proyecto para el congreso (1)

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EVALUACION DEL EFECTO GENOTOXICO EN TOMATES TRATADOS CON PLAGUICIDAS EMPLEANDO LA TÉCNICA SMART EN D. melanogaster

2014

UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN SIMÓN

FACULTAD: CIENCIAS FARMACEUTICAS Y BIOQUIMICAS

CARRERA: BIOQUIMICA Y FARMACIA


Presentado por : LAMAS CLAROS JENNY A.

MUÑOZ CAMACHO JUAN MARCOS

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COCHABAMBA – BOLIVIA– 2014


1. INTRODUCCION

El consumo de tomate es importante para la salud humana puesto que posee innumerables propiedades alimenticias, sin embargo, algunos de estos productos son expuestos a contaminación química, constituyéndose un peligro para el consumidor.

La introducción en el mercado de un gran número de nuevos productos ha tenido una doble consecuencia en nuestro entorno. Aunque muchos de estos productos han contribuido a mejorar la calidad de vida, otros presentan determinados riesgos de toxicidad, como son algunos plaguicidas considerados de alto riesgo entre los cuales están el Captopril y Thodoron.

La exposición directa con estos agroquímicos podría ocasionar mutaciones en células somáticas, y con el fin de prevenir estas consecuencias resulta imprescindible realizar ensayos de genotoxicidad.

Las investigaciones relacionadas con la genotoxicidad adquieren cada día mayor importancia a nivel mundial, debido al creciente deterioro del ambiente al que se encuentra expuesto el hombre.

Dentro este marco de referencia Bejarano (2002), señala que prevenir los daños ambientales y la salud pública es mejor que tratar de remediarlos, particularmente en el caso de los plaguicidas cuyos efectos crónicos que por lo general tardan años en manifestarse y pueden afectar a futuras generaciones.

El test de Mutación y Recombinación Somática (SMART) es uno de los ensayos de gran utilidad en esta evaluación, por su sensibilidad, rapidez y bajo costo económico en la investigación de sustancias químicas con propiedades mutagénicas.

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1.2. JUSTIFICACION

Uno de los pilares de la economía cochabambina es el cultivo y comercialización de productos agrícolas, como el tomate. Sin embargo, en el cultivo de este producto, a fin de combatir y eliminar las plagas, una gran parte de los agricultores usan plaguicidas considerados riesgosos para la salud humana debido a que poseen efectos tanto tóxicos atacando de manera directa a órganos vitales, así como efectos genotóxicos que actúan sobre la estructura del ADN.

Existen estudios que avalan los efectos genotóxicos de algunos insecticidas, por ejemplo en 2012, Rodrigo G. realizó una investigación evaluando la genotoxicidad de plaguicidas en tomate en el municipio de rio Chico demostrando actividad genotóxica positiva para el metabolito activo Clorpirifos; y también el trabajo realizado por Gonzales M. (2006) que demostró la actividad genotóxica de ciclofosfamida y mitomicina C.

Esta situación de peligro para la salud de la población, exige realizar una evaluación genotóxica para determinar posibles alteraciones mutagénicas, empleando la técnica SMART en alas de Drosophila melanogaster, que es correlacionado al ser humano ya que existe un 75% de similitud entre las estructuras de los genes de las D. melanogaster y la estructura genética humana.

1.3. PROBLEMA

1.3.1. Planteamiento del problema

La producción de tomate en la localidad de Omereque es importante debido a los beneficios alimenticios y económicos que representan para el departamento de Cochabamba. Gran cantidad del tomate que se consume en el departamento proviene de este municipio.

Sin embargo, los agricultores usan una gran variedad de plaguicidas con dosificaciones y una frecuencia de uso no controlado a fin de combatir y eliminar las plagas, lo cual presenta un alto riesgo toxicológico para la salud de la población.

El poco control por parte de las autoridades de salud y medio ambiente sobre la aplicación de insecticidas que son restringidos a estos cultivos y la irresponsabilidad de los agricultores en el proceso productivo al no considerar medidas de bioseguridad como usar ropa adecuada, manipulación con guantes o

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uso de mascarillas representa un alto riesgo toxicológico para la salud tanto de los cosechadores como de los consumidores.

Los factores anteriormente mencionados nos llevan a realizar una evaluación toxicológica y genotóxica para determinar posibles alteraciones mutagénicas en Drosophila melanogaster.

1.3.2. Formulación del problema

¿Cuáles son los efectos genotóxicos del tomate en la localidad de Omereque sobre D. melanogaster?

1.4. HIPÓTESIS

Los tomates cultivados en la localidad de Omereque presentan una carga genotóxica que causa mutaciones positivas en los tricomas de alas de Drosophila melanogaster.

2. OBJETIVOS

2.1. OBJETIVO GENERAL

Evaluar el efecto genotóxico de los frutos de tomates tratados con pesticidas, provenientes del municipio de Omerque empleando la técnica SMART en alas de D. melanogaster

2.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS

Identificar los plaguicidas utilizados en la producción de frutos de tomate, en la localidad de Omereque.

Determinar la toxicidad que presenta el extracto de tomate usando una curva de supervivencia.

Evaluar el efecto genotóxico a diferentes concentraciones de extracto de tomate

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3. MARCO TEORICO

3.1 Cultivo de tomate en Omereque

Omereque es un municipio localizado en el departamento de Cochabamba, bastante conocido por la producción de tomate que abastece los mercados de Cochabamba, Santa Cruz y Chuquisaca. Datos de la Alcaldía de Omereque informan que los productores logran comercializar aproximadamente 1.200.000 cajas de tomates.

3.2 Plaguicidas

Los plaguicidas o pesticidas son sustancias químicas empleadas por el hombre para controlar o combatir algunos seres vivos considerados como plagas ya que ocasionan daño en la producción y almacenamiento de artículos agrícolas.

La clasificación toxicológica de los plaguicidas en las categorías de baja peligrosidad, nocivas, tóxicas o muy tóxicas. Dicha clasificación se realiza atendiendo básicamente a su toxicidad aguda, expresada en DL50 (dosis letal al 50%) por vía oral o dérmica, o en CL 50 (concentración letal al 50%) por vía respiratoria.

Estas sustancias químicas tóxicas, utilizadas para eliminar las plagas agrícolas, pueden causar efectos agudos (a corto plazo) y crónicos (a largo plazo) irreversibles para la salud.

Los campesinos no usan recipientes especiales, guantes ni mascarillas para manipular los químicos. Algunos incluso prueban con la lengua el plaguicida para ver si el agroquímico es fuerte, y cuando fumigan no usan traje de protección y terminan empapados con el tóxico. Lo más grave es que muchos los almacenan debajo de sus camas, cuando éstos deberían estar lejos de sus viviendas.

El 2004, la Universidad Mayor de San Simón de Cochabamba llevó a cabo una investigación en la localidad agrícola de Parotani. El estudio reveló que el 70% de la población presenta niveles bajos de acetilcolinesterasa, indicador de intoxicación aguda por plaguicida.

3.2 Genotoxicidad

Se la define como la acción de un agente o sustancia que interactúa de forma directa o indirecta con el ADN, modificándolo y afectando su integridad. El efecto

http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=CL_50&action=edit&redlink=1

http://es.wikipedia.org/wiki/Dosis_letal_mediana

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genotóxico del agente o sustancia genera un cambio errático permanente (mutación) sobre el ADN y el genotipo afectando a la célula que esta en proceso de división celular.

Existen varias pruebas para determinar la capacidad relativa de un agente de ocasionar daño en el material genético, entre las cuales tenemos el Ensayo SMART, el test de Ames, la prueba de Micronúcleos y el Ensayo del cometa.

3.3 Drosophila melanogaster

La mosca de la fruta, Drosophila melanogaster, ofrece una serie de ventajas como sistema de prueba de genotoxicidad in vivo.

Es un ser vivo eucariota, fácil de cultivar, su ciclo de generación es corto, posee una progenie numerosa y los ensayos somáticos son baratos porque sólo se requiere el equipo de laboratorio básico y es de bajo costo. Además constituye un sistema de prueba ya establecido y validado que utilizan células germinales, para evaluar la toxicidad crónica en genes especialmente los que tienen que ver con los genes recesivos ligados al sexo.

3.4 Ensayo SMART en D. melanogaster

Estas pruebas de mutación y recombinación somáticas (SMART) son ensayos de una sola generación y utilizan marcadores recesivos que se expresan en la superficie de los ojos o de las alas de las moscas adultas. Se basan en la detección y cuantificación de eventos mutacionales y de recombinación en células somáticas de un organismo eucariota.

La inducción de la pérdida de heterocigosis de marcadores en las células de los discos de los imagos de las larvas mediante el tratamiento con compuestos genotóxicos, conduce a la formación de un clon de células mutantes que después de la metamorfosis se expresan como manchas en los ojos o en las alas.

Además de la cruza estándar en la prueba SMART del ala, es posible realizar una cruza de bioactivación elevada (BE). Las larvas de ésta última se caracterizan por un elevado nivel constitutivo de citocromos P450, lo que facilita la detección de promutágenos y procancerígenos (Graf y VanSchaik 1992). GuzmánRincón y Graf(1995) y Graf et al. (1996)

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4. MARCO METODOLOGICO

4.1. SELECCIÓN DE LA MUESTRA VEGETAL

Se obtuvo tomate procedente del municipio de Omereque, comprándose éste tomate en el mercado Calatayud y se procedió a realizar un cuarteo al azar en el laboratorio del PROFAC. El tomate seleccionado se lavó con agua destilada para proceder a la preparación del extracto.

4.2. PREPARACION DE EXTRACTOS

Se prepararon extractos acuosos en una relación 1:1 (p/v), empleando 100 gr de tomate sin pelar, que fue triturado, posteriormente se colocó el tomate triturado en una licuadora con 100 ml de agua destilada para obtener extractos de consistencia pastosa.

El extracto obtenido se constituyó como la solución madre que fue almacenado en frascos ambarado para ser refrigerado a una temperatura de 4 0C.

A partir de la solución madre se realizaron diluciones para obtener diferentes concentraciones a evaluar, como se detalla en la Tabla Nº 1.

Tabla Nº 1 Concentraciones del extracto a evaluar

EXTRACTOS DILUCION

Sol. Madre/agua

CONCENTRACION

Tomate

1/0 100%

1/1 50%

1/2 25%

1/4 12,5%

4.3. ENSAYO SMART EN ALAS DE Drosophila melanogaster

Los extractos de tomate a diferentes concentraciones, fueron evaluados mediante es test de Mutación y Recombinación Somática (SMART) en alas de Drosophila melanogaster para determinar su genotoxicidad. Se trabajó con cepas de Drosophila melanogaster correspondientes a las cepas: Mwh, Fler3 y Orrfler3.

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Como control positivo se usaron los insecticidas Lorsban Plus; y como control negativo agua destilada. Ya se tenían los datos de estos controles procedentes de trabajos anteriormente realizados.

4.3.1. Procedimiento del Test SMART

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6.

7.

Separación

Cepas

Fler3 Mwh Orrfler3

SEXADO SEXADOSEXADO

160 hembras

Descarte de machos

60 macho

s

Descarte de hembras

Descarte de machos

160 hembras

CRUCE ESTANDAR CRUCE ALTA

BIOACTIVACION (HB)

Larvas 1er InstarLarvas

Larvas Larvas 1er Instar

Larvas 2do Instar TRATAMIENTO LARVAS DE 3er INSTAR CON

EXTRACTOS

TRATAMIENTO LARVAS DE 3er INSTAR CON

EXTRACTOS

Larvas 2do Instar

DETERMINACION DE LA TOXICIDAD DE EXTRACTOS

DETERMINACION DE LA TOXICIDAD DE EXTRACTOS

MONTAJE DE ALAS

EVALUACION DE LA GENOTOXICIDAD DE LOS EXTRACTOS

LECTURA DE ALAS

MONTAJE DE ALAS

EVALUACION DE LA GENOTOXICIDAD DE LOS EXTRACTOS

Tóxico Sub tóxicoTóxico Sub tóxico

LECTURA DE ALASANALISIS

DE DATOS

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4.4.1. Cultivo de cepas de D. melanogaster

Se obtuvieron diferentes cepas de D. melanogaster, identificándose tres tipos: fler3, Orrfler y Mwh. Estas cepas se cultivaron por separado en frascos de vidrio donde se preparó un medio de mantenimiento que sirven como alimentos para las moscas. Generalmente estos medios de mantenimiento duran aproximadamente unos 15 días y pasado este tiempo se volvió a preparar el medio. En dicho medio de mantenimiento, las moscas cruzan y las hembras depositan sus huevos que en pocos días llegan a emerger teniéndose un gran número de moscas en poco tiempo.

4.4.2. Sexado: Separación de moscas machos y hembras

Una vez preparado el extracto, se procedió al sexado de las moscas de las diferentes cepas empleando un estereoscopio en el que se observaron las características anatómicas y diferencias morfológicas de machos y hembras. Se sacrificaron a todas las moscas adultas quedando en los frascos solo huevos. Se dejó un tiempo esperando a que los huevos eclosionen, al término de 5 horas esto sucedió y obtuvimos moscas adultas que aún son vírgenes ya que aún no han llegado a su tiempo de cruzamiento.

Posteriormente en un frasco de vidrio se trasvaso cierta cantidad de moscas y se tapó con un tapón empañado con éter hasta que quedaron dormidas y con la ayuda de un estereoscopio se van seleccionando moscas machos y hembras de cada cepa.

Cepa Machos Hembras

Fler3 Descarte 160

Orrfler3 Descarte 160

Mwh 60 Descarte

Las moscas seleccionadas se colocaron por 24 horas en frascos de vidrio con un pequeño trozo de plátano (lugar y tiempo en el que las hembras depositan huevos).

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Posteriormente se preparó el medio de ovoposición que reemplaza el trozo de plátano, este es un medio nutritivo para los huevos de las moscas.

4.4.3. Cruzamiento

Los cruzamientos se realizaron en los frascos de preparación con el medio de ovoposición. Los cruces son de tipo Estándar y de Alta Bioactivación:

Cruce Estándar (ST): 80 hembras vírgenes de la cepa fler3 se cruzan con 40 machos de la cepa mwh.

Alta Bioactivación (HB): 80 HEMBRAS orrfler3 se cruzan con 40 machos mwh.

El cruce se realiza para obtener larvas de 3er instar

4.4.4. Tratamiento de larvas de tercer instar de D. melanogastercon extractos

Al cabo de 5 días del cruzamiento, se pesó en una balanza 1.5 g de Drosophila Instant Medium (Carolina Biological Suppy, Brulington) en frascos de vidrio y se añadieron 5 ml de cada concentración que se está evaluando.

Seguidamente se contó 50 larvas de tercer instar procedentes de los cruces realizados, Estándar y Alta Bioactivacion y se colocaron en los frascos anteriormente descritos, dejándolas por 48 horas con los extractos. Las larvas de tercer instar se alimentaron con el preparado entre el medio Carolina Biological y el extracto que se estudió.

4.4.5. Prueba de toxicidad en las D. melanogaster del extracto de tomate

Para determinar la toxicidad de los extractos evaluados se realizó un recuento de las moscas adultas sobrevivientes procedentes de las larvas de 3er instar que fueron expuestas a las diferentes diluciones del extracto de tomate.

4.4.6. Prueba de toxicidad subletal empleando la técnica SMART

a. Montaje de alas, se debe sacrificar a las moscas procedentes de los cruces que aun queden vivas y luego empleando el estereoscopio y pinzas muy finas, se retiran cuidadosamente las dos alas de las moscas y se

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procede a montarlas en un portaobjetos. En un portaobjetos pueden caber las dos alas de unas 10 moscas. Cada portaobjetos se debe identificar.

b. Lectura de alas, empleando el objetivo 40x del microscopio se procede a revisar los pelos presentes en la superficie de las alas de D. melanogaster. Siendo muy cuidadoso/a se buscan mutaciones en los pelos, a dichas mutaciones se les denominan manchas que pueden ser simples o dobles. Para la observación de los pelos en las alas se tomaron en cuenta las diferentes áreas en que se subdivide el ala de la mosca. Se pueden identificar manchas resultantes de dos marcadores genéticos:

Marcador genético mwh, se observa el crecimiento de tres o más pelos en lugar de uno

Marcador genético Flr3, el pelo tiene la característica de presentar una base ensanchada respecto a la base delgada que presenta un pelo normal.

También se pueden clasificar las manchas que se observan, esta clasificación se realiza de acuerdo al tipo y tamaño de mancha

Manchas simples pequeñas, cuando se presentan manchas con la expresión del fenotipo mwh y Flr3 y el número de células afectadas es de 1 o 2.

Manchas simples grandes, cuando el número de células afectadas es mayor a 2.

Mancha gemela, son aquellas manchas que expresan ambos marcadores, es decir mwh y Flr3 ubicados de forma adyacente.

4.4.7. Análisis de datos

Una vez realizado el recuento de las mutaciones en las alas, se llenan datos en un programa computarizado. Se usó el Test Binomial Condicional de Kastenbaum – Bowman. Se obtuvieron resultados que indican si las diluciones de los extractos son genotóxicos; estos resultados se determinan de acuerdo a la frecuencia en el que aparecen las manchas.

Resultado positivo: la frecuencia de manchas totales de los tratamientos es dos veces mayor (m=2) a la frecuencia encontrada en el control negativo.

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Resultado negativo: la frecuencia de manchas totales es menor que la frecuencia encontrada en el control negativo.

Resultado inconcluso: la frecuencia de manchas totales no es dos veces mayor a la frecuencia hallada en el control negativo.

5. RESULTADOS

5.1 Sobrevivencia de larvas de 3er. Instar a diferentes concentraciones

% DE SOBREVIVENCIA

Cruce

Concentraciones Evaluadas

12,5 25 50 100

ST 89 96 90 88

HB 94 91 97 95

Todos estos resultados de sobrevivencia que son mayores al 70% revelan que las concentraciones que fueron utilizadas del extracto de tomate son no tóxicas.

5.2 Porcentaje de sobrevivencia de larvas de 3er. Instar en Controles K (-) y K (+)

Estos resultados que se presentan proceden de trabajos anteriores, los cuales indican que el porcentaje de sobrevivencia de las moscas en el control negativo (agua destilada) son del 83% para el cruce ST y 95% para el cruce HB.

Controles Concentraciones Evaluadas

% DE SOBREVIVENCIA

Cruce ST Cruce HB

Agua destilada

K (-) 83% 95%

Lorsban Plus

100% 0 0

50% 0 0

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K (+) 25% 0 0

12.5% 0 0

Se evidencia que en el caso del control positivo K (+), las diferentes concentraciones presentan un porcentaje de sobrevivencia del 0% para ambos cruces.

Comparación de porcentaje de sobrevivencia entre K (-) y las concentraciones del extracto (%)

Cruce K (-)

Concentración %

12,5 25 50 100

ST 83 89 96 90 88

HB 95 94 91 97 95

K - 12,5 25 50 100828486889092949698

STHB

Se observa que tanto en el Control Negativo K (–) como en las diferentes concentraciones del extracto, existe una sobrevivencia de las D. melanogaster mayor al 70% por lo que ninguna posee un efecto tóxico directo

5.3. EVALUACION DE LA GENOTOXICIDAD

Los resultados fueron obtenidos mediante la aplicación del test binomial propuesto por Kastembaun e Bowman, tanto para los cruces ST y HB donde se observaron Manchas Simples Pequeñas (MSP), Manchas Simples Grandes (MSG), Manchas Gemelas (MG) y Manchas Totales (MT).

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Se hace una relación entre el número de manchas totales (MT) que es la suma de manchas simples (MSP y MSG) y manchas gemelas MG. Esta sumatoria se divide entre el número de pares de alas que se observan en microscopio.

Número de Manchas

Número de Moscas

Se obtuvo un valor numérico que se compara con el valor obtenido en el Control Negativo K (-); de esta manera se logró obtener la frecuencia de mutaciones genéticas que aparecen en las alas de las moscas que han sido expuestas al extracto respecto a la frecuencia de mutaciones genéticas en las alas de las moscas que han sido expuestas a agua destilada. Entonces se determinó si existe un resultado positivo o un resultado negativo de las diferentes diluciones del extracto de tomate.

5.3.1. Cruce ST

5.3.1.1. MSP

Las MSP, son las que presentan una o dos células con el marcador Genotípico mwh o Flr3. El valor de la frecuencia del control negativo es de 0,30 MSP/Mosca, para considerar que las concentraciones que se utilizaron en la prueba presentan acción genotóxica positiva, la frecuencia de MSP/Mosca tendrá que ser dos veces mayor a la frecuencia de MSP/Moscas del control Negativo (m=2).

De las cuatro concentraciones aplicadas, la concentración del 12,5% presenta una frecuencia de 0,55 MSP/Mosca, demostrando ser inconclusiva, debido a que el número de manchas encontradas no son suficientes para poder establecer si el extracto acuoso de tomate presenta o no genotoxicidad a esta concentración.

A diferencia de los otros tres tratamientos al 25%, 50% y 100% que llegan a formar un grupo

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6. CONCLUSIONES

En el municipio de Omereque, los plaguicidas más utilizados son el Lorsban Plus (cuyos principios activos son Clorpirofo y Cipermetrina) y el Caporal para el cultivo de tomate.

El insecticida Lorsban Plus a una concentración igual o mayor al 12,5% presenta acción tóxica letal que se demuestra mediante la curva de supervivencia. Las diferentes concentraciones del extracto de tomate presentan una supervivencia mayor al 70% por lo que no se consideran tóxicas.

Los extractos acuosos de tomates procedentes de Omereque y en concentraciones de 100, 50 y 25% presentan genotoxicidad que se evidencia por la aparición de manchas totales en una frecuencia 2 veces mayor a la frecuencia de manchas en las alas de D. melanogaster tratadas con agua destilada.

Los efectos genotóxicos causados por el Lorsban Plus contenido en los tomates cultivados en el municipio de Omereque se demuestran por la mutación de los pelos en las alas de D. melanogaster que se evidencia por la aparición de manchas, sobre todo manchas simples pequeñas.

7. BIBLIOGRAFIA

Martínez, C, y. Mendieta K. “EVALUACION GENOTOXICA EN LECHUGAS PRODUCIDAS EN EL VALLE CENTRAL DE VINTO MEDIANTE EL TEST DE MUTACION Y RECOMBINACION SOMATICA (SMART)”, Tesis de grado para optar el título académico de licenciatura en Bioquímica y Farmacia, Cochabamba 2014

Ramírez, J. y Lacasaña, M. “PLAGUICIDAS: CLASIFICACIÓN, USO, TOXICOLOGÍA Y MEDICIÓN DE LA EXPOSICIÓN, ARCHIVOS PREVISIÓN DE RIESGOS LABORALES”, Universidad Pompeu Fabra. Barcelona, España 2001

OIT. “GUÍA SOBRE SEGURIDAD Y SALUD EN EL USO DE PRODUCTOS AGROQUÍMICOS” Ginebra, Oficina Internacional del Trabajo, 1993

Contreras, Bravo; Zuhey, Lilia y Ávila, Mejía “EXPRESIÓN DE GFP EN DISCOS IMAGINALES DE DROSOPHILA MELANOGASTER”, Centro Universitario Anglo Mexicano de Morelos, México, 2010

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Vasquez C., López X., “ESTUDIOS GENOTÓXICOS”, Disponible en: http://www.cfnavarra.es/salud/anales/textos/vol28/n2/revis2a.htm

FUNDESNAP-SENASAG., “MEDIDAS PARA EL CONTROL DE ÁREAS PROTEGIDAS, LOS INSECTICIDAS Y SUS ALCANCES” Disponible en: http://www.uv./cienciahombre/revistae/vol19num1/articulos/fundesnap/index.htm

RESUMEN

Bolivia es un país agrícola y debido a que esta actividad es muy importante económicamente, se hace primordial el cuidado y control de los cultivos. Por esta situación, los agricultores utilizan los plaguicidas sin un control adecuado.

En el presente trabajo se hizo una evaluación del efecto genotóxico que pueden causar los plaguicidas que se utilizan en la producción de tomate en la localidad de Omereque, lugar de donde se obtuvieron las muestras. Con estas muestras de tomate se obtuvo un extracto acuoso de consistencia pastosa.

La evaluación se realizó mediante la prueba in vivo de Mutación y Recombinación Somática (SMART), que emplea a Drosophila melanogaster como organismo experimental ya que éste organismo posee una sensibilidad mutagénica elevada para determinar la actividad recombinogénica y mutagénica. Se llevó a cabo dos tipos de cruces con las cepas de moscas: Estándar (ST), en el cual hembras vírgenes de la cepa Flr3 fueron cruzadas con machos de la cepa Mwh, cruce que detecta mutágenos de acción directa; y el cruce de Alta Bioactivación (HB), donde se cruzaron hembras vírgenes de la cepa Orrflr3 con machos de la cepa Mwh, cruce que posee la capacidad de detectar mutágenos de acción indirecta. Las larvas de tercer instar procedentes de ambos cruces fueron expuestas al extracto de tomate y a sus diferentes concentraciones de 100%, 50%, 25%, 12.5% durante 48 horas. Se usó agua destilada como control negativo y como control positivo Lorsban Plus.

Posteriormente se analizaron en microscopio las mutaciones producidas en las células somáticas que dan origen a las alas, mutaciones que son causadas al someter las moscas de D. melanogaster a tratamiento con las diferentes concentraciones del extracto de tomate.

http://www.cfnavarra.es/salud/anales/textos/vol28/n2/revis2a.htm

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