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VALIDACIÓN CLÍNICA DE LA DETECCIÓN DE PROTEÍNAS Y ÁCIDOS NUCLEICOS INTEGRADOS EN UNA MATRÍZ DE
BIOSENSORES ELECTROQUÍMICOS PARA EL DIAGNÓSTICO DE INFECCIONES EN EL TRACTO URINARIO
María Fernanda Rodríguez Quesada
María Priscilla Rodríguez Quesada
Ruchika Mohan, Kathleen E. Mach, Moran Bercovici, Ying Pan, Lakshmi Dhulipala, Pak Kin Wong, Joseph C. Liao
Diagnóstico
Síntomas urinarios
Piuria
≥105 ufc de uropatógen
os
INTRODUCCIÓN
Diagnóstico lento, poco seguro, administración de antibióticos innecesarios…
INFECCIÓN DEL TRACTO URINARIO (ITU)
Diagnóstico
Proteínas urinarias
indicadoras (lactoferrina
)
Identificación del
patógeno (ARNr 16S)
INTRODUCCIÓN
INFECCIÓN DEL TRACTO URINARIO (ITU)
Diagnóstico específico, cuantifica el nivel de infección.
Generar un diagnóstico rápido y exacto para 113 muestras de pacientes con riesgo a presentar ITU, utilizando una matríz de biosensores electroquímicos para la detección de Lactoferrina y ARNr 16S del patógeno
Validar el diagnóstico comparándolo con los resultados clínicos.
OBJETIVOS
DOS ENSAYOS EN UNA MATRIZ
Temperatura Hibridación:Ácidos nucleicos: 65 ºC Proteínas: 35 ºC
Pruebas a 35 ºC:Menor intensidad de uniónMenor especificidad
Diseño de nuevos oligonucleótidos 20-24 pb
METODOLOGÍA
PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS Y ENSAYO CON BIOSENSOR
Fusión de las sondas y
anticuerpos de captura con
sensor
Incubación a 37 ºC por 30
min
Sedimentación, Lisis y
Neutralizado
Hibridación con 11 sondas de detección
Incubación a 37 ºC por 15
min
Hibridación con la sonda
de captura en el sensor
METODOLOGÍA
PRUEBAS DE MICROBIOLOGÍA CLÍNICA
Análisis de orinaGlóbulos blancos por high power
field (WBC/HPF)pHGravedad específicaEsterasa de leucocitosNitrito
Cultivo Susceptibilidad
METODOLOGÍA
ESTUDIO CLÍNICO Y BIOSENSOR
Estudio Clínico
Biosensor
Especificidad
Negativas
34 33 97%
1 especie 22 22 100%
2-3 especies
13 10 77%
Mezcla 44 37 84%
Positivas 79 70 89%
RESULTADOS
LTF Correlación confirma que LTF refleja
presencia de piuria
Esterasa de
leucocitos
Conteo de
glóbulos blancos
LTF
RESULTADOS
Se desarrolló una matriz integrada de detección múltiple para ácidos nucleicos específicos de bacterias y proteínas de respuesta inmune
Se validó clínicamente la detección realizada por el biosensor electroquímico
Se logró un diagnóstico molecular rápido de ITU contribuyendo a una menor prescripción innecesaria de antibióticos
CONCLUS IONES