak. 8eori tersebut

kelainan vaskularisasi plasenta, teori iskemik, radikal bebas dan dis)ungsi endotel,

teori intoleransi imunologik antara ibu dan janin, teori adaptasi kardiovaskular,

teori de)isiensi genetik, teori de)isiensi gi5i dan teori in)lamasi $ngsar, 200%.

(. &riteria )iagn#sis "reeklam"sia

(iagnosis preekklampsia ringan ditegakkan berdasar atas timbunya

hipertensi disertai proteinuria dan / atau edema stelah kehamilan 20 minggu

dengan gejala sebagai berikut6

1. 8ekanan darah sistolik/diastolik E 10/@0 mm&g

2. Proteinuria E 00 mg/2 jam atau E A1 dipstik

. 4dema lokal tidak dimasukka dalam kriteria pree#lampsia, ke#uali edema

pada lengan, muka dan perut, edema generalisata

Preeklampsia berat bila ditemukan satu atau lebih gejala sebagai berikut6

1. 8ekanan darah sistolik E 190 dan tekanan darah diastolik E 110 mm&g,

tekanan darah ini tidak menurun meskipun ibu hail sudah dira"at di rumah

sakit dan sudah menjalani tirah baring

2. Proteinuria > !,0 gram/2 jam atau A dalam pemeriksaan kualitati)

. Fliguria, yaitu produksi urin kurang dari !00 ##/2 jam

. *enaikan kadar kreatinin plasma


8/32

8

!. ?angguan visus dan serebral6 penurunan kesadaran, nyeri kepala, skotoma

dan pandangan kabur

9. yeri epigastrium atau nyeri pada kuadran kanan atas abdomen $akibat

tegangnya kapsula ?lisson%

7. 4dema paru dan sianosis

C. &emolysis mikroangiopati

@. 8rombositopenia berat 6 < 100.000 sel/mm atau penurunan trombosit

dengan #epat

10. ?angguan hepar $kerusakan hepatoselular% 6 peningkatan kadar alanine

dan aspartate aminotrans)erase

11. Pertumbuhan janin intrauterine yang terhambat

12. 'indrom &4::P

?ambaran klinik pree#lampsia bervariasi luas dan sangat individual. 'ulit

untuk menentukan gejala mana yang mun#ul lebih dahulu. 8etapi se#ara teori

biasanya didahului oleh edema, hipertensi kemudian proteinuria $ngsar, 200;

Bunningham et al., 200!%.

B. %truktur Plasenta manusia

dalah organ discoid yang panjang diameternya sekitar 2! #m dan tebal

diameternya #m. Plasenta dibentuk oleh pelat #horioni# yang menghadap janin,

di mana tali pusar terpasang, dan lempeng basal yang berbatasan dengan


9/32

9

endometrium ibu $?ambar 1, -ernis#he dan *au)mann, 2001%. Plasenta internal

manusia terdiri dari susunan proses yang luas seperti jari, yaitu vili. Proses ini

timbul dari plat #horioni# vili sebagai batang, dan #abang tersebut berulang kali

menimbulkan vili intermediate dan akhirnya menjadi vili terminal $?eorgiades et

al., 2002%. Gili 8erminal adalah tempat yang paling penting bagi pertukaran ibu3

janin, yang di#u#i langsung oleh darah ibu. Permukaan luar villus dibentuk oleh

sel sinsitiotro)oblas yang berdi)erensiasi penuh dan berinti banyak dan populasi

sel induk yang disebut sitotro)oblas, yang membedakan dan menggabungkan

syn#ytiotrophoblasts $?eorgiades et al., 2002%.

?ambar 2.1 'truktur plasenta manusia

Pada gambar adalah gambaran umum janin dengan plasentanya. Pembuluh

darah janin menempel ke plasenta melalui tali pusat. 'uplai darah ibu mengalir

melalui plasenta, yang memasok janin dengan nutrisi dan membuang kotoran dari

darah janin $1 tali pusat,. 2 #airan ketuban,.. membran amnio#horioni#, dari

""".mhhe.#om%. Pada gambar -, adalah plasenta manusia dengan vili janin

yang mengandung pembuluh janin dan tali pusat -B juga digambarkan. Gili


10/32

10

di#u#i oleh darah ibu. Pada gambar B, dua pohon vili janin menggambarkan pola

per#abangan yang kompleks $dari inkenberger dan Herb, ature ?eneti#s 2000%.

Pertukaran )isiologis yang penting dari 5at antara darah ibu dan janin terjadi

melalui antarmuka )eto3maternal yang terletak di antara dua sirkulasi, di mana

jenis sel berikut berada6 a* tro)oblast vili, +* membran basement di dekat

syn#ytiotrophoblasts , * inti vili, )* membran basement, e* janin sel endotel

kapiler $-ernis#he dan *au)mann, 2001%. 'elain itu, jaringan desidua, yang

merupakan bagian dari ibu, ditandai oleh sel poligonal atau berbentuk bulat dan

mempunyai daerah vas#ular yang kaya sitotro)oblas ekstravili. 'el3sel lain yang

terlibat dalam respon imun biasanya mengisi desidua seperti sel3sel pembunuh

alami rahim $nk% yang me"akili mayoritas leukosit yang menyusup pada saat

implantasi $plin et al, 1@@1;. -ernis#he dan *au)mann, 2001%, makro)ag, 8 sel,

sel -, granulosit, sel plasma $-ernis#he dan *au)mann, 2001%.

1. Tr#!#+las

'el tro)oblas pada manusia dapat diioslasi dengan mudah dari plasenta

$-is#ho) dan Bampana,2007%. -erikut adalalh gambar yang menunjukkan letak

pla#enta dan letak tro)oblas pada morula.

Iiak ovum dibuahi dan terjaid nidiasi atau plasentasi, lapisan korio embrio

menghasilkan korionik gonadotropin. 'etelah ovum dibuahi, lapisan korion

mengalami meiosis ++, kemudian trans)ormasi, lalu embriogenesis. Jigot yang

memulai berembriogenesis itu disebut konseptus karena berasal dari konsepsi

ovum dan spermato5oa. ula3mula terbentuk morul, sema#am gumpalan buah


11/32

11

anggur, diselaputi 5ona pellu#ida. orula tumbuh menjadi blastula $blastosit%

setelah terbentuknya rongga berisi #airan di dalamnya. -lastula tumbuh menjadi

2 jaringan, embrioblas $inner #ell mass, gumpoalan sel dalam% dan tro)oblas

$outer #ell mass, pemberi nutrisi% $Katim, 1@@%.

-lastosis merupakan rongga di pusat morula yang terbentuk akibat

pengumpulan #airan yang dipindahkan dari lumen oviduk se#ara berangsu3

angsur. Pada tahap blastosis, 5ona pellu#ida makin menipis dan menghilang,

memungkinkan sel3sel tro)oblas, yang berkemampuan menerobos mukosa,

berkontak langsung dengan endometrium. +mplantasi atau nidasi men#akup

penerobosan melalui sel uterus. 'elama implantasi, tro)oblas berdi)erensiasi

menjadi 2 lapisan, yaitu sinsisiotro)oblas dan sitotro)oblas. 'insisiotro)oblas

adalah lapisan sinsium luar berinti banyak, terjadi akibat penyatuan sitotro)oblas

terdapat banyak mikrovili yang tidak teratur dan sitoplasma super)isial

mengandung vesikel terbungkus membran. 'itoplasma sinsisiotro)oblas

menampakkan banyak retikulum endoplasma kasar dan halus, sebuah kompleks

?olgi yang berkembang baik, dan banyak mitokondria. 'titro)oblas terdiri atas

lapisan sel lonjong mononukleus tidak teratur tepat diba"ah sinsisiotro)oblas.

Pada bagian tro)oblas ini dibentuk juluran3juluran panjang yaitu vilus primer

$junLuiera, et al., 1@@C%.

'etelah implantasi, sel3sel tro)oblas yang tertanam di dalam endometrium

terus berkembang, membentuk jaringan bersama dengan sistem pembuluh darah

maternal untuk menjadi plasenta, yang kemudian ber)ungsi sebagai sumber nutrisi


12/32

12

dan oksigenasi bagi jaringan embrioblas yang akan tumbuh menjadi janin.

$eksoprodjo dan Hibo"o, 1@@@%.

C. Imun#l#gi &ehamilan

Pada kehamilan terjadi )enomena imun yang unik karena janin dan

plasenta dapat berkembang dalam rahim tanpa diserang oleh sistem imun ibu

meskipun melalui penggabungan sel ibu dan janin. 'elama lebih dari !0 tahun

yang lalu, 'ir Peter eda"ar mengemukakan bah"a terdapat suatu mekanisme

sehingga janin di dalam rahim yang memiliki si)at semi3allogra)t

$mengeskpresikan protein dari gen paternal dan maternal% tidak diserang oleh

sistem imun maternal. 'ekarang ini terdapat ja"aban bah"a selain men#egah

respon imun maternal, tro)oblas juga mengadakan kerjasama dengan sistem imun

maternal demi kesuksesan suatu kehamilan.8erdapat tiga )ase dalam imunologi kehamilan. ase pertama, yaitu

implantasi pada trimester pertama. ase ini menggambarkan pembentukan Mluka

terbukaN dan sangat membutuhkan proses in)lamasi yang kuat. Pada )ase ini,

blastokista harus menembus epitel dinding uterus dengan merusak jaringan

endometrial yang selanjutnya diikuti oleh invasi tro)oblas ke dalam pembuluh

darah maternal yang nantinya akan berguna untuk suplai darah kepada janin. ase

pertama ini tidak akan berhasil jika tidak ter#ipta suatu kondisi in)lamasi, maka

dari itu )ase pertama disebut dengan )ase pro3in)lamasi. ase yang kedua, proses

perkembangan janin pada trimester kedua dan ketiga. Pada proses ini, terjadi

suatu simbiosis antara ibu dengan bayinya dan sistem imun yang berperan pada

)ase ini adalah yang bersi)at anti3in)lamasi. khirnya )ase yang ketiga dalam


13/32

13

imunologi kehamilan, adalah )ase dimana sang ibu akan melahirkan bayinya,

maka dari itu dibutuhkan kembali respon imun yang bersi)at in)lamasi. Partus

digambarkan dengan adanya respon imun yang terdapat di dalam myometrium dan

memulai proses in)lamasi. espon pro3in)lamasi ini menyebabkan adanya

kontraksi pada uterus. 'ehingga dapat disimpulkan bah"a kehamilan terdiri dari

proses pro3 maupun anti3in)lamasi, yang tergantung pada "aktu kehamilan.

1. %it#kin

'itokin merupakan protein pemba"a pesan kimia"i, atau perantara dalam

komunikasi antarsel yang sangat poten, akti) pada kadar yang sangat rendah $103

10 O 1031! mol/+ dapat merangsang sel sasaran%. eseptor yang diekspresikan dan

a)initasnya merupakan )a#tor kun#i respon selular. Iadi sitokin berperan dalam

aktivasi sel 8, sel -, monosit, makro)ag, in)lamasi dan induksi sitotoksisitas.'itokin dihasilkan oleh sel , yang berperan sebagai mediator atau

penghantar sinyal dari suatu sel, baik untuk menginduksi dari suatu sel ke sel lain

maupun untuk menginduksi dirinya sendiri. Pada mulanya sitokin yang dihasilkan

oleh monosit disebuut monokin, sedangkan sitokin yang dihasilkan lim)osit

disebut lim)okin. (alam perkembangannya dimana satu sel dapat menghasilkan

lebih dari satu sitokin, maka istilah monokin maupun lim)okin saat ini jarang

digunakan. amun, yang digunakan adalah beberapa istilah, seperti interleukin

$+:%, 8umor e#rotid a#tor $8%, +nter)eron $+%. $'udiana, 200C%

'el 8 helper sebagai tipe inhibitor mutual pada palsenta dengan tipe sel

yang pertama, dinamai sel 8h1, mensekresi +:32, +3= dan lim)otoksin. &al ini

kontras dengan tipe sel 8h2, yang mensekresi +:3, +:39 dan +:310. 'itokin 8h1

dihubungkan dengan imunitas sel mediated dan reaksi hipersensiti)itas lambat,


14/32

14

sedangkan sitokin 8h2 menangkap respon antibody dan reaksi alergi. Fleh karena

sitokin 8h1 diperhitungkan #ukup berbahaya terhadap kehamilan dan sitokin 8h2

$+:310% dan mendo"n regulasi produksi sitokin 8h1, maka itu telah diungkapkan

bah"a kehamilan yang sukses merupakan )enomena 8h2. -eberapa substansi

seperti prostaglandin 42, 8?b, ?3B' dan +:310 berperan dalam rangkaian

imunoendokrin pada pemeliharaan kehamilan. P?432 mempunyai banyak

perangkat imunosupresi), termasuk inhibisi semua sel system imun. +:310 se#ara

potensial memiliki 2 mekanisme yang mana dapat menginhibisi )ungsi imun6

se#ara langsung sebagai )a#tor inhibitor sintesis sitokin dan se#ara tak langsung

sebagai pema#u tro)oblas invasi ke dalam arteria spiralis +:310.

+:310 merupakan inhibitor makro)ag dan sel dendritik yang berperan

dalam mengontrol reaksi imun nonspesi)ik dan imun selular. +:310 diproduksi

terutama oleh makro)ag yang diakti)kan. +ni merupakan #ontoh dari regulator

)eedba#k negati). +:310 men#egah produksi +:312 oleh makro)ag dan sel dendritik

yang diakti)kan. +:310 men#egah ekspresi kostimulatori molekul &B3++ pada

makro)ag dan sel dendritik.

. Peranan sit#kin selama kehamilan

'elama kehamilan, pembi#araan silang antara jaringan ibu dan janin dapat

berkontribusi bagi pera"atan kehamilan, dan gangguannya $yaitu kegagalan

implantasi, preeklamsia% yang mungkin mengakibatkan aborsi. 'elama kehamilan,

sitokin terutama terlibat dalam $1% stimulasi pertumbuhan, di)erensiasi dan )ungsi

sel epitel ibu dari rahim dan saluran, $2% stimulasi pertumbuhan, di)erensiasi

embrio sebelum dan setelah implantasi tro)oblas, $% koordinasi dan sinkronisasi

selama perkembangan embrio, dan sitokin terlibat dalam hubungan pada

antarmuka )eto3maternal $8abib5adeh dan -abaknia 1@@!;. (ealtry dkk, 2000%.


15/32

15

Iaringan plasenta memproduksi sitokin dan hormon, yang sangat penting di dalam

regulasi pada antarmuka )eto3maternal. 'aito $2000% menggambarkan dengan baik

tentang skenario hipotetis yang menunjukkan pembi#araan silang antara ovarium,

plasenta dan desidua yang diperlukan untuk memastikan keberhasilan kehamilan.

'eperti yang diilustrasikan pada ?ambar , ovarium melepaskan hormon

progesteron yang mengakibatkan stimulasi sel 8h2 untuk memproduksi sitokin.

'itokin 8h2 seperti +:3 dan leuemia inhibitory factor $:+% meningkatkan

sekresi human chorionic !onadotropin (hC") dari tro)oblas plasenta $'aito dkk.,

1@@7%, yang selanjutnya menginduksi produksi progesteron dari ovarium,

sehingga kembali menyebabkan induksi sel 8h2. 'elain itu, sitokin 8h2 seperti +:3

dan +:310 diketahui sebagai )aktor yang mampu menginduksi di)erensiasi

lim)osit 8h2 dari sel 8&0 $osmann dan 'ad, 1@@9%, dan dapat mengendalikan

intrauterin sel pembunuh alami $*% dengan menghambat peningkatannya

melalui kontrol +:32 +:32-, +:2g, sehingga men#egah kemungkinan

serangan terhadap tro)oblast $'aito dkk, 1@@9.%. 'el3sel plasenta $tro)oblas, 8#%

dan makro)ag desidua $% , keduanya memiliki en5im katabolik tripto)an

$seperti indolamine 2,3dioksigenase, +(F% yang terlibat di dalam mengendalikan

aktivasi sel 8 sitotoksik ibu, berkolaborasi untuk melindungi jaringan plasenta

dari serangan oleh sel 8 ibu $unn dkk., 1@@C%. 4kspresi +(F pada antarmuka

)eto3maternal disarankan karena diperlukan untuk men#egah penolakan imunologi

dari allogra)t janin karena penghambatan katabolisme tripto)an selama kehamilan

memungkinkan lim)osit ibu untuk memediasi aborsi $unn dkk., 1@@C%. unn

dan rekan $1@@C% membuat hipotesis bah"a sel 8 memiliki pemeriksaan regulator


16/32

16

siklus sel spesi)ik yang sensiti) terhadap tingkat tripto)an, ini menunjukkan bah"a

+(F menekan aktivasi sel 8 dan proli)erasi di dalam mi#roenvironments lokal

dengan mengurangi gi5i. *arena mekanisme yang tepat, dimana sel tro)oblas yang

mengekspresikan +(F melindungi janin alogenik dari penolakan, mekanisme

tersebut masih harus dijelaskan, dan mengingat bah"a penelitian terbaru $-aban

dkk, 200.% menggambarkan bah"a tikus +(F3/3 yang mengalami kehamilan

normal, pentingnya +(F di dalam menentukan keberhasilan kehamilan perlu

ditinjau kembali.

(. Peranan sit#kin )alam "at#genesis "reeklam"sia

*onsep terkini tentang pree#lampsia yang terjadi dis)ungsi menyeluruh

dari endotel vas#ular ibu dengan karakteristik meningkatnya reistensi vaskuler,

proteinuria, edema, dan koagulopati. Pen#etus kesurakan endotel pada

preeklampsia tidak diketahui, tetapi aktivasi neutro)il dapat terjadi pada kerusakan

vas#ular yang sama pada keadaan tidak hamil. ?reer dan ka"an3ka"an

melaporkan bah"a konsentrasi neutrophil elastase, penanda spesi)ik untuk

aktivasi neutr)il se#ara in vivo, meningkat dalam sirkulasi peri)er preeklampsia.

Iuga dilaporkan hubungan yang signi)ikan antara neutro)iil elastase plasma dan

)a#tor vin Hillebrand, penanda kerusakan endotel, pada pasien dengan

pree#lampsia. 'itokin dapat merangsang aktivasi neutro)il, ekspresi )a#tor

vonHillebrand, dan adhesi sel pada endothelium dengan hasil akhir keusakan

vas#ular $Flusi et al., 2000%.

D. %"irulina

1. De!inisi %"irulina

'e#ara komersial, lebih dikenal dengan nama Spirulina, menga#u pada

biomassa kering dari #yanoba#terium, Arthrospira platensis, dan merupakan


17/32

17

produk dari asal muasal biologisnya se#ara keseluruhan. 'umber strain spirulina,

diolah oleh produsen di merika 'erikat dan diperoleh dari niversity o) 8eQas di

ustin lgae Bulture Bolle#tion $84R%. -ibit ini, diberi label 84R1@29, yang

a"alnya diisolasi dari tambang garam alkali di dekat (el ar, Bali)ornia, oleh .

:e"in pada tahun 1@9@.

(alam penggunaan taksonomi nya, Spirulina adalah nama yang digunakan

untuk menggambarkan dua jenis Byanoba#teria terutama A. platensis dan A.

maxima, yang umumnya digunakan sebagai makanan, suplemen makanan, dan

suplemen pakan. *edua spesies ini dan spesies Arthrospira lainnya pernah

diklasi)ikasikan oleh ?eitler1, yang mengkombinasikan semua spesies

membentuk trikoma heliks ke dalam genus tunggal, 'pirulina. 'ebenarnya

sebelum ?eitler, ?omont2 telah menempatkan dua genera terpisah atas dasar

adanya septa atau divisi dalam trikoma, yaitu spesies spirulina yang tanpa septa

dan spesies rthrospira dengan septa. (alam kajian detil mor)ologi, pemeriksaan

)isiologi, dan biokimia terbaru yang me"akili genera ini, bah"a kedua genera ini

sangatlah berbeda serta bentuk3bentuk yang dapat dimakan tersebut sering disebut

Spirulina platensis, dimana genera ini memiliki banyak kesamaan dengan spesies

yang lebih ke#il lainnya seperti 'pirulina utama. Perbedaan ini juga telah

dibuktikan oleh hasil dari urutan lengkap dari gen 19' r dan +8' (#nternal

$ranscribed Spacer) antara gen 19' dan 2' yang menentukan dua strain

rthrospira dan satu strain 'pirulina. *edua strain rthrospira tersebut

membentuk #luster jarak dekat dari strain 'pirulina. $?re"shin,200C%

. M#r!#l#gi %"irulina

?anggang renik spirulina adalah multiseluler berbentuk )ilamen $benang%

yang tersusun atas sel3sel berbentuk silindris tanpa sekat pemisah $septa%, tidak


18/32

18

ber#abang dengan trikhoma $benang% berbentuk helik $berpilin% dan ber"arna

hijau kebiruan, panjang trikhoma sekitar 20 mm, sehingga terlihat dengan mata

telanjang. (iameter 13 Sm pada tipe yang lebih ke#il, sedangkan pada tipe yang

lebih besar 312 Sm. meskipun demikian, ada juga sel spirulina yang tumbuh

sampai !3!0 Sm, seperti yang ada di (anau Bhad, eksiko. 'itoplasma spirulina

mempunyai sekat pemisah $septa%. 'epta inilah yang oleh para ahli )ikologi

digunakan untuk membuat sistematika dari tipe spirulina. Pada sitoplasma

spirulina tampak adanya granular sitoplasma yang mengandung vakuola gas.

(. Peran imun#l#gi s"irulina

'pirulina mengandung protein sekitar 90, berbagai jenis polisakarida,

asam lemak esensial, vitamin dan mineral, dan senya"a )enolik. 'alah satu

protein utama yang terkandung dalam 'pirulina $1! 3 20 dari berat kering

alga% adalah C-phycocyanin, yang terdiri dari apoprotein dan chromophores

phycocyanobilin yang terikat kovalen, yang menyebabkan "arna biru pada

#yanoba#teria. 'elain Spirulina se#ara keseluruhan, beberapa bagian dari

polisakarida dan B3phy#o#yanin sudah diteliti karena mampu mempengaruhi

)ungsi kekebalan tubuh.

-. E!ek Immun#enhan,ing %"irulina

'ejumlah Produk alami memiliki e)ek immunoenhancing. &asil

ekperimen menunjukkan bah"a produk Spirulina se#ara positi) mempengaruhi

)ungsi kekebalan ba"aan dan meningkatkan sistem kekebalan tubuh seluler dan

humoral.

Polisakarida 'ul)at yang diisolasi dari ekstrak air spirulina, yang disebut

#al#iumspirulan $Ba3'p%, memperlihatkan akti)itas imunomodulator dan antivirus.

8erlebih lagi immolina, )raksi polisakarida dengan berat molekul yang tinggi

pada 'pirulina, meningkatkan ekspresi kemokin pada sel 8&P31 mono#yti#


19/32

19

manusia. Penelitian lain telah mempelajari penggunaan 'pirulina di dalam

meningkatkan respon kekebalan. Polisakarida dan phy#o#yanin dari 'pirulina

meningkatkan reproduksi sumsum tulang, pertumbuhan timus, proli)erasi sel

limpa, meningkatkan kekebalan he"an model, seperti tikus. Penelitian juga

menunjukkan bah"a 'pirulina men!-up-re!ulate sistem kekebalan tubuh dengan

#ara meningkatkan kemampuannya untuk ber)ungsi maksimal meskipun banyak

tekanan dari lingkungan yang bera#un, bakteri, dan virus. :iteratur menyatakan

bah"a phy#o#yanin dari 'pirulina merangsang hematopoiesis, dan terutama

eritropoiesis, dengan #ara menginduksi pelepasan hormon erythropoietin $4PF%.

Phy#o#yanin dan polisakarida dari 'pirulina meningkatkan antibodi dan produksi

sel darah putih. enurut Tureshi ndali $1@@9%, persentase makro)ag )agositosis

pada ku#ing meningkat saat ku#ing tersebut diberi ekstrak S. platensis yang larut

dalam air. 'elain itu, ekstrak '. platensis yang larut dalam air menyebabkan

sekresi interleukin, seperti +:31, dari makro)ag peritoneal murine, dan proli)erasi

thymo#ytes. 'elain itu, e)ek spirulina pada imunitas nonspesi)ik telah diukur pada

tingkat akti)itas sel Pembunuh lami $*%. :eukosit yang diambil dari limpa

ayam yang diberi makan 'pirulina memiliki aktivitas sel antitumor yang lebih

besar daripada he"an kontrol, mungkin disebabkan produksi sitokin sebagai

inter)eron. Penelitian pada model ayam menunjukkan peningkatan aktivitas sel

* dalam membunuh sel tumor. *apasitas makro)ag peritoneal untuk menelan

partikel lateks sudah dievaluasi pada penelitian lain, di mana makro)ag peritoneal

hilang pada tikus yang telah diberi makanan yang disuplementasi 'pirulina $10

dari makanan adalah spirulina kering% selama 10 minggu6 ada sedikit peningkatan


20/32

20

persentase )agosit dari @1, menjadi @!,@ pada in %itro. Penelitian ini juga

menemukan bah"a phy#o#yanin dari 'pirulina menghambat pelepasan histamin,

yaitu molekul bioakti) yang berhubungan dengan alergi. $?re"shin,200C%

E. ELI%A En/0me'Linke) Immun# %#r+ent Assa0*

4:+' merupakan teknik biokimia yang biasa digunakan pada bidang

imunologi untuk mendeteksi keberadaan antigen atau antibodi pada sampel yang

diuji. 8erdapat beberapa jenis metode 4:+', yaitu $-urgess, 1@@!%6

1. Met#)e ELI%A langsung

Pada metode ini antigen se#ara langsung diadsorbsikan ke suatu substrat

padat. Permukaan substrat di#u#i dan antibodi yang ditempeli en5im digunakan

untuk menunjukkan adanya antigen. &asilnya akan terlihat bila ditambah substrat.

*on)igurasi ini memerlukan anntiserum yang spesi)ik untuk antigen yang

dimaksud. ntiserum ini harus dikonjugasikan pada en5im. *eterbatasan

kon)igurasi ini berikatan dengan si)at pengikatan substrat padat dan kualitas

antibodi indikator. Pembatas utama sistem ini adalah tidak adanya )leksibilitas.

*euntungan utamanya adalah kesederhanaan sistem. *on)igurasi ini biasanya

digunakan untuk mengenali antigen.

. ELI%A tak langsung

etode ini merupakan kon)igurasi paling sederhana yang dapat digunakan

untuk mengukur titer antibodi. ntigen teradsorbsi pada substrat padat. ntibodi

primer tidak berabel dapat diperoleh dari serum atau berma#am3ma#am #airan

tubuh lain. ntibodi sekunder terikat pada en5im yang sesuai. ntibodi itu


21/32

21

biasanya disebut sebagai konjugat. &asilnya akan tampak bila ditambahkan

substrat. ntigen dan antibodi sekunder biasanya dibuat konstan dan yang

berubah adalah antibodi primer. *erapatan optik berhubungan dengan konsentrasi

antibodi primer. *elemahan utama kon)igurasi ini terletak pada tidak adanya

spesi)itas sebagai akibat bereaksi dengan antigen yang tidak murni.

(. ELI%A Penangka" Antigen atau ELI%A %an)i,h

*on)igurasi ini menggunakan antibodi yang terikat pada )ase padat untuk

menangkap antigen se#ara spesi)ik. 8erdapat sejumlah variasi lebih lanjut. Iika

tingkat antibodi harus diukur, kon)igurasi sisanya serupa dengan 4:+' tidak

langsung. Iika antigen akan diukur, dapat digunakan kon)igurasi serupa atau

indikatornya menggunakan antibodi terkonjugasi spesi)ik untuk antigennya.

ntiodi penangkap da sistem indikatornya dibuat tetap dan yang berubah adalah

konsentrasi antigennya. ntibodi monoklonal semakin banyak digunakan sebagai

antibodi pedangkan dan dalam sistem indikator. 4:+' penangkap antigen

mempunyai potensi untuk meningkatkan spesi)itas 4:+' tidak langsung asalkan

antibodi penangkapnya dpat men#egah terjadinya penempelan antigen yang ada

dalam jumlah ke#il yang dapat mengganggu spesi)itas 4:+' tak langsung.

dapun prinsip dasar pada metode 4:+' sand"i#h dapat ditunjukkan pada

gambar berikut.

-. ELI%A Penangka" Anti+#)i

*on)igurasi ini menggunakan antiglobulin yang terikat pada substrat

padat. ntibodi sampel yang diuji ditangkap dan sistem indikator menempeli


22/32

22

antigen belabel. plikasi yang paling umum misalnya, anti3+g, diikatkan

substrat padat. nti3+g ini akan menangkap +g semua spesi)isitas dari sampel

uji. *emudian ditambahkan antigen berlabel en5im, baik yang dilabeli se#ara

langsung maupun yang dilabeli le"at ikatan tak langsung seperti antibodi

monoklonal atau biotin. *eapatan optik berkaitan dengan kadar +g spesi)ik

sampe uji. da kemungkinan timbul spesi)itas yang sagat kurang karena +g

yang tertangkap akan mengenali baik epitop yang dia"etkan maupun epitop

spesi)ik pada antigen. amun, spesi)itas teknik ini tampaknya tidak menyebabkan

masalah utama.

2. ELI%A m"etiti!

8eknik ini dapat digunakan dalam sejumlah kon)igurasi dasar. *ompetisi

dapat terjadi terhadap antigen atau terhadap antibodi. Pada kompetisi antibodi

membutuhkan antigen untuk ditangkap antibodi se#ara langsung maupun le"at

antibodi spesi)ik ke substrat padat. ntibodi yang telah dikenal bersaing dengan

antibodi yang tidak dikenal untuj mendapatkan tempat penempelan pada antigen.

ntibodi yang telah diketahui dapat dilabel atau dapat dideteksi menggunakan

antibodi anti spesiesnya. 4:+' kompetiti) keadaannya tidak begitu jelas karena

antibodi yang tidak dikenal akan dijumpai baik terikat pada antigen maupun

bebas.

*adar sitokin dapat diketahui dengan menggunakan metode 4:+'.

'itokin 83 dan +3= serta sitokin +:3, +:39, +310 dapat dianalisis dengan

metode 4:+' dengan menggunakan kit yang terdiri drai sand"i#h 4:+'. 8ahap


23/32

23

pertama yaitu mengikat sitokin antibodi monoklonal anti3sitokin yang terdapat

pada "ells dari mi#rotiter plates. Pada tahap kedua, ditambahkan monoklonal

biotinylated bersamaan dengan en5im streptavidin $peroQidase atau alkaline

phospate%. ntibodi biotinylated mengikat )ase solid dari kompleks antibodi3

antigen. 'etelah inkubasi "ells di#u#i dan pengikatan en5im treptavidin dengan

biotin diikuti dengan penambahan substrat kromogenik. +ntensitas "arna yang

dihasilkan menunjukkan proporsi konsenttrasi sitokin pada sampel $'#ott,2009%.


24/32

24

BAB III

&ERAN3&A &4N%EP

A. &erangka nse"

-eberapa teori tentang terjadinya pree#lampsia telah dikembangkan tetapi

tidak satupun teori yang memuaskan, sehingga sampai saat ini

preeklampsia masih dikenal sebagai the disease o) theories.

*ehamilan

&ipertensi Fdema Proteinuria

Preeklampsia

8&1 8&2 8&17 8eg

'pirulina

+:3 10


25/32

25

B. Hi"#tesis Penelitian

1. Hi"#tesis Ma0#r

8erdapat pengaruh pemberian 'pirulina terhadap sekresi sitokin 8h1, 8h2,

8h17, 8reg pada kehamilan preeklampsia

1. Hi"#tesa Min#r

a. 8erdapat peningkatan sitokin 8reg, 8h2 dan penurunan 8h1, 8h17 pada

kehamilan preeklampsia dengan pemberian spirulina

b. 8erdapat peningkatan sitokin 8h1, 8h17 pada kultur pla#enta yang terpapar

pree#lampsia

#. erdapat peningkatan sitokin 8reg dan 8h2 pada kultur pla#enta yang terpapar

preeklampsia


26/32

26

BAB I5

MET4DE PENELITIAN

A. Ran,angan Penelitian

an#angan penelitian yang menggunakan dalam bentuk analitik

eksperimental dengan pengambilan sampel pla#enta untuk mengetahui e)ek

pemberian spirulina terhadap sekresi sitokin +:310 pada kehamilan preeklampsia

dibandingkan dengan #ontrol normal. ntuk mengukur jumlah sekresi +:310

peneliti terlebih dahulu melakukan kultur sel tro)oblast dari plasenta pasien

preeklampsia, lalu dari serum yang dihasilkan akan diba#a dengan 4:+' reader ,

sehingga akan terba#a jumlah sitokin yang disekresikan.'elanjutnya peneliti akan

melakukan intervensi dengan pemberian ekstrak spirulina dan membandingkan hasil

sekresi sebelum dan sesudah diberikan perlakuan.

B. P#"ulasi )an %am"el Penelitian

Populasi dan sampel penelitian ini akan dijabarkan sebagai berikut;

1. P#"ulasi Penelitian

Populasi merupakan seluruh objek atau objek penelitian yang memiliki

kuantitas dan karakteristik tertentu yang ditetapkan oleh peneliti untuk dipelajari

dan ditarik kesimpulan. Populasi dalam penelitian ini adalah seluruh sitokin yang

dihasilkan oleh sel tro)oblas dari plasenta ibu hamil yang mengalami

preeklampsia.

. %am"el Penelitian


27/32

27

-esarnya sampel dalam penelitian yang akan dilakukan menggunakan #ara

non probability samplin! dengan metode consecuti%e. Consecuti%e samplin!

adalah metode pemilihan sample dengan menetapkan subjek yang memenuhi

kriteria penelitian dimasukkan dalampenelitian sampai kurun "aktu tertentu,

sehingga jumlah responden dapat terpenuhi. dapun kriteria inklusi dalam

pemilihan responden yang akan dijadikan sampel penelitian adalah seorang ibu

hamil yang mengalami preeklampsia. 'edangkan kriteria eksklusi dari penelitian

ini adalah ibu hamil dengan dengan ri"ayat diabetes mellitus, kehamilan dengan

diabetes mellitus, kehamilan dengan penyakit ginjal sebelumnya serta kehamilan

dengan ri"ayat hipertensi.

C. 5aria+el Penelitian

Gariable dalam penelitian ini adalah

&. Gariabel bebas adalah variable yang menjadi sebab timbulnya atau berubahnya

variable terikat. Gariabel bebas dalam penelitian ini adalah pemberian spirulina

'. Gariabel terikat adalah variable yang dipengaruhi atau menjadi akibat karena

adanya variable bebas. Gariabel terikat pada penelitian ini adalah jumlah sekresi

interleukin 10 yang dihasilkan oleh sel tro)oblas dari plasenta pasien

preeklampsia.

D. L#kasi )an 6aktu Penelitian


28/32

28

:okasi penelitian ini adalah bertempat di laboratorium )isiologi akultas

*edokteran niversitas -ra"ijaya alang. Penelitian ini dilaksanakan pada bulan

Iuli O Fktober 201.

E. De!inisi 4"erasi#nal

1. Preeklampsia adalah kehamilan dengan tekanan darah E 10/@0 mm&g

disertai proteinuria $pemeriksaan kualitati) E A1% setelah umur kehamilan 20

minggu $ngsar,200;Bunningham et al,200!%

2. mur kehamilan adalah umur kehamilan yang dihitung dari hari pertama haid

terakhir $&P&8% atau umur kehamilan berdasarkan pemeriksaan '? yang

dilakukan sebelum umur kehamilan 20 minggu $Bunnningham et al., 200!%

. 'pirulina mengandung protein sekitar 90, berbagai jenis polisakarida, asam

lemak esensial, vitamin dan mineral, dan senya"a )enolik yang di periksa dengan

metooda 4n5yme3:inked +mmuno3'orbent ssay $4:+'%, dilaksanakan di

:aboratorim isiologi niversitas -ra"ijaya alang.

. 'itokin adalah protein terlarut yang dapat berinteraksi dengan reseptor spesi)ik

sel. 'itokin juga berpartisipasi dalam pertumbuhan dan aktivasi sel3sel imun serta

memediasi respon3respon imun seperti in)lamasi, dll.

7. Pr#se)ur Pengam+ilan )an Pemeriksaan %am"le &a)ar IL'18

+bu hamil yang memenuhi kriteria sebagai sampel penelitian akan diberikan

penjelasan $in)ormed #onsent% tentang penelitian. pabila setuju ikut dalam


29/32

29

penelitian mereka diminta menandatangani )ormulir persetujuan ikut serta dalam

penelitian yang telah disediakan.

1. Is#lasi )an &ultur %el Tr#!#+las Plasenta

Iaringan plasenta pasien preeklampsia diperoleh dari umah 'akit 'iolam,

'urabaya dengan persalinan melalui operasi se#tio #aessaria. (isiapkan botol

berisi larutan #ord splution dari re)rigator $suhu UB%. 'egera setelah kelahiran,

pla#enta dipotong dan langsung dimasukkan ke dalam larutan #ord solution.

etode isolasi dan kultur sel tro)oblast dilakukan berdasarkan modi)ikasi

dari metode isolasi se#ara en5imatik menurut Iones $1@@9%. 'ebelumnya bagian

dasar plate kultur 9 "ell dilapisi #over glass dan ditetesi dengan V0,! ml gelatin

$0,2% dan diinkubasi selama V0390 menit. Iaringan pla#enta di#u#i

menggunakan P-'3 steril $P-'3% p& 7, yang mengandung antibiotik pen3

strep dalam #a"an petri sampai terbebas dari darah. Iaringan dipotong3potong

sampai ke#il V 2mm dan dibilas dengan P-' steril p& 7, yang mengandung

pen3strep, kemudian dipipetting dan disentri)ugasi pada 2!00 rpm selama 10

menit. 'upernatan dibuang dan pelet + diresuspensi dengan !m: medium kultur

serum )ree $31@@ A pen3strep%, dipipeting dan disentri)ugasi pada 2!00 rpm

selama 10 menit.

'upernatan dibuang dalam pelet ++ diresuspensi dengan medium kultur

yang mengandung serum $31@@ A pen3strep A 10 -'%, diabil sebanyak V!00

µ: potongan jaringan dimasukkan pada plate kultur 9 "ell dan diinkubasi pada

inkubator BF2 ! suhu 7NB selama 0 menit. (itambahkan 1,! ml medium 3


30/32

30

1@@ yang mengandung -' 10 lalu diinkubasi pada inkubator BF2 !, suhu

7UB. Penggantian medium kultur dilakukan setelah 2 jam dengan 31@@ A 10

-' kemudian ditumbuhkan kembali pada inkubator BF2 ! suhu 7UB selama

hari kemudian dipanen.

. Pengukuran &a)ar %it#kin Interleukin 18 )engan met#)e ELI%A

*adar +:310 pada kultur media dikuanti)ikasi menggunakan immunoassay

dengan metode 4:+'. Pengukuran +:310 dilakukan dengan menggunakan dua

antibodi monoklonal yaitu #apture antibody dan re#apture andibody. (ilakukan

#oating antigen dengan menggunakan 100 µl #alibrator diluent ++ untuk standart.

(itambahkan medium sampel yang telah disentri)ugasi $!0 µl% dan antibodi

primer $!0 µl%, sedangkan penambahan protein standar sebanyak 100 µl $&uman

+:310%. 'elanjutnya diinkubasi pada mikroplate @9 "ell selama over noght pada

UB. Plate @9 "ell dikeluarkan dari re)rigrator dan didiamkan pada suhu ruang

selama 0 menit. 'elanjutnya di#u#i dengan "ahing bu))er QW200 µl lalu

diinkubasi dengan antibodi sekunder ?oat anti &uman +g? yang berlabel biotin

dalam P-' yang mengandung -' $-ovine 'erum lbumin% 1 $16100% W100

µl, diinkubasi pada shaker selama 1 jam pada suhu ruangan. (i#u#i dengan

"ashing bu))er Q W200 µl dan ditetesi 'trepavidin &P $161!00% diinkubasi

selama 0 menit. (i#u#i dengan "ashing bu))er Q W200 µl dan diinkubasi

dengan substrat bu))er dan - W100 µl selama 0 menit dalam ruang gelaplalu


31/32

31

diteteskan stop rea#tion, selama 10 menit dan diba#a pada 4:+' reader pada λ

!0 nm.

(. Pr#se)ur ekstrak s"irulina

'pirulina dibiakkan dalam media tumbuh alami air laut dengan "aktu

pembiakan 1 hari. 'etelah dilakukan pemamenan, spirulina dikeringkan dengan

menggunakan sinar matahari. -entuk spirulina yang akan diekstrak berbentuk

serbuk spirulina kering spirulina kering ukuran 10 mesh yang didapat dengan

menghaluskannya dengan mortar.

lat yang dipakai berupa beker glass, lbu erlenmeyer dengan berbagai

volume, tabung reaksi besar, alat sentri)ugasi, lemari pendingin, dan alat

spektro)otometri. Gariabel tetap dalam penelitian ini adalah massa spirulina,

ke#epatan sentri)ugasi, lama sentri)ugasi, volume solvent dan volume bu))er.

Gariabel berubah dalam asam asetat 70, 7!, dan C0 ammonium sul)at !0,

!!, dan 90, dan air. 8iap variabel, dibuat rangkap atau triplikat.

Prosedur kerja proses dimulai dengan menghaluskan spirulina hingga ukuran

10 mesh dengan menggunakan mortar, kemudian men#ampur serbuk spirulina

tersebut dengan larutan bu))er )os)at p& 7.0 dan disimpan dalam re)rigrator

selama 2 jam, kemudian disentri)ugasi pada 9.000 rpm selama 90 menit. &asil

sentri)ugasi berupa padatan dibuang dan bagian #airan diampurkan dengan solvent

sesuai dengan variabel, kemudian disentri)ugasi lagi dengan ke#epatan 9.000 rpm

selama 90 menit. Pendugaan hasil penampakan untuk masing3masing jenis


32/32

32

senya"a yang diperoleh dari hasil ekstraksi berdasarkan pola absropsi pada

panjang gelombang 91039!0 nm.

ji kelarutan Phy#o#yanin terhadap temperatur dan p&, dan uji kestabilan

yang dilakukan selama C hari dengan monitoring tiap 2 jam dengan

menggunakan alat spektro)otometri. *elarutan Phy#o#yanin dikaji pada p& asam

$2,,% dengan menggunakan &B: dan basa $10,11,12% dengan menggunakan

aF&. *elarutan Phy#o#yanin dikaji terhadap temperatur dengan penyimpanan

Phy#o#yanin pada temperatur kamar $27V 2⁰B% dan pada temperatur re)rigrator

$1⁰B 3 1 7⁰B%. ekstrak Phy#o#yaninyang telah diuji kelarutannya terhadap

temperatur disimpan selama C har untuk diujikestabilannya. 'etelah interval

"aktu 2 jam, kosentrasi Phy#o#yanin diukur absorbansinya.

3. Teknik Analisia Data

(alam kuantitai) kadal +:310 hasil 4:+' dibandingkan pada setiap

kelompok perlakuan menggunakan analisa Garian satu arah $Fne Hay FG%

menggunakan 'P'' $'tatisti# Pa#kage or 'osial '#ien#e% versi 12 )or "indo"s.

(ata ekspresi +:310 diperoleh dengan #ara menghitung nilai positi) ber"arna

#oklat pada daerah sitoplasma sel tro)oblast yang dinyatakan dalam bentuk

persentase dan dianalisis sevara deskripti).

proposal ta mey

Documents