PYRUVATE CARBOXYLASE

SITI NURFAJRIAH20510018

PENDAHULUAN

MEKANISME REAKSI

ISOLASI DAN PEMURNIAN

DEFESIENSI PC

Pyruvate carboxylase (PC) memiliki nomor enzim 6.4.1.1

Piruvat karboksilase adalah enzim dari kelas ligase yang mengkatalisis karboksilasi piruvat membentuk oksaloasetat (OAA).

PENDAHULUAN

PC merupakan enzim allosterik yang diaktifkan oleh efektornya yakni Asetil-CoA

PC mengandung ion Mn2+ yang terikat kuat dan gugus prostetik yang terikat secara kovalen yakni biotin

PC berbentuk tetramer yang terdiri atas 4 subunit yaitu BC (biotin carboxylase), CT (carboxytransferase), BCCP (biotin-carboxy carrier protein), dan PT (PC tetramerization)

MEKANISME REAKSI

Mekanisme reaksi di atas terjadi dua tahap reaksi parsial

Pyruvate + MgATP2- + HCO3- Mg2+

Oxaloacetate + MgADP- + Pi

Mekanisme Ping Pong Bi Bi Uni Uni

MEKANISME KINETIK

Mekanisme Ping Pong Bi Bi Uni Uni

PC disubklon dari Staphylococcus aureus dalam vektor pET28a kemudian diekpresikan pada E. coli.

Sel yang mengekspresikan PC kemudian dimurnikan dengan :1. Pestle & Mortar (dengan N2 cair)

2. Centrifuge3. Dialisis / Kromatografi Penukar Ion

Aktivitas PC dianalisis dengan SDS-PAGE dan spektrofotometer Massa

ISOLASI DAN PEMURNIAN

Kekurangan karboksilase piruvat merupakan gangguan bawaan yang menyebabkan asam laktat dan senyawa beracun lainnya yang berpotensi untuk terakumulasi dalam darah

Ada dua jenis kekurangan PC berdasarkan tingkat keparahannya:

1. tipe 1: terjadi penumpukan asam laktat dalam darah (asidosis laktit)

2. tipe 2 : terjadi penumpukan amonia dalam darah (hiperamonemia)

DEFISIENSI PC

Terima Kasih