pruebas rapidas
DESCRIPTION
TRANSCRIPT
![Page 1: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/1.jpg)
DETECCION DE CASOS DE TB DROGORRESISTENTE
JOSÉ GABRIEL CORNEJO GARCIA MEDICO NEUMOLOGO
HOSPITAL ARZOBISPO LOAYZA
![Page 2: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/2.jpg)
Tipos de Prueba de SensibilidadPruebas Fenotípicas Pruebas Genotípicas
![Page 3: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/3.jpg)
Fenotípicas Genotípicas
•Modelo viabilidad celular
•Observación directa o indirecta de Mtb en presencia de antibióticos
•Presencia de genes específicos de Mtb
•Secuencias genéticas relacionadas a la presencia de Mtb y mutaciones asociadas a resistencia
![Page 4: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/4.jpg)
Pruebas fenotípicas•El gold
estándar es el método de proporciones en medio sólido de Lowenstein-Jensen.
•Se evalua la relación en el número de colonias.
<1% susceptible
>1% resistente
![Page 5: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/5.jpg)
Tiempo para obtener resultado de una prueba de sensibilidad
INH02-baja Resistente
INH1-alta Resistente
EMB/ETB Sensible
SM-alta Sensible
RIF Resistente
PZA Resistente
Proporciones Lowenstein-Jensen
![Page 6: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/6.jpg)
Es necesario pruebas de sensibilidad rápidas•También pueden ser fenotípicas o
genotípicas.
•Estas deben tener las siguientes características:▫1. Alta sensibilidad y especificidad.▫2. Bajo costo▫3. Facilidad técnica.▫4. Bajo riesgo en bioseguridad
![Page 7: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/7.jpg)
PS rápidas fenotípicas
•Las pruebas disponibles son:▫Medios líquidos: BACTEC 460 y
BACTEC 960 o MGIT.▫Griess.▫MODS.
![Page 8: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/8.jpg)
•Los medios líquidos tienen mayor sensibilidad que los medios sólidos ( Lowenstein-Jensen).
•El resultado puede estar en 10-15 días y la PS en otros 10-15 días.
![Page 9: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/9.jpg)
BACTEC TB 460 MGIT
![Page 10: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/10.jpg)
![Page 11: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/11.jpg)
GRIESS
•Es una prueba fenotípica desarrollada en el Instituto Central de Tuberculosis de Moscú.
•Es un método colorimétrico basado en la acción de la nitrato reductasa.
•Se utiliza medios de L-J al cual se agrega NaNO3.
•Se requiere que el esputo sea positivo y de un volumen mínimo de 3 ml.
![Page 12: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/12.jpg)
En 2 tubos con medio de cultivo se agrega 0,2 ml de sedimento del esputo
En otros 2 tubos a lo anterior se agrega en uno H y en el otro R en concentraciones críticas
![Page 13: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/13.jpg)
•Luego de 28 días de incubación se agrega el reactivo, con la finalidad de detectar la conversión de nitratos a nitritos, que es la actividad de la enzima nitrato reductasa.
![Page 14: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/14.jpg)
![Page 15: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/15.jpg)
•En el Perú la prueba fue validada en el 2003 por el Instituto Nacional de Salud y por el Laboratorio del Estado de Massachusetts.
•Esta disponible desde el 2006.
![Page 16: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/16.jpg)
![Page 17: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/17.jpg)
MODS• El MODS o Microscopic
Observation Drug Susceptibility, es un método fenotípico basado en medio líquido.
• El crecimiento de M. tuberculosis es mas rápido en medios líquidos.
• El crecimiento se observa por el crecimiento y formación de cordones.
![Page 18: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/18.jpg)
• Por lo tanto puede servir tanto para el diagnóstico de tuberculosis y al agregar antibióticos a las muestras y comparando con los controles también para tuberculosis MDR.
• Requiere el uso de microscopio de luz invertida.
• El resultado se puede dar en 7 días.
• El costo es de 2 dólares por muestra.
![Page 19: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/19.jpg)
![Page 20: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/20.jpg)
![Page 21: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/21.jpg)
![Page 22: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/22.jpg)
Pruebas rápidas genotípicas
•Principalmente basadas en la amplificación de ácidos nucleicos siendo la técnica mas usada la reacción en cadena de la polimerasa ( PCR ).
•Estas pruebas pueden servir para el Dx y como prueba de sensibilidad.
•No sirven para monitorizar el tratamiento porque se puede detectar ácidos nucléicos de micobacterias no viables.
![Page 23: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/23.jpg)
Genotype MTBDRplus
•Se puede usar en cepas aisladas en medios sólidos o líquidos ( método indirecto ).
•También en muestras de esputo frotis positivo ( método directo ).
•Detecta mutaciones en el gen rpoB ( resistencia a R ), en el gen katG ( resistencia a altas dosis de H), y en el gen inhA ( resistencia a bajas dosis de H).
•Los resultados pueden estar en 72 horas.
![Page 24: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/24.jpg)
H R
Sens
91,4% 98,4%
Espf
99,7% 99,1%
![Page 25: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/25.jpg)
Genotype MTBDRsl•Es un método genotípico de utilidad en la
detección rápida de casos XDR.•Evalúa la resistencia a quinolonas por
detección de mutaciones en el gen gyr A que codifica la enzima DNA girasa.
•La resistencia a aminoglicósidos es por mutación en el gen rrs que codifica el RNA 16S.
•Ademas detecta resistencia a E por mutación en el gen embB que codifica el arabinosil transferasa.
![Page 26: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/26.jpg)
![Page 27: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/27.jpg)
GeneXpert MTB/RIF
•Es una prueba rápida genotípica completamente automatizada.
•Es un test que sirve para el diagnóstico de TB y de resistencia a R, por medio de PCR en tiempo real para amplificar una secuencia específica del gen rpoB.
•Se puede realizar en muestras con baciloscopía positiva o negativa.
![Page 28: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/28.jpg)
•La monorresistencia a R es poco común, la presencia de resistencia a R esta asociado en más del 90% a MDR.
•Por lo que el GeneXpert sirve también para el diagnóstico temprano de MDR.
![Page 29: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/29.jpg)
•Los reactivos necesarios para la lisis bacteriana, extracción de acido nucléico, y amplificación; así como la muestra se colocan en un cartucho plástico.
•El volumen necesario de muestra para el estudio es de solo 1 ml.
![Page 30: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/30.jpg)
•El único paso manual es el agregar un buffer bactericida a la muestra de esputo antes de colocarlo en el cartucho.
•El riesgo en bioseguridad es mínimo, debido a que no se libera aerosol.
•Luego el cartucho es colocado en el dispositivo GeneXpert.
![Page 31: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/31.jpg)
![Page 32: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/32.jpg)
Sensibilidad HIV (+) 93,9%Sensibilidad HIV (-) 98,4%
P= 0,02
![Page 33: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/33.jpg)
CONCLUSIONES:
•Se debe pedir PS rápidas a todos los pacientes.
•En muestras Bk positivas se puede pedir cualquier tipo de prueba.
•En muestras Bk negativas se puede pedir BACTEC, MODS, o Xpert; las que también sirven para Dx de TB.
•Si se requiere un resultado con mucha rápidez se sugiere Genotype, Xpert, o MODS.
![Page 34: Pruebas rapidas](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022081413/548e469cb4795963488b4622/html5/thumbnails/34.jpg)
•La desventaja de Xpert es que no evalúa la resistencia a H.