PENGDAUN

GUKURAN TEH H

DPP

AN KAPAHIJAU (CaPH DAN V

ASITAS Aamellia siVOLTAM

ANTIOKinensis) DMMETRI

KSIDAN EDENGAN I SIKLIK

EKSTRAKMETOD

K

K DE

ARRINI SEPTIANTI

DEPFAKULLTAS MATEMATIK

PARTEME

INSTITUKA DAN I

EN KIMIA

T PERTAILMU PE

A

BOGO2011

ANIAN BOENGETAHHUAN ALAAM OGOR

OR 1

ABSTRAK ARINI SEPTIANTI. Pengukuran Kapasitas Antioksidan Ekstrak Daun Teh Hijau (Camellia sinensis) dengan Metode DPPH dan Voltammetri Siklik. Dibimbing oleh ELLY SURADIKUSUMAH dan DEDEN SAPRUDIN.

Daun teh hijau (Camellia sinensis) memiliki kemampuan sebagai antioksidan. Penelitian ini bertujuan menentukan kapasitas antioksidan fraksi teraktif ekstrak daun teh hijau menggunakan metode DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil) dan voltammetri siklik. Ekstrak kasar metanol memiliki aktivitas antioksidan lebih besar dibandingkan ekstrak aseton. Ekstrak metanol difraksionasi dengan kromatografi lapis tipis preparatif (KLTp) menghasilkan 10 fraksi. Di antara 10 fraksi, fraksi 2 merupakan fraksi teraktif antioksidan karena memilki persentase inhibisi terbesar dibandingkan fraksi lain ketika diukur dengan metode DPPH, yaitu 74.78%. Begitu pun, metode voltammetri siklik menunjukkan bahwa fraksi 2 memiliki kapasitas antioksidan terbesar yang terlihat pada voltammogram daerah anode, yaitu 2.2710A.s. Berdasarkan uji fitokimia, fraksi teraktif mengandung senyawa flavonoid dan tanin.

ABSTRACT

ARINI SEPTIANTI. Measuring Antioxidant Capacity of Green Tea Leaves (Camellia sinensis) Extract using DPPH and Cyclic Voltammetry Methods. Supervised by ELLY SURADIKUSUMAH and DEDEN SAPRUDIN.

Green tea (Camellia sinensis) exhibited antioxidant activity. The purpose of study was to determine antioxidant capacity of the most active green tea leaves fraction using DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) and cyclic voltammetry methods. Methanol crude extract of the sample showed antioxidant activity higher than the acetone extract. Fractionation of the methanol extract by preparative thin layer chromatography resulted 10 fractions. Among the 10 fractions, fraction 2 was the most active fraction with inhibition percentage of 74.78%. Similarly, cyclic voltammetry method showed that fraction 2 was the most active on anodic area of 2.2710 A.s. The result of phytochemical tests showed that the most active fraction contain flavonoids and tannins.

PENGUKURAN KAPASITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK DAUN TEH HIJAU (Camellia sinensis) DENGAN METODE

DPPH DAN VOLTAMMETRI SIKLIK

ARINI SEPTIANTI

Skripsi sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Sains pada Departemen Kimia

DEPARTEMEN KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR

2011

Judul : Pengukuran Kapasitas Antioksidan Ekstrak Daun Teh Hijau (Camellia sinensis) dengan Metode DPPH dan Voltammetri Siklik

Nama : Arini Septianti NIM : G44061573

Disetujui, Pembimbing I, Pembimbing II,

Ir. Elly Suradikusumah, MS Deden Saprudin, S.Si, M.Si NIP 19450214 197010 2 001 NIP 19680518 199412 1 001

Diketahui, Ketua Departemen Kimia

Prof. Dr. Ir. Tun Tedja Irawadi, MS NIP 19501227 197603 2 002

Tanggal lulus :

PRAKATA

Syukur alhamdulillah penulis panjatkan ke hadirat Allah SWT atas limpahan rahmat, hidayah, dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan karya ilmiah ini dengan judul Pengukuran Kapasitas Antioksidan Ekstrak Daun Teh Hijau (Camellia sinensis) dengan Metode DPPH dan Voltammetri Siklik. Penelitian ini dilaksanakan sejak bulan November 2010 sampai Mei 2011 di Laboratorium Kimia Analitik dan Laboratorium Bersama, Departemen Kimia, FMIPA, IPB.

Penulis mengucapkan terima kasih kepada berbagai pihak yang memberikan bimbingan dan motivasi selama penelitian sampai penulisan karya ilmiah ini. Terima kasih kepada Ibu Ir, Elly Suradikusumah,MS dan Bapak Deden Saprudin, S.Si, M.Si selaku pembimbing yang selalu memberikan saran, motivasi, dan meluangkan waktu untuk berkonsultasi. Ucapan terima kasih tak terhingga untuk mama, papa, Kak Rifky, dan Kak Rina atas doa, motivasi, dan kasih sayangnya kepada penulis.

Penulis juga mengucapkan terima kasih kepada seluruh staf Laboratorium Kimia Analitik (Pak Eman, Bu Nunung, Pak Dede, Pak Ridwan, dan Pak Kosasih) dan staf laboratorium bersama (Mas Eko dan Mba Siti Rachmah) atas bantuannya selama penulis melaksanakan penelitian. Selain itu, penulis juga mengucapkan terima kasih kepada teman satu bimbingan (Ahmad Yani, Emilia Fatmawati, dan Martha Yusfita), Aisyah Hidayat, dan Catharina.

Teriring doa dan harap semoga Allah meridhoi upaya yang penulis harapkan. Semoga karya ilmiah ini bermanfaat bagi penulis sendiri maupun berbagai pihak.

Bogor, Mei 2011

Arini Septianti

RIWAYAT HIDUP

Penulis dilahirkan di Bogor pada tanggal 9 September 1988 dari pasangan Hendarwan dan Sudiah. Penulis merupakan anak ketiga dari tiga bersaudara.

Tahun 2006, penulis lulus dari SMA Negeri 4 Bogor dan pada tahun yang sama lulus seleksi masuk IPB melalui jalur Undangan Seleksi Masuk IPB (USMI). Penulis memilih mayor Kimia dan minor Teknologi Pangan.

Selama mengikuti perkuliahan, penulis menjadi asisten Kimia Analitik untuk mahasiswa Biologi dan ITP pada tahun ajaran 2009/2010; Analisis Komponen Aktif dan Uji Aktivitas untuk program Diploma Analisis Kimia pada tahun ajaran 2010/2011; Kimia Analitik Dasar untuk program Diploma Analisis Kimia pada tahun ajaran 2010/2011; dan Kimia Industri untuk program Diploma Analisis Kimia pada tahun ajaran 2010/2011. Selain itu, penulis mengajar di bimbingan belajar Primagama pada tahun 2009 sampai 2011.

DAFTAR ISI

Halaman

DAFTAR TABEL .............................................................................................. viii

DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... viii

DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................... xi

PENDAHULUAN ............................................................................................. 1

TINJAUAN PUSTAKA .................................................................................... 1 Teh Hijau ........................................................................................................ 1 Antioksidan .................................................................................................... 2 Voltammetri Siklik ......................................................................................... 2 Mekanisme Kapasitas Antioksidan Menggunakan Metode Voltammetri Siklik .............................................................................................................. 3 Mekanisme Kapasitas Antioksidan Menggunakan Metode DPPH ................ 3 Ekstraksi ......................................................................................................... 4 Kromatografi .................................................................................................. 4

BAHAN DAN METODE .................................................................................. 5 Lingkup kerja ................................................................................................. 5 Alat dan Bahan ............................................................................................... 5

HASIL DAN PEMBAHASAN .......................................................................... 6 Kadar Air ........................................................................................................ 6

Ekstraksi ......................................................................................................... 7 Ekstrak Aktif .................................................................................................. 7 Kromatografi Lapis Tipis Preparatif .............................................................. 8 Penentuan Fraksi Teraktif Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH ..... 9 Penentuan Kapasitas Antioksidan dengan Voltammetri Siklik ..................... 10 Uji Fitokimia .................................................................................................. 12

SIMPULAN DAN SARAN ............................................................................... 12 Simpulan ........................................................................................................ 12 Saran ............................................................................................................... 12

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 12

LAMPIRAN ....................................................................................................... 14

DAFTAR GAMBAR

Halaman 1 Struktur Resonansi Radikal Bebas dari DPPH ........................................... 3

2 Pita Absorpsi DPPH dalam Pelarut Metanol .............................................. 3

3 Mekanisme Penghambatan Radikal DPPH ................................................. 4

4 Bioautografi Aktivitas Antioksidan dengan DPPH Ekstrak Metanol dan Aseton Daun Teh Hijau.......................................................... 7

5 Voltammogram Pengukuran Antioksidan Ekstrak Kasar ........................... 8

6 Hasil Pemisahan Ekstrak Metanol Daun Teh Hijau dengan KLTP ............ 8

7 KLT Bioautografi Fraksi KLTp dengan DPPH .......................................... 9

8 Mekanisme Reaksi Senyawa Flavonoid dengan DPPH .............................. 9

9 Kurva Kalibrasi Asam Askorbat dengan DPPH 0.05 mM .......................... 10

10 Voltammogram Fraksi Hasil KLTp ............................................................ 10

11 Voltammogram Fraksi 2 Hasil KLTp ......................................................... 11

12 Voltammogram Asam Askorbat ................................................................. 11

13 Kurva Kalibrasi Asam Askorbat dengan DPPH 0.05 mM .......................... 11

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman 1 Diagram Alir Penelitian ................................................................................. 15

2 Penentuan Kadar Air Daun Teh Hijau ........................................................... 16

3 Penentuan Rendemen Ekstrak Kasar Daun Teh Hijau dalam Metanol ......... 17

4 Penentuan Rendemen Ekstrak Kasar Daun Teh Hijau dalam Aseton ........... 18

5 Pengukuran Kapasitas Antioksidan Ekstrak Kasar Daun Teh Hijau dengan Metode Voltammetri Siklik ........................................................................... 19

6 Hasil Pemisahan Fraksi KLT Preparatif ........................................................ 20

7 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum DPPH 0.05 mM Dalam Metanol .......................................................................................................... 21

8 Penentuan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Daun Teh Hijau dengan Metode DPPH .................................................................................... 22

9 Hasil Voltammogram Pengukuran Kapasitas Antioksidan Fraksi KLTp Ekstrak Metanol Daun Teh Hijau .................................................................. 23

10 Pengukuran Kapasitas Antioksidan Fraksi KLTp Ekstrak Metanol Daun Teh hijau dengan Metode Voltammetri Siklik ............................................... 24

11 Penentuan Aktivitas Antioksidan Vitamin C dengan Metode DPPH ............ 25

12 Pengukuran Kapasitas Antioksidan Asam Askorbat dengan Metode

Voltammetri ................................................................................................... 25

PENDAHULUAN

Radikal bebas berperan dalam terjadinya berbagai penyakit. Efek dari proses oksidatif radikal bebas dapat menyebabkan peradangan dan penuaan dini. Terjadinya kondisi stres oksidatif, yaitu kondisi tidak seimbangnya antioksidan alami yang terkandung di dalam tubuh, menyebabkan manusia tidak dapat bergantung pada antioksidan alami yang sudah terkandung di dalam tubuhnya untuk mengatasi radikal bebas (Campanella et al. 2006). Antioksidan adalah zat yang dapat menetralisir atau menghancurkan radikal bebas. Radikal memiliki tingkat reaktivitas yang tinggi dan secara alami ada di dalam tubuh sebagai hasil dari reaksi biokimia di dalam tubuh (Konisi et al. 2003).

Radikal bebas yang berlebih dalam tubuh dapat mempercepat proses penuaan dan menyebabkan bahaya patologis yang serius, seperti struk otak, diabetes melitus, arthritis reumatoid, penyakit Parkinson, penyakit Alzheimer, dan kanker. Radikal bebas oksigen termasuk spesies oksigen reaktif (ROS), yaitu spesies dengan kecenderungan oksidasi kuat, meliputi radikal alami (radikal superoksida dan radikal hidroksil) dan bukan radikal alami (ozon dan hidrogen peroksida). Produksi ROS pada tubuh manusia selalu melalui proses metabolik. Jika tidak terdeaktivasi, spesies ini memberikan reaktivitas kuat yang berbahaya bagi semua molekul. Dalam beberapa tahun ini, upaya mengatasi pembentukan radikal bebas pada produk farmasi dan bahan pangan diatasi oleh antioksidan dari bahan alami (Campanella et al. 2006).

Teh hijau berasal dari tanaman teh (Camellia sinensis) yang dapat tumbuh dengan baik di daerah pegunungan beriklim sejuk. Teh hijau merupakan salah satu jenis teh yang digemari terutama di Cina dan Jepang, sedangkan teh hitam paling banyak digemari di Amerika, Eropa, dan Indonesia. Teh hijau mengandung zat aktif antioksidan alami dengan kandungan yang lebih tinggi daripada teh hitam ataupun teh merah. Antioksidan alami tersebut berupa polifenol,umumnya adalah kelompok flavanol yang dikenali sebagai katekin dan tanin. Antioksidan ini berfungsi sebagai penangkal radikal bebas (Suzuki et al. 2003).

Metode pengukuran aktivitas antioksidan didasarkan pada pengukuran aktivitas pengumpulan suatu radikal oleh senyawa antioksidan. Senyawa antioksidan dalam bentuk tereduksi akan bereaksi dengan radikal bebas menjadi bentuk teroksidasinya yang

stabil dan memiliki warna yang berbeda dengan bentuk tereduksinya. Perubahan warna tersebut dapat dideteksi menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang yang sesuai. Saat ini terdapat beberapa metode penentuan aktivitas antioksidan menggunakan metode spektrofotometri yang terkenal, seperti 2,2-azinobis - (3-etil-benzotiazolin-6-asam sulfonat) (ABTS), 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH), asam-2-tiobarbiturat (TBA), kemampuan mereduksi feri (FRAP), kemampuan mereduksi kupri (CUPRAC), dan kapasitas absorbansi radikal oksigen (ORAC) (Caldwell 2001).

Metode yang digunakan untuk menentukan kapasitas antioksidan ekstrak daun teh hijau pada penelitian ini adalah metode spektrofotometri dan elektrokimia. Metode spektrofotometri yang dipilih adalah metode DPPH. Metode ini berdasarkan penangkapan atom hidrogen dari suatu antioksidan oleh radikal DPPH sehingga stabil dalam bentuk tereduksi. Metode elektrokimia yang digunakan adalah voltammetri siklik. Metode elektrokimia mengukur kapasitas antioksidan berdasarkan pada pengukuran daerah anode dari voltammogram siklik. Penelitian ini bertujuan menentukan fraksi teraktif antioksidan ekstrak daun teh hijau menggunakan metode DPPH dan voltammetri siklik.

TINJAUAN PUSTAKA

Teh Hijau

Teh merupakan salah satu produk minuman terpopuler yang banyak dikonsumsi oleh masyarakat indonesia maupun dunia dikarenakan teh mempunyai rasa dan aroma yang atraktif, selain itu teh juga dipercaya mempunyai khasiat bagi kesehatan tubuh diantaranya mencegah kegemukan, kanker dan kolesterol. Teh berdasarkan proses pengolahannya diklasifikasikan ke dalam tiga jenis yaitu teh fermentasi (teh hitam), teh semi fermentasi (teh olong) dan teh tanpa fermentasi (teh hijau). Teh merupakan minuman yang sudah dikenal oleh penduduk bumi ini. Dari berbagai macam tipe teh setidaknya ada 3 kategori utama, yaitu teh hijau, teh olong dan teh hitam. Teh hitam dibuat dari dengan melakukan fermentasi terhadap daun teh. Selama proses produksi teh hitam, sebagian besar senyawa-senyawa yang ada akan teroksidasi. Teh olong dibuat dengan fermentasi sebagian. Sedangkan, teh hijau

2

mengalami proses pengeringan untuk mencegah proses oksidasi lebih lanjut hingga zat yang terkandung tetap dalam kondisi utuh.

Khasiat pada teh hijau diperoleh dari komponen-komponen yang dimiliki oleh teh hijau, seperti senyawa-senyawa polifenol. Senyawa ini mempunyai aktivitas antioksidan yang dapat mencegah oksidasi oleh radikal bebas, yang dapat menyebabkan timbulnya kanker. Polifenol merupakan komponen kimia yang mempunyai aktivitas antioksidan (Suzuki et al. 2003). Penelitian yang sudah dilakukan baik secara farmakologi maupun endimologi menegaskan bahwa polifenol pada teh hijau mempunyai peran yang sangat potensial pada aktivitas antioksidan (Ikeda et al. 2003). Kandungan polifenol dalam daun teh mencapai 25-35% dari keseluruhan bahan kering daun (Belitz and Grosch 1999). Pada teh hijau senyawa-senyawa polifenol yang terdiri atas flavonol, flavandiol, flavonoida dan asam-asam fenolat. Umumnya, senyawa polifenol di dalam teh hijau adalah kelompok flavanol yang dikenali sebagai katekin dan senyawa tanin.

Katekin pada teh merupakan flavonoid yang termasuk dalam kelas flavanol. Jumlah atau kandungan katekin ini bervariasi untuk masing-masing jenis teh. Adapun katekin teh yang utama adalah Epicatehcin (EC), Epicatehcin gallate (ECG), Epigalochatechin dan Epichatecin gallate (EGCG). Katekin teh memiliki sifat tidak berwarna, larut dalam air, serta membawa sifat pahit dan sepat pada seduhan teh. Hampir semua sifat produk teh termasuk didalamnya warna, rasa dan aroma secara langsung maupun tidak langsung, dihubungkan dengan modifikasi pada katekin ester menjadi katekin non ester dapat menurunkan rasa pahit dan sepat dari teh hijau (Hartoyo 2003).

Antioksidan

Antioksidan memiliki peranan yang sangat penting dalam memerangi radikal bebas. Antioksidan adalah zat yang diperlukan tubuh untuk menangkap radikal bebas terhadap sel normal, protein, dan lemak (Prakasih 2001). Antioksidan dalam tubuh bermanfaat untuk mencegah reaksi oksidasi yang ditimbulkan oleh radikal bebas baik berasal dari metabolisme tubuh maupun faktor eksternal lainnya. Radikal bebas adalah atom atau molekul yang tidak stabil dan sangat reaktif karena mengandung satu atau lebih elektron tidak berpasangan pada orbital terluarnya. Radikal bebas akan bereaksi dengan molekul

di sekitarnya untuk memperoleh pasangan elektron supaya mencapai kestabilan atom atau molekul. Reaksi ini berlangsung terus menerus dalam tubuh dan bila tidak dihentikan akan menimbulkan berbagai penyakit, seperti kanker, jantung, katarak, penuaan dini, serta penyakit degeneratif lainnya (Kikuzaki & Nakatani 1993).

Antioksidan dapat diperoleh secara alami maupun sintetik. Beberapa contoh antioksidan alami di antaranya asam askorbat (vitamin C), -tokoferol, -karoten, asam urat, sistein, vitamin K, serum albumin, bilirubin, dan beberapa logam seperti seng dan selenium. Sementara itu, contoh antioksidan sintetik diantaranya hidroksianisol berbutil (BHA) dan hidroksitoluena berbutil (BHT) (Mosquera et al. 2007).

Voltammetri Siklik

Voltammetri adalah metode elektrokimia dengan pengukuran arus sebagai fungsi potensial. Metode voltammetri mengaplikasikan suatu potensial pada sebuah sel elektrokimia dan arus yang mengalir melalui sel diukur sebagai fungsi dari potensial. Plot arus sebagai fungsi potensial disebut voltammogram. Voltammogram menampilkan informasi kualitatif dan kuantitatif tentang spesi yang terlibat pada reaksi oksidasi dan reduksi (Harvey 2000).

Metode voltammetri secara umum dilakukan dengan menggunakan dua elektrode. Namun, metode voltammetri modern yang berkembang menggunakan tiga elektrode. Sinyal eksitasi dari potensial diaplikasikan pada elektrode kerja, mengubah potensialnya relatif terhadap potensial tetap dari elektrode rujukan. Arus yang dihasilkan antara elektrode kerja dan pembantu diukur. Elektrode pembantu yang digunakan secara umum adalah kawat platina dan elektrode SCE, serta Ag/AgCl adalah electrode rujukan yang sering digunakan (Harvey 2000).

Sinyal eksitasi yang dihasilkan dalam sel kimia pada metode voltammetri memiliki 4 bentuk berdasarkan metode yang digunakan adalah linear scan, differential pulse, square wave, dan triangular (cyclic voltametry) (Skoog et al. 1998).

Voltammetri siklik adalah teknik yang paling luas digunakan untuk mendapatkan informasi kualitatif dan kuantitatif tentang reaksi elektrokimia. Voltammetri siklik digunakan sebagai eksperimen awal pada studi elektroanalisis. Secara khusus, metode ini digunakan untuk menentukan lokasi dari

3

potensial redcepat dan mpengaruh mkeseluruhan

Voltammvoltammetriselama penawal ke popotensial aw(scanning) reduksi berkatodik maukatodik adalpenyapuan darus yang pasebaliknya (

MekanAntioks

Mekanisumum menterjadi dalampropagasi, dpembentukasubstrat yanreaktif akibasubstrat akmembentuk propagasi. Rmenyerang hidroperoks(Javanmardi

Antioksimelalui duperpindahanperpindahanPAH mengudalam menmemberikansedangkan kemampuantransfer elesenyawa, se(Prior et al.

Pengukumenggunakatermasuk kemelibatkan didasarkan pdari voltamdaerah anodsuatu zat anmengandungantioksidan voltammetrielektron sua

doks dari spememberikan ev

edia terhadapn (Wang 1994)metri siklik i berdasarkannyapuan poteotensial akhiwal atau dise

dapat diballangsung. Deupun anodik lah arus yangdari arus yangaling kecil da(Khopkar 2002

esi elektroaktivaluasi yang b proses redok).

f secara baik dari ks secara

nisme Penguksidan MenggVoltammetr

sme kerja nghambat oksm tiga tahap dan terminasi. an radikal subng bersifat tidat hilangnya skan bereaks

radikal peRadikal perok

substrat yida dan radi et al. 2003). idan mampu mua mekanis

n atom hidn elektron beukur kemampnstabilkan radn atom h

metode n antioksidaektron untuk eperti logam, 2005).

uran kapaan metode e dalam jenis

donor elepada daerah an

mmogram. Kude bergantungntioksidan ke g radikal.

dengani siklik diukuatu zat antiok

merupakan n pengukura

ensial dari pir dan kembebut juga penik kembali

engan demikidapat teruku

digunakan pag paling besar an arus anodik2).

kuran Kapasigunakan Metori Siklik

antioksidan sidasi substrautama, yaitu Tahap inisiasbstrat, yaitu

dak stabil dansatu atom H. si dengan eroksi pada ksi lebih lanjyang menghdikal substra

mendeaktivasisme utama, drogen (PAHebas (PEB). puan dari antidikal bebas hidrogennya

PEB mean melalui

mereduksi bkarbonil, dan

asitas antivoltammetri metode PEB

ektron. Pengnode yang dih

urva yang dihg pada donor e

suatu senyawBesarnya k

n menggur berdasarkanksidan tersebu

teknik an arus potensial ali lagi nyapuan

setelah an arus

ur. Arus ada saat menuju

k adalah

itas ode

secara at yang inisiasi,

si terjadi turunan

n sangat Radikal oksigen

tahap ut akan hasilkan at baru

i radikal yaitu

H) dan Metode

ioksidan dengan

(AH), engukur

proses berbagai n radikal

ioksidan siklik

B karena gukuran hasilkan hasilkan elektron wa yang kapasitas gunakan n donor ut yang

dihasilkan terjadinya do2006).

pada daerahonor elektron

h anode t(Campanella

tempat a et al.

Mekani

Antiisme Pengukuioksidan Met

uran Aktivitatode DPPH

as

Penangka

utama aktiviBeberapa memana aktivipenangkapan organik poltemperatur ksatunya deng2003). DPPadalah radikungu. Ketikaberwarna kun(Gambar 1).

apan radikal itas antioksidetode telah ditas antioksioleh radikal s

Gambar 1 Sd

Metode D

penentuan aradikal yang metanol danditunjukkan ometanol pada520 nm (Gadalam bentudilakukan peyang cukup a

Gambar 2 Pm

lar, seperti kamar. Peng

gan menggunaPH (2,2-difekal bebas yana direduksi ning (2,2-dife

adalah mekadan pada madikembangkanidan diukur sintetik pada p

metanol gukuran ini akan DPPH enil-1-pikrilhing stabil beroleh radikal

enil-1-pikrilhid

anisme akanan. n yang

oleh pelarut

pada salah

(Ionita idrazil) rwarna l akan drazin)

Struktur resondari DPPH (Io

DPPH seringantioksidan. bebas dalam

n memiliki oleh pita absoa panjang geloambar 2). DPuk radikal engukuran akakurat (Molyn

ita absorpsi Dmetanol (Moly

nansi radikal onita 2003).

g digunakan DPPH merularutan etano

warna ungu orpsi dalam pombang sekitaPPH bersifat sehingga muktivitas antioeux 2004).

DPPH dalam pyneux 2004).

bebas

untuk upakan ol atau

yang pelarut ar 515-

stabil ungkin

oksidan

pelarut

4

Metode pengukuran Radikal bmenangkap ekstrak ysehingga tereduksi (G

DPPH mantioksidan

bebas dari atom hidrog

ang mengamenghasilkan

Gambar 3).

merupakan berdasarkanantioksidan

gen dari komandung antin bentuk

metode n PAH.

akan mponen ioksidan

DPPH

Gambar 3

D

Ekstrakssenyawa tubahan dengberdasarkantidak salindidefinisikanatau lebih kfase lain.

Ekstraksyang dilakukterkandung bantuan supada ekstrakelarutan likakan melarHal-hal yanpemilihan pracun, dan (Khopkar 20

Sokhletasecara berkdipanaskan penyari temolekul airmenyari siselanjutnya bulat. Pendilakukan ditempatkandilapisi kertpenyari dipsehingga mekondensor cairan penymenyari zatcairan penysifon, selurulabu alas b

Mekanisme pDPPH (Prakas

Ekstra

si adalah punggal atau mgan mengunan distribusinyang bercampun sebagai pro

komponen dar

si merupakan kan untuk medalam suatu

uatu pelarut. aksi pelarut mke dissolve likrutkan zat pong perlu dippelarut adala

kemudahann002). asi merupakankesinambungasehingga m

erkondensasi r oleh pendinimplisia dalamasuk kembaarikan kompdengan cara

n dalam klotas saring sedpanaskan dalaenguap dan dbola menja

ari yang jatuht aktif di dalayari telah muh cairan aka

bulat melalui

penghambatansih 2001).

aksi

proses pengamajemuk dar

akan pelarut a pada dua faur. Ekstraksoses pemindahri matriks me

suatu proses engambil zat-zu campuran

Metode pemmenggunakan ke, yaitu pelarolar dan sebertimbangkan

ah selektivitanya untuk d

n penyarian sian, cairan

menguap, uapmenjadi m

ngin balik daam Slongsonali ke dalam laponen kimiaa serbuk sionsong yang

demikian rupaam labu aladikondensasikdi molekul-mh ke dalam kam simplisia dmencapai peran turun kempipa kapiler

n radikal

ambilan ri suatu tertentu

ase yang si juga han satu ereka ke

selektif zat yang

dengan misahan

prinsip rut polar aliknya.

n dalam as, sifat diuapkan

implisia penyari cairan

molekul-an turun ng dan abu alas a yang implisia g telah a, cairan as bulat kan oleh molekul lonsong dan jika rmukaan mbali ke

hingga

terjadi sirkulabila cairan tampak noda mencapai 20-dikumpulkan

asi. Ekstraksidi sifon tidajika di KLT,

-25 kali. Ekstdan dipekatk

i sempurna diak berwarna, atau sirkulastrak yang dip

kan.

itandai tidak

si telah peroleh

Kromatoggrafi

Kromatog

pemisahan ymemisahkan lainnya bertersebut padKromatografiempat jenis,kromatografi ion, dan Kromatografikomponen spermukaan bahan isian memisahkan sehingga mecairan tipis bertindak sebbertindak sebpertukaran ioberbentuk iodilakukan deyang permeabberlangsung didasarkan komponen ya

Kromatogjenis kromamenggunakanalumina padlogam yangkromatografi menggunakandalam sinar upelarut atau (Furniss et almerupakan splanar yang analisis kualiditotolkan papada sebuah naik pada pedan komponejarak yang bedan derajat (Christian 19

grafi adalahyang dapat suatu kompo

rdasarkan mda fase diami dapat dikelo, yaitu krompartisi, krom

kromatograi adsorbsecara selektiadsorben ya

kolom. Krkomponen

engalami parpada penya

bagai fase diabagai fase gon memisahkaon. Kromatongan mengisibel sebagai faseperti proseatas ukura

ang dipisahkan

Kromatogdigunakan umurni suatu stipis preparaoleh gaya k

grafi lapis tipiatografi partn sebuah lapda sebuah leg keras. F

lapis tipisn substansi yaultraviolet. Fa

campuran pl. 1989). Kromsalah satu be

dapat diguitatif maupun ada pelat kemwadah berisi

elat dengan aen sampel akaerbeda bergan

retensinya 86).

h suatu mdigunakan

onen dari kommigrasi komm dan fase ompokkan ke matografi ad

matografi pertuafi filtrasi si memisif teradsorbsiang dipakai romatografi

secara sertisi antara langga padat am dan eluen

gerak. Kromatan komponenografi filtrasi kolom deng

ase diam. Pems pengayakan

an molekul n (Adnan 1997s (KLT) merutisi dan ad

pis tipis silikempeng gelasFase diam s seringkali ang dapat berpse gerak meru

pelarut yang matogtafi lapientuk kromat

unakan pada kuantitatif. S

mudian ditempeluen. Sampe

adanya gaya kan bergerak d

ntung pada kelpada fase

metode untuk

mponen mponen

gerak. dalam

dsorbsi, ukaran

gel. sahkan i pada

untuk partisi

elektif, lapisan

yang n yang tografi n yang si gel gan gel

misahan n yang

dari 7). upakan dsorbsi a atau s atau untuk

juga pendar upakan sesuai

is tipis tografi

skala Sampel patkan

el akan kapiler dengan larutan

diam

grafi lapis tuntuk memisenyawa, yaitutif (KLTp). kapilaritas y

tipis (KLT) isahkan komu kromatografTeknik ini d

yang pemisah

yang mponen fi lapis dibantu hannya

berdasarkan perbedaan interaksi sampel dalam dua fase yang tidak saling campur. Spot yang dihasilkan dikelompokkan menjadi beberapa fraksi. Hasil fraksi tersebut dikerok untuk diidentifikasi komponen yang terdapat pada sampel tersebut.

BAHAN DAN METODE

Alat dan Bahan

Alat-alat yang digunakan adalah peralatan kaca, radas Soxhlet, neraca analitik, pengering putar, kolom kaca, pelat KLT, lampu UV, oven, lempeng tetes, potensiostat-galvanostat, dan spektrofotometer ultraviolet-tampak (UV-Vis).

Bahan-bahan yang diperlukan adalah daun teh hijau dari Perkebunan Gunung Mas, vitamin C, metanol, aseton, serbuk Mg, HCl pekat, amil alkohol, etanol, eter, anhidrida asam asetat anhidrat, H2SO4 pekat, H2SO4 2 M, kloroform, NH4OH, pereaksi Meyer, pereaksi Wagner, pereaksi Dragendorf, FeCl3 1%, heksana, etil asetat, diklorometana, toluena, silika, larutan bufer fosfat 0.05 mol/L dengan pH 7.4, KClO4, elektrode pasta karbon, elektrode Ag/AgCl, dan elektroda platina.

Lingkup Kerja

Metode penelitian ini secara garis besar terdiri dari 2 tahap. Tahap pertama adalah ekstraksi daun teh hijau dengan pelarut metanol dan aseton, kemudian ditentukan fraksi aktif antioksidan di antara 2 ekstrak tersebut menggunakan metode DPPH dan voltametri siklik. Tahap kedua adalah melakukan fraksionasi terhadap ekstrak kasar yang termasuk fraksi aktif antioksidan untuk menentukan fraksi teraktif antioksidan menggunakan metode DPPH dan voltammetri siklik. Bagan aliran penelitian dapat dilihat pada Lampiran 1. Penentuan Kadar Air (AOAC 2006)

Cawan porselen dikeringkan pada suhu 105 oC selama 30 menit lalu didinginkan dalam eksikator dan ditimbang. Sebanyak masing-masing 3 gram sampel daun teh hijau dimasukkan dalam cawan dan dipanaskan pada suhu 105 oC selama 3 jam sampai

diperoleh bobot konstan. Setelah itu, didinginkan dalam eksikator dan ditimbang.

Ekstraksi Daun Teh Hijau

Bahan diekstraksi dengan menggunakan metode Soxhlet. Pelarut yang digunakan adalah metanol dan aseton. Sebanyak 40 gram sampel serbuk daun teh disoxhletasi selama 4 jam menggunakan masing-masing 200 mL pelarut metanol dan aseton. Ekstrak metanol dan aseton kemudian dipekatkan dengan penguap putar tekanan rendah sehingga . Uji Fitokimia (Harborne 1987)

Uji Flavonoid. Sebanyak 0.1 g ekstrak teh hijau ditambahkan 10 mL air panas kemudian dididihkan selama 5 menit dan disaring. Sebanyak 10 mL filtrat ditambahkan 0.5 serbuk Mg, 1 mL HCl pekat, dan 1 mL amil alkohol. Campuran dikocok kuat-kuat. Uji positif ditandai dengan munculnya warna merah, kuning, atau jingga pada lapisan amil alkohol.

Uji Triterpenoid dan Steroid. Sebanyak 0.1 g ekstrak teh hijau dilarutkan dengan 25 mL etanol (50 oC), disaring, dan residu ditambahkan eter. Filtrat ditambahkan 3 tetes anhidrida asam asetat dan 1 tetes asam sulfat pekat secara berurutan. Larutan dikocok perlahan dan dibiarkan beberapa menit. Uji positif ditandai dengan terbentuknya warna merah atau ungu untuk triterpenoid serta hijau atau biru untuk steroid.

Uji Alkaloid. Sebanyak 0.1 g ekstrak teh hijau dilarutkan dengan 10 mL kloroform dan beberapa tetes NH4OH dan disaring ke dalam tabung reaksi tertutup. Ekstrak kloroform dalam tabung reaksi dikocok dengan penambahan 10 tetes H2SO4 2 M kemudian lapisan asamnya dipindahkan dalam tabung reaksi lain. Lapisan asam ini diteteskan pada pelat tetes dan ditambahkan pereaksi Meyer, Wagner, dan Dragendorf yang akan menimbulkan endapan warna berturut-turut putih, cokelat, dan merah jingga.

Uji Saponin. Sebanyak 0.1 g ekstrak teh hijau ditambahkan ke dalam 10 mL air panas dan dididihkan selama 5 menit lalu disaring. Filtrat dikocok dalam tabung reaksi tertutup selama 10 detik lalu dibiarkan selama 10 menit. Adanya saponin ditunjukkan dengan terbentuknya buih yang stabil.

Uji Tanin. Sebanyak 0.1 g ekstrak teh hijau ditambahkan ke dalam 10 mL air panas dan dididihkan selama 5 menit lalu disaring. Filtrat ditambahkan 10 mL FeCl3 1%. Uji

positif ditandai munculnya warna hijau kehitaman. Pemilihan Eluen Terbaik dengan KLT

Pelarut atau fase gerak yang akan digunakan untuk fraksionasi ekstrak teh hijau dipilih dari hasil KLT yang terbaik. Ekstrak pekat teh hijau dilarutkan dalam pelarut yang sesuai dan ditotolkan pada pelat KLT. Setelah kering, pelat KLT langsung dielusi dalam ruang elusi yang telah dijenuhkan oleh uap eluen pengembang. Eluen yang digunakan, ialah diklorometana:metanol (5:1), heksana:etil asetat (2:1), metanol:kloroform (1:9), etil asetat:toluena (1:1), dan etil asetat:diklorometana (7:3). Noda hasil elusi diamati di bawah lampu UV pada panjang gelombang 254 dan 366 nm (Ikeda et al. 2003). Fraksionasi dengan KLT Preparatif

Fraksionasi daun teh hijau dilakukan dengan KLT preparatif (KLTp). Sampel ditotolkan pada pelat kaca yang dilapisi oleh silika gel. Elusi dilakukan dengan eluen terbaik. Sebelum dielusi, eluen dijenuhkan selama 30 menit. Setelah elusi selesai, noda yang dihasilkan kemudian dideteksi oleh sinar UV pada panjang gelombang 254 dan 366 nm. Noda tersebut dikerok dan dikelompokkan menjadi beberapa fraksi. Setelah itu, dilarutkan dengan pelarut ekstrak awal. Penentuan Fraksi Aktif Secara Bioautografi

Ekstrak pekat dilarutkan dalam masing-masing pelarut yang sesuai, yaitu metanol dan aseton kemudian ditotolkan pada pelat KLT. Setelah kering, pelat kemudian dielusi dengan eluen terbaik yang telah dijenuhkan. Noda hasil elusi diamati di bawah sinar UV pada panjang gelombang 254 nm dan 366 nm kemudian disemprot menggunakan larutan DPPH dalam metanol. Fraksi yang aktif ditunjukkan dengan berkurangnya intensitas warna ungu pada DPPH. Penentuan Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH (Hanani 2005)

Ekstrak sampel yang akan diuji aktivitas antioksidannya dibuat dalam konsentrasi 100 ppm. Ekstrak tersebut dipipet 0.2 mL kemudian ditambahkan 3.8 mL larutan DPPH 0.05 mM dalam metanol. Campuran

dihomogenkan dan dibiarkan selama 30 menit dalam ruang gelap. Serapan diukur dengan spektrofotometer UV-tampak pada panjang gelombang 515 nm. Sebagai kontrol positif digunakan asam askorbat konsentrasi 2, 3, 4, 5 dan 6 ppm dengan perlakuan yang sama dengan sampel uji. Persentase inhibisi sampel dan control positif dihitung untuk mengetahui fraksi teraktif sebagai aktivitas antioksidan. Penentuan Kapasitas Antioksidan Menggunakan Metode Voltammetri Siklik (Campanella et al. 2006)

Pengukuran dilakukan menggunakan potensostat-galvanostat dengan pasta karbon sebagai elektrode kerja, platina sebagai elektrode pembantu, dan elektrode Ag/AgCl sebagai elektrode pembanding. Ekstrak dengan konsentrasi 100 ppm dan KClO4 dilarutkan dalam larutan bufer fosfat 0.05 mol/L dengan pH 7.4 ke dalam sel elektrokimia. Ketiga elektrode dimasukkan ke dalam larutan bufer fosfat hingga permukaan elektrode tercelup. Sebelum dilakukan pengukuran, larutan dideaerasi dengan mengalirkan gas nitrogen selama kurang lebih 1 menit. Saat pengukuran, gas nitrogen tetap dialirkan di atas larutan contoh. Perubahan yang terjadi diamati pada profil voltamogram yang dihasilkan. Arus diukur pada kisaran potensial -0.3V +1.,3V dengan laju payaran sebesar 400 mV/s. Setiap dilakulan pengukuran, elektrode dibilas dengan akuades. Pengukuran juga dilakukan untuk kontrol positif, yaitu vitamin C.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Kadar Air

Penentuan kadar air bertujuan menentukan jumlah air pada sampel tanaman sehingga diketahui cara penyimpanannya yang terbaik agar tidak tejadi kerusakan sampel akibat mikrob (Harjadi 1993). Selain itu, kadar air bertujuan menentukan rendemen suatu ekstrak. Kadar air pada daun teh hijau diperoleh sebesar 8.62% (Lampiran 2). Kadar air menurut literatur sekitar 410% (Ikeda et al. 2003). Hal ini menunjukkan kadar air dalam daun teh hijau sangat bervariasi bergantung pada proses pengeringan dan penyimpanan.

Sampel yang baik disimpan dalam jangka panjang adalah yang memiliki kadar air kurang dari 10% (Winarno 1997). Kadar air

7

yang diperoleh kurang dari 10% sehingga sampel tersebut memiliki jangka waktu simpan yang sangat baik dan relatif lama.

Ekstraksi

Serbuk sampel daun teh hijau diekstraksi dengan pelarut metanol dan aseton. Senyawa polifenol merupakan salah satu senyawa yang terdapat pada daun teh dan termasuk golongan flavonoid. Flavonoid merupakan senyawa polar karena mempunyai gugus hidroksil atau suatu gula sehingga flavonoid larut dalam pelarut polar, seperti metanol dan aseton.

Metanol dapat melarutkan hampir semua senyawa organik yang bersifat polar maupun semipolar. Metanol juga mudah menguap sehingga mudah dibebaskan dari ekstrak. Aseton adalah senyawa berbentuk cairan yang tidak berwarna dan mudah terbakar. Aseton larut dalam berbagai nisbah dengan air, etanol, dan dietil eter. Polaritas aseton yang menengah dapat digunakan untuk melarutkan dan mengekstraksi berbagai macam senyawa.

Rendemen ekstrak daun teh hijau dalam metanol diperoleh sebesar 16.70% (Lampiran 3) dan dalam aseton sebesar 14.83% (Lampiran 4). Rendemen ekstrak metanol lebih besar, maka diduga senyawa yang terdapat pada daun teh hijau memiliki polaritas yang sama dengan pelarut metanol, seperti epigalokatekin galat (ECGC). Senyawa polifenol ini kelarutannya sangat besar pada pelarut metanol karena gugus fenoliknya.

Metode Soxhlet menggunakan efek panas untuk membantu proses difusi pelarut ke dalam dinding sel. Adanya efek panas menyebabkan naiknya energi kinetik pelarut dan komponen-komponen dalam tumbuhan sehingga akan meningkatkan frekuensi tumbukan di antara keduanya. Tumbukan ini sangat diperlukan terutama dalam mempercepat proses destruksi dinding sel, difusi pelarut, dan melarutkan senyawa-senyawa tumbuhan dalam pelarut yang digunakan (Hidayat 2004).

Keuntungan Soxhletasi adalah membutuhkan pelarut yang sedikit karena penyarian terjadi berulang-ulang dan zat yang tersari di dalam pelarut lebih banyak. Namun, prosedur Soxhletasi biasanya hanya dipergunakan untuk bahan penyusun yang relatif aman terhadap pengaruh pemanasan dan hanya dipergunakan untuk simplisia tumbuhan yang berjumlah kecil oleh karena keterbatasan daya tampung radas Soxhlet tersebut.

Ekstrak Aktif

Penentuan ekstrak aktif dilakukan dengan 2 metode, yaitu dengan metode KLT bioautografi menggunakan DPPH dan metode voltammetri siklik. Pada KLT bioautografi, sampel ditotolkan ke pelat KLT kemudian dielusi dengan eluen yang sesuai. Berdasarkan pemilihan eluen terbaik, didapatkan heksana:etil asetat (2:1). Setelah itu, dilakukan penyemprotan larutan DPPH dalam metanol 1mM pada pelat KLT yang telah dielusi.

Larutan DPPH akan menghasilkan warna ungu. Ekstrak yang paling aktif akan menunjukkan intensitas warna ungu yang paling rendah (pudar) dan terlihat noda ekstrak sampel tersebut (hilang warna ungu). Hal ini karena komponen aktif pada ekstrak yang berpotensi sebagai antioksidan bereaksi dengan DPPH dan mengubah DPPH menjadi bentuk tereduksinya dengan ditandai hilangnya atau pudarnya warna ungu pada DPPH. Hasil bioautografi ini menunjukkan bahwa ekstrak metanol memiliki aktivitas antioksidan lebih besar dibandingkan denngan ekstrak aseton (Gambar 4).

Gambar 4 Bioautografi aktivitas antioksidan

dengan DPPH ekstrak metanol daun teh hijau (kiri) dan ekstrak aseton daun teh hijau (kanan) dengan eluen heksana:etil asetat (2:1).

Metode voltammetri siklik digunakan

untuk menentukan lokasi potensial redoks dari spesies elektroaktif secara cepat serta menampilkan informasi tentang spesies yang terlibat pada reaksi oksidasi dan reduksi. Hasil yang ditampilkan berupa voltammogram. Pengukuran antioksidan pada metode ini berdasarkan pengukuran daerah anode yang dihasilkan voltammogram. Anode merupakan daerah terjadinya donor elektron. Karena itu, semakin besar daerah anode yang dihasilkan, semakin besar kapasitas antioksidan.

8

(a)

(b)

Gambar 5 Voltammogram hasil pengukuran kapasitas antioksidan ekstrak metanol daun teh hijau + KClO4 dalam bufer pH 7.4 (100, 500, dan 1000 ppm) [a] dan ekstrak aseton daun teh hijau + KClO4 dalam buffer pH 7.4 (100, 500, dan 1000 ppm) [b].

Pengukuran kapasitas antioksidan dengan

metode voltammetri siklik ini menggunakan KClO4 sebagai oksidator yang akan direduksi oleh senyawa antioksidan yang terdapat pada daun teh hijau. Pengukuran dilakukan pada ekstrak metanol dan aseton dengan konsentrasi 100, 500, dan 1000 ppm (Gambar 5). Hasil pengukuran selengkapnya ditunjukkan pada Lampiran 5.

Terlihat bahwa semakin besar konsentrasi ekstrak, semakin besar kapasitas antioksidan yang dihasilkan pada daerah anode. Kapasitas antioksidan terbesar terdapat pada ekstrak metanol. Hal ini dikarenakan senyawa antioksidan daun teh hijau dalam ekstrak metanol lebih banyak mendonorkan elektron

pada senyawa KClO4. Radikal bebas pada oksidator yang ada memerlukan elektron agar stabil. Elektron tersebut terdapat pada antioksidan yang terdapat pada daun teh hijau. Senyawa-senyawa yang berpotensi sebagai antioksidan pada daun teh diduga ada yang tidak larut dalam aseton, seperti kafein sehingga mengurangi aktivitas antioksidan.

Kromatografi Lapis Tipis Preparatif

Ekstrak yang paling aktif sebagai

antioksidan difraksionasi lebih lanjut dengan Kromatografi Lapis Tipis Preparatif (KLTp). Ekstrak yang aktif menurut metode KLT bioautografi dan metode voltammetri siklik adalah ekstrak metanol.

Fase gerak yang digunakan untuk KLTp berdasarkan pemilihan eluen terbaik, ialah heksana:etil asetat (2:1). Sebagai fase diam digunakan silika gel yang tercetak pada lempengan kaca. Silika gel merupakan senyawa anhidrat sehingga perlu diaktifkan dalam oven selama 30 menit sebelum digunakan. Tujuannya adalah agar air yang terikat secara fisik pada permukaannya dapat lepas. Silika gel dapat menjerap air sebanyak 3.5% bobot keringnya dalam kelembapan sekitar 4050%.

Silika gel bersifat polar sehingga akan mengikat senyawa yang bersifat polar juga. Senyawa yang bersifat polar akan cepat bergerak jika menggunakan pelarut yang polar begitu juga sebaliknya (Harvey 2000). Noda yang terbentuk diamati di bawah lampu UV pada panjang gelombang 254 dan 366 nm. Dihasilkan 10 fraksi (Gambar 6) dengan RRf yang ditunjukkan pada Lampiran 6. Semua fraksi yang diperoleh diuji aktivitas antioksidannya.

Gambar 6 Hasil pemisahan ekstrak metanol

daun teh hijau menggunakan KLTp (Fraksi 1-10 dari bawah ke atas).

-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4-30

-25

-20

-15

-10

-5

0

5

10

15

20

25

Aru

s (A

)

Potensial vs Ag/AgCl (volt)

Ekstrak metanol 100 ppm Ekstrak metanol 500 ppm Ekstrak metanol 1000 ppm

-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4-30

-25

-20

-15

-10

-5

0

5

10

15

20

25

30

Aru

s (A

)

Potensial vs Ag/AgCl (volt)

Ekstrak aseton 100 ppm Ekstrak aseton 500 ppm Ekstrak aseton 1000 ppm

9

PenentuAntiok

Pengujia

DPPH dilakKLT bspektrofotombioautografidisemprot Terlihat bahantioksidan (Gambar menunjukkaungu DPPH

Gambar 7

Larutan

yang dominmembuat dihasilkan terlihat pada2, 3, dan aktivitas antmetode spefraksi terakRadikal bebabsorpsi dalgelombang m

Penentuaantioksidan didasarkan persentase antioksidan Fraksi 2 antioksidan 8).

Senyawasenyawa anbentuk DPPakan semakserapan padPada uji

uan Fraksi Teksidan dengan

an antioksidakukan dengan bioautografi metri. Padai, fraksi yang dengan larut

hwa 3 fraksi mterbaik, yait7). Frak

an berkurangnH.

1

2

3

4 5

7 6

9 8

10

KLT bioaudengan DPfraksi KLTp

DPPH memnan. Adanya intensitas wberkurang at

a noda yang d8. Ketiga f

tioksidannya dektrofotometriktif dari ketbas DPPH 0.0lam pelarut mmaksimum 51an fraksi

dengan mpada persenyang menggdalam menan

didapati terbesar, yait

a DPPH dittioksidan don

PH tereduksi. kin pudar dada panjang gfraksi terak

eraktif Aktivn Metode DPP

an dengan 2 cara, yaitu

dan a metode diperoleh dartan DPPH

menunjukkan atu fraksi 2,3,ksi-fraksi nya intensitas

utografi fraksiPPH (kiri) dap (kanan).

mpunyai warnsenyawa anti

warna ungutau pudar. H

dihasilkan padfraksi tersebudengan menggi untuk mentiga fraksi t05 mM memilmetanol pada p15 nm (Lampi

teraktif smetode DPPntase inhibisigambarkan angkap radikalmemiliki a

tu 74.78% (La

tangkap olehnor hidrogen m

Warna larutaan diikuti pengelombang 5

ktif dengan

vitas PH

metode dengan metode

KLT ri KLTp 1 mM. aktivitas , dan 8 tersebut s warna

i KLTp an hasil

na ungu ioksidan

u yang Hal ini

da fraksi ut diuji gunakan ngetahui tersebut. liki pita panjang iran 7). senyawa PH ini i, yaitu aktivitas l bebas. aktivitas ampiran

h suatu menjadi an ungu nurunan 15 nm. DPPH,

penangkapan memantau pekarena redukserapan yaninhibisi semabahwa aktiviseperti yang d

Teh hijausenyawa feflavandiol, fSenyawa fenkatekin (Hartersebut beContohnya, r(Gambar 8).flavonoid meRadikal arimengalami rhidrogen kedPembentukandengan DPstruktur momenggambarkmempunyai sal. 2009).

Gambar 8

Kontrol p

asam askorbkerja menangterjadinya reSoedibyo 19komponen alpereduksi. M2 radikal DP

radikal enurunan absoksi oleh radikng diperoleh,akin besar. Hitas antioksiddiperoleh pada

u mengandungenol, antaraflavonoid, dnol utama rtoyo 2003). erperan sebreaksi flavon

Atom hidroreduksi radikail dari seesonansi dandua ke radikn kompleks sePH bergantunlekulnya. Mkan bahwa sesifat yang rel

Mekanismeflavonoid (Jiang et al

positif yang at atau vitam

gkap radikal beaksi beranta98). Asam a

lami yang meMolekul asam PPH melalui 2

diikuti dorbansi yang kal. Semakin maka pers

Hal ini menandan semakin a fraksi 2.

g tanin dan bea lain fladan asam fedalam teh

Senyawa-sebagai antioknoid dengan ogen dari seal bebas dari Denyawa flav

n memberikankal DPPH laenyawa antiong pada kest

Mekanisme teenyawa antiolatif stabil (Ji

e reaksi sedengan

l. 2009).

digunakan min C denganbebas dan menai (Dalimarthaskorbat meruemiliki sifat saskorbat mer

2 atom hidrog

dengan terjadi

n kecil sentase ndakan

besar,

erbagai avanol, fenolat. adalah

enyawa ksidan. DPPH

enyawa DPPH. vonoid n atom ainnya. ksidan tabilan ersebut ksidan

iang et

enyawa DPPH

adalah n cara ncegah

ha dan upakan sebagai reduksi gennya

10

sehingga membentuk DPPH nonradikal. Senyawa ini mampu memberikan atom hidrogennya kepada radikal bebas sehingga aktivitasnya dapat diukur dengan metode DPPH. Asam askorbat dapat menangkap radikal bebas dan mampu mencegah terjadinya reaksi berantai.

Gambar 9 Kurva kalibrasi asam askorbat

dengan DPPH 0.05 mM.

Kurva kalibrasi asam askorbat yang dihasilkan mempunyai persamaan regresi linear y = 1.934 + 12.71x dengan R2 = 0.980 (Gambar 9). Nilai R2 menggambarkan korelasi antara konsentrasi analit dan sinyal analit. Korelasi yang memenuhi persyaratan adalah 0.9972, sedangkan secara ilmu statistika nilai 0.80 masih menunjukkan korelasi yang cukup bagus (ICH 1995). Nilai R2 pada percobaan menunjukkan korelasi yang cukup bagus antara konsentrasi asam askorbat dengan % inhibisi. Fraksi teraktif daun teh hijau 100 ppm berdasarkan DPPH setara dengan 5.7 ppm asam askorbat. Jadi, aktivitas antioksidan asam askorbat masih lebih besar.

Penentuan Kapasitas Antioksidan Menggunakan Voltammetri Siklik

Pengukuran kapasitas antoksidan dengan

menggunakan voltammetri siklik didasarkan pada perpindahan elektron bebas pada daerah anode. Daerah tersebut adalah tempat terjadinya pendonoran elektron. Pada pengukuran, potensial diberikan pada contoh melalui elektrode konduktif (elektrode kerja) yang dicelupkan ke dalam sampel. Potensial yang berfungsi sebagai gaya dorong dipayar sepanjang potensial tertentu yang dikehendaki. Kisaran potensial yang diukur untuk menentukan kapasitas antioksidan ekstrak teh hijau sebesar -0.3 +1.3 V.

Metode pengukuran menggunakan 3 elektrode, yaitu elektrode pasta karbon sebagai elektrode kerja, elektrode Ag/AgCl sebagai elektrode pembanding, dan elektrode

platina (Pt) sebagai elektrode pembantu. Elektrode kerja adalah tempat terjadinya reduksi atau oksidasi analit, elektrode pembanding adalah elektrode dengan potensial tetap, dan elektrode pembantu adalah elektrode untuk melengkapi sirkuit agar arus mengalir.

Hanya senyawa aktif yang akan memberikan puncak pada voltammogram di daerah anoda (Gambar 10a), sedangkan senyawa yang tidak aktif tidak memberikan puncak pada voltammogram (Gambar 10b). Voltammogram semua fraksi sebanyak 3 kali ulangan terdapat pada Lampiran 9. Semakin besar daerah anode, maka semakin besar kapasitas antioksidan senyawa tersebut. Fraksi 2 merupakan fraksi teraktif karena memilki kapasitas antioksidan terbesar, yaitu 2.2710 A.s (Lampiran 10). Hasil tersebut sama dengan metode DPPH, yaitu fraksi 2 merupakan fraksi teraktif.

(a)

(b)

Gambar 10 Voltammogram fraksi 1 sampai 5 (a) dan fraksi 6 sampai 10 (b).

y =12.71x +1.934R=0.980

020406080100

0 5

%In

hibisi

Konsentrasi(ppm)

10

-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4-24-22-20-18-16-14-12-10-8-6-4-202468

101214

Aktif Ar

us (

A)

Potensial vs Ag/AgCl (volt)

Buffer pH 7.4 Fraksi 1 Fraksi 2 Fraksi 3 Fraksi 4 Fraksi 5

-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4-22-20-18-16-14-12-10-8-6-4-202468

1012 Tidak aktif

Arus

(A)

Potensial vs Ag/AgCl (volt)

Buffer pH 7.4 Fraksi 6 Fraksi 7 Fraksi 8 Fraksi 9 Fraksi 10

11

Pengukuran antioksidan dengan metode voltammetri siklik dilakukan sebanyak 3 kali ulangan. Hasil voltammogram dari 3 kali ulangan tersebut memberikan pola yang hampir sama (Gambar 11). Hal tersebut menunjukkan keterulangan yang baik.

-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4

-35

-30

-25

-20

-15

-10

-5

0

5

10

15

20

25

30

Arus

(A

)

Potensial vs Ag/AgCl (volt)

Asam askorbat 60 ppm Asam askorbat 70 ppm Asam askorbat 80 ppm Asam askorbat 90 ppm

-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4-20

-15

-10

-5

0

5

10

Arus

(A

)

Potensial vs Ag/AgCl (volt)

Fraksi 2 (1)+KClO4 Fraksi 2 (2)+KClO4 Fraksi 2 (3)+KClO4

Gambar 12 Voltammogram asam askorbat.

Kurva kalibrasi asam askorbat yang dihasilkan mempunyai persamaan regresi linier y = 0.049x 1.202 dengan R2 = 0.997 (Gambar 13). Nilai R2 menggambarkan korelasi antara konsentrasi analat dengan sinyal analat. Korelasi yang memenuhi persyaratan adalah 0.9972, sedangkan secara ilmu statistika nilai 0.80 masih menunjukkan korelasi yang cukup bagus (ICH 1995). Nilai R2 pada percobaan menunjukkan korelasi yang cukup bagus antara konsentrasi asam askorbat dengan daerah anoda. Fraksi teraktif daun teh hijau 100 ppm berdasarkan voltammetri siklik setara dengan asam askorbat konsentrasi 70.87 ppm. Oleh karena itu, kapasitas antioksidan asam askorbat lebih besar.

Gambar 11 Voltammogram fraksi 2 hasil

KLTP.

Senyawa antioksidan yang terdapat pada fraksi 2 bereaksi dengan KClO4 yang dilarutkan pada bufer pH 7.4. Fungsi bufer sebagai elektrolit pendukung, yaitu garam yang ditambahkan dalam jumlah berlebih ke dalam larutan analit untuk mengurangi efek migrasi dan menurunkan tahanan larutan. KClO4 sebagai oksidator kuat yang sangat membahayakan tubuh akan direduksi oleh suatu senyawa antioksidan yang terkandung di dalam daun teh hijau. Senyawa antioksidan tersebut akan mendonorkan elektron ke KClO4. Terjadinya donor elekron dapat menyebabkan peningkatan pH. Oleh karena itu, diperlukan bufer pH 7.4 untuk mempertahankan pH selain sebagai larutan elektrolit pendukung.

Kontrol positif yang digunakan pada pengukuran kapasitas antioksidan daun teh hijau dengan menggunakan metode voltammetri siklik adalah asam askorbat. Senyawa ini berperan sebagai pengikat oksigen sehingga tidak mendukung reaksi oksidasi. Dalam hal ini, senyawa tersebut akan mengadakan reaksi dengan oksigen yang berada dalam sistem sehingga jumlah oksigen akan berkurang.

y =0.049x 1.202R=0.997

0

2

4

50 70 90Daerahan

oda

(A.s)

Konsentrasi(ppm)

Gambar 13 Kurva kalibrasi asam askorbat.

Hasil voltammetri siklik diperoleh fraksi teraktif, yaitu fraksi 2. Hal ini sama dengan hasil yang diperoleh dengan menggunakan metode DPPH. Oleh karena itu, metode voltammetri siklik ini dapat menggantikan metode DPPH. Metode voltammetri siklik ini lebih murah, sederhana, dan cepat dibandingkan metode DPPH. Metode DPPH hanya dapat melihat aktivitas antioksidan dari persentase inhibisi, sedangkan metode voltammetri siklik dapat dilihat dari tiga parameter, yaitu daerah anode, arus, dan potensial.

Asam askorbat akan mereduksi KClO4 dengan cara mendonorkan elektronnya sehingga radikal bebas pada senyawa KClO4 akan stabil (Gambar 12). Semakin besar konsentrasi asam askorbat, maka semakin besar kapasitas antioksidan karena banyaknya elektron yang didonorkan pada daerah anode (Lampiran 12).

Uji Fitokimia

Uji fitokimia adalah uji kualitatif untuk mengetahui kandungan senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam ekstrak tanaman. Ekstrak kasar metanol dan aseton memiliki kandungan metabolit sekunder yang sama, yaitu flavonoid, alkaloid, saponin, tanin, dan steroid. Pada fraksi teraktif terdapat senyawa metabolit sekunder berupa flavonoid dan tanin.

Tabel 1 Uji fitokimia ekstrak daun teh hijau

dan fraksi teraktif

Komponen Ekstrak Ekstrak Fraksi teraktif

metanol aseton Metanol Flavonoid + + + Saponin + + - Tanin + + + Alkaloid + + - Triterpenoid - - - Steroid + + -

Keterangan: (+) terdeteksi, (-) tidak terdeteksi

Teh hijau mengandung tanin dan berbagai senyawa polifenol, termasuk flavanol, flavandiol, flavonoid, dan asam fenolat. Senyawa polifenol utama dalam ini adalah katekin. Senyawa katekin dalam ini terdiri dari epikatekin, epigalokatekin, epikatekin galat, dan epigalokatekin galat (Hartoyo 2003). Senyawa ini berfungsi sebagai antioksidan untuk menangkap radikal bebas dalam tubuh juga ampuh mencegah berkembangnya sel kanker dalam tubuh. Berdasarkan hasil uji fitokimia terbukti bahwa ekstrak teraktif daun teh hijau mengandung flavonoid dan tanin.

SIMPULAN DAN SARAN

Simpulan

Ekstrak metanol daun teh hijau lebih tinggi aktivitas antioksidannya dibandingkan dengan ekstrak aseton. Fraksionasi ekstrak metanol menghasilkan 10 fraksi. Diantara 10 fraksi, fraksi 2; 3; dan 8 memiliki aktivitas antioksidan lebih tinggi dibandingkan fraksi lain. Fraksi 2 yang merupakan fraksi teraktif menunjukkan aktivitas antioksidan sebesar 74.78% berdasarkan metode DPPH dan 2.2710 A.s berdasarkan metode voltammetri siklik. Urutan ketiga fraksi, yaitu fraksi 2 diikuti fraksi 8 dan yang terndah fraksi 3. Urutan tersebut diperoleh berdasarkan metode DPPH dan voltammetri siklik. Oleh karena

itu, metode voltammetri siklik dapat menggantikan metode DPPH.

Saran

Analisis lanjut diperlukan penentuan

kapasitas antioksidan berdasarkan arus dan potensial maksimum pada voltammetri siklik.

DAFTAR PUSTAKA

Adnan M. 1997. Teknik Kromatografi untuk

Analisis Bahan Makanan. Yogyakarta: Andi Yogyakarta.

[AOAC] The Association of Official

Analytical Chemist. 2006. Official Methods of Analysis. Ed ke-18. Washington DC: Association of Official Analytical Chemist.

Belitz HD and Grosch W. 1999. Food

Chemistry 2 Th. Jerman: Springer. Caldwell CR. 2001. Oxygen radical

absorbance capacity of the phenolic compounds in plant extracts fractioned by high- performance liquid chromatography. Anal Biochem 293:232-238.

Campanella L, Martini E, Rita G, Tomasseti

M. 2006. Antioxidant capacity of dry extracts checked by voltammetric method. J Food Agric Environ 4:135-144.

Christian GD. 1986. Analytical Chemistry. Ed

ke-4. USA: John Willey & Sons. Dalimartha S, Soedibyo M. 1998. Awet Muda

Dengan Tumbuhan Obat dan Diet Suplemen. Jakarta: Trubus Agriwidya.

Furniss BS, Hannaford AJ, Smith PWG,

Tatchell AR, Vogel AI. 1989. Vogels Textbook of Practical Organic Chemistry 4th. New York: Willey & Sons.

Hanani E, Abdul M, Ryany S. 2005.

Identifikasi Senyawa Antioksidan dalam Spons Callyspongia sp dari Kepulauan Seribu. Majalah Ilmu Kefarmasian 2: 127-133.

Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia.

Padmawinata K, Sudiro I, penerjemah. Bandung: Institut Teknologi Bandung. Terjemahan dari: Phytochemical Methods.

13

Harjadi W. 1993. Ilmu Kimia Analitik Dasar. Jakarta: Gramedia.

Hartoyo A. 2003. Teh dan Khasiatnya bagi

Kesehatan. Yogyakarta: Kanisius. Harvey D. 2000. Modern Analytical

Chemistry. New York: McGraw-Hill. Hidayat MG. 2004. Perbandingan metode

ekstraksi flavonoid dan terpenoid dari sidaguri serta daya inhibisi ekstrak terhadap aktivitas xantin oksidase. [Skripsi]. Bogor: Institut Pertanian Bogor.

[ICH] International conference on

Harmonization 1995. Validation of Analytical Procedures: Methodology Q2B [terhubung berkala]. www.ich.org [12 Januari 2011].

Ikeda I et al. 2003. Heat epimerized tea

catechin rich in gallocatechin gallate and catechin gallate are more effective to inhibit cholesterol absorption than tea catechin rich in epigallocatechin gallate and epicatechin gallate. J Agric Food Chem 51:7303-7307.

Ionita P. 2003. Is DPPH Stable Free Radical a

Good Scavenger for Oxygen Active Species?. J Chem 59:11-16.

Javanmardi J, Stushnoff C, Locke E, Vivanco

JM. 2003. Antioxidant activity and total phenolic content of iranian ocimum accessions. J Agric Food Chem 83:547-550.

Jiang X, Chen X, Wei Y. 2009. Free Radical

Scavenging Activity and Flavonoids Contents of Polygonum orientale Leaf, Stem and Seed Extracts. Latin Am J Pharm 28:284-287.

Khopkar SM. 2002. Konsep Dasar Kimia

Analitik. Saptorahardjo, penerjemah. Jakarta: UI Press. Terjemahan dari: Basic Concept of Analytical Chemistry.

Kikuzaki H, Nakatani N. 1993. Antioxidant

effects of some ginger constituents. J Food Sci 58:1407-1410.

Konishi Y, Kobayashi S, Shimizu M. 2003.

Tea polyphenols inhibit tea transport of dietary phenolic acid mediated by tea monocarboxylic acid transporter (MCT) in

intestinal caco-2 cell monolayers. J Agric Food Chem 51:7296-7302.

Molyneux. P. 2004. The use of the stabil free

radical diphenylpicrilhydrazyl (DPPH) for estimating antioxidant activity. J Sci Tech 26:211-219.

Mosquera OM, Correa YM, Buitrago DC,

Nino J. 2007. Antioxidant activity of twenty five plants from Colombian biodiversity. Mem Inst Oswaldo Cruz 102 (5): 631-634.

Prakasih A. 2001. Antioxidant activity.

Medallion Laboratories Analytical Progress 19 (2).

Prior RL, Wu X, Schaich K. 2005.

Standardized method for the determination of antioxidant capacity and phenolics in food and dietary supplements. J Agric Food Chem 55:2698 A-J.

Rouessac F, Rouessac A. 1994. Chemical

Analysis Modern Instrumentation Methods and Techniques 2nd. USA: John Willey & Sons.

Skoog DA, West DM, Holler FJ. 1998.

Fundamentals of Analytical Chemistry. Ed ke-7. Orlando: Sounders College.

Suzuki M et al. 2003.. Epimerization of tea

catechin and o-methylated derivatives of (-)-epigallocatechin-3-o-gallate: relationship between epimerization and chemical structure. J Agric Food Chem 51:510-514.

Wang J. 1994. Analytical Electrochemistry.

New York: VCH. Winarno FG. 1997. Kimia Pangan dan Gizi.

Jakarta: Gramedia.

LAMPIRAN

15

Lampiran 1 Diagram alir penelitian

Sokhletasi dengan aseton

Ekstrak metanol

Ekstrak aseton

Uji Fitokimia

Fraksi teraktif

Pemilihan eluen terbaik dengan KLT

Fraksinasi dengan KLTp

Uji kapasitas antioksidan

Eluen terbaik

Serbuk daun teh hijau

Uji antioksidan

Sokhletasi dengan metanol

Uji fitokimia

16

Lampiran 2 Penentuan kadar air daun teh hijau

Ulangan Bobot cawan

Bobot sampel

Bobot cawan+sampel kering

Kadar air

kosong (g) (g) (g) (% b/b) 1 1.9051 3.0006 4.6479 8.59 2 1.9313 3.0009 4.6742 8.60 3 1.9258 3.0008 4.6661 8.68

Rerata 8.62 Contoh perhitungan ulangan 1: Bobot sampel (Bobot cawan+sampel kering) Bobot cawan kosong Kadar air = 100% Bobot sampel 3.0006 gram (4.6479 1.0951)gram = 100% 3.0006 gram 0.2578 gram = 3.0006 gram = 8.59%

17

Lampiran 3 Penentuan rendemen ekstrak kasar daun teh hijau dalam metanol

Ulangan Bobot sampel Bobot ekstrak Faktor Rendemen

(g) (g) koreksi (% b/b) 1 40.162 5.1750 1.0862 14.00 2 40.117 7.1671 1.0862 19.40

Rerata 16.70 Contoh perhitungan rendemen ulangan 1: 100 + kadar air Faktor koreksi = 100 100 + 8.62 = 100 = 1,0862 Bobot ekstrak Rendemen = fk 100% Bobot sampel 5.1750 gram = fk 100% 40.1620 gram = 14.00%

18

Lampiran 4 Penentuan rendemen ekstrak kasar daun teh hijau dalam aseton

Ulangan Bobot sampel Bobot ekstrak Faktor Rendemen

(g) (g) koreksi (% b/b) 1 40.0103 4.5750 1.0862 12.42 2 40.0193 6.3510 1.0862 17.24

Rerata 14.83 Contoh perhitungan rendemen ulangan 1: 100 + kadar air Faktor koreksi = 100 100 + 8.62 = 100 = 1,0862 Bobot ekstrak Rendemen = fk 100% Bobot sampel 4.5750 gram = fk 100% 40.0103 gram = 12.42%

19

Lampiran 5 Pengukuran kapasitas antioksidan ekstrak kasar daun teh hijau dengan metode voltammetri siklik

Ekstrak Konsentrasi Ulangan Daerah anode Rerata daerah anode

(ppm) (A.s) (A.s) Metanol 1 2.321

100 2 2.320 2.319 3 2.317

1 5.420500 2 5.079 5.329

3 5.488

1 7.0871000 2 7.194 7.059

3 6.896

Aseton 1 1.858 100 2 1.733 1.772

3 1.724

1 4.598500 2 4.346 4.492

3 4.533

1 5.2661000 2 5.010 5.138

3 5.139

-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4-30

-25

-20

-15

-10

-5

0

5

10

15

20

25

Aru

s (

A)

Potensial vs Ag/AgCl (volt)

Ekstrak metanol 100ppm (1) Ekstrak metanol 100ppm (2) Ekstrak metanol 100ppm (3) Ekstrak metanol 500ppm (1) Ekstrak metanol 500ppm (2) Ekstrak metanol 500ppm (3) Ekstrak metanol 1000ppm (1) Ekstrak metanol 1000ppm (2) Ekstrak metanol 1000ppm (3)

-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4-30

-25

-20

-15

-10

-5

0

5

10

15

20

25

30

Aru

s (

A)

Potensial vs Ag/AgCl (volt)

Ekstrak aseton 100 ppm (1) Ekstrak aseton 100 ppm (2) Ekstrak aseton 100 ppm (3) Ekstrak aseton 500 ppm (1) Ekstrak aseton 500 ppm (2) Ekstrak aseton 500 ppm (3) Ekstrak aseton 1000 ppm (1) Ekstrak aseton 1000 ppm (2) Ekstrak aseton 1000 ppm (3)

20

Lampiran 6 Hasil pemisahan fraksi KLT preparatif

Fraksi

Jarak spot dari Jarak tempuh eluen Rf garis awal (cm) dari garis awal (cm)

1 0.3 18 0.02 2 0.8 18 0.04 3 5.4 18 0.3 4 8 18 0.44 5 10.3 18 0.57 6 11.5 18 0.64 7 13 18 0.72 8 14.3 18 0.79 9 15.4 18 0.85 10 16.7 18 0.93

21

ampiran 7 Penentuan panjang gelombang maksimum DPPH 0.05 mM dalam metanol

Panjang gelombang (nm) Absorbansi

Panjang gelombang (nm) Absorbansi

L

415 0.213 479 0.456 417 0.214 481 0.473 419 0.216 483 0.489 421 0.219 484 0.497 423 0.221 485 0.505 425 0.224 487 0.522 427 0.227 489 0.539 429 0.230 491 0.556 431 0.233 493 0.574 433 0.237 495 0.591 435 0.240 497 0.606 437 0.244 499 0.622 439 0.249 501 0.636 441 0.253 503 0.650 443 0.258 505 0.661 445 0.263 507 0.671 447 0.270 509 0.679 449 0.276 511 0.685 451 0.284 513 0.689 453 0.292 515 0.690 455 0.300 517 0.688 457 0.310 519 0.687 459 0.320 521 0.682 461 0.330 523 0.676 463 0.342 525 0.667 465 0.354 528 0.651

469 0.381 533 0.619 471 0.395 535 0.605

0.410 0.589

467 0.367 531 0.633

473 475

537 539 0.425 0.574

477 0.440 541 0.560

22

Lampiran 8 Penentuan aktivitas antioksidan ekstrak metanol daun teh hijau dengan metode DPPH

Fraksi entrasi m) UlaAbsorbansi

i

Rerata Kons(pp ngan

% inhibisEkstrak Ekstrak+DPPH % inhibisi

2 100 0.059 .233 74.78

1 0 74.78 0.063 3 100 0.001 .245 64.56

2 0.237 74.78 1 0 64.64 2 0.002 .247

8 100 0.021 .235 68.83

0 64.49 1 0 68.98

0.023 Blanko .690

2 0.239 68.69 0

Contoh perhitungan: A blanko [(A ekstrak+DPPH) trak tanpa D% Inhibis 100% A blanko .690 [0.23 59] = 100% 0.690

= 74.78 %

eks PPH] i =

0 3 0.0

23

raksi KLTp )

gan 3

(a)

(c)

Lampiran 9 Hasil voltammogram pengukuran kapasitas antioksidan fekstrak metanol daun teh hijau + KClO4 dalam bufer pH 7.4 (aulangan 1, (b) ulangan 2, (c) ulan

1214

(b)

-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4-24-22-20-18-16-14-12-10

-8-6-4-202468

10

Aru

s (A

)

Potensial vs Ag/AgCl (volt)

Buffer Fraksi 1 Fraksi 2 Fraksi 3 Fraksi 4 Fraksi 5

-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4-22-20-18-16-14-12-10-8-6-4-202468

1012

Arus

(A)

Potensial vs Ag/AgCl (volt)

Buffer pH 7.4 Fraksi 6 Fraksi 7 Fraksi 8 Fraksi 9 Fraksi 10

-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4-24-22-20-18-16-14-12-10-8-6-4-202468

101214

Aru

s (

A)

Potensial vs Ag/AgCl (volt)

Buffer pH 7.4 Fraksi 1 Fraksi 2 Fraksi 3 Fraksi 4 Frkais 5

-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4-22-20-18-16-14-12-10-8-6-4-202468

1012

Aru

s (A

)

Potensial vs Ag/AgCl (volt)

Buffer pH 7.4 Fraksi 6 Fraksi 7 Fraksi 8 Fraksi 9 Fraksi 10

-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4-24-22-20-18-16-14-12-10-8-6-4-202468

101214

Arus

(A

)

Potensial vs Ag/AgCl (volt)

Buffer pH 7.4 Fraksi 1 Fraksi 2 Fraksi 3 Fraksi 4 Fraksi 5

-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4-22-20-18-16-14-12-10-8-6-4-202468

1012

Arus

(A)

Potensial vs Ag/AgCl (volt)

Buffer Fraksi 6 Fraksi 7 Fraksi 8 Fraksi 9 Fraksi 10

24

Lampiran 10 Pengukuran kapasitas antioksidan fraksi KLTp ekstrak metanol daun teh hijau dengan metode voltammetri siklik

Fraksi Ulangan Konsentrasi Daerah anoda Rerata daerah

anode (ppm) (A.s) (A.s) 1 1 100 0.1662

2 100 0.1672 0.1668 3 100 0.1670 2 1 100 2.5100

2 100 2.1650 2.2710 3 100 2.1380 3 1 100 0.7156

2 100 0.7087 0.7107 3 100 0.7078 4 1 100 0.4390

2 100 0.4409 0.4352 3 100 0.4257 5 1 100 -

2 100 - - 3 100 - 6 1 100 -

2 100 - - 3 100 - 7 1 100 0.6699

2 100 0.6646 0.6562 3 100 42 8 1 100 2.4550

0.63

2 100 2.1090 2.2233 3 100 2.1060 9 1 100 0.3719

2 100 0.3718 0.3722 3 100 0.3729

10 1 100 - 2 100 - -

3 100 -

25

Lampiran 11 Penentuan aktivitas antioksidan vitamin C dengan metode DPPH

Konsentrasi Absorbansi

% inhibisi (ppm) Blanko 0.690 -

2 0.518 24.93 3 0.411 40.43 4 0.303 56.09 5 0.224 67.53 6 0.173 74.93

Contoh perhitungan: A blanko A sampel % Inhibisi = 100% A blanko 0.690 0.518 = 100% 0.690 = 24.93%

Lampiran 12 Pengukuran kapasitas antioksidan asam askorbat dengan metode

voltammetri siklik

Konsentrasi Daerah anode

(ppm) (A.s) 60 1.758 70 2.218 80 2.678 90 3.238

CoverAbstrak dan AbstractHalaman JudulLembar PengesahanPrakataRiwayat HidupDaftar IsiDaftar GambarDaftar LampiranPendahuluan dan Tinjauan PustakaBahan dan MetodeHasil dan PembahasanKesimpulan, Saran dan Daftar Pustaka Lampiran