proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals
TRANSCRIPT
![Page 1: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/1.jpg)
PROTEÏNES: DETECCIÓ, ANÀLISI I
MALALTIES RENALS
Marta Portillo Carrasquer
Institut Antoni Martí i Franquès
Nati Arnal Babiloni
![Page 2: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/2.jpg)
Objectiu: Conèixer a fons què són les proteïnes. Fer un
estudi sobre tres proteïnes i les malalties:
- Albúmina proteïnúria
- Gammaglobulina glomerulonefritis
- Hemoglobina hematúria
Hipòtesi: Potser a través de la identificació i la
quantificació de proteïnes que trobem a l’orina podem
saber si una persona pateix una malaltia renal.
![Page 3: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/3.jpg)
Les proteïnes són polímers d’aminoàcids units
mitjançant enllaços peptídics.
Trobem tres tipus d’aminoàcids: essencials, no
essencials i condicionals.
Els aminoàcids són sòlids, cristal·lins, amb un punt de
fusió elevat i solubles en aigua. Es classifiquen en
quatre grups.
![Page 4: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/4.jpg)
Les proteïnes s’organitzen en quatre estructures:
Tenen múltiples funcions.
![Page 5: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/5.jpg)
ELS RONYONS
Regulació del líquid extracel·lular del cos orina.
Estructura macroscòpica i microscòpica.
![Page 6: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/6.jpg)
ALBÚMINA I PROTEÏNÚRIA
Albúmina:
- És la proteïna més freqüent al plasma.
- Fa funcions molt importants.
- Es sintetitza a les cèl·lules hepàtiques.
- Petita, simètrica i carregada negativament.
Proteïnúria és la presència en excés de proteïnes a
l’orina.
- Símptomes
- Causes
- Tipus:
Aïllada
Aïllada persistent
Associada
![Page 7: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/7.jpg)
GAMMAGLOBULINA I GLOMERULONEFRITIS
Gammaglobulina tipus de globulina
- Transport, coàguls i defensa.
Poques deficiència immune.
Moltes càncer de sang.
- Cèl·lules hepàtiques.
Són immunoglobulines (anticossos).
Glomerulonefritis: Inflamació de glomèruls.
- Símptomes
- Causes
- Tipus:Aguda (de sobte)
Crònica (gradualment)
![Page 8: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/8.jpg)
HEMOGLOBINA I HEMATÚRIA
Hemoglobina Eritròcits (pigment “Hemo”protoporfirina + un àtom de ferro)
- Transport 𝑂2 i 𝐶𝑂2- Estructura Quatre subunitats (cadenes)
90% capacitat
Hematúria: aparició d’hemoglobina a l’orina que prové dels ronyons o del tracte urinari.
- Símptomes
- Causes
- Tipus:
Moment
Quantitat
Duració
Inicial, terminal o total
Microscòpica o macroscòpica
Transitòria o permanent
![Page 9: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/9.jpg)
PART PRÀCTICA
DETERMINACIÓ DE LA
PRESÈNCIA DE “GFP” EN L’E. COLI
ANÀLISI D’ORINA AMB
TIRES REACTIVES
QUANTIFICACIÓ DE PROTEÏNES
![Page 10: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/10.jpg)
DETERMINACIÓ DE LA PRESÈNCIA DE “GFP” EN
L’E. COLI
E. Colis genèticament modificats gen GFP (Green
Fluorescent Protein) d’una medusa.
GFP 230 aminoàcids i pesa uns 27 KDa.
Objectiu: l’electroforesi amb gel de poliacrilamida
Gel:
Stacking al 5% (porus grans)
Running al 10% (porus petits)
![Page 11: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/11.jpg)
Passos a seguir:
Dissolució running Aigua Stacking + pinta (pous)
Gelificat retirar pinta muntar
Carregar pous
Buffer
Corrent (200 V durant 1 hora).
![Page 12: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/12.jpg)
![Page 13: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/13.jpg)
Passat el temps desmuntar i tenyir.
Fer rentades (àcid acètic i 2-propanol).
Observació.
Conclusions.
Marcador
E. Coli dH5α E. Coli + GFP
![Page 14: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/14.jpg)
ANÀLISI D’ORINA AMB TIRES REACTIVES
Objectiu: observar substàncies que no haurien
d’aparèixer a l’orina.
Tires reactives d’orina.
- Glucosa
- Leucòcits
- Nitrit
- Proteïna
- Urobilinogen
- Sang
![Page 15: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/15.jpg)
Passos a seguir:
Obtenir orina fresca.
Introduir tira (2 o 3 segons).
Esperar 1 minut.
Observar i comparar resultats.
![Page 16: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/16.jpg)
Primers dos pacients:
Conclusions: Ambdós pacients estan sans.
TUB 1 TUB 2
GLU (glucosa) Normal (groc) Normal (groc)
LEU (leucòcits) Normal 1+~ 10-25 leu/ml Normal 1+~ 10-25 leu/ml
NIT (nitrit) Negatiu (blanc) Negatiu (blanc)
PRO (proteïna) Negatiu (groc) Negatiu (groc)
UBG (urobilinogen) Normal 1 + 1 (17) (rosat) Normal 1 + 1 (17) (rosat)
ERY/HB (sang) Negatiu (groc) Negatiu (groc)
![Page 17: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/17.jpg)
Els altres dos pacients:
Conclusions:
- TUB 3: Alt nivell glucosa i sang Possible diabetis
i hematúria.
- TUB 4: Proteïnes Malaltia renal (proteïnúria)
TUB 3 TUB 4
GLU (glucosa) 2 + 100 (5,5) mmol/l (verd) Normal (groc)
LEU (leucòcits) Normal 1+~ 10-25 leu/ml Normal 1+~ 10-25 leu/ml
NIT (nitrit) Negatiu (blanc) Negatiu (blanc)
PRO (proteïna) Negatiu (groc) 3 + 500 mg/dl (verd fort)
UBG (urobilinogen) Normal 1 + 1 (17) (rosat) Normal 1 + 1 (17) (rosat)
ERY/HB (sang) 4 + 250 Ery/microlitre (verd fort) Negatiu (groc)
![Page 18: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/18.jpg)
QUANTIFICACIÓ DE PROTEÏNES
Objectiu: Saber la quantitat de proteïna que hi ha en E.
Coli dH5α i en E. Coli + GFP.
BSA (albúmina bovina) recta de regressió.
Espectrofotòmetre
- Intensitat de la llum.
- Absorbància.
![Page 19: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/19.jpg)
Passos a seguir:
8 mostres
Agafar 20 microlitres de mostra i afegir 980
microlitres de Bradford posar-ho a la cubeta.
Esperar 10 minuts.
Carregar l’espectrofotòmetre (595 nanòmetres).
1 d’aigua (la primera indica el 0)
4 albúmina
1 d’E. Coli + GFP
1 d’E. Coli dH5α
1 de medi de cultiu
![Page 20: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/20.jpg)
Resultats:
0 mg/ml H2O → 0
0’1 mg/ml BSA → 0’102
0’2 mg/ml BSA →0’162
0’3 mg/ml BSA → 0’257
0’4 mg/ml BSA → 0’291
E. Coli dH5𝛼→ 1’362
E. Coli amb GFP → 1’501
Medi → 0’02
Conclusió: Repetir Diluir les mostres.
![Page 21: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/21.jpg)
Repetir l’experiència.
Resultats:
0 mg/ml H2O → 0
E. Coli dH5𝛼 1:10→ 0’447 Menys el medi (0’02) → 0’427
E. Coli + GFP 1:10→ 0’484 Menys el medi (0’02) → 0’444
E. Coli dH5𝛼 1:20→ 0’205 Menys el medi (0’02) → 0’185
E. Coli + GFP 1:20→ 0’242 Menys el medi (0’02) → 0’222
Conclusions: Aquest cop està tot correcte.
![Page 22: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/22.jpg)
![Page 23: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/23.jpg)
Conclusions
Càlculs:
E. Coli dH5𝛼 1:20 0,26 mg/ml E. Coli dH5𝛼 5,2 mg/ml
E. Coli + GFP 1:20 0,29 mg/ml E. Coli + GFP 5,8 mg/ml
![Page 24: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/24.jpg)
CONCLUSIONS
Es demostra la meva hipòtesi: podem saber si una
persona pateix una malaltia renal observant les proteïnes
de l’orina.
Les proves es poden utilitzar per diagnosticar malalties ja
que són fiables i eficaces.
Ens aporten molta informació útil.
Són molt específiques.
Serveixen per millorar o salvar la vida de molts pacients
degut a que podem fer un diagnòstic molt acurat.
![Page 25: Proteïnes: anàlisi, detecció i malalties renals](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022051710/5a650b717f8b9ab5218b4a03/html5/thumbnails/25.jpg)
GRÀCIES PER LA VOSTRA ATENCIÓ.