ISOLASI TRITERPENOID DAN UJI ANTIOKSIDAN DARI FRAKSI ETIL ASETAT KULIT BATANG MERANTI MERAH

(Shorea singkawang (Miq).Miq)

ARTIKEL

ISMARTI BP.0921207031

PROGRAM STUDI KIMIA PASCASARJANA UNIVERSITAS ANDALAS

2011

Triterpenoid Isolation and Antioxidant Experiment of Stem Red Meranti

Fractil Etil Asetat (Shorea Singkawang (Miq).Miq)

Ismarti (0921207031)

(Under Guidance of Prof. Dr. Yunazar Manjang and Dr. Mai Efdi, M.Si)

ABSTRACT

Shorea Singkawang (Miq).Miq is kind of traditional medicine that is belongs

to Dipterocarpaceae family. Its fruit can be used as food preservation and

medicines. On the root, stem, leaves and Shorea fruits contain of secondary

metabolite which acts as antioxidant, antibacterial, anti termite, anti cancer,

antifungal and sitotocsic. The sample of the research was stem. Maceration was

done by using solution n-hexane and dreg was macerated with etil asetat.

Separation of compound in thick extract of etil asetat was done by using liquid

chromatography column and SGP method (Step Gradient Polarity). The

purification of compound used KLT and it was eluted in different level of eluen

polarity; create a single spot with 243-245C melted point and 23 mg weight. The

result of ultraviolet spectroscopy analysis (UV), infrared (IR) and GC-MS showed

that the result of compound isolation was triterpenoid penta siklik which consists

of ester group, benzenoid, charbosilat and hydroxyl with 592 gram/mol molecule

weight. On the other hand, the position of substituent could not determine yet. The

experiment of antioxidant fraktil etil asetat activity toward DPPH and various of

concentration gave EC50 about 82 ppm that shown fraksi etil asetat was active as

antioxidant.

Key words: Shorea singkawang (Miq).Miq, triterpenoid, antioxidant

PENDAHULUAN

Shorea singkawang (Miq).Miq (Meranti merah) adalah tumbuhan obat yang

termasuk salah satu spesies dari tumbuhan family Dipterocarpaceae. Tumbuhan

ini merupakan kelompok tumbuhan tingkat tinggi penghuni hutan tropis yang

tersebar di sebagian wilayah Indonesia terutama hutan Kalimantan (tumbuhan ini

dikenal dengan nama tengkawang) dan Sumatera bagian timur (dikenal dengan

nama singkawang pinang).

Beberapa spesies dari genus Shorea adalah penghasil buah tengkawang yang

merupakan komoditi ekspor dimana kulit kayunya mengeluarkan getah damar

yang dapat digunakan untuk berbagai keperluan, seperti dalam industri obat-

obatan dan kosmetika (Hakim.E.H.et al, 2002). Selain itu kayunya juga awet,

ringan, kuat dan juga bermutu tinggi sehingga banyak digunakan sebagai bahan

bangunan, perahu dan furniture (Lukman H, 2010). Buahnya telah lama

dimanfaatkan oleh masyarakat pedesaan sebagai obat tradisional dalam

menyembuhkan berbagai macam penyakit, seperti: diare, luka bakar, obat

sariawan dan dapat memperlancar peredaran darah. Minyak hasil perasan dari biji

buah singkawang ini digunakan sebagai pengawet nasi minyak tradisional.

Keawetan dari kayu meranti dan biji singkawang sebagai pengawet makanan

merupakan pertanda adanya interaksi tumbuhan dengan lingkungannya.

Interaksi tumbuhan dengan lingkungannya berhubungan dengan

pembentukan metabolit sekunder di dalam tumbuhan tersebut dimana

pembentukan metabolit sekunder ini berkaitan erat dengan fungsi ekologisnya.

Pada bagian batang, daun dan biji tumbuhan Shorea diduga mengandung

metabolit sekunder yang berfungsi sebagai antioksidan, antibakteri, antifugal dan

sitotoksik (Hakim, et al, 2002). Berdasarkan penelusuran literatur terhadap genus

Shorea, diketahui bahwa telah diisolasi berbagai jenis senyawa metabolit

sekunder dengan bioaktivitas yang sangat menarik diantaranya: senyawa

oligostilbenoid dari ekstrak metanol kulit batang Shorea gibbosa, sebagai anti

kanker (Saroyobudiono, et al, 2008), senyawa turunan fenol dari ekstrak aseton

kulit batang Shorea multiflora (Hakim, et al, 2002), senyawa leavifonol,

Diptoindonesin A, dan Ampelopsin A dari kulit batang Shorea siminis (Aminah,

et al, 2003). Namun, isolasi senyawa triterpenoid yang juga merupakan metabolit

sekunder belum begitu banyak dilakukan terhadap tumbuhan genus Shorea ini,

khususnya pada Shorea singkawang (Miq). Miq. Pengisolasian golongan senyawa

triterpenoid didapatkan hanya pada Shorea robusca. Senyawa triterpenoid ini

resisten terhadap rayap kayu kering (Microcerotermesbeesoni) (Nicholaus et

al,1994).

Senyawa golongan terpenoid menunjukkan aktivitas farmakologi yang

menarik sebagai antiviral, antibakteri, antiinflamasi, antikanker, dan sebagai

inhibisi terhadap sintesis kolesterol (Mahato et al, 1997). Senyawa terpenoid yang

diisolasi dari tumbuhan Nardophyllum bryoides menunjukkan aktivitas sitotoksik

terhadap sel pangkreatik adenokarsinoma manusia (Sanchez et al, 2010). Berbeda

dengan yang ditemukan oleh Lage et al (2010), bahwa senyawa terpenoid dari

spesies tumbuhan Euphorbia memberikan aktivitas antitumor.

Senyawa golongan terpenoid merupakan komponen penting dari banyak ekstrak

kayu dan juga merupakan konstituen utama dari ekstrak yang diperoleh dengan

pelarut non polar. Peran terpenoid yang sudah banyak diketahui adalah terpenoid

sebagai zat pengatur tumbuh dan anti rayap sedangkan terpenoid sebagai bahan

aktif insektisida biologis dan antioksidan belum banyak diketahui (Setiawati T,

2001). Berdasarkan dari penelusuran literatur yang telah dilakukan belum ada

laporan ilmiah yang kami dapatkan tentang kandungan senyawa metabolit

sekunder yaitu terpenoid (triterpenoid) serta bioaktivitasnya yang menarik dari

tumbuhan Shorea singkawang (Miq).Miq. Oleh karena itu penulis melakukan

isolasi senyawa metabolit sekunder terutama golongan senyawa triterpenoid dari

tumbuhan Shorea singkawang (Miq).Miq dengan judul Isolasi Triterpenoid dan

Uji Antioksidan Fraksi Etil Asetat Dari Kulit Batang Meranti merah (Shorea

singkawang (Miq).Miq)

MATERI DAN METODE

Bahan

Bahan-bahan yang digunakan adalah kulit batang dari tumbuhan Shorea

singkawang Miq.).Miq. Bahan kimia yang digunakan sebagai pelarut pada proses

ekstraksi dan pemurnian adalah n-heksan teknis yang didistilasi, etilasetat yang

didestilasi, metanol teknis yang didistilasi, Adsorben yang dipakai pada kolom

kromatografi adalah silika gel 60 Art. 77733 keluaran Merck, Pereaksi Meyer

dipakai untuk identifikasi Alkaloid, pereaksi Liebermann-Buchard untuk

identifikasi terpenoid dan steroid, sianoda test untuk identifikasi flavonoid dan

FeCl3 untuk identifikasi fenolik kertas saring whatman, aluminium foil dan tissue.

Peralatan

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah sebagai berikut: Rotary

evaporator Heidolph WB 2000, peralatan distilasi, fisher jhon Melting Point

Apparatus, Spektrofotometer UV-1700 Series, FTIR (Fourier Transform Infrared)

Perkin Elmer 1600 series, GC-MS QP 2010 plus Shimadzu, lampu ultraviolet

untuk pengungkap noda model UV GL 58 UV 254 nm dan 365 nm, kertas

saring, plat KLT (Kromtografi Lapis Tipis), plat tetes, alumunium foil, Kolom

Kromatografi Vakum Cair berdiameter 3 cm dan tinggi 20 cm, Chamber dan

peralatan gelas lainnya yang umum digunakan dalam laboratorium.

Cara Kerja

Sampel yang diperlukan untuk penelitian diperoleh dari desa Seling, kecamatan

Rantau Panjang, Kabupaten Merangin, Provinsi Jambi dan diidentifikasi pada

Lembaga Herbarium Jurusan Biologi ( ANDA ) Universitas Andalas Padang

dengan kode specimen No.1. Coll. 01-Yi. Bagian yang diteliti adalah kulit batang

Shorea singkawang (Miq).Miq yang telah dikeringanginkan pada udara terbuka

yang tidak terkena cahaya matahari secara langsung, sampai beratnya konstan,

dirajang, dihaluskan, hingga diperoleh serbuk kering kulit batang Shorea

singkawang (Miq). Miq kemudian ditimbang, siap untuk dilakukan ekstraksi.

Ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi. proses maserasi dimulai dari

pelarut yang bersifat nonpolar kemudian dilanjutkan dengan pelarut yang lebih

polar. Sebanyak 4,6 kg serbuk kering kulit batang Shorea singkawang (Miq). Miq,

dimaserasi dengan 6 L pelarut n-heksana selama 5 hari. Kemudian hasil maserasi

disaring, filtrat n-heksana yang didapat diuapkan dari pelarutnya menggunakan

alat rotary evaporator, pada suhu 400C. Proses ekstraksi ini dilakukan berulang-

ulang sebanyak 5 kali (sampai warna larutan memudar) sehingga didapatkan

ekstrak pekat n-heksana yang berwarna kuning kecoklatan. Semua ekstrak

digabung kemudian dipekatkan kembali dengan rotary evaporator pada suhu 40

0C.

Selanjutnya ampas dimaserasi kembali dengan 6 liter pelarut etil asetat

selama 5 hari kemudian disaring dan dipekatkan dengan alat rotary evaporator

40 0C. Maserasi dilakukan sampai 5 kali (sampai warna larutan dari coklat

menjadi memudar) sehingga didapatkan ekstrak kental etil asetat yang berwarna

coklat tua. Masing-masing ekstrak pekat hasil maserasi dikumpulkan dalam suatu

tempat kemudian dipekatkan kembali dengan rotary evaporator pada suhu 40 0C

lalu ditimbang beratnya.

Untuk memisahkan senyawa-senyawa yang ada dalam ekstrak kental etil

asetat dilakukan dengan menggunakan kromatografi vakum cair (KVC) yang

bertujuan untuk menyederhanakan pemisahan komponen metabolit sekunder yang

terdapat di dalam sampel. Kolom KVC yang berdiameter 5 cm dan tinggi 20 cm

diisi dengan fasa diam silika gel 60 Art. 7733 sebanyak 70 g dengan perbandingan

berat sampel dan silika 1:10 sehingga ketinggian silika mencapai lebih kurang 7

cm. Pengisian kolom dilakukan dalam keadaan vakum, agar diperoleh kerapatan

kemasan maksimum. Kemudian Sebanyak 7 g ekstrak kering etil asetat dilakukan

preadsorbsi dan dimasukkan ke dalam kolom kromatografi vakum cair dan

pengelusian dilakukan dengan eluen secara SGP (Step Gradient Polarity ) yaitu

metoda elusi dengan cara meningkatkan kepolaran pelarut secara bergradien

dengan berbagai perbandingan eluen yang dimulai dari pelarut n-heksana 100%

kemudian ditingkatkan kepolarannya secara bertahap dengan menambahkan

pelarut yang lebih polar, n-heksana: etil asetat, eluen yang digunakan dimulai n-

heksana: etil asetat ( 9:1 ) dan seterusnya sampai etil asetat 100% dilanjutkan

dengan etil asetat : metanol sampai perbandingan etil asetat : methanol ( 5 : 5 )

Fraksi-fraksi yang keluar ditampung dengan vial 15 mL, setiap vial diberi nomor

hingga mencapai 224 vial, diuapkan pelarutnya pada suhu kamar, sampai semua

pelarut mongering, kemudian diketahui bahwa pada dinding vial nomor 99 yaitu

pada perbandingan eluen n-heksana : etil asetat (3: 7) sampai vial nomor 140

dengan perbandingan eluen n-heksana : etil asetat (1:9) terbentuk padatan putih

kekuningan, kemudian dilakukan uji KLT pada vial tersebut dan vial yang

memperlihatkan pola noda sama dikumpulkan digabung dan diberi nomor

diperoleh 6 fraksi F1, F2, F3, F4, F5, F6, ternyata pada vial dengan nomor 130

(F4) terdapat satu noda maka pemisahan dilanjut dengan metode tirturasi dengan

cara menggunakan sistem kelarutan dua pelarut yang berbeda kelarutan yaitu n-

heksan dan metanol. Padatan yang putih kekuningan dilarutkan terlebih dahulu

dengan pelarut metanol kemudian ditambahkan secara perlahan pelarut n-heksan

tetes pertetes, penambahan n heksan dihentikan setelah terbentuk kekeruhan,

kemudian larutan ini dibiarkan pada suhu kamar selama 12 jam sampai semua

pelarut menguap terbentuk endapan berwarna putih, kemudia dilakukan

pencucian dengan n-heksan.diperoleh padatan putih amorf yang larut baik dalam

pelarut etil asetat.

Senyawa yang terisolasi diuji tingkat kemurniannya menggunakan KLT,

dilakukan pengelusian ber ulang-ulang dengan berbagai tingkat kepolaran eluen

yang menghasilkan noda tunggal berwarna merah dengan pereaksi Liebermann

Burchard (LB) dilihat di bawah lampu UV. Selanjutnya dilakukan pengukuran

titik leleh dengan alat Fisher Johns Melting Point Aparatus. kemudian dihitung

beratnya selanjutnya di analisis menggunakan spektroskopi UV-Vis, FTIR,dan

GC-MS.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Hasil pengujian kandungan metabolit sekunder (alkaloid, flavonoid, steroid,

terpenoid, fenolik, saponin dan kumarin) dari kulit batang Shorea singkawang

(Miq). Miq, dapat dilihat pada Tabel 1 berikut ini:

Tabel 1. Pengujian profil fitokimia kulit batang Shorea singkawang (Miq). Miq

No Metabolit

sekunder Pereaksi Pengamatan Hasil

1 Alkaloid Mayer Tidak terbentuk endapan putih _

2 Fenolik Besi (III) klorida Larutan ungu/biru +

3 Flavonoid Logam Mg-HCl Larutan orange/merah +

4 Steroid Lieberman-

Buchard

Larutan hijau/biru +

5 Terpenoid Lieberman-

Buchard

Larutan merah/ungu +

6 Saponin Tes busa Busa +

7 Kumarin NaOH 10% Fluorisensi semakin terang +

Hasil pengujian profil fitokimia yang dilakukan pada kulit batang Shorea

singkawang (Miq). Miq yang diperoleh dari desa Seling kecamatan Rantau

panjang, Kabupaten Merangin Propinsi Jambi, memperlihatkan kandungan

metabolit sekunder yang sama dengan laporan Saroyobudiono et al. (2008) yaitu

tumbuhan dari genus Shorea mengandung senyawa golongan fenolik, flavonoid,

terpenoid, steroid, dan saponin. .Berdasarkan hasil pengujian profil fitokimia

tersebut membuktikan bahwa pada famili atau genus tumbuhan yang sama akan

diperoleh senyawa metabolit sekunder yang identik. Pendapat ini dikenal dengan

istilah kemotaksonomi yakni korelasi antara kandungan metabolit sekunder

dengan taksonomi tumbuhan.

Ekstraksi Senyawa Triterpenoid dari Kulit Batang Shorea singkawang

(Miq). Miq

Isolasi serbuk kering kulit batang tumbuhan Shorea singkawang (Miq).

Miq(4,6 kg) menggunakan metoda maserasi dimulai dengan pelarut non polar n-

heksan pada suhu kamar selama (5x5 hari), dengan total volume terpakai

sebanyak 30 L disaring dan di uap kan pelarutnya dengan dilakukan evaporasi

memakai penguap vakum (rotary evaporator ) diperoleh ekstrak kering heksan

sebanyak 26,6 g. selanjut nya ampas direndam kembali dengan pelarut yang lebih

polar etil asetat pada suhu kamar selama ( 5x5 hari), kemudian disaring dan di

uapkan pelarut nya dengan (Rotari evaporator) diperoleh ekstrak kering etil asetat

sebanyak 46,6 g. Didapatkan dua fraksi seperti yang tercantum pada Tabel 2 di

bawah ini.

Tabel 2. Hasil maserasi dengan n-heksana dan etil asetat

No Fraksi Berat (g) Warna

1 n-Heksana 26,6 Kuning kecoklatan

2 Etil asetat 46,5 Coklat tua

Dari tabel 2 di atas diketahui bahwa fraksi n-heksana merupakan fraksi

dengan kandungan metabolit sekunder yang lebih rendah daripada fraksi etil

asetat. Hal ini mengindikasikan bahwa senyawa semipolar relatif lebih banyak

daripada senyawa nonpolar yang terdapat pada kulit batang Shorea singkawang

(Miq). Miq.

Pemisahan dan Pemurnian Fraksi Etil Asetat dengan kolom KVC

Hasil pemurnian 7 g ekstrak etil asetat dengan teknik kolom kromatografi

vakum cair dan dielusi dengan pelarut secara bergradien mempergunakan pelarut

heksan, etil asetat dan methanol, dengan volume masing-masing eluen sebanyak

200 ml, di tamping dengan vial 15 ml, setiap vial diberi nomor diperoleh 224

vial, setelah vial di keringkan pada suhu kamar pada vial nomor 99 sampai 140

terbentuk padatan putih kekuningan, setelah dianalisa dengan KLT, vial dengan

pola noda yang sama digabung, sehingga diperoleh 6 Fraksi. Ternyata vial dengan

nomor 130 (F4) memperlihatkan noda tunggal, dapat dilihat pada Tabel 3 di

bawah ini:

Tabel 3. Analisis KLT hasil Kolom Kromatografi Vakum Cair

No Fraksi No Vial KLT

1. F1 99-112 Tailing

2. F2 113-126 Dua noda tailing

3. F3 127-129 Tailing

4. F4 130 Satu noda

5. F5 131-135 Tailing

6. F6 136-140 Tiga noda memanjang

Selanjut nya dilakukan rekristalisasi terhadap vial dengan nomor 130 (F4)

dengan pelarut heksan dan methanol diperoleh padatan putih amorf sebanyak 23

mg yang larut baik dalam pelarut etil asetat. Kemudian dilakukan penentuan jarak

leleh, dimana senyawa hasil isolasi meleleh pada pada suhu 243 245 0C

dengan ranji jarak leleh yang tidak lebih dari 2 0C

, meng indikasikan senyawa

relativ telah murni. Selanjutnya pengujian kemurnian terhadap senyawa hasil

isolasi dilakukan dengan metoda Kromatografi Lapis Tipis dengan berbagai

komposisi eluen memperlihatkan noda tunggal yaitu Rf o,18 (n-Heksan: Etil

Asetat (1:9)), Rf 0,23 (EtilAsetat (100 %)), Rf 0,68 (EtilAsetat : Metanol(9:1)), Rf

0,38 (EtilAsetat :Diklorometan (8:2)), Rf 0,48 (Etil Asetat : Diklorometan (9:1)

berdasarkan percobaan di atas maka dapat disimpulkan bahwa senyawa hasil

isolasi relativ murni Berikut nilai Rf senyawa hasil isolasi dengan berbagai

komposisi eluen seperti tercantum pada Tabel 4 di bawah ini.

Tabel 4. Nilai Rf dari KLT senyawa hasil isolasi

No Pengelusi Rf

1 n-Heksana : Etil asetat (1:9) 0,18

2 Etil asetat (100 %) 0,23

3 Etil asetat : Metanol (9:1) 0,68

4 Etil asetat : Diklorometana (8:2) 0,38

5 Etil asetat : Diklorometana (9:1) 0,48

Data perlakuan dengan kromatografi lapis tipis untuk berbagai tingkat kepolaran

eluen seperi tercantum pada Tabel 4 di atas dan gambarnya dapat dilihat pada

lampiran lima, menunjukkan bahwa senyawa hasil isolasi yang diperoleh

memperlihatkan noda tunggal. Berdasarkan hasil uji titik leleh dan KLT, dapat

disimpulkan bahwa senyawa hasil isolasi telah murni dan siap dilakukan

pengukuran spektroskopi.

Karakterisasi Struktur Senyawa Hasil Isolasi

Sebelum dilakukan karakterisasi struktur senyawa hasil isolasi dengan

spektroskopi terlebih dahulu dilakukan identifikasi dengan menggunakan pereaksi

Liberman-Buchard. Hasil identifikasi menunjukkan terbentuknya warna merah

ungu.. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa hasil isolasi merupakan senyawa

golongan triterpenoid Selanjutnya senyawa hasil isolasi dianalisa dengan

menggunakan spektrofotometer Ultraviolet ( UV), Infra merah (IR), dan GC- MS.

Analisis spektum Ultraviolet (UV)

Hasil pengukuran spektrum UV (MeOH) senyawa hasil isolasi menunjukkan

serapan maksimum berturut-turut pada panjang gelombang maks 282,60 nm

(0,056) di rujuk sebagai pita aromatik sebagai contoh, stirena mempunyai transisi

* pada maks 282 nm adalah karakteristik pita B (benzenoid bands) dan

adanya kromofor ikatan rangkap terkonjugasi yang ditunjukkan pada pada

max=202 nm.(Supratman Unang. 2009 ). Spektrum UV dapat dilihat pada Gambar

22 di bawah ini:

Gambar 1 . Spektrum UV senyawa hasil isolasi

Hal ini menunjukkan bahwa senyawa hasil isolasi yang didapat adalah

golongan triterpenoid yang mengandung gugus aromatis tersubsitusi berdasarkan

pita serapan maksimum pada panjang gelombang yang diperoleh terindentifikasi

sebagai pita serapan gugus benzenoid (Supratman Unang,2009).

Analisis Spektrum Inframerah

Spektrum Inframerah (IR ) senyawa hasil isolasi memperlihatkan serapan

melebar pada bilangan gelombang, max : 3426,89 cm-1

, mengindikasikan adanya

gugus hidroksil (O-H), pita serapan pada bilangan gelombang, max: 2928,38 cm1,

menunjukkan adanya regangan C-H alifatis, pita serapan pada bilangan

gelombang, max : 1730,8 cm-1

, menunjukkan adanya gugus karbonil C=O dari

ester.yang diperkuat dengan adanya gugus C-O pada pita serapan bilangan

gelombang max 1263,15 cm-1

Spektrum infamerah dapat ditunjukkan pada

gambar 2 di bawah ini:

Gambar 2. Spektrum Inframerah

Selanjutnya serapan pada bilangan gelombang, max 1633,41 cm -1

menunjukkan adanya regangan C=C aromatik, serapan pada bilangan gelombang,

max : 1456,96 cm-1

menunjukkan adanya regangan C-H lentur, serapan pada

bilangan gelombang, max : 1374,03 cm-1

menunjukkan adanya C(CH3)2 ciri

khas senyawa terpenoid (gem dimetil). Sedangkan pada daerah sidik jari vibrasi

regangan dari C-O didapatkan dua lingkungan yaitu pada daerah bilangan

gelombang, max : 1263,15 cm-1

dan serapan pada bilangan gelombang, max :

1066,44 cm-1

, 1025, 94 cm-1

, pada daerah bilangan gelombang, max : 799,35 cm-1

menunjukkan adanya senyawa aromatik tersubsitusi, pada bilangan gelombang,

max : 620,966 cm-1

menunjukkan daerah serapan lentur C=C-H keluar bidang. Atas

dasar ini maka senyawa hasil isolasi, diduga sebagai suatu triterpenoid pentasiklik

dengan subsituen benzenoid dan gugus karboksilat. Hal yang sama dijumpai pada

senyawa fenilasetat untuk vibrasi C=O pada bilangan gelombang, max: 1730 cm-1

.

(Supratman Unang,2009).

1374

1263

3426

2928

709

620

1633

1456 1730

1066 1025

Tabel 5. Interpretasi spektrum infra merah senyawa hasil isolasi

Bilangan gelombang

( max, cm-1

)

Jenis Vibrasi

3426 OH

2928 C-H, ulur

1730 C=O, karbonil (ester)

1633 C=C, aromatik

1456 C-H,lentur

1374 C(CH3)2,gem dimetil

1263,15 C-O,ester

1066,1025 C-O

709, 620 C=C-H,aromatik

Berdasarkan analisa data di atas dapat diusulkan bahwa senyawa hasil isolasi

merupakan senyawa dari golongan triterpenoid pentasiklik yang memiliki

substituent ester (Benzenoid), yang didukung oleh serapan maksimum pada

daerah maks = 282 nm yang ditunjukkan spektrofotometer Ultraviolet (UV), asam

karboksilat, dan alkohol, spektrum yang dihasilkannya sangat identik.

Spektroskopi Kromatografi Gas Spektrometer Massa (GC-MS)

Analisis senyawa hasil isolasi dengan menggunakan spektroskopi massa

Simadzu QP 2O10 plus dengan metoda EIMS (Elektron Impact Mass

Spektroskopy ) memperlihatkan adanya satu puncak dapat dilihat pada gambar

di bawah ini:

Gambar 3. Kromatogram Kromatografi Gas

Perekaman dari Kromatografi Gas-Spektrometer Massa memberikan

kromatogram memperlihatkan senyawa hasil isolasi telah murni yang memberikan

satu puncak pada waktu retensi 32,4 menit. Puncak kromatografi tunggal

menunjukkan bahwa senyawa hasil isolasi merupakan senyawa murni. Spektrum

massa ditunjukkan pada gambar di bawah ini. Pembelahan fragmen dari spektrum

massa senyawa hasil isolasi memberikan puncak M +

pada m/z = 592 .

Gambar 4. Pola fragmentasi dari Spektroskopi massa

Senyawa triterpenoid hasil isolasi mempunyai masa molekul 592 gram/mol.

Dalam spektrometer massa senyawa tersebut mengalami fragmentasi menjadi ion

fragmen dengan m/z = 592, 551, 537, 523, 313, 239, 137, 85, 71, 57, (100%), dan

43. Ion fragmen utama ditunjukkan dengan m/z = 57 yang disimpulkan sebagai

fragmen yang paling stabil dalam spektroskopi massa.

Berdasarkan ion molekul dan pola fragmentasi dari senyawa isolasi,

kemungkinan adanya kemiripan dengan pola fragmentasi senyawa triterpenoid

asam boswellic (3-O-Asetofenol-11-Hidroxy-- boswellic asid) hasil temuan

(Simla Basar 2005) yang memiliki titik leleh 245- 247 0C dan ion molekul dengan

pola framentasi m/z = 43, 56, 73, 83, 95, 133, 237, 313, 524, 545, 557, 598

namun untuk senyawa hasil isolasi belum dapat diketahui letak substituennya

dengan pasti.

Uji Antioksidan Ekstrak Kulit Batang Shorea singkawang (Miq). Miq

Pada pengujian awal uji antioksidan ini ditentukan terlebih dulu panjang

gelombang maksimum DPPH. Dari hasil pengukuran didapatkan panjang

gelombang DPPH maks adalah 515 nm. Panjang gelombang ini digunakan untuk

pengukuran absorban larutan sampel.

Dari 3,8 mL larutan DPPH 50 M yang ditambahkan dalam 0,2 mL metanol

digunakan sebagai kontrol didapatkan absorban sebesar 0,387. Dari hasil

pengukuran absorban fraksi n-heksan dan etil asetat, absorban dari masing-masing

sampel dapat dilihat pada Tabel 7.

Tabel 5. Hasil penentuan % inhibisi dari sampel dan kontrol

No. Fraksi (1000 ppm) % Inhibisi

1. n-heksan 48,0

2. etil asetat 95,5

3. vitamin C (kontrol +) 96,1

Berdasarkan Tabel 5 diketahui bahwa fraksi n-heksan memiliki persen

inhibisi yang lebih kecil daripada fraksi etil asetat. Hal ini mengindikasikan

bahwa fraksi etil asetat memiliki aktivitas antioksidan yang lebih baik dari fraksi

n-heksana dan memiliki aktivitas mendekati standar positif (vitamin C).

Terhadap fraksi etil asetat dilanjutkan pengujian aktivitas antioksidan dari

beberapa konsentrasi, yaitu 100 ppm; 200 ppm; 400 ppm; 600 ppm ; 800 ppm ;

dan 1000 ppm. Berdasarkan hasil pengukuran absorban didapat % inhibisi seperti

yang terlihat pada Tabel 7. Cara perhitungan dan regresi (antara konsentrasi

sampel dengan % inhibisi) dapat dilihat pada Lampiran 3 dan 4.

Tabel 8. Hasil penentuan % inhibisi fraksi etil asetat

No Konsentrasi (ppm) % Inhibisi

1. 100 38,7

2. 200 62,0

3. 400 74,6

4. 600 88,1

5. 800 93,5

6. 1000 95,1

Berdasarkan % inhibisi yang didapat dihitung EC50 dari fraksi etil asetat

ini, yaitu konsentrasi ekstrak yang diperlukan untuk meredam 50% aktivitas

radikal DPPH. Didapatkan EC50 sebesar 82 ppm. Hal ini berarti dengan

konsentrasi 82 ppm fraksi etil asetat ekstrak Shorea singkawang (Miq) Miq dapat

meredam 50% aktivitas radikal DPPH.

KESIMPULAN

1. Berdasarkan analisa UV, IR, GC-MS, serta pengujian dengan pereakasi

Liebermann-Burchad maka senyawa hasil isolasi dari fraksi etil asetat kulit

batang Shorea singkawang (Miq).Miq merupakan senyawa golongan

triterpenoid pentasiklik turunan oleanan dengan m/z = 592, dan dapat

diusulkan rumus molekul yaitu C38H56O5 dengan subsituen yang terikat pada

senyawa triterpenoid adalah gugus hidroksi, karboksilat dan fenil asetat.

2. Fraksi etil asetat dari kulit batang Shorea singkawang (Miq).Miq aktiv

sebagai antioksidan, dengan DPPH memberikan nilai EC50 sebesar 82 ppm.

DAFTAR PUSTAKA

Ahmad, S.A. 2006 Hakekat Perkembangan Kimia Organik Bahan Alam. Dari

Tradisional ke Moderen Dan Contoh Terkait Dengan Tumbuhan

Lauraceae, Moraceae, Dan Dipterocarpaceae Indonesia. Penerbit ITB

Ahuja, S. 2003. Chromatography and Separation Science, Academic Press. USA.

Aminah, N.S., Achmad, S.A., Hakim, E.H., Syah, Y.M., Juliawaty, L.D., dan

Ghisalberti, E.L. 2003. Laevifonol, Diptoindonesin A, dan Ampelopsin A,

Tiga Dimer Stilbenoid dari Kulit Batang Shorea seminis V. Sl.

(Dipterocarpaceae). Jurnal Matematika dan Sains. 8 (1). 31-34

Anonim, 2002. Shorea leprosula Miq. Informasi Singkat Benih, Direktorat

Perbenihan Tanaman Hutan. Jakarta.

Anwar, L.1999 Isolasi Komponen Utama Fraksi Aktif Brine Shrimp Ekstak

Metanol Ficus deltoidea Blume. Tesis program pascasarjana Universitas

Andalas Padang

Brand-Williams, W, M.E. Cuvelier, and C. Berset. 1995. Use of a Free Radical

Method to Evaluate Antioxidant Activity. Lebensmittel-wissenschaft and

Technologie. 25-30.

Breitmaier, Eberhart. 2006. Trpenes, Falvors, Fragrances, Pharmaca,

Pheromoes. Wiley- VCH VerlagGmbH & Co. KgA, Germani.

Chiang, Y.M. and Y.H. Kuo. 2000.Taraxastane from the Aerial Roots of Ficus

microcarpa L.J. Nat. Prod.63:898-901.

Culvenor, C.C.J. and J.S. Fitzgerald. A Field Method for Alkaloids Screening of

Plants. J. Pharm, Sci. Vol. 52. Hal 303 304.

Crews, P., Rodriguez, J. dan Jaspars, M. 1998 Organik Struktur Analysis.

University of California, Santa Cruz. Oxpord Univercity Press.

Gallo. B. C. Margareth and Miranda J. Sarachine.2009. Biological Activities of

Lupeol. International Journal of Biomedical and Pharmaceotical Science.

Gritter, R.J., J.M. Bobbit, A.E. Schwarting (Terjemahan K. Padmawinata), 1991

Pengantar Kromatografi, Edisi II, ITB, Bandung.

Gotto, A. M. 2003. Antioxidants, Statins, and Atherosclerosis. Journal of The

American College of Cardiology. 41. (7). 1205-1210.

Raj.K.Hotta and Maringanti Bapur. 1992. Triterpenoids from the Resin of Shorea

Robusta ,. Regional Research Laboratory,Bhubaneswar 751 013,

Orissa,India,. Jurnal.

Robinson. Trefor. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi, 1995, Penerbit ITB

Bandung, 57-83.

Harborne, J.B. 1987. Metoda Fitokimia : Penentuan Cara Modern Menganalisis

Tumbuhan

Terjemahan Kosasih Padmawinata & Iwang Sudiro. ITB, Bandung

Hakim. E.H. 2002. Oligostilbenoid dari tumbuhan Dipterocarpaceae. Buletin of

the Indonesian Socienty of Natural Product Chemistry.2. 1-19.

Hakim, E.H., Muhtadi., Syah, Y.M., Juliawaty, L.D., Achmad, S.A., Said, I.M.,

dan Latip, J. 2005. Tiga Senyawa Oligostilbenoid dari Kulit Batang

Dipterocarpus retusus Blume (Dipterocarpaceae). Jurnal Matematika dan

Sains. 10 (4). 137-143

Hambali, E., Noor, E., Masud, Z.A., dan Pandji, C. 2008. Produksi Lemak Tengkawang sebagai Bahan Baku Industri Lipstik. IPB Press. Bogor.

Heyne, K. 1997. Tumbuhan Berguna Indonesia. Badan Litbang Kehutanan

Jakarta. Jilid III. 1390-1443.

Hostettmann, K, Hostettmann, M., dan Marston, A. 1997. Cara

Kromatografi Preparatif: Penggunaan pada Isolasi Senyawa Bahan

Alam, Terjemahan Kosasih Padmawinata. ITB, Bandung.

Imran Gaffar, Allian Noor, Tjodi Harlim, Nunuk Hariani Soekamto. 2008.

Senyawa Triterpenoid Asam-3-asetoksi-12-Oleanen-28-oat dari ekstrak

Metilen Klorida pada tumbuhan (Kleinhovia hospita L.,) . Jurnal,

Informasi Tetknologi (INTEK). Pascasarjana Universitas Hasnuddin.

.

Krstanti, Alfinda novi, Nanik S. A., Mulyadi, T., dan Bambang, K. 2008. Buku

Ajar Fitokimia. Airlangga University Press. Surabaya.

Khopkar, S.M 2003. Konsep Dasar Kimia Analitik . Terjemahan A. Saptoraharjo.

UI-Press,Jakarta.

Kikuzaki, H., Hisamoto, M., Hirose,K., Akiyama, K., and Taniguchi, H. 2002.

Antioxidants Properties of Ferulic Acid and Its Related Compound.

J.Agric.Food Chem. 50:2161-2168.

Lage, H.,N.Duarte, C.Coburger, A.Hilgeroth, dan M.J.U. Ferreira. 2010.

Antitumor activity of terpenoids against classical and atypical multidrug

resistant cancer cells. Phytomedicine. 17.441-448.

Lenny Sovia., 2006. Senyawa Terpenoid dan steroid, Karya Ilmiah Fakultas

Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sumatra Utara.

Laxmi N,Misra and Ateeque Ahmad., 1996. Triterpenoids From Shorea Robusta

Resin. Central Institut of Medicinal and Aromatik Plants, P.O. CIMAP,

Lucknow-226015, India International journal.

Lukman,H., 2010 Eksplorasi dan Pengumpulan Benih Jenis Shorea Penghasil

tengkawang.buletin Biotehnologi., PT,Sari Bumi Kusuma .Kalimantan

Tengah

Marzuki Asnah ., Noor Alfian,. Soekamto Nunuk, dan HarlimTjodi 2008 . Artikel

penelitian,.Asam 2,3-dihidroksi- oleanen -28- oat dari tumbuhan

pterospermum celebicum (Sterculliacfae) Bulletin of The Indonesian

Society of Natural Products Chemistry.

Mohrig. R.J., Hammond. N.C., Schatz., F.P., and Morrill. C.T. 2003.

Techniques in Organik Chemistry. W.H. Freeman Company

Muharni. 2010. Terpenoid lupeol dari manggis hutan (Garcinia bancana Miq).

Jurusan Kimia FMIPA. Universitas sriwijaya, Sumatera selatan.

Indonesia. Jurnal Penelitian Sains Volume 13 nomor 3 (C) 13308.

Nicolaus, N.A, L.K Darusman, E.A.Husaeni. 1994. Pemisahan dan Isolasi

Terpenoid dari sebuk gergaji Shorea leprosula Miq Sebagai Antirayap

Nordin, C. et.al. 1985. Aspect of Natural Product Chemistry Proceeding, The

Phytochemical Survey. Malaysia : Dept. Chemistry UPM.

Pavia L. Donal, Gary M. Lampman, George S. Kriz ; Introduction to

Spectroscopy, A Guide for Student of Organic Chemistry, Sauders

College, Phladelphia, 1992.

Pavia D.L., Lampman, G.M., Kriz, G.S., dan Vyvian, J.R. 2007. Introduction to

Spectroscopy. Sauders College. Philadelphia.

Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat, cetakan pertama, 2000,

Departemen Kesehatan Repoblik Indonesia Direktorat Jendral

Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta.

Pratt, D.E. 1990 1990 Natural antioksidant Not exploited commercially in Food

Antioxidant. Edited by B.J.F. Hudson. Elsevier Science, New York, p:

171-191.

P, Manitto. 1981. Biosynthesis of Natural Products. England : Ellis Horwoud Ltd.

K.S Rita, et al . 2004. Sifat Antirayap Resin Damar Mata Kucing dari Shorea

Javanica K.et V.

Rosyidah, K., Juliawati, L.D., Din, L.B., Latip, J., Hakim, E.H. 2006. Dua Dimer

Resveratrol dari Kulit Batang Shorea parvifolia Dyer (Dipterocarpaceae).

Buletin of The Indonesian Society of Natural Product Chemistry. 6 (2). 57-

61

Sharp J. T., Goesney, I., Bowley, A.G., 1989. Practical Organik Chemistry : A

student Handbook of Techniques. Chapmann and Hall, London.

Soerianegara, I. dan RHMJ. Lemmens (eds.). 2002. Sumber Daya Nabati Asia

Tenggara 5(1): Pohon penghasil kayu perdagangan yang utama. Jakarta :

PROSEA - Balai Pustaka. ISBN 979-666-308-2. Hal 415-438.

Sootheeswaran, S., dan Pasupathy. V. 1993. Distribution of Resveratrol

Oligomer in Plants, J.Phytochemistry.32 . 1083-1092.

Sarayobudiyono, H., Hakim, E.H., Juliawaty, Syah, Y.M., Achmad, S.A., Hakim,

E.H., Latip,J., Said, I.M. 2008. Oligostilbenoids from Shorea gibbosa

andtheir cytotoxic properties agains P-388 cells. J. Nat Med. 62. 195-198.

Sarayobudiyono, H., Hakim, E.H., Juliawaty, L.D., Latip, J. 2006.

Trimerstilbenoid dari Kulit Batang Shorea rugosa. Buletin of The

Indonesian Society of Natural Product Chemistry. 6 (1). 13-18.

Simla Basar. 2005. Phytochemical Investigations On Boswellia Species.

Dissertation for the fulfillment of the requirement for the degree of

Dr.rer.nat. Hamburg.

Sitorus, M. 2009. Spektroskopi Elusidasi Struktur Molekul Organik Graha Ilmu.

Yokyakarta.

Schwenke, D. C. 1998. Antioxidants and Atheroclerosis. J. Nutr. Biochem. : 424-

437

Sujadi. 1983. Penentuan Struktur Senyawa Organik. UGM Press, Yokyakarta.

Sumaryono, W., (1999), Produksi Metabolit Sekunder Tanaman Secara Bioteknologi Prosiding Seminar Nasional Kimia Bahan Alam 99, Penerbit UI Jakarta

Stuart, B. 2004. Infrared Spectroscopy, Fundamental and Aplication. Jhon Wiley

& Sons. Ltd.

Supratman, Unang. 2009. Elusidasi Struktur Senyawa Organik. Bandung :

UNPAD.

Suryati 2010 Germanikol Sinamat, suatu triterpenoid baru dan triterpenoid

lainnya serta steroid dari Daun Tabat Barito ( Ficus deltoideus Jack ).

Disertasi Pascasarjana Unand Padang.

Tachakittirungrot, Suganya, Fumio Ikegami, and Siriporn Okonogi. 2007.

Antioxidant Active Priniples Isolated from Psidium guajava Grown in

Thailand. Scientia Pharmaceutica.

Trilaksani, W., 2003, Antioksidan: Jenis, Sumber, Mekanisme Kerja dan Peran

Terhadap Kesehatan, Institute Pertanian Bogor, Bogor, hal 1-12

Tri Mayanti, W, Drajat Natawigena, Unang Supratman dan Roekmiati

Tjokronegoro. 2009. Triterpenoid yang beraktivitas antamakan dari kulit

batang Kokosan (Lansium domesticum Corr cv, Kokossan (Meliaceae).

Jurnal . symposium Kimia BAhan Alam , Semarang.

Voggel, Textbook of Practical Organik Chemistry, 4th

Ed, Revised by B.S.,

Funiss et. al Longman , London, New York, 1987.

Wixom, R. L dan Gehrke, C. W. 2010. Chromatography A Science of

discovery.Jhon

Wiley & sons Inc. Pulication. Canada.

Yoshiaki, T., dan Masatake, N. 2001. Oligostilbenes from vitaceaous plants.

Trends in Heterocyclic Chemistry. 7. 41-54.

Yusnelti, Valentina Adimurti K. 2010. Isolasi senyawa-senyawa aktif dan uji

aktivitas antibakteri, antioksidan dan antikanker dari tumbuhan Langka

(Shorea sumatrana, Sym). Laporan penelitian Unja

Zhang, Y., Seeram, N.P., Lee, R., Feng L ., Heber, D. 2008. Isolation and

Identivication of Strawberry Phenolics with Antioksidant and Human

Cancer Cell Antiproliferative Properties. Agric. Food Chem. 56 (3): 670-

675.