proteini za farmaciju 2013.ppt
TRANSCRIPT
![Page 1: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/1.jpg)
PROTEINI
Dušica PavlovićBiohemija, 2006St 1083-1094St 1110-1122
![Page 2: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/2.jpg)
Centralno mesto biohemije u odnosu na sve ostale “nauke o životu”
![Page 3: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/3.jpg)
Sadržaj predavanjaStruktura u uloga proteinaŽivotni ciklus proteina ćelijeSinteza proteina i posttranslaciona modifikacijaNivoi strukture proteinaŠaperon sistemiGreške u sklapanju proteinaRazgradnja proteina u organizmuIntracelularna degradacija proteinaProteini plazmeFunkcije proteina plazmePromene koncentracije proteina u plazmiSpecifični proteini plazmeProteini u ostalim telesnim tečnostima
![Page 4: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/4.jpg)
Grč. Proteos – prvi, primarni, najvažniji Naziv protein uveo je Berzelius, a često se koristi tetrmin
belančevine Oligopeptidi do 10AK; Polipeptidi sadrže 10 do 100
aminokiselinskih ostataka(Proteini preko 100 AK) Bakterija E. Coli sadrži oko 3000 različitih proteina a čovek
>1 000 000 Najaktivniji su biomolekuli – svi životni procesi odvijaju se u
strukturama proteina ili uz njihovo učešće Dnevna potreba čoveka iznosi 100-110g proteina
![Page 5: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/5.jpg)
Proteini su pored vode najzastupljeniji biomolekuli u ćeliji
![Page 6: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/6.jpg)
Proteine grade alfa amino kiseline L-konfiguracije za sintezu prteina kriste se 20 AK
![Page 7: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/7.jpg)
Nivo proteina u ćeliji
Količinu proteina u ćeliji određuju:• Nivo transkripcije
•Nivo translacije
•Degradacija proteina
Transkripcija se odvija u jedruTranslacija u ribozomimaPostranslaciona modifikacija u citozolu
![Page 8: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/8.jpg)
Proteini – opšte karakteristike
50-70% suve težine ćelije anabolizam ↔ katabolizam su u ravnoteži (120 g/dan) Poluživot (meri se satima, danima)–ćelijski i plazma proteini;(meri se godinama)–strukturni proteini Sinteza: jetra, gastrointestinalni trakt, retikuloendotelni sistem Razgradnja: jetra, bubreg, digestivni trakt. Uglavnom su makromolekuli –MM od 6 000 do nekoliko miliona Prosti i složeni proteini Monomeri i polimeri (homo i heteropolimeri)
![Page 9: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/9.jpg)
Složeni (konjugovani) proteini
Hromoproteini (hem) Metaloproteini (metalni ioni) Fosfoproteini (fosfat) Lipoproteini (lipidi) Glikoproteini, proteoglikani (ugljenihidrati) Nukleoproteini (nukleinske kiseline)
![Page 10: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/10.jpg)
Replikacija DNK
![Page 11: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/11.jpg)
![Page 12: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/12.jpg)
Informacija za aminokiselinsku sekvencu proteina se nalazi u sekvenci nukleotida u određenom
segmentuDNK (gen)
![Page 13: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/13.jpg)
![Page 14: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/14.jpg)
![Page 15: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/15.jpg)
GENOMIKA / PROTEOMIKA
PROTEOMPROTEOM
Ukupna nasledna Ukupna nasledna informacijainformacija
GENOMGENOM
![Page 16: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/16.jpg)
![Page 17: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/17.jpg)
Aktivnost i struktura proteina determinišu fenotip
![Page 18: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/18.jpg)
![Page 19: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/19.jpg)
Životni ciklus proteinaNa račun informacije koju nosi DNA vrši se sinteza proteina
mRNA Protein
Proteolytic CleaveageAcylationMethylationPhosphorylationSulfationSelenoproteins UbiquinationGlycolisation
Transport
Oštećenje -free radicals
Razgradnja
Uticaj faktora sredine-chemicals-radioactiivty
Posttranslaciona modifikacija
U ćelijske organele ili u ekstrćelijski prostor
Pakovanje
![Page 20: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/20.jpg)
Post-translational modification
Autophosphorylation, phosphorylation, ubiquitination, multiubiquitination, N-acetylation, O-glycosylation, N-glycosylation,nitrozilacion methylation, carboxymethylation, palmitoylation, unknown
![Page 21: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/21.jpg)
![Page 22: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/22.jpg)
Kombinacijom blokova od 20 aminokiselina + alternativni splajsing + alternativni promotor + postranslaciona
modifikacija > 1 000 000 različitih proteina
![Page 23: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/23.jpg)
![Page 24: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/24.jpg)
Alternativni promotor objašnjava varijabilnost strukture eukariotskih promotora odredjenih gena koji kodiraju različitu regulatornu poruku u datoj DNK kodirajućoj sekvenci
A B C
D EF
BC
BC
1
2
12
![Page 25: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/25.jpg)
![Page 26: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/26.jpg)
![Page 27: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/27.jpg)
ULOGE (dinamičke i strukturne) Strukturna i potporna uloga: u izgradnji citoskeleta
(aktin, tubulin, spektrin); u izgradnji unutarćelijskog matriksa (proteoglikani, kolagen, elastin, integrini.
Transportna: proteini krvne plazme, ali i svi drugih proteina koji učestvuju u transportu molekula kroz ćelijsku membranu (transportuju: kiseonik, lipide, proizvode metabolizma, jone, vitamine, hormone, lekove, otrove)
Katalitička: svi enzimi su proteinske strukture Regulatorna: Veliki broj hormona je proteinske prirode,
svi do sada izolovani faktori rasta su proteinske prirode, receptori za hormone i faktore rasta su proteini, transkripcioni faktori;
Održavanje koloidno-osmotskog pritiska (albumini)
![Page 28: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/28.jpg)
Zaštitna: antitela su po strukturi proteini; skoro svi faktori koagulacije su proteini; Rezervni proteini : ovoalbumin, gluten,
kazein, feritin Održavanje acido-bazne ravnoteže
(hemoglobin) Omogućavaju kretanje i kontraktilnost:
flagelini, aktin, miozin i sl. Veliki broj otrova su proteini: toksin
difterije, zmijski otrov
![Page 29: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/29.jpg)
Struktura proteina
primarna struktura (polipeptidni lanac) sekundarna struktura (α-i β-zavojnica) tercijarna struktura kvarterna struktura (vise subjedinica) superkvaternerna struktura
![Page 30: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/30.jpg)
![Page 31: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/31.jpg)
Primarna struktura proteina
Primarna struktura predstavlja broj, vrstu, redosled i raspored amino kiselina u polipeptidnom lancu.
Čini je peptidna veza, koja se uspostavlja između karboksilnog kraja jedne i amino kraja sledeće amino kiseline.
Ova veza je stabilna i može se raskinuti reakcijama kisele hidrolize ili delovanjem specifičnih proteolitičkih enzima-proteaza. Prva primarna struktura ustanovljena je za insulin 1958god.
![Page 32: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/32.jpg)
Peptidna veza
![Page 33: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/33.jpg)
![Page 34: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/34.jpg)
Polipeptidni lanac ima N-i C-kraj
![Page 35: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/35.jpg)
U okviru primarne strukture može postojati razlika, što znači da proteini istih funkcija (najčešće enzimi) mogu pokazivati minimalne razlike unutar vrste (intra species) ili između različitih vrsta (inter species) proteini.
Mogu imati potpuno različite funkcije, a pokazivati veliku sličnost u sekvencama, što je označeno kao invarijante (proteazomi i histoni).
Familije proteina pokazuju strukturnu i funkcionalnu homologiju – plimorfizam (familije proteaza: tripsin, himotripsin, elastaza; nespecifična holin esteraza).
Mutacije u primarnoj strukturi mogu značajno funkcionalno umanjiti vrednost jednog proteina, kakav je primer srpasta anemija.
![Page 36: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/36.jpg)
Male promene u primarnoj strukturi proteina jakose odražavaju na njihovu funkciju
![Page 37: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/37.jpg)
![Page 38: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/38.jpg)
Funkcinalne grupe u molekulu proteina
Hidrofilne grupe Hidrofobne grupeKarboksilna (-COOH) Metil (-CH3)
Karbonilna (>C=O) Metilenska (-CH2)
Hidroksilna (OH) Etil (-C2H5)
Aldehidna (-CHO) Propil (-C3H8)
Amino (-NH2) Fenil (-C6H5)
Imino (>NH)Amidna (-CONH2)
Sulfhidrilna (-SH)
Hemijske osobine proteina zavise od amino, karbksilne i drugih funkcionalnih grupa, koje nisu angažovane u stvaranju peptidnih veza
![Page 39: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/39.jpg)
Osobine proteina zasnovane na primarnoj strukturi Rastvoreni proteini su polivalentni joni.Njihova negativna
naelektrisanja potiču od karboksilnih anjona u bočnim lancima glutaminske I asparaginske kiseline.
Pozitivne naboje daju bočni lanci baznih aminokiselina: arginin,lizin I histidin
Promenom PH vrednosti može se uticati na naelektrisanje proteina Izoelektrična tačka (IT) je ona vrednost PH pri kojj je broj + jednak
broju – naboja (jonozacija proteina je najmanja, kretanje u električnom polju najsporije)
Ako u proteinu preovlađuju bazne AK ITće biti u baznoj sredini i obrnuto
Proteini se najlakše talože na IT. Taloženje može biti reverzibilno (isoljavanje) i ireverzibilno (denaturacija proteina)
![Page 40: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/40.jpg)
SEKUNDARNA STRUKTURA
Obrazuje se uglavnom na bazi stvaranjavodoničnih veza između atoma koji se nalaze usastavu peptidne veze koji se nalaze relativnoblizu u polipeptidnom lancu. Vodonične veze se grade između karbonilnogkiseonikovog atoma svakog prvog ostatakaaminokiseline u nizu i atoma vodonika iz NHgrupesvake četvrte amino kiseline. Glavni vidovi sekundarne strukture su -spirala(α -heliks) i β- nabrana struktura.
![Page 41: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/41.jpg)
Linus Pauling i Robert Corey su(1951)predvideli(prvo)α-heliksa (potom) i ß-niz (pločicu)!
![Page 42: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/42.jpg)
Sekundarna struktura Sekunadrna struktura se može formirati u okviru istog
lanca ili između različitih lanaca, stvaranjem vodoničnih ali i drugih sekundarnih veza
Ukoliko se formira u istom lancu onda dolazi do obrazovanja vodonične veze između svake prve i četvrte amino kiseline formirajući spiralnu strukturu, tzv. heliks. On može biti zavijen ulevo ili udesno
Ukoliko dolazi do stvaranja vodonične veze između različitih polipeptidnih lanaca to je presavijena struktura -ploča tj -nabrana struktura (cik-cak)
![Page 43: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/43.jpg)
Sekundarna struktura proteina
•α–heliks
![Page 44: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/44.jpg)
Slika Alfa helikoidna struktura. Vodonične veze su paralelne sa osnovnim lancem
Alfa heliks ima 3.6 ostatka AK po okretu
![Page 45: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/45.jpg)
![Page 46: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/46.jpg)
![Page 47: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/47.jpg)
β-nabrana struktura
Postojanje strukture pretpostavili i opisali Pauling i Corey, 1951
Nastaje formiranjem vodoničnih veza između paralelnih i antiparalelnih lanaca
Segmenti sa konformacijom nabrane strukture mogu biti dužine od 2 do 12 aminokiselinskih ostataka
![Page 48: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/48.jpg)
tip sekundarne strukture tip sekundarne strukture
Kraći tip prikazivanja ovih struktura
Slika Tipovi sekundarnih struktura proteina
![Page 49: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/49.jpg)
•β-nabrana struktura
Sekundarna struktura proteina
![Page 50: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/50.jpg)
![Page 51: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/51.jpg)
![Page 52: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/52.jpg)
• Polipeptidni lanac, koji u sebi već sadrži delove sa sekundarnom strukturom, jesposoban da se u celini izuvija u prostoru izauzme položaj koji odgovara najstabilnijoj konformaciji, pri datim uslovima, koji se naziva tercijerna struktura.
• U interakciju stupaju bočni nizovi ostataka aminokiselina koji su u polipeptidnom lancu dosta udaljeni jedan od drugoga
TERCIJERNA STRUKTURA
![Page 53: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/53.jpg)
Tercijarna struktura
Tercijarna struktura predstavlja viši oblik organizacije proteinskog lanca u prostoru i čini osnovu podele proteina na fibrilarne i globularne.
Fibrilarni proteini su veoma dugi (miozin, kolagen, keratin), nerastvorljivi su u vodi i lako se talože solima lakih metala
Globularni proteini su loptastog ili elipsoidnog izgleda (mioglobin,albumini, globulini,enzimi). Rastvorljivi su u vodi.
![Page 54: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/54.jpg)
Disulfidne veze
Vodonične veze između
peptidnih grupa
Vodonične veze između dva lanca
Hidrofobnainterakcija
Jonska vezaVodonične veze
između bočnih lanacai peptidnih grupa
Slika Tipovi nekovalentnih interakcija u formiranju tercijalne strukture proteina
![Page 55: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/55.jpg)
Elektrostatičke interakcije
Hidrofobne interakcije
Kovalentne veze (disulfidne veze)
U stabilizaciji tercijerne strukture proteina poredvodonične veze veliku ulogu i drugi vidoviinterakcije bočnih nizova
![Page 56: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/56.jpg)
![Page 57: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/57.jpg)
oksidovani Lys koji povezujelance obezbeđuje krutostkolagena
![Page 58: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/58.jpg)
Globularni proteiniSrukturne karakteristike• Većina ostaka polarnih kiselina okrenuto je prema spoljaa polarne grupe su maksimalno izložene rastvaraču.• Većina hidrofobnih ostataka su unutar proteinskogmolekula i interaguju međusobom.• Proteinski molekul se na taj način zgušnjava.• Haotična struktura nazvana struktura slučajnog klupka“random coil” nije slučajna.• Strukture globularnih proteina nisu statične.• Različiti elementi strukture i strukturni domeni proteina,kreću se u različitim pravcima.
![Page 59: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/59.jpg)
Pravilna tercijarna struktura proteina je od egzistencijalnog značaja za ćeliju.
Ona je kod enzima odlučujuća za stvaranje enzim-supstrat kompleksa, kod hormona i receptora za proces prepoznavanja, u transportnim proteinima za obavljanje normalne funkcije vezivanja i transporta materija.
Izmenjena tercijarna struktura može neki protein učiniti neprepoznatljivim, stranim za organizam i time dovesti do pojave bolesti.
![Page 60: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/60.jpg)
![Page 61: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/61.jpg)
KVATERNERNA STRUKTURA Nekoliko polipeptidnih lanaca se mogu međusobnopovezati gradeći pri tome kvatenernu strukturu,
tako dobijene strukture se nazivaju kompleksi ili agregati
U okviru tog kompleksa, svaki polipeptidni lanacpredstavlja jednu podjedinicu
podjedinica ima očuvanu primarnu, sekundarnu i tercijernu strukturu
stabilizovana je uglavnom vodoničnim vezama i hidrofobnim intrakcijama između polipeptinih lanaca koje predstavljaju podjedinice
moguće su sve vrste interakcija koje stabilizuju tercijernu strukturu
![Page 62: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/62.jpg)
Kvaternerna struktura
Interakcija između više proteinskih lanaca uslovljava stvaranje kvaternerne strukture proteina.
Tipovi kvaternerne strukture su: dimeri, tetrameri, filamenti od više zajednički uvijenih heliksa (kolagen), filamenti od paralelnih heliksa (keratin). Svaka polipeptidna jedinica se naziva subjedinica ili protomer, a nastali protein je oligomer
Subjedinice se vezuju nekovaletnom interakcijom (vodonične veze, jonske, hidrofobne interakcije)
![Page 63: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/63.jpg)
![Page 64: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/64.jpg)
![Page 65: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/65.jpg)
![Page 66: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/66.jpg)
Šaperoni• In vivo, šaperoni pomažu da se proteini, označeni kao proteini saspecijalizovanom funkcijom, vežu međusobom na adekvatan i korektan način.
![Page 67: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/67.jpg)
šaperon sistemi (heat shock) U formiranju tercijarne a posebno kvaternerne strukture
proteina u ćeliji od pomoći su specifični sistemi koji se nazivaju molekularni vodiči ili šaperon sistemi.
Oni imaju zadatak da pomognu u formiranju tercijarne strukture novostvorenog proteina i da spreče druge neželjene transformacije proteina, kao što je agregacija sa drugim proteinima putem hidrofobnih grupa.
Šaperoni imaju izgled šuplje cevi koju izgrađuju dva prstena sačinjena od po sedam proteina Hsp 70s i Hsp 60s (zajednički poznati kao GroEL).
Jedan manji protein (GroES) (40s) predstavlja «kapu», tj. poklopac koji se otvara da bi protein ušao. U šupljini se nalazi malo sklonište u kome se smešta novopristigli protein
![Page 68: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/68.jpg)
Ribozomi
Novosintetisaniprotein
Šaperon
Protein sa definisanom tercijarnom strukturom
![Page 69: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/69.jpg)
Delovanje šaperona za vreme prenosa proteina
![Page 70: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/70.jpg)
Molekularni šaperonprotein koji pomaže strukturiranju inekovalentnom združivanju drugihproteinskih struktura in vivo, a nepredstavlja dеo nastale strukture(uredbeni protein, engl. chaperon)šaperonin (uređivački protein, engl.chaperonin): protein unutar kojega seodvija strukturiranje drugih proteina
Smatra se da poremećaj normalnih puteva šaperon proteinakoji omogućavaju promet nesolubilnih proteina dovodido taloženja AMILOID beta u ćelijama i njihovo oštećenje Doovakvih poremećaja mogli bi da dovedu kako smanjeno vezivanješaperona za A beta, tako i smanjena raspoloživostšaperon proteina
![Page 71: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/71.jpg)
Šaperon
Protein sa definisanomtercijarnom strukturom
Nativni protein, bez tercijarne strukture
![Page 72: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/72.jpg)
Pravilna tercijalna struktura proteina je egzistencijalna za ćeliju
Enzyme catalytic site Prosthetic group
attachment Metal ion binding site Cysteines for
disulphide bonds Protein or molecular
binding
![Page 73: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/73.jpg)
Protein misfolding (greške u sklapanju proteina) Sklapanje (presavijanje proteina) je proces koji može rezultirati greškom, jer
sistem koji obezbeđuje kvalitet protena nije perfektan, Greške u sklapanju proteina mogu nastati spontano ali mogu biti
uzrokovane i mutacijom gena koji produkuju protein sa greškom. U nekim slučajevima atipična proteoliza prekursornog proteina dovodi do nastajanja kraćeg segmenta fibrilarnog proteina koji podleže atipičnom sklapanju.
Dolazi do intracelularne agregacije i degradacije proteina sa greškom u sklapanju. Ova pojava predstavlja molekularnu osnovu za nastanak nekih bolesti – Alzheimer (β amiloid peptid od 40-43 AK, koji agregira u konformaciju β ploče, dobijajući svojstva neurotoksina)
β amiloid peptid nastaje proteolizom iz amiloid prekusornog proteina APP koji je transmembranski protein prisutan u ćelijama CNS i drugih tkiva
![Page 74: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/74.jpg)
Amiloid prekursor proteina Amiloid prekursor proteina je transmembranski glikoprotein sa
funkcijama u preživljavanju neurona i procesima učenja i pamćenja Kod AB umesto alfa, aktivira se beta sekretaza („amiloidogeni put“)
što dovodi do stvaranja A beta koji se sastoji iz dela transmembranskog domena i kratkog ekstracelularnog fragmenta. I alfa i beta sekretaza deluju na ektodomen
![Page 75: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/75.jpg)
Enzymes cut the APP into fragments, the most important of which for AD is called -amyloid (beta-amyloid) orA.
![Page 76: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/76.jpg)
Beta-amyloid is “sticky” so the fragments cling together along with other material outside of the cell, forming theplaques seen in the AD brain.
![Page 77: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/77.jpg)
Glavne patohistološke promene kod AB su ekstracelularnidepoziti amiloida-beta (A beta) – amiloidni ili senilni plakovi (SP)
i
intracelularne nakupine tau proteina – neurofibrilarna klubad (NFK),
![Page 78: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/78.jpg)
2
3
Prevents tubulin
![Page 79: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/79.jpg)
Amiloid beta deluje patološki podstičući oksidativnistres, ekscitotoksičnost sa nakupljanjem kalcijuma u ćelijama,smanjenjem fluidnosti membrana, smanjenjem energetskihzaliha, izmenama citoskeleta, podsticanjem zapaljenskihprocesa i promenama homeostaze metala
Navedeni procesidovode do disfunkcije sinapsi, nekroze ili apoptoze i gubitkaneurona.
Uklanjanje A beta odvija se posredstvommikroglije, putem receptora za krajnje produkte uznapredovaleglikozilacije (advanced glycation end products –AGEs; receptor za AGEs – RAGE; stvaranje AGEs je pojačanokod DM). DM se smatra faktorom rizika za pojavu AB
![Page 80: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/80.jpg)
Prote(in)opathy cascade
protein misfolded protein
mutation
aggregation
deposition
Neurodegeneration
beta-sheet
![Page 81: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/81.jpg)
Denaturacija proteina
Denaturacija je proces gubitka tercijarne strukture proteina, kada on postaje funkcionalno neaktivan, a fizički nerastvorljiv u prvobitnom rastvaraču i gubi svoje prvobitne osobine. To se postiže promenom spoljašnjih uslova, kao što je povišenje temperature, postizanje ekstremnih pH vrednosti, odnosno dodatak organskih rastvarača ili uree
![Page 82: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/82.jpg)
![Page 83: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/83.jpg)
RAZGRADNJA PROTEINA U ORGANIZMU
U organizmu se proteini nalaze u stalnom dinamičkom stanju, neprekidno se sintetišu i razgra|uju, što odredjuje dužinu života specifičnih proteina (poluživot proteina)
Oštećeni kao i nepotrebni proteini se uklanjaju iz organizma degradacijom, a oslobođene amino-kiseline mogu poslužiti za ponovnu sintezu proteina
Razgradnja endogenih proteina vrši se proteolitičkim fermentima- proteazama
Odigrava se u:
1. ekstracelularnom prostoru - ekstracelularna proteoliza
2. unutar ćelija, intracelularna proteoliza
![Page 84: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/84.jpg)
Ekstracelularna proteoliza Ekstracelularna proteoliza se ostvaruje delovanjem proteaza koje se oslobadjaju iz
rezidualnih tkivnih ćelija i inflamatornih ćelija. Proteaze vrše razgradnju i remodeliranje ekstracelularnih proteina uprkos postojanju visoko-efektivnih inhibitora u ekstracelularnom prostoru, čija se inhibitorna moć smanjuje oksidativnom inaktivacijom.
Proteaze su endopeptidaze, razlažu peptidne veze u unutrašnjosti proteinske molekule. Mogu se klasifikovati u 4 grupe u odnosu na hemijske grupe njihovog aktivnog centra, to su:
1. serin-proteaze 2. metalo-proteinaze 3. cistein-proteinaze 4. aspartat-proteinaze
Serin i metalo-proteinaze su aktivnije pri neutralnom pH, one katalizuju mnoge reakcije proteolize u ekstracelularnim prostorima. Serin-proteaze često aktiviraju druge serin-proteaze koje su u inaktivnoj formi (zimogeni), što se dešava u procesu koagulacije i fibrinolize, aktivaciji komplementa, hormonskoj produkciji, fertilizaciji.
![Page 85: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/85.jpg)
Intracelularna degradacija proteina
Lizozomalna proteoliza Ubikvitin – Proteozomalna proteoliza(visoko konzervisan polopeptid – 76 AK
(8,5kDa – ubikvitin)
![Page 86: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/86.jpg)
Lizozomalna proteoliza
Proteini koji ulaze u ćeliju endocitozom, pinocitozom i fagocitozom
Lizozomi sadrže oko 50 hidrolitičkih enzima (proteaze, nukleaze, lipaze, karbohidraze)
Lizozomalne proteaze označene su kao katepsini aktivni su u kiseloj sredini
![Page 87: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/87.jpg)
Lizozomalna proteoliza
![Page 88: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/88.jpg)
UBIKVITINSKI SISTEM-UBIKVITINACIJA- Ubikvitin prepoznaje proteine za degradaciju i selektivno ih obeležava -
Karboksilni kraj ubikvitina se vezuje za є-amino grupu lizinskih ostataka proteina koji će se degradirati. Ubikvitin je target za proteazom
Degradacija se odvija kompleksom 26S proteazoma
Aminokiselinski ostaci na N terminalnom kraju proteina koji se razlaže određuju dužinu poluživota (proteini sa metioninom imaju poluživot 20 dana a sa argininom oko 2 min)
E3 enzimi koji učestvuju u ovom putu su čitači N-terminalne rezidue
DISFUNKCIJA POJEDINIH KOMPONENTI OVOG SISTEMA UKLJUČENE SU U PATOGENEZU UROĐENIH I STEČENIH BOLESTI
![Page 89: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/89.jpg)
![Page 90: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/90.jpg)
Put ubikvitin proteozom
![Page 91: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/91.jpg)
Hromatografija proteina
![Page 92: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/92.jpg)
hromatografija–komponente smese se razdvajaju na koloni
![Page 93: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/93.jpg)
Zavisi od vrednosti pIrazličitih aminokiselina kojese razdvajaju.Pozitivno naelektrisaniproteini se vezuju zanegativno naelektrisanupodlogu.Negativno naelektrisaniproteini prolaze.Jonoizmenjivačka hromatografija Najkiselije aminokiseline putuju najbrže a najbaznije seeluiraju poslednje.Površina svakog signala je mera relativne količine svakepojedinačne aminokiseline u smesi.
HPLC-mobilna faza se kroz kolonu propušta pod pritiskom-skraćenovreme analize.HPLC Površina svakog signala je mera relativne količine svakepojedinačne aminokiseline u smesi.
![Page 94: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/94.jpg)
Hromatografija na koloni
![Page 95: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/95.jpg)
![Page 96: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/96.jpg)
![Page 97: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/97.jpg)
![Page 98: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/98.jpg)
![Page 99: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/99.jpg)
![Page 100: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/100.jpg)
![Page 101: proteini za farmaciju 2013.ppt](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022050703/563db841550346aa9a920736/html5/thumbnails/101.jpg)
Sekvencionisanje proteina tehnikomrekombinovane DNK
• Redosled četiri baze u DNK: adenina, guanina, timina i citozina (zapisan u genima) direktno određuje sekvencuaminokiselina u proteinu.
• Moguća automatizovana analiza DNK ili RNK
• Sekvenca stotine proteina, sa velikim brojem aminokiselinskih ostataka određen na ovaj način