REACREACŢIILE ŢIILE IMUNOLOGICE. IMUNOLOGICE.

REACŢIILE AG-AC REACŢIILE AG-AC in vitroin vitro

Studiul şi aprecierea imunităţii poate Studiul şi aprecierea imunităţii poate fi efectuată prin intermediul diferitor fi efectuată prin intermediul diferitor teste realizate teste realizate in vitroin vitro sau sau in vivo in vivo (reacţii imunologice).(reacţii imunologice).

Pentru aprecierea răspunsului imun Pentru aprecierea răspunsului imun umoral se studiază interacţiunea umoral se studiază interacţiunea dintre Ag şi Ac, iar pentru aprecierea dintre Ag şi Ac, iar pentru aprecierea imunităţii celulare se determină imunităţii celulare se determină numărul total de limfocite, subclasele numărul total de limfocite, subclasele limfocitelor T, se evaluează limfocitelor T, se evaluează citokinele, etc. citokinele, etc.

REACREACŢŢIIILEILE ANTIGEN-ANTICORP in vitro (REAC ANTIGEN-ANTICORP in vitro (REACŢŢIIILEILE SEROLOGISEROLOGICCE)E)

RReaceacţţiiaa Ag-Ac est Ag-Ac estee d determinată de eterminată de interacinteracţţiiuunneaea specifispecificăcă dintre epitop dintre epitopiiii A Antintiggenuluienului şişi paratop paratopiiii AAntinticcorpilororpilor. . În acest proces intervin patruÎn acest proces intervin patru t tiippuriuri de de llegăturiegături: l: legături deegături de h hiidrogen, ldrogen, legăturiegături electrostati electrostaticce, e, forforţţeelele Van der Waals Van der Waals şişi l legăturiegături h hiidrodroffobe.obe.

Legătura Legătura Ag-Ac a Ag-Ac arere tr treei caracteristii caracteristicici: est: estee exotermiexotermicăcă, specifi, specificăcă şişi reversib reversibiillăă..

AAfinitfinitatateeaa un unuiui Ac p Ac pentruentru un un Ag specifiAg specificc caractericaracterizzeeazăază intensitintensitatateeaa for forţţeelorlor de de llegăturăegătură aa complex complexuluiului Ag-Ac. Ag-Ac. E Eaa depinde depinde de cde complementaritomplementaritatateeaa steri stericăcă didintre ntre paratop paratop şişi epitop epitop..

AAviditviditatateeaa uunnuiui Ac p Ac pentru un entru un Ag specifiAg specificc reprezintreprezintăă rapiditrapiditatateeaa apari apariţţiieiei manifestării manifestării reacreacţţiieiei Ag-Ac Ag-Ac ((precipitaprecipitarere, aglutina, aglutinare, re, etc.)etc.). E. Eaa dep depiindndee de constant de constantaa d de e asociasociereere, de , de vvalenalenţaţa Ac, d Ac, dee n nuummăărrulul d de e epitopepitopii, de temperatur, de temperaturăă, d, dee pH, de for pH, de forţaţa ioniionicăcă aa m mediuluiediului..

Un paratop se Un paratop se poate poate combina combina cu cu unun singur singur epitop, epitop, numitnumit “specifi “specificc”. ”. AstfelAstfel,, dacă estedacă este ccuunnoscutoscut un unulul d dinin element elementeleele reac reacţţiieiei - Ag - Ag sausau Ac, p Ac, poaoatte fie fi identifi identificatcat celălaltcelălalt

Reacţiile Ac-Ac (reacţiile serologice) au Reacţiile Ac-Ac (reacţiile serologice) au două direcţii de aplicare practică:două direcţii de aplicare practică:

I.I. SSeroidentificaeroidentificare:re: DDetectetectareaarea şişi do dozzaarreeaa Ag Ag ((element element necunoscutnecunoscut - - tulpin tulpinii microbiene microbiene izolate din diferite prelevate)izolate din diferite prelevate) cu ajutorul cu ajutorul Ac specifiAc specifici cunoscuţici cunoscuţi..

PoPott fi fi utili utilizatezate d douăouă sur surssee dde e Ac: Ac: Ac Ac monoclonmonoclonaliali, , absolut absolut omogenomogeni, dar care i, dar care recrecuunnoosscc doar un singurdoar un singur epitop epitop şişi Ac Ac polpoliiclonclonaliali, , ce se ce se conconţinţin înîn seruri imune seruri imune ((antiseruriantiseruri)), , carecare perm permiit lt legăturiegături de de aviditaviditatatee înaltă înaltă cucu Ag. Ag.

Serurile imune se obţinSerurile imune se obţin prinprin injecta injectarearea lla un a un animal de laborator animal de laborator aa antigene antigenelorlor ccununooscscuutete. . După o perioadă deDupă o perioadă de t tiimp, serump, serull animaluanimaluluilui va va conconţţiinne anticorpe anticorpii contr contraa aceacesstortor antigene. antigene. Dar natura exactă a Ac Dar natura exactă a Ac din acest ser nu poate fi cunoscută cu din acest ser nu poate fi cunoscută cu exactitate (Ac policlonali)exactitate (Ac policlonali). . SSpecificitpecificitatateeaa seruseruluilui trebuie să fie permanent controlată trebuie să fie permanent controlată şi şi Ac Ac nedoriţi trebuie să fienedoriţi trebuie să fie elimin eliminaţiaţi pr prinin adsoradsorbţbţiiee..

II. SII. Serodiagnosticerodiagnostic:: DDetectetectareaarea şişi titra titrarreeaa AcAc din serul bolnavilor din serul bolnavilor (component (component necunoscut) faţă de unecunoscut) faţă de un Ag specifin Ag specificc ccununooscutscut ( (conţinut în diagnosticuriconţinut în diagnosticuri))..

Unele Unele reacreacţţiiii Ag-Ac se manifest Ag-Ac se manifestăă direct direct şi şi pot fipot fi observatobservatee de experimentatde experimentatoor: r: dede exemplexempluu precipitaprecipitarearea sasau u aglutinaaglutinarearea complexecomplexelorlor Ag-Ac Ag-Ac, , llizaiza unor celule unor celule purtătoare de Ag pe membrana lor purtătoare de Ag pe membrana lor (hemol(hemolizăiză, bacteriol, bacteriolizăiză, etc)., etc).

AlteAlte reac reacţţiiii Ag-Ac n Ag-Ac nuu se vi se vizzualiualizzeeazăază “spontan” in vitro. “spontan” in vitro. În acest caz se vaÎn acest caz se va recurrecurge lage la nişte nişte artificartificiiii experimenta experimentale, cum le, cum ar fi utilizareaar fi utilizarea Ac “mar Ac “marcaţicaţi”:”:

Ac marAc marcaţicaţi cucu un fluorocrom: un fluorocrom: imunofluorescenimunofluorescenţaţa..

Ac marAc marcaţicaţi cucu un i un izzotop radioactiv: otop radioactiv: analiza analiza radio-imunradio-imunăă..

Ac marAc marcaţicaţi cu ocu o enz enziimmăă:: analiza analiza imunoenzimunoenziimatimaticăcă..

INTERACŢIINTERACŢIUNUNEAEA ANTIGEN-ANTICORP ANTIGEN-ANTICORPI.I. Faza specificăFaza specifică: are loc interacţiunea : are loc interacţiunea

dintre Ag şi Ac specific corespdintre Ag şi Ac specific corespuunzătornzător. . Este Este un un ffenomen rapid, invienomen rapid, invizzibibiil, comun l, comun pentrupentru to toateate reac reacţţiiileile Ag-Ac. Ag-Ac. Decurge la Decurge la temperatura de 37 C, în prezenţa unui temperatura de 37 C, în prezenţa unui electrolit (sol. fiziologică).electrolit (sol. fiziologică).

II.II. Faza nespecificăFaza nespecifică,, vivizzibibiillăă a uniunii Ag-Ac, a uniunii Ag-Ac, se manifestă prinse manifestă prin precipit precipitararee, , aglutinaaglutinarere, , liză, etcliză, etc - - fenomene determinate de fenomene determinate de anumite condiţii (valenţa Ac, dimensiunile anumite condiţii (valenţa Ac, dimensiunile Ag, etc).Ag, etc).

REACŢIA DE AGLUTINAREREACŢIA DE AGLUTINAREDin latinăDin latină – agglutinatio - încleiere – agglutinatio - încleiere Reacţia Ag-Ac se poate manifesta prin Reacţia Ag-Ac se poate manifesta prin

aglutinareaglutinare atunci când determinantele antigenice atunci când determinantele antigenice sunt purtate de sunt purtate de particule figurateparticule figurate (Ag insolubile, (Ag insolubile, corpusculare), iar corpusculare), iar AcAc specifici sunt specifici sunt compleţicompleţi (cel (cel puţin bivalenţi). puţin bivalenţi).

Aglutinarea este determinată de formarea unei Aglutinarea este determinată de formarea unei reţele între Ag şi Ac, ce permite apropierea unui reţele între Ag şi Ac, ce permite apropierea unui număr suficient de particule figurate pentru a număr suficient de particule figurate pentru a constitui aglutinate vizibile cu ochiul liber. Ac constitui aglutinate vizibile cu ochiul liber. Ac IgM cu 10 epitopi potenţiali aglutinează mai activ IgM cu 10 epitopi potenţiali aglutinează mai activ decât Ac IgG. decât Ac IgG.

Clasificarea reacţiilor de aglutinareClasificarea reacţiilor de aglutinare

1.1. Aglutinare “Aglutinare “activăactivă” sau “” sau “directădirectă”, în care ”, în care particula figurată (Ag corpuscular) este el particula figurată (Ag corpuscular) este el însuşi purtător de determinante antigenice însuşi purtător de determinante antigenice specifice (hematii, leucocite, trombocite, specifice (hematii, leucocite, trombocite, spermatozoizi, bacterii)spermatozoizi, bacterii)

2.2. Aglutinare “Aglutinare “pasivăpasivă” sau “” sau “indirectăindirectă”, în care ”, în care particula serveşte doar de suport pentru un particula serveşte doar de suport pentru un determinant antigenic solubil fixat artificial determinant antigenic solubil fixat artificial pepe suprafaţa sa. Frecvent sunt utilizate suprafaţa sa. Frecvent sunt utilizate ca suport ca suport hematii formolate, particule de latex sau hematii formolate, particule de latex sau microcristale de colesterol.microcristale de colesterol.

O shi H aglutinare.swf

ReactiReactiii d de e aglutinaaglutinarere activ activaa (direct (directaa)) Aspect Aspect ccalitatialitativvRReactieactiaa p poateoate fi fi efectuefectuataata pepe lam lamaa de de sticlasticla

sau isau in tubn tuburiuri..RReactieactiaa pepe lam lamaa Se amesteca o picatura dSe amesteca o picatura de sere ser si o picatura si o picatura

de suspenside suspensiee bacteriana (Ag)bacteriana (Ag). . LLecturecturaa se se fafacece lala microscop microscop sasau u cu ochiul libercu ochiul liber. . IIn n cacazz de reacti de reactiee po pozzitivitiva apar conglomerate, a apar conglomerate, iar iar lichidul lichidul se clarifica se clarifica; ;

iin can cazz de reacti de reactiee negativ negativaa,, lichidullichidul r ramaneamane tulburetulbure. .

Aglutinare pe lamela.swf

RReactieactiaa iin tubn tuburiuri

In eprubeta se amestecaIn eprubeta se amesteca seru serull sisi Ag figur Ag figurateate (hemati(hematiii, bacteri, bacteriii))..

RReactieactiaa po pozzitivitivaa se se manifestamanifesta pr prinin forma formarearea un unuiui sediment sediment ccu aspect de u aspect de umbrelaumbrela invers inversataata lala f fuundndulul tub tuburilor (peste 20-24 ore)urilor (peste 20-24 ore) şi clarificarea lichidului. şi clarificarea lichidului. Aprecierea intensitaAprecierea intensitaţii reacţiei ţii reacţiei se efectueaza dupa se efectueaza dupa sistema de 4 plusuri (++++).sistema de 4 plusuri (++++).

CCeluleelulelele n neeaglutinaglutinatate e se se sedimentesedimenteazaaza lala f fuundndulul tubtuburilorurilor su subb form formaa de buton de buton sasau u inelinel (reacti (reactiee negativnegativaa). ). LLecturecturaa se fa se facece cu ochiul liber saucu ochiul liber sau folosindfolosind oglinda oglinda concav concavaa a microscopului. a microscopului.

Aspect Aspect ccantitatiantitativvMMetodetodaa diluti dilutiilorilor succesive succesiveInitial se efectueaza dilutii succesive ale serului Initial se efectueaza dilutii succesive ale serului

(1/50, 1/100, 1/200, etc) in care se introduc (1/50, 1/100, 1/200, etc) in care se introduc ulterior culterior cantitantitatiati egale egale dde e Ag. Ag. Termostat – 2 ore, Termostat – 2 ore, apoi la t camerei apoi la t camerei 18-20 ore18-20 ore. .

ApreciereaAprecierea: cea mai mare dilutie a serului in care : cea mai mare dilutie a serului in care se manifesta aglutinare de cel putin se manifesta aglutinare de cel putin 3 “+” (+++)3 “+” (+++) se numeste se numeste titrul titrul aanticorpilor aglutinantinticorpilor aglutinanti (titrul (titrul serului aglutinant)serului aglutinant)..

AAglutinaglutinarearea direct directaa est estee utili utilizatazata p pententrruu determindeterminaarreaea grupe grupelorlor sang sangvvininee sasau u inin diagnosticdiagnosticulul unorunor maladi maladiii infecti infectioaoase se (seroidentificarea Ag sau depistarea şi titrarea (seroidentificarea Ag sau depistarea şi titrarea Ac din serul bolnavilor) .Ac din serul bolnavilor) .

Reactie de aglutinare in tuburi.swf

ReactiReactilele d de e aglutinaaglutinarere pasiv pasivaa (indirect (indirectaa)) AAglutinaglutinarearea pasiv pasivaa const constaa inin fix fixaarreaea un unuiui

Ag solubAg solubiil (l (sasau u alal unui unui Ac) Ac) pepe un suport un suport corpuscularcorpuscular inert inert, care nu , care nu intervinterviinnee inin reactireactiaa Ag-Ac. Ag-Ac. In calitate de suport inert In calitate de suport inert pot servi hematiile, particule pot servi hematiile, particule de latex, de latex, ccristaristalele de colesterol. de colesterol. SSuspensiuspensiaa de de particule particule sensibilizate cu Ag sau Ac sensibilizate cu Ag sau Ac estestee pusa inpusa in contact contact ccu seruu serull imun ( imun (respectivrespectiv cucu Ag),Ag), ca si in cazul aglutinarii directe. ca si in cazul aglutinarii directe.

Avantajele Avantajele reactireactiilorilor indirecte indirecte:: facilitfacilitatateeaa lectur lecturiiii sisi sensibilit sensibilitatateea inaltaa inalta. .

RReactieactiaa d de e hemaglutinahemaglutinarere indirect indirecta a ((pasivpasivaa) ) – RHAI / RHAP– RHAI / RHAP

Unele Unele antigeneantigene de origine polizaharidica de origine polizaharidica se se fixefixeazaaza pra pracctiticc spontanspontan, , dupadupa oo sscurtcurtaa incubatiincubatiee, , pe suprafatape suprafata hemati hematiilor. Ailor. Antigenentigenelele proteiproteicece se fixe se fixeazaaza doar dupadoar dupa oo pre preggatiatirere prealabprealabiillaa aa hemati hematiilorilor ( (de ex.: tratarea cu de ex.: tratarea cu tanitaninana, formol). , formol).

RHAIRHAI se efectuează se efectuează in godeurile in godeurile uneuneii pla placi ci din polistirendin polistiren. . RReactieactiaa po pozzitivitivaa se se manifestamanifesta prprinin aglutina aglutinarearea eritrocitelor eritrocitelor sensibilizate sensibilizate (umbrela inversata de culoare bruna(umbrela inversata de culoare bruna la la fundul godeurilorfundul godeurilor))..

În În reacţia de latex-aglutinarereacţia de latex-aglutinare Ac sau Ag Ac sau Ag sunt fixaţi pe particule de latex. Reacţia se sunt fixaţi pe particule de latex. Reacţia se efectuează pe lama de sticlă. efectuează pe lama de sticlă.

Reacţia de latex-aglutinare este utiliReacţia de latex-aglutinare este utilizatazata iin n identificarea factidentificarea factoorrulului rui reeumatoid umatoid lala bolnavibolnavi suspectsuspectii de pol de poliiartritartritaa r reeumatoidumatoidaa, , iin n bacteriologie pbacteriologie pentruentru identificarea rapidă a identificarea rapidă a mi/o sau Ag lor în prelevate, sau mi/o sau Ag lor în prelevate, sau identificarea tulpinilor izolate, de identificarea tulpinilor izolate, de asemenea pentru serodiagnosticul unor asemenea pentru serodiagnosticul unor infecţii.infecţii.

Reacţia de Co-aglutinare.Reacţia de Co-aglutinare.

La baza acestei reacţii se află La baza acestei reacţii se află proprietatea unei bacterii – proprietatea unei bacterii – Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus (tulpina (tulpina CoCowanwan) ) - ce are în componenţa peretelui - ce are în componenţa peretelui celular proteina Acelular proteina A - - să fixeze Ig G prin să fixeze Ig G prin intermediul fragmentului Fc. Astfel se intermediul fragmentului Fc. Astfel se formează diagnosticuri cu Ac, cu formează diagnosticuri cu Ac, cu ajutorul carora pot fi identificare Ag ajutorul carora pot fi identificare Ag respective necunoscute. Reacţia se respective necunoscute. Reacţia se efectuează pe lamă.efectuează pe lamă.

REACŢIA COOMBSREACŢIA COOMBS

Unii Ac (monovalenţi) nu sunt aglutinanţi în Unii Ac (monovalenţi) nu sunt aglutinanţi în condiţii normalecondiţii normale, fiind monovalenti , fiind monovalenti (ex.: (ex.: anticorpii anti-Rh, responsabili de anticorpii anti-Rh, responsabili de incompatibilitatea materno-fetală în incompatibilitatea materno-fetală în sistemul Rh). Ei pot fi depistaţi graţie sistemul Rh). Ei pot fi depistaţi graţie testelor Coombs.testelor Coombs.

Sunt posibile 2 tehnici, în funcţie de Sunt posibile 2 tehnici, în funcţie de prelevat: sânge de la nou-născut sau de la prelevat: sânge de la nou-născut sau de la femeia gravidă.femeia gravidă.

- Tehnica Coombs directă.Tehnica Coombs directă. La un nou- La un nou-născut se caută prezenţa Ac materni anti-Rh născut se caută prezenţa Ac materni anti-Rh fixaţi pe hematii, dacă mama este Rh-. La fixaţi pe hematii, dacă mama este Rh-. La aceste hematii suspecte se adaaceste hematii suspecte se adauugă un ser gă un ser anti-Ig umană. Acest ser nu aglutinează anti-Ig umană. Acest ser nu aglutinează hematiile normale, din contra, el provoacă hematiile normale, din contra, el provoacă aglutinarea hematiilor pe care sunt fixaţi Ac aglutinarea hematiilor pe care sunt fixaţi Ac anti-Rh.anti-Rh.

- Tehnica Coombs indirectă. Tehnica Coombs indirectă. La o femeie La o femeie gravidă Rh- Ac anti-Rh sunt prezenţi în ser. gravidă Rh- Ac anti-Rh sunt prezenţi în ser. Iniţial la acest ser se agaIniţial la acest ser se agauugă hematii Rh+ gă hematii Rh+ (pentru formarea complexului Ag-Ac), apoi (pentru formarea complexului Ag-Ac), apoi se aplică serul anti-Ig.se aplică serul anti-Ig.

REACTIILE DE PRECIPITAREREACTIILE DE PRECIPITARE Imunoprecipitarea se manifesta doar Imunoprecipitarea se manifesta doar

atunci cand atunci cand Ag solubilAg solubil este amestecat cu este amestecat cu Ac corespunzator. Ea poate fi observata Ac corespunzator. Ea poate fi observata sau in mediu lichid, sau solid, fiind sau sau in mediu lichid, sau solid, fiind sau calitativa, sau cantitativa. Acestea sunt calitativa, sau cantitativa. Acestea sunt reactii specifice dar putin sensibile, ce reactii specifice dar putin sensibile, ce necesita cantitati importante de anticorpi. necesita cantitati importante de anticorpi.

Precipitarea complexelor moleculare Precipitarea complexelor moleculare rerezzultate din uniunea Ag-Ac este ultate din uniunea Ag-Ac este determinata de formarea unei retele determinata de formarea unei retele tridimensionale de Ag reunite prin Ac.tridimensionale de Ag reunite prin Ac.

ConCondiţiile de formare a diţiile de formare a rereţţelei de precipitare:elei de precipitare: Ac sa fie cel putin bivalent (Ac completi)Ac sa fie cel putin bivalent (Ac completi) Ag sa fie multivalent (haptenele nu pot fi Ag sa fie multivalent (haptenele nu pot fi

precipitate)precipitate) Precipitarea maxima corespunde cu zona de Precipitarea maxima corespunde cu zona de

echivalenechivalenţăţă, unde Ac si Ag sunt in raport optimal , unde Ac si Ag sunt in raport optimal de concentrade concentraţţie, ce permite precipitarea tuturor ie, ce permite precipitarea tuturor moleculelor de Ac cu Ag corespunzator.moleculelor de Ac cu Ag corespunzator. În În exces de Ag sau de Ac precipitatul nu se exces de Ag sau de Ac precipitatul nu se formează.formează.

Utilizare:Utilizare: în în medicina legala (determinarea medicina legala (determinarea apartenenapartenenţţei de specie a diferitor proteineei de specie a diferitor proteine: : sânge, spermă, etcsânge, spermă, etc),), în în igiena alimentar igiena alimentarăă ((depistarea depistarea falsificfalsificăărriiii alimentelor), alimentelor), în în diagnosticul maladiilor infectioase, etc diagnosticul maladiilor infectioase, etc

PRECIPITAREA IN MEDIU LICHIDPRECIPITAREA IN MEDIU LICHID Reactia de precipitare inelaraReactia de precipitare inelaraIntr-un tub cu diametrul de cinci millimetri se Intr-un tub cu diametrul de cinci millimetri se

introduce introduce serul imunserul imun; pipeta se inclina si pe peretii ; pipeta se inclina si pe peretii ei se lasa sa se prelinga incet solutia de Ag, ca sa ei se lasa sa se prelinga incet solutia de Ag, ca sa nu se amestece cu serul. Daca Acnu se amestece cu serul. Daca Ac din ser corespund din ser corespund cu Agcu Ag, in zona de separare a celor doua lichide, in zona de separare a celor doua lichide

se formeaza un inel alb, ceea ce se formeaza un inel alb, ceea ce semnifica precipitarea semnifica precipitarea complexului Ag-Ac. complexului Ag-Ac. Avantajul metodeiAvantajul metodei – rapiditatea – rapiditatea si simplicitatea. si simplicitatea. Utilizarea practicaUtilizarea practica: identificarea : identificarea petelor de sange, depistarea falsificarilorpetelor de sange, depistarea falsificarilor produselor alimentare, depistarea produselor alimentare, depistarea antigenului polizaharidic al agentului antigenului polizaharidic al agentului antraxului in omogenat antraxului in omogenat dde organe (reactia Ascoli).e organe (reactia Ascoli).

Reacţia de floculare (tehnica Reacţia de floculare (tehnica Ramon)Ramon)

Se efectuează diluţia succesivă a Se efectuează diluţia succesivă a serului imun (Ac) la care se adaserului imun (Ac) la care se adauuga ga cantităţi egale de Ag. Se întroduc cantităţi egale de Ag. Se întroduc probele în termostat şi periodic se probele în termostat şi periodic se examinează pentru depistarea examinează pentru depistarea tubului în care apare tubului în care apare precipitatul precipitatul iniţial (zona de echivalenţă).iniţial (zona de echivalenţă).

Utilizare:Utilizare: pentru determinarea pentru determinarea cantităţii de toxină, antitoxină sau cantităţii de toxină, antitoxină sau anatoxină.anatoxină.

PRECIPITAREA ÎN MEDIU SOLID PRECIPITAREA ÎN MEDIU SOLID (ÎN GEL)(ÎN GEL)

În aceste reacţii Ag şi Ac difuzează În aceste reacţii Ag şi Ac difuzează unul spre altul prin geloză şi în zona unul spre altul prin geloză şi în zona de concentraţie optimă a acestor de concentraţie optimă a acestor două reactive se produce două reactive se produce precipitarea sub formă de linii albe-precipitarea sub formă de linii albe-cenuşii. Dacă există mai multe cenuşii. Dacă există mai multe sisteme Ag-Acsisteme Ag-Ac,, se vor forma linii de se vor forma linii de precipitare distincte. Poate fi utilizată precipitare distincte. Poate fi utilizată în analiza calitativă a unui în analiza calitativă a unui amestecamestec de Ag într-o soluţie. de Ag într-o soluţie.

Imunodifuzia simplă radială Imunodifuzia simplă radială (tehnica Mancini)(tehnica Mancini)

Se efectuează pe o placă acoperită cu Se efectuează pe o placă acoperită cu geloză, în care sunt încorporaţi Ac geloză, în care sunt încorporaţi Ac specifici. Ag este depus în godeurile specifici. Ag este depus în godeurile din stratul de geloză. Ag difuzează din stratul de geloză. Ag difuzează radial în geloză pe parcursul a 48 ore. radial în geloză pe parcursul a 48 ore. Dacă Ag corespunde Ac, atunci are loc Dacă Ag corespunde Ac, atunci are loc formarea de discuri de precipitare, cu formarea de discuri de precipitare, cu suprafaţa proporţională concentraţiei suprafaţa proporţională concentraţiei Ag din godeu. Se utilizeză pentru Ag din godeu. Se utilizeză pentru depistarea şi cuantificarea Ig, depistarea şi cuantificarea Ig, hormonilor, enzimelor, etc.hormonilor, enzimelor, etc.

Imunodifuzie dublă Imunodifuzie dublă (tehnicile Ouchterlony şi Elek)(tehnicile Ouchterlony şi Elek)Se acoperă cu geloză o placă de sticlă sau se toarnă Se acoperă cu geloză o placă de sticlă sau se toarnă

geloza în cutia Petri. geloza în cutia Petri. În tehnica Ouchterlony Ag şi Ac difuzează din În tehnica Ouchterlony Ag şi Ac difuzează din

godeurile situate la o distanţă de 15 mm unul de godeurile situate la o distanţă de 15 mm unul de altul. altul.

În tehnica Elek cele 2 reactive difuzează din benzile În tehnica Elek cele 2 reactive difuzează din benzile de hârtie plasate pe suprafaţa gelozei. de hârtie plasate pe suprafaţa gelozei.

Moleculele difuzează în gel în funcţie de greutatea Moleculele difuzează în gel în funcţie de greutatea lor şi formează lor şi formează linii de precipitarelinii de precipitare pentru fiecare pentru fiecare sistem Ag-Ac ce corespund în zona lor de sistem Ag-Ac ce corespund în zona lor de echivalenţă. Dacă două Ag sunt identice, liniile lor echivalenţă. Dacă două Ag sunt identice, liniile lor se unesc, dacă sunt diferite – se intersectează. se unesc, dacă sunt diferite – se intersectează. UtilizareaUtilizarea – determinarea toxinelor (toxigeneza), – determinarea toxinelor (toxigeneza), antitoxinelor, Ag proteice antitoxinelor, Ag proteice

Contraimunoelectroforeza (CIEF)Contraimunoelectroforeza (CIEF)

Este utilă la examinarea amestecurilor Este utilă la examinarea amestecurilor antigenice complexe. antigenice complexe. Lectura este posibila Lectura este posibila peste 90 minute.peste 90 minute.

Geloza este turnată pe o placă de sticlă, Ag şi Geloza este turnată pe o placă de sticlă, Ag şi Ac sunt dispuşi în rezervoare circulare de 2 Ac sunt dispuşi în rezervoare circulare de 2 mm diametru, la o distanţă de 10 mm. În mm diametru, la o distanţă de 10 mm. În timpul timpul electroforezeielectroforezei Ag, încărcat negativ, Ag, încărcat negativ, migrează spre polul pozitiv, întâlnind Ac care migrează spre polul pozitiv, întâlnind Ac care migrează spre catod. migrează spre catod. LLa interacţiunea Ag şi a interacţiunea Ag şi Ac omologi are loc formarea liniei de Ac omologi are loc formarea liniei de precipitare. CIEF serveşte la examinarea precipitare. CIEF serveşte la examinarea componentelor Ag din lichide biologice: LCR, componentelor Ag din lichide biologice: LCR, urină, lichid pleural, ascită, etc.urină, lichid pleural, ascită, etc.

REACŢII DE CITOLIZĂ IMUNĂREACŢII DE CITOLIZĂ IMUNĂ (cu (cu participarea complementului)participarea complementului)

Activarea fracţiilor complementului Activarea fracţiilor complementului (C) duce la liza particulei purtătoare (C) duce la liza particulei purtătoare de Ag (hematii, bacterii, diverse de Ag (hematii, bacterii, diverse celule...)celule...)

Activarea complementuluiActivarea complementului- Calea clasicăCalea clasică- Calea alternativăCalea alternativă- Calea lectinicăCalea lectinică

Activarea C pe cale clasicăActivarea C pe cale clasică

ActivatorulActivatorul îîll constituie constituie complexe Ag-Accomplexe Ag-Ac (IgG, IgM)(IgG, IgM)

Consecutivitatea activării C: Consecutivitatea activării C: Ag-AcAg-Ac fixează fracţia fixează fracţia C1qrsC1qrs, care c, care caapătă pătă ulterior activitate esterazică (în ulterior activitate esterazică (în prezenţa obligatorie a Caprezenţa obligatorie a Ca++++) )

C1 activează C1 activează C4C4, cu formarea , cu formarea complexului complexului AgAcC1C4bAgAcC1C4b. Este apoi . Este apoi activat activat C2 (AgAcC1C4bC2a), C2 (AgAcC1C4bC2a), complexul complexul C4bC2aC4bC2a devenind devenind convertază ce acţionează asupra C3convertază ce acţionează asupra C3

Urmează clivarea C3 în C3a Urmează clivarea C3 în C3a (anafilotoxină) şi (anafilotoxină) şi C3bC3b, care se uneşte , care se uneşte de complex de complex (AgAcC1C4bC2aC3b)(AgAcC1C4bC2aC3b), , formând C5-convertaza, care formând C5-convertaza, care clivează C5 în C5a şi C5bclivează C5 în C5a şi C5b

C5b se leagă de membrana celulei-ţintă. C5b se leagă de membrana celulei-ţintă. Urmează fixarea simultană a Urmează fixarea simultană a C,6,7C,6,7. La . La final se fixează final se fixează C8C8, apoi , apoi C9,C9, formând formând “complexul de atac membranar”. “complexul de atac membranar”. Fixarea lor produce leziuni ireversibile – Fixarea lor produce leziuni ireversibile – liza celulei.liza celulei.

Calea alternativă de activare a CCalea alternativă de activare a C

Activatori:Activatori: endotoxine, celule infectate endotoxine, celule infectate cu virus, levuri, paraziţi, venin de cu virus, levuri, paraziţi, venin de cobră, agregcobră, agregaate de IgA sau IgEte de IgA sau IgE. C1,4 . C1,4 şi 2 nu intervin şi reacţia începe cu şi 2 nu intervin şi reacţia începe cu C3C3. Properdina, factorul B şi ionii de . Properdina, factorul B şi ionii de MgMg++ ++ sunt obligatorii în procesul de sunt obligatorii în procesul de activare pe cale alternativă.activare pe cale alternativă.

Calea lectinicăCalea lectinică de activare a C este determinată de activare a C este determinată de legarea unor lectine pe unele grupări de de legarea unor lectine pe unele grupări de manoză, carbohidrat prezent în componenţa manoză, carbohidrat prezent în componenţa multor mi/o şi absentă la ma/o. Lectina este multor mi/o şi absentă la ma/o. Lectina este echivalentă fracţiei C1q. Alte 2 molecule se echivalentă fracţiei C1q. Alte 2 molecule se asociază, formând o enzimă similară C1, ceea ce asociază, formând o enzimă similară C1, ceea ce duce la formarea complexului C4bC2a (C3-duce la formarea complexului C4bC2a (C3-convertaza) convertaza)

Componentele reacţiilor de liză:Componentele reacţiilor de liză:- Ag (celule bacteriene, hematii, etc)Ag (celule bacteriene, hematii, etc)- Ac (lizine - IgG şi IgM)Ac (lizine - IgG şi IgM)- Complement– ser proaspăt de cobai Complement– ser proaspăt de cobai

sau ser de cobai liofilizatsau ser de cobai liofilizat

Reacţia de bacterioliză (RBL)Reacţia de bacterioliză (RBL)

- Ag – suspensie de bacterii vii - Ag – suspensie de bacterii vii (vibrioni, leptospire...)(vibrioni, leptospire...)

- Ac – serul imun sau serul bolnavului- Ac – serul imun sau serul bolnavului

- Complement - Complement

RBL in vitroRBL in vitro- Se efectuează diluţia succesivă a seruluiSe efectuează diluţia succesivă a serului- Se adaSe adauugă suspensie microbiană viegă suspensie microbiană vie- Se adaSe adauugă complementgă complement

(martor: Ag+ser fiziologic+C)(martor: Ag+ser fiziologic+C)- Incubare 2 h la 37Incubare 2 h la 37°°CC- Reînsămânţare pe cutii cu geloză câte 0,1 ml Reînsămânţare pe cutii cu geloză câte 0,1 ml

din fiecare diluţie (24h – 37din fiecare diluţie (24h – 37°° C) C)- LecturaLectura – se compară nr coloniilor crescute din – se compară nr coloniilor crescute din

martor şi probele studiatemartor şi probele studiate- TitrulTitrul – cea mai mare diluţie a serului în care – cea mai mare diluţie a serului în care

au fost lizate cel puţin 50% din celuleau fost lizate cel puţin 50% din celule

RBL in vivoRBL in vivo- Amestecul dintre Ag şi Ac se inoculează intra-Amestecul dintre Ag şi Ac se inoculează intra-

peritoneal la animale de laborator (ex.: peritoneal la animale de laborator (ex.: şoareci albi)şoareci albi)

- Peste fiecare 10 min, timp de o oră, se Peste fiecare 10 min, timp de o oră, se extrage lichidul peritoneal, se pregăteşte un extrage lichidul peritoneal, se pregăteşte un preparat nativ şi se examinează pe fond preparat nativ şi se examinează pe fond negru sau cu contrast de fază.negru sau cu contrast de fază.

- Rezultat pozitiv – numărul bacteriilor scade Rezultat pozitiv – numărul bacteriilor scade treptat până la dispariţie.treptat până la dispariţie.

Utilizarea RBLUtilizarea RBL – diagnosticul holerei (RVL), – diagnosticul holerei (RVL), leptospirozelor (RALL)leptospirozelor (RALL)

Reacţia de hemoliză (RHL)Reacţia de hemoliză (RHL)- AgAg – hematii de berbec, suspensie de 3% – hematii de berbec, suspensie de 3%- AcAc – ser imun de iepure anti-hematii de – ser imun de iepure anti-hematii de

berbec (serul hemolitic)berbec (serul hemolitic)- ComplementComplement Principiul reacţieiPrincipiul reacţiei: complexele Ag-Ac formate : complexele Ag-Ac formate

fixează C şi-l activează pe cale clasică, fixează C şi-l activează pe cale clasică, provocând hemoliza.provocând hemoliza.

Intensitatea hemolizei se apreciază vizual (+Intensitatea hemolizei se apreciază vizual (++++) sau prin măsurarea densităţii optice +++) sau prin măsurarea densităţii optice a hemoglobinei eliberate.a hemoglobinei eliberate.

Utilizarea practică a RHLUtilizarea practică a RHL: pentru dozarea C, : pentru dozarea C, precum şi în montarea reacţiei de fixare a precum şi în montarea reacţiei de fixare a complementului. complementului.

REACŢIA DE FIXARE A REACŢIA DE FIXARE A COMPLEMENTULUI (RFC)COMPLEMENTULUI (RFC)

Este o reacţie complexă, constituită din 2 Este o reacţie complexă, constituită din 2 sisteme Ag-Ac şi cu participarea C.sisteme Ag-Ac şi cu participarea C.

În RFC participă Ig capabile să fixeze C – IgM În RFC participă Ig capabile să fixeze C – IgM şi IgG. şi IgG.

RFC se utilizează în diagnosticul virozelor, RFC se utilizează în diagnosticul virozelor, infecţiilor bacteriene, etcinfecţiilor bacteriene, etc

Toate componentele RFC sunt utilizate în Toate componentele RFC sunt utilizate în acelaşi volum fiind titrate în prealabil pentru acelaşi volum fiind titrate în prealabil pentru aprecierea dozelor de lucru.aprecierea dozelor de lucru.

Reacţia este însoţită de martori ai tuturor Reacţia este însoţită de martori ai tuturor componenţilorcomponenţilor

Reacţia se efectuează în 2 etape Reacţia se efectuează în 2 etape utilizând 2 sisteme.utilizând 2 sisteme.

I etapăI etapă – – Sistemul de bazăSistemul de bază este este constituit din constituit din Ag1Ag1 (diagnosticuri sau (diagnosticuri sau Ag necunoscute), Ag necunoscute), Ac1 (Ac1 (serul serul bolnavului sau serul imun) şi bolnavului sau serul imun) şi complementcomplement în doza de lucru. în doza de lucru. Amestecul este incubat 1h la 37Amestecul este incubat 1h la 37°° C C sau menţinut 16-18 ore la 4sau menţinut 16-18 ore la 4°° C. Dacă C. Dacă Ac se combină cu Ag omolog va avea Ac se combină cu Ag omolog va avea loc şi fixarea C (efect frecvent loc şi fixarea C (efect frecvent invizibil).invizibil).

II etapăII etapă – la sistemul de bază se ada – la sistemul de bază se adauugă gă sistemul indicator (hemolitic),sistemul indicator (hemolitic), constituit constituit din hematii de berbec din hematii de berbec (Ag2)(Ag2) combinate cu combinate cu Ac specifici Ac specifici – serul hemolitic – serul hemolitic (Ac2).(Ac2). Peste Peste 1h incubare la 371h incubare la 37°° C reacţia este C reacţia este terminată.terminată.

Evaluarea rezultatelorEvaluarea rezultatelor – dacă complementul – dacă complementul a fost fixat de primul sistem Ag-Ac a fost fixat de primul sistem Ag-Ac hemoliza nu se observă (rezultat pozitiv).hemoliza nu se observă (rezultat pozitiv). Dacă Ag1 nu corespunde cu Ac1, Dacă Ag1 nu corespunde cu Ac1, complementul rămâne disponibil pentru complementul rămâne disponibil pentru fixare pe sistemul indicator Ag2-Ac2, fixare pe sistemul indicator Ag2-Ac2, provocând provocând hemoliza (rezultat negativ)hemoliza (rezultat negativ)

Complement FixationComplement Fixation

Ag

Patient’sserum

Ag No Ag

Ag

Tehnici serologice cu utilizarea Ac Tehnici serologice cu utilizarea Ac marcaţimarcaţi

În unele cazuri este imposibil de a În unele cazuri este imposibil de a detecta o reacţie Ag-Ac: unii Ac nu detecta o reacţie Ag-Ac: unii Ac nu precipitează, alţii nici nu precipitează, precipitează, alţii nici nu precipitează, nici nu aglutinează, există complexe nici nu aglutinează, există complexe Ag-Ac care nu fixează C. În aceste Ag-Ac care nu fixează C. În aceste cazuri pot fi utilizaţi Ac marcaţi pentru cazuri pot fi utilizaţi Ac marcaţi pentru a vizualiza Ag respectiv. Conjugarea Ac a vizualiza Ag respectiv. Conjugarea Ac cu marcanţi nu afectează proprietăţile cu marcanţi nu afectează proprietăţile lor imunologice.lor imunologice.

Aceste reacţii se montează pe suport Aceste reacţii se montează pe suport solid (lamă, plăci din plastic)solid (lamă, plăci din plastic)

Marcanţii utilizaţi uzual:Marcanţii utilizaţi uzual:- FluorocromiFluorocromi (rodamina, fluoresceina), (rodamina, fluoresceina),

care emit respectiv o lumină roşu-oranj care emit respectiv o lumină roşu-oranj sau verde-galbenă sau verde-galbenă la tratarea lorla tratarea lor cu cu raze UV (raze UV (Reacţia de Imuno-Reacţia de Imuno-FluorescenţăFluorescenţă))

- EnzimeEnzime (fosfataza alcalină, peroxidaza), (fosfataza alcalină, peroxidaza), capabile să modifice culoarea unui capabile să modifice culoarea unui substrat (substrat (Reacţia Imuno-enzimaticăReacţia Imuno-enzimatică))

- Radio-izotopi Radio-izotopi ((125125J sau J sau 33H), care emit H), care emit respectiv raze gamma şi beta (respectiv raze gamma şi beta (Analiza Analiza Radio-ImunăRadio-Imună))

Reacţia de imunofluorescenţă (RIF, Reacţia de imunofluorescenţă (RIF, reacţia COONS)reacţia COONS)

Metoda directăMetoda directă (numai în scop de (numai în scop de seroidentificare). Din materialul ce conţine seroidentificare). Din materialul ce conţine AgAg (material nativ, cultură pură, biopsie (material nativ, cultură pură, biopsie tisulară) se prepară un frotiu, peste care se tisulară) se prepară un frotiu, peste care se aplică serul imun specific cu aplică serul imun specific cu Ac marcaţi cu Ac marcaţi cu fluorocrom.fluorocrom. Peste 20 min de incubare într-o Peste 20 min de incubare într-o cameră umedă preparatul este studiat la cameră umedă preparatul este studiat la microscopul luminiscent. În caz de reacţie microscopul luminiscent. În caz de reacţie pozitivă se observă luminiscenţă locală. pozitivă se observă luminiscenţă locală. Inconvenient Inconvenient – necesitatea de a avea seruri – necesitatea de a avea seruri imune marcate specifice pentru fiecare Ag.imune marcate specifice pentru fiecare Ag.

                                                                                                              

                                                                                                 

• positive test for rabies • negative test for rabies

Metoda indirectăMetoda indirectă. Poate fi utilizată . Poate fi utilizată pentru sero-identificare şi sero-pentru sero-identificare şi sero-diagnostic.diagnostic.

Pe frotiul ce conţine Pe frotiul ce conţine AgAg se aplică se aplică AcAc corespunzători corespunzători nemarcaţinemarcaţi. Peste 20 . Peste 20 min se spală minuţios preparatul, min se spală minuţios preparatul, apoi se adaapoi se adauugă gă anti-Ig fluorescentăanti-Ig fluorescentă, , care se va combina cu Ac din care se va combina cu Ac din complex. Acest reactiv poate fi complex. Acest reactiv poate fi utilizat în numeroase reacţii.utilizat în numeroase reacţii.

Anti-Ig se obţine prin imunizarea Anti-Ig se obţine prin imunizarea iepurilor (sau altor animale) cu Igiepurilor (sau altor animale) cu Ig umaneumane..

Tehnica fondată pe fixarea C:Tehnica fondată pe fixarea C: Markerul fluorescent este un ser anti-Markerul fluorescent este un ser anti-complement care se va lega de complement care se va lega de complementul fixat pe complexul Ag-complementul fixat pe complexul Ag-Ac.Ac.

RIF se utilizează pentru identificarea RIF se utilizează pentru identificarea rapidă a Ag din biosubstrate sau rapidă a Ag din biosubstrate sau pentru serodiagnostic.pentru serodiagnostic.

Reacţia Imuno-Enzimatică (RIE, ELISAReacţia Imuno-Enzimatică (RIE, ELISA - -Enzyme Linked Immunosorbent Enzyme Linked Immunosorbent AAssaysssays).).

- RIE directă (metoda sandwich).- RIE directă (metoda sandwich). Utilizată Utilizată doar în sero-identificarea Ag.doar în sero-identificarea Ag. În godeurile din În godeurile din placa de polistiren în care sunt fixaţi placa de polistiren în care sunt fixaţi Ac Ac cunoscuţicunoscuţi se toarnă soluţia de se toarnă soluţia de Ag necunoscutAg necunoscut. . Se incubează 1h. După o spălare minuţioasă a Se incubează 1h. După o spălare minuţioasă a godeurilor se adagodeurilor se adauugă gă Ac marcaţi cu enzimeAc marcaţi cu enzime, , care se fixează pe epitopii liberi ai Ag care se fixează pe epitopii liberi ai Ag polivalent. După incubare de 30 min-1h se polivalent. După incubare de 30 min-1h se spală iarăşi godeurile. Prezenţa complexului spală iarăşi godeurile. Prezenţa complexului Ac-Ac-Ag-Ac-marcat Ag-Ac-marcat se depistează cu ajutorul se depistează cu ajutorul substratului cromogensubstratului cromogen (substanţă iniţial (substanţă iniţial incoloră, dar care se colorează sub acţiunea incoloră, dar care se colorează sub acţiunea enzimeienzimei, ex. apa oxigenata si , ex. apa oxigenata si orthofenilendiaminaorthofenilendiamina). ).

- RIE indirectă.RIE indirectă. Utilizată în serodiagnosticUtilizată în serodiagnostic. . Ag cunoscutAg cunoscut este fixat la fundul godeurilor. este fixat la fundul godeurilor. Ac (serul testat)Ac (serul testat) se întroduce în godeu, se întroduce în godeu, după 1h se spală totul şi se adadupă 1h se spală totul şi se adauugă gă ligandul marcat cu enzimăligandul marcat cu enzimă (anti-Ig sau (anti-Ig sau proteina A cuplate cu enzimă). Acest proteina A cuplate cu enzimă). Acest ligand se fixează pe Ac testaţi. Se adaligand se fixează pe Ac testaţi. Se adauugă gă apoi apoi substratul cromogensubstratul cromogen. Cantitatea de . Cantitatea de Ac se măsoară după densitatea optică a Ac se măsoară după densitatea optică a lichidului din godeuri.lichidului din godeuri.

- Tehnica imunoblot (western blot)Tehnica imunoblot (western blot) permite identificarea Agpermite identificarea Ag sau ai Ac sau ai Ac dintr-un dintr-un amestecamestec..

I etapăI etapă – electroforeza în gel a probei de Ag – electroforeza în gel a probei de Ag

II etapăII etapă – transferul electric al Ag pe – transferul electric al Ag pe membrana de nitrocelulozămembrana de nitroceluloză

III etapăIII etapă – pe membrană sunt aplicaţi – pe membrană sunt aplicaţi succesiv Ac dirijaţi contra Ag, apoi succesiv Ac dirijaţi contra Ag, apoi conjugatul marcat cu enzimă, care permite conjugatul marcat cu enzimă, care permite depistarea Ac fixaţi. După o spălare se depistarea Ac fixaţi. După o spălare se adaadauugă substratul cromogen. Fiecare gă substratul cromogen. Fiecare complex Ag-Ac formează zone colorate complex Ag-Ac formează zone colorate distincte. distincte. UtilizareUtilizare: depistarea Ac anti-HIV, : depistarea Ac anti-HIV, caracterizarea Ac monoclonali...caracterizarea Ac monoclonali...

Proteinele sunt separate electroforetic în gel poliacrilamid. Proteinele sunt separate electroforetic în gel poliacrilamid. Sub acţiunea câmpului electric are loc difuzia proteinelor Sub acţiunea câmpului electric are loc difuzia proteinelor conform greutăţii moleculare, aranjându-se în zone liniare conform greutăţii moleculare, aranjându-se în zone liniare subţiri diferite: mai aproape de start se aranjează subţiri diferite: mai aproape de start se aranjează proteinele cu masă moleculară mare (120-150 kDa), la final proteinele cu masă moleculară mare (120-150 kDa), la final se aranjează proteinele cu masă moleculară mică (5-se aranjează proteinele cu masă moleculară mică (5-10kDa).10kDa).

Apoi lamela de gel este transferată pe o foaie de Apoi lamela de gel este transferată pe o foaie de nitroceluloză amplasată între electrozii unei surse de curent nitroceluloză amplasată între electrozii unei surse de curent continuu. Sub acţiunea câmpului electric are loc trecerea continuu. Sub acţiunea câmpului electric are loc trecerea proteinelor din gel pe nitroceluloză, unde se fixează foarte proteinelor din gel pe nitroceluloză, unde se fixează foarte bine pe hârtie. bine pe hârtie.

Proteinele fixate sunt marcate cu o enzimă (e.g. alkaline Proteinele fixate sunt marcate cu o enzimă (e.g. alkaline phosphatase sau peroxidase) incoloră. phosphatase sau peroxidase) incoloră.

Procedura ulterioară de montare a reacţiei este similară Procedura ulterioară de montare a reacţiei este similară tehnicii ELISA.tehnicii ELISA.

Analiza radioimună (ARI)Analiza radioimună (ARI)

Principiul este identic cu cel al RIEPrincipiul este identic cu cel al RIE

AgAg se fixează la fundul godeurilor din se fixează la fundul godeurilor din placa de plastic. Se adaplaca de plastic. Se adauugă gă Ac testaţiAc testaţi care se vor combina cu Ag omolog. care se vor combina cu Ag omolog. După spălarea godeurilor, se adaDupă spălarea godeurilor, se adauugă gă un un ligand radiomarcatligand radiomarcat (anti-Ig). După (anti-Ig). După eliminarea excesului de izotopi prin eliminarea excesului de izotopi prin spălare, se măsoară radio-spălare, se măsoară radio-activitatea: ea este proporţională cu activitatea: ea este proporţională cu concentraţia Ac dozaţi. concentraţia Ac dozaţi.

Reacţia de neutralizare (RN):Reacţia de neutralizare (RN): formarea complexelor Ag-Ac duce la formarea complexelor Ag-Ac duce la neutralizarea efectului biologic al Ag neutralizarea efectului biologic al Ag (neutralizarea toxinelor, enzimelor, (neutralizarea toxinelor, enzimelor, virusurilor).virusurilor).

Reacţia de imobilizareReacţia de imobilizare

Unii anticorpi anti-bacterieni pot Unii anticorpi anti-bacterieni pot provoca imobilizarea bacteriilor provoca imobilizarea bacteriilor mobile (vibrioni, spirochete)mobile (vibrioni, spirochete)