retrospektivna analiza kliniČkih i laboratorijskih … · uzorci krvi su analizirani aparatom za...

219

* Rad primljen za štampu 13. 02. 2015. godine**Dr sc. vet.med. LjubicaSpasojević Kosić, vanredni profesor, Departman za veterinarskumedicinu,Poljoprivredni fakultet,Univerzitet uNovomSadu; dr sc. vet.med.SaraSavić,naučnisaradnik,Naučniinstitutzaveterinarstvo„NoviSad”;drsc.vet.med.AleksandarPot-konjak,docent,drvet.med.VukVračar,asistent,Departmanzaveterinarskumedicinu,Pol-joprivrednifakultet,UniverzitetuNovomSadu

ORIGINALNI RAD / ORIGINAL PAPER

DOI:10.2298/VETGL1504219S UDC636.75.09:616.993-074

RETROSPEKTIVNA ANALIZA KLINIČKIH I LABORATORIJSKIH NALAZA LOVAČKIH PASA SA SEROLOŠKIM REAKCIJAMA NA UZROČNIKE

BOLESTI KOJE SE PRENOSE KRPELJIMA (ANAPLASMA PHAGOCYTOPHILUM, BORRELIA BURGDORFERI,

BABESIA CANIS, EHRLICHIA CANIS, RICKETTSIA CONORII)* RETROSPECTIVE ANALYSIS OF CLINICAL AND LABORATORY FINDINGS IN

HUNTING DOGS WITH SEROLOGIC REACTIONS TO TICK-BORNE PATHOGENS (ANAPLASMA PHAGOCYTOPHILUM, BORRELIA BURGDORFERI, BABESIA CANIS,

EHRLICHIA CANIS, RICKETSIA CONORII)

Spasojević Kosić Ljubica, Savić Sara, Potkonjak A., Vračar V.**

U endemskim oblastima seroprevalencija na uzročnike bolesti koji se prenose krpeljima je visoka. U ovom radu, na populaciji od 58 lovačkih pasa je ispitivana seroprevalencija na uzročnike koji se prenose krpeljima (Anaplasma phagocytophilum, Borrelia burgdorferi, Babesia canis, Ehrlichia canis, Rickettsia conorii) u uslovima infekcije sa jednim ili više uzročnika. Rezultati seroloških reakcija su upoređeni sa rezultatima dobijenim kliničkim pregledom, hematološkim i biohemijskim analizama krvi. Ukupna seroprevalencija na jednog ili više ispitivanih uzročnika iznosila je 74,14% (R. conorii 44,83%, B. canis 32,76%, B. burgdorferi 25,86%, E. canis 13,79%, A. phagocytophilum 8,47%), pri čemu je 25,86% pasa bilo seropozitivno na dva uzročnika, 15,52% pasa na tri uzročnika, a 1,72% pasa na 4 uzročnika. Od svih kliničkih simptoma statističku značajnost je imala pojava povišene telesne temperature (p<0,05) i aritmija (p<0,05) kod pasa seropozitivnih na ispitivane uzročnike. Za većinu hematoloških i biohemijskih parametara nije postojala statistički značajna razlika u njihovoj vrednosti između pasa seropozitivnih i seronegativnih na ispitivane uzročnike. Statistički značajna razlika utvrđena za pojedine hematološke (broj eritrocita i seroreaktivnost na B. burgdorferi) i

220

Vet.glasnik69(3-4)231-244(2015)SpasojevićKosićLjubicaisar.:Retrospektivnaanalizakliničkihilaboratorijskihnalazalovačkihpasasaserološkimreakcijamana...

Uvod / Introduction

biohemijske parametre (koncentracija albumina i seroreaktivnost na E. canis i aktivnost AST i seroreaktivnost na R. conorii) nije bila klinički značajna. Visoka izloženost uzročnicima koji se prenose krpeljima ukazuje na neadekvatnu profilaksu ektoparaziticima kod lovačkih pasa. Nalaz povišene telesne temperature kod lovačkih pasa potrebno je razjasniti etiološki daljim dijagnostičkim procesom, pri čemu treba koristiti metode direktne dijagnostike, koje mogu dokazati veći broj uzročnika zbog mogućnosti koinfekcije.

Ključne reči: lovački psi, krpelji, infektivne bolesti, kliničko-patološki nalazi, serološke reakcije.

Rizikdapasbudeizloženuzročnicimakojeprenosekrpeljizavisiodrase,aktivnosti i kontrole infestacije krpeljima (Show i sar., 2001). Bolesti koje seprenosekrpeljima(babezioza,erlihioza,lajmskabolest,rikecioza,anaplazmoza)suznačajneukliničkojveterinarskojpraksi,anaročitouendemskimpodručjima.

Postojanjekliničkihsimptomakodpsa,zajednosapodacimaoizloženostipsakrpeljima,podrazumevaneophodnostdaljegdijagnostičkogpostupkauciljupostavljanjaetiološkedijagnoze.Kliničkisimptomikojisugerišupostojanjebolestikoje seprenosekrpeljimasunedovoljno specifični (letargija, anoreksija, febra,limfadenopatija, bledilo vidljivih sluzokoža,petehije, ehimoze,promenjenabojaurina,poliartritisidr.)(Manzilloisar.,2006;ESCAP2012).Usvomradukliničarisečestooslanjajunahematološkeibiohemijskenalazeupostavljanjudijagnoze.Međutim,razvojkliničkih,hematološkihibiohemijskihpromenaizazvanihrazličitimuzročnicima koji se prenose krpeljima su često nepredvidivi, naročito ukolikokodpsapostojikoinfekcijasadvailivišemikroorganizama(Otrantoisar,2009).Etiološka dijagnoza zahteva poznavanje dijagnostičkih standarda za određeneuzročnike,aoniuslučajubolestikojeseprenosekrpeljimaobuhvatajumorfološkudijagnostiku (pregled krvnog razmaza, pregled buffy-coat), primenu indirektneserološke dijagnostike (IFAT, ELISA, Western Blot) i direktne molekularnedijagnostike(PCR)(ESCAP2012).

UokviruispitivanjazdravstvenogstanjalovačkihpasanateritorijiVojvodine,većsuobavljenaispitivanjaseroprevalencijeB. burgdorferi, B. canis, E. canis i R. conorii (Savić-Jevđevićisar.,2008;Potkonjakisar.,2014a;Potkonjakisar.,2014b). U ovom radu predstavljamo seroprevalenciju naA. phagocytophilum, B. burgdorferi iprikazujemoprokuženostsavišeuzročnikanakonkoinfekcijeuispitivanojpopulacijilovačkihpasa.Ciljovogradajedaanalizirakliničko-patološkerezultatedobijenekliničkimpregledompasa,analizomkrvneslikeibiohemijskimanalizamaserumaiuporediihsaserološkimreakcijamanaA. phagocytophilum, B. burgdorferi, B. canis, E. canis i R. conoriiuuslovimainfekcijesajednimilivišeuzročnika.

221


Ovim ispitivanjem je obuhvaćeno 58 pasa sa područja Novog Sada (40mužjaka i 18 ženki).Uslov da psi učestvuju u istraživanju bio je da su aktivniu lovu, odnosno zamlade pse, da su učestvovali u bar jednoj lovnoj sezoni.Rasni sastav pasa činili su: nemački kratkodlaki ptičar, nemački oštrodlakiptičar,mađarskavižla,poenter,vajmarskiptičar,labradorretriver,engleskiseter,engleski špringer španijel, epanjel breton, posavski gonič, istarski kratkodlakigonič, jazavičar,nemački lovački terijer,malimisterlender.Svipsisuprvobitnopodvrgnuti detaljnim kliničkim pregledima. Anamneza je uzeta od vlasnika, aodnosilasenauslovedržanja,ishraneinegepsa,kaoisprovođenjeprofilaktičkihmeravakcinacijeiantiparazitskogtretmana.Nakonsprovođenjaopštegkliničkogpregleda,odsvakogpsasuuzetiuzorcikrvi,urina i fecesa.Krv jeuzorkovanaiz v. cephalica antebrachiizaanalizukrvneslike,biohemijskeanalizeseruma iserološkudijagnostikunauzročnikebolestikojeseprenosekrpeljima.

Uzorci krvi su analizirani aparatom za automatsko brojanje ćelijaAbacusJuniorVet(DiatronMI,PLC,Hungary)kakobisedobilevrednostihematološkihparametara (broj eritrocita, leukocita, trombocita, limfocita, granulocita,prekurzoraleukocita,koncentracijahemoglobina,hematokrit,MCV,MCH,MCHC,varijabilnost veličine eritrocita, trombokrit, prosečna zapremina trombocita).Serumipasasuodmomentauzorkovanjadosprovođenjaanalizabiohemijskihparametara u aparatu Rayto RT-1904C semi-auto ChemistryAnalyzer (RaytoLifeandAnalyticalScienceCO,Ltd,China)čuvaniuzamrznutomobliku(-20°C).Dobijene su vrednosti sledećih biohemijskih parametara: albumini, globulini,albumin/globulinkoličnik(A/G),ukupniproteini,urea,kreatinin,ukupnibilirubin,AST,ALT,alkalnafosfataza.Serološkadijagnostikajepodrazumevalautvrđivanjeodređenog titra antitela IgG klase različitih uzročnika. Za utvrđivanje prisustvaIgGnaantigeneA. phagocytophilumkorišćenjemikroimunofluorescentnitest,agraničnititarjebio1:80(MIFIgGAntibodyKit,Fullerlaboratories,USA).PrisustvoIgGnaantigeneB. burgdorferiizvršenojekorišćenjemindirektnogELISAtesta,agraničnititarjebio1:101(recom-WellBorreliacanisIgG,MikrogenDiagnostik,Germany). Indirektni imunofluorescentni test (proizvođača Veterinary MedicalResearch&Development,USA)jekorišćenzadokazivanjeprisustvaantitelaklaseGnaE. canis.Svikrvniserumisatitromvećimilijednakimsa1:50suproglašenipozitivnim. Ista vrsta serološkog testa je korišćena za dokazivanje IgG naR. conorii i B. canis.GraničnititarantitelanaR. conoriijebio1:64(MegaScreen®FLUORICKETTSIA conorii,MEGACORDiagnostikGmbH,Austria), dok je zaantitela na B. canisbio1:128(MegaScreen®FLUOBABESIAcanis,MEGACORDiagnostikGmbH,Austria).

Za statističku obradu podataka korišćen je paket Statistica 12. Brojčanevrednostiparametarapredstavljenesuapsolutno,relativnoikaosrednjavrednost±SD.Poređenjeznačajnostirazlikeizmeđuvrednostihematološkihibiohemijskihparametarapasakojisubiliserološkipozitivni inegativnivršenojet-testomza

Materijal i metode rada / Material and methods

222

nezavisneuzorke.Procenaznačajnostikliničkihsimptomakodlovačkihpasasaserološkim reakcijama na ispitivane uzročnike procenjivana je McNemarovimtestom.Vrednostp<0,05jesmatranastatističkiznačajnom.

Umomentukliničkogpregledalovačkihpasaustanovljenisurazličitikliničkisimptomi(tabela1).Povišenjetelesnetemperatureiuvećanjejednogilivišelimfnihčvorovasubilinajčešćeprisutnisimptomikodpregledanihpasa,saučestalošćuod59,32%i47,46%.Odostalihsimptomakojisuutvrđeniprilikompregleda,akojimogudasedoveduuvezusaispitivanimuzročnikomkojiseprenosekrpeljima,najvećuučestalostsuimalearitimije,kojesusejavilekod13,56%pasa.

Tabela1. Nalaz kliničkih pregleda kod lovačkih pasaTable 1. Clinical examination findings in hunting dogs

Nalaz kliničkih pregleda / Clinical examination findings

Broj pasa (%) / Number of dogs (%)

Nalaz kliničkih pregleda / Clinical examination findings

Broj pasa (%) / Number of dogs (%)

Pyrexia 35(59,32) Hyperplasiaprostatae 3(5,08)

Lymphadenopathia 28(47,46) Nodus 2(3,39)

Puliculosis 10(16,95) Hernia 2(3,39)

Callus 9(15,25) Fracturadentis 2(3,39)

Alopecia 8(13,56) Cicatrix 1(1,69)

Cremordentium 8(13,56) Monorchid 1(1,69)

Arythmia 8(13,56) Cataracta 1(1,69)

Balanopostitis 7(11,86) Canicies 1(1,69)

Vulnus 6(10,17) Anodontia 1(1,69)

Lichenificatio 5(8,47) Ptosis 1(1,69)

Otitisexterna 5(8,47) Prognatioinferior 1(1,69)

Laboratorijskihematološkinalazikodpregledanihlovačkihpasasupokazalipostojanje odstupanja od referentnih vrednosti. Kod najvećeg broja pasaustanovljenojepostojanjeleukocitozeineutrofilije(tabela2).Odstupanjavrednostibiohemijskih parametara od referentnih vrednosti kod lovačkih pasa prikazanasutakođeutabeli2.Unajvećembrojuslučajevaodstupanjasuseodnosilanapovećanjekoncentracijeukupnihproteinaiglobulinaismanjenjeodnosaalbuminaiglobulina.KodčetiripsajeustanovljenopovećanjeaktivnostienzimaASTiALT,

Rezultati / Results


223

ali jesamokod jednogodnjih registrovano ipovećanjekoncentracijeukupnogbilirubina.

Tabela2.Odstupanje vrednosti hematoloških i biohemijskih parametara kod lovačkih pasaTable 2. Deviation of values of haematological and biochemical parameters in hunting dogs

Parametri / Parameters

Broj (%) pasa / Number of dogs (%)





RBC↑RBC↓Hgb↑Hgb↓Hct↑Hct↓MCV↑MCV↓MCH↑MCH↓MCHC↓RDW↑

5(8,47)6(10,17)8(13,56)6(10,17)4(6,78)6(10,17)2(3,39)3(5,08)6(10,17)1(1,69)1(1,69)6(10,17)

WBC↑GRA↑LYM↑MID↑MID↓

PLT↑PLT↓PCT↑PCT↓MPV↑MPV↓

25(42,37)25(42,37)13(22,03)4(6,78)13(22,03)

6(10,17)13(22,03)5(8,47)14(23,73)2(3,39)6(10,17)

Albumini↓Albumini↑Globulini↑A/G↓Proteini↑Urea↑Bilirubin↑AST↑ALT↑

1(1,72)2(3,45)48(82,76%)33(56,90)41(70,69)2(3,45)19(32,76)13(22,41)14(24,14)

Legenda:WBC–brojleukocita,GRA–brojgranulocita,LYM–brojlimfocita,MID–brojprekurzoraleukocita,RBC–brojeritrocita,Hgb–koncentracijahemoglobina,Hct–hematokrit,MCV–prosečnazapreminaeritrocita,MCH–prosečansadržajhemoglobinaueritrocitu,MCHC–prosečnakoncen-tracijahemoglobinaueritrocitu,RDW–varijabilnostveličineeritrocita,PLT–brojtrombocita,PCT-trombokrit,MPV–prosečnazapreminatrombocita,A/G–albumini:globulini,AST–aspartattrans-aminaza,ALT–alanintransaminaza.Legend: WBC – leukocytes number, GRA –granulocytes number, LYM – lymphocytes number, MID –leukocytes precursor number, RBC – erythrocytes number, Hgb – concentration of hemoglobin, Hct – hematocrit, MCV – mean erythrocyte vol-ume, MCH – average content of hemoglobin in erythrocytes, MCHC – average concentration of hemoglobin in erythrocytes, RDW – variability in erythrocyte size, PLT – number of platelets, PCT - thrombocrite, MPV – mean platelet volume, A/G – al-bumins : globulins, AST – aspartate transaminase, ALT – alanine transaminase.

Najveća seroprevalencija ustanovljena je na R. conorii (44,83%), zatimna B. canis (32,76%) iB. burgdorferi (25,86%). Seroprevalencija naE. canis je iznosila 13,79%, dok je najmanja seroprevalencija, od 8,47% utvrđena zaA. phagocytophilum. Kod određenog broja pasa ustanovljeno je da postojiseropozitivnost na više od jednog uzročnika (tabela 3). Nijedan pas nijebio seropozitivan na sve isptivane uzročnike. Ukupan broj pasa, koji je bioseropozitivan na jednog ili više uzročnika bolesti koje se prenose krpeljima,iznosio je43 (74,14%),dok jesamo15pasabilo serološkinegativno.Najvećibrojpasa,15pasa(25,86%)jebiloinficiranosadvauzročnika,9pasa(15,52%)je imalokoinfekciju sa tri uzročnika,dok jesamokod jednogpsa registrovanakoinfekcijasačetiriuzročnika.


224

Tabela3.Seropozitivnost pasa izražena kao broj pasa (procenat) na jednog ili više uz-ročnika bolesti koji se prenose krpeljima

Table 3. Seropositivity of the dogs expressed as a number of dogs (percentage) per one or more tick-borne diseases causative agents

Uzročnik / Causative agent A. phagocytophilum B. burgdorferi B. canis E. canis R. conorii

Seropreval. broj / Seroprevalence number(%)

5 (8,47%)

15 (25,86%)

19 (32,76%)

8(13,79%)

26(44,83%)

B. canis 2 3(5,17%)

E. canis 0 2(3,45%)

1(1,72%)

R. conorii 1 3(5,17%)

1(1,72%)

2(3,45%)

B.burgdorferiB.canis

1 0 2 (3,45%)

B.canis,R. conorii

1 2(3,45%)

1(1,72%)

E. canis,R. conorii

0 1(1,72%)

1(1,72%)

B. canis, E. canis,R. conorii

0 1(1,72%)

Ispitivanje značajnosti pojave tri klinička simptoma (hypertermia,lymadenopathia,arrhythmia)kodlovačkihpasa,sa ibezserološkihreakcijanaispitivane uzročnike bolesti koje se prenose krpeljima, pokazalo je postojanjestatističke značajnosti za pojavu hipertermije (p<0,05) i aritmije (p<0,05). Odukupno43psakojisubiliserološkipozitivninajednogilivišeuzročnikavektorskiprenosivih bolesti, kod27pasa je ustanovljenopostojanje hipertermije.Od15pasakojisubiliserološkipozitivninaB. burgdorferikodčetiripsajeustanovljenopostojanje aritmija.

Prosečne vrednosti parametara krvne slike u odnosu na serološkereakcije lovačkih pasa na ispitivane uzročnike dati su u tabeli 4.Ustanovljenoje postojanje statistički značajne razlike samo u broju eritrocita između pasakoji su imali različite serološke reakcije na B. burgdorferi. Nije ustanovljenopostojanjestatističkiznačajnerazlikevrednostiparametarakrvneslikekodpasasa serološkim reakcijama na ostale ispitivane uzročnike. Takođe su statističkianaliziranevrednostiparametarakrvneslikeuodnosunaukupnuseronegativnosti seropozitivnost na jednog ili više ispitivanih uzročnika.Nije nađena statistički


225

značajnarazlikaubrojueritrocita, leukocita i trombocitauodnosunaserološkistatuspasanaispitivaneuzročnikebolesti.Tabela4.Efekat serološkog statusa na odabrane hematološke i biohemijske parametre

(srednja vrednost ± SD) kod ispitivanih lovačkih pasaTable 4. Effect of serological status to selected haematological and biochemical parameters (average values

± SD) in investigated hunting dogs

Uzročnik / Causative agent

Status / Status

Eritrociti / Erythrocytes

5,5-8,5x 1012/l

Leukociti / Leukocytes6-17x109/l

Trombociti / Platelets

150-400x109/l

Proteini / Proteins55-75g/l

A/G0,7-1,9

A. phagocytophilumSeropoz.

n= 5 6,36±0,90 15,83±8,44 284,40±165,37 73,87±14,80 0,86±0,48

Seroneg.n=54 6,67±1,04 15,45±7,08 268,80±146,36 84,32±13,27 0,69±0,25

B. burgdorferi

Seropoz.n=15 6,02±1,15 16,75±6,40 261,64±169,77 85,28±14,53 0,68±0,24

Seroneg.n=43 6,85±0,91* 17,14±7,17 274,17±140,75 82,62±13,46 0,72±0,29

B. canis

Seropoz.n=19 6,41±0,85 15,33±10,17 280,31±139,69 80,82±15,58 0,71±0,34

Seroneg.n=39 6,81±1,14 15,65±6,74 266,65±152,40 84,42±12,66 0,72±0,25

E. canis

Seropoz.n=8 6,62±0,84 17,06±4,85 233,33±115,27 91,57±7,58 0,69±0,26

Seroneg.n=50 6,64±1,07 17,03±7,24 275,84±150,76 81,93±13,97 0,71±0,28

R. conorii

Seropoz.n=26 6,75±0,10 15,62±5,80 259,04±140,48 85,59±12,52 0,71±0,30

Seroneg.n=32 6,65±0,94 17,70±7,48 280,47±153,41 81,36±14,40 0,71±0,25

*statističkiznačajnarazlikauodnosunaseropozitivnepse(p<0,05)/ *statistically significant difference in relation to seropositive dogs (p<0,05)

Analizirane su vrednosti biohemijskih parametara u odnosu na pojavuseropozitivnosti kod lovačkih pasa i to onih koji su najčešće promenjeni kodpasa inficiranih određenim uzročnicima. U slučaju seroloških reakcija na A. phagocytophilumanaliziranesuvrednostialbumina,globulina,A/G,ukupniproteini,enzimiASTiALTibilirubin.Biohemijskiparametrialbumini,ukupniproteini,ureai kreatininanalizirani su kodpasasa serološkim reakcijamanaB. burgdorferi. Ukupniproteini,globulini,A/Gkoličnik,urea,kreatinin,bilirubin,ASTiALTbilisubiohemijskiparametrikojisuanaliziranikodpasasaserološkimreakcijamanaB. canis.KodpasasaserološkimreakcijamanaE. canis analizirane su vrednosti albumina,globulina,A/Gkoličnik,ukupniproteini,bilirubin,ASTiALT,doksukodpasasaserološkimreakcijamanaR. conorriianaliziranialbumini,urea,kreatini,


226

bilirubin, AST, ALT i alkalna fosfataza. Ustanovljeno je postojanje statističkiznačajne razlikeukoncentracijialbumina izmeđupasakojisubili seropozitivnii seronegativni na E. canis(36,09±7,12uodnosuna32,04±4,50,p=0,034),kaoiukoncentracijiASTizmeđupasakojisubiliseropozitivniiseronegativninaR. conorrii(23,82±15,88uodnosuna35,31±19,45,p=0,018).Nijepostojalastatističkiznačajnarazlikauvrednostimaostalihbiohemijskihparametaraizmeđupasakojisubiliseropozitivniiseronegativninaispitivaneuzročnike.Procenabiohemijskihparametara,kaoštosualbumini,globulini,A/Gkoličnikiukupniproteini,izvršenajeizmeđupasakojisubiliseropozitivninajednogilivišeuzročnikabolestikojeseprenosekrpeljimaipasakojisubiliseronegativninasveispitivaneuzročnike.Nijepostojalastatističkiznačajnarazlikanavedenihparametaraizmeđupasakojisubiliseropozitivniiseronegativninajednogilivišeispitivanihuzročnika.

Uovomistraživanjuispitivanajeseropozitivnostnauzročnikekojiseprenosekrpeljimaivezaovakvogstatusasapojavomkliničkihsimptomaiporemećajimavrednostihematološkihibiohemijskihparametara.Svakiodispitivanihuzročnika(A. phagocytophilum, B. burgdorferi, B. canis, E. canis, R. conorii)jeustanjudaizazoveoboljenje,alimnogaodnjihmogudasejaveusubkliničkomoblikuilidapredstavljajuhronični imunološkipodražajzaorganizampsa.Sadrugestrane,ispitivaniuzročnici(osimB. canis)imajuzoonotskipotencijalimogudaizazovuoboljenjekodljudi(Sambriisar.,2004).Iznavedenogproističeznačajpraćanjauzročnika koji se prenose krpeljima u različitim populacijama pasa, pa samimtim i upopulaciji lovačkihpasa.Adekvatanmonitoring i sprovođenjeprofilaksezaektoparazitekodpasapredstavljajuconditio sine qua nonsmanjenjarizikazaoboljenjakojaseprenosekrpeljimaikodpasaikodljudi.

Veliki broj simptoma koji je registrovan tokom kliničkih pregleda lovačkihpasauovomistraživanjunemožedasedovedeuvezusauzročnicimabolestikoje seprenose krpeljima.Naosnovuanamnestičkih podataka, svi psi koji sudovedeni na pregled za potrebe istraživanja, bili su bez kliničkih simptoma.Kliničkim pregledom su najčešće registrovani hipertermija i uvećanje limfnihčvorova. Pojava hipertermije je bila i statistički značajna kod pasa koji su biliseropozitivni na jednog ili višeuzročnika,dokpojavauvećanja limfnih čvorovanijebilastatističkiznačajnauodnosunaseropozitivnostpasanauzročnikekojiseprenosekrpeljima.Diferencijalnudijagnozuzapovišenutelesnutemperaturučinivelikibrojbolesti,kaoštosulokalneisistemskeinfekcije,imunološkiposredovaniporemećaji,neoplazije,reakcijanalekove,nekroze,embolusiidrugiporemećaji(Dunn, 2000). Rezultati ovog istraživanja sugerišu da je neophodno uraditidodatnudijagnostikuuslučajukliničkognalazapovišenetemperaturekodpasa.Inicijalnidijagnostičkiplanutakvomslučajupredstavljajusvakakohematološkeibiohemijskeanalizesaodređivanjemkoncentracijeproteina ifibrinogena,ali iisključivanjenajčešćihinfektivnihbolestikodpasa.Pojavaaritmijajebilastatistički

Diskusija / Discussion


227

značajnakodpasakojisubiliseropozitivninaB. burgdorferi.Velikibrojuzrokamožedasedovedeuvezusapojavomaritmija(Boswood,2000),arezultatiovogistraživanjasugerišudaseodinfektivnihuzročnika,izmeđuostalih,moraisključitinavedenabakterija.

Kodnajvećegbrojapasaodstupanjahematološkihparametarasuseodnosilana leukocitozu i neutrofiliju. Diferencijalna dijagnoza za neutrofilnu leukocitozuobuhvata inflamaciju, uticaj stresa i kortikosteroida, uticaj fizičkog opterećenjai adrenalina ili leukemiju (Latimer i Tvedten, 1999). Postojanje leukocitoze ineutrofilijesaskretanjemu levokod istogbrojapasaunašemispitivanju ideuprilogpostojanjuinflamacije.Drugiporemećajihematološkihparametarakojisesusrećuuvezisadelovanjemispitivanihuzročnikanisubiliprisutnikodvelikogbrojapasa.Oligocitemija i trombocitopenijasubileprisutnekodšest,odnosno13 pasa. Od šest pasa koji su imali oligocitemiju jedan je bio seronegativannasve ispitivaneuzročnike, jedan jebioseropozitivanna jednoguzročnika(B. burgdorferi),tripsasubilaseropozitivnanadvauzročnika(A. phagocytophilum i R. conorii, B. burgdorferi i B. canis, B. burgdorferi i R. conorii), dok je jedanpas bio seropozitivan na četiri uzročnika (A. phagocytophilum, B. burgdorferi, B. canis, R. conorii).Kodlovačkihpasasaregistrovanomtrombocitopenijomtripsasubilaseronegativnanaisptivaneuzročnike,šestpasajebiloseropozitivnona jednog uzročnika, tri psa su bila seropozitivna na dva uzročnika (dva psana B. burgdorferi i R. conorii i jedan na A. phagocytophilum i R. conorii),dokjejedan pas bio seropozitivan na četiri uzročnika (isti pas kod koga je postojalaoligocitemija).Nijepostojalastatističkiznačajnarazlikaubrojueritrocita,leukocitai trombocita izmeđupasa koji su bili seropozitivni i seronegativni na ispitivaneuzročnike, osim u slučaju broja eritrocita za B. burgdorferi, ali bez kliničkeznačajnosti.Dominantninalazibiohemijskihparametarasubilihiperglobulinemija,hiperproteinemijaismanjenjeA/Gkoličnika.Promenenavedenihparametaraiduuprilogpostojanjuantigenestimulacijeiinflamacije(hroničnebakterijske,virusne,gljivične, protozoarne, rikecijarne i parazitske infekcije), neoplazija ili oboljenjanastalihnaimunološkojosnovi(WerneriTurnwald,1999).Unašemistraživanjunijemoglodasepotvrdipostojanjeznačajnostirazlikeukoncentracijialbumina,globulina,A/Giukupnihproteinaizmeđuseropozitivnihiseronegativnihpasa.Uispitivanjukoje jesprovedenonapsimakao laboratorijskimživotinjama,većinahematološkihibiohemijskihparametarasenijerazlikovalaizmeđuseropozitivnihiseronegativnihpasa,avrednostiparametarasubileureferentnimvrednostima(Scorpioisar.,2008).Međutim,ustanovljenojepostojanjestatističkeznačajnostiukoncentracijiglobulinaiA/GkoličnikaizmeđupasakojisubiliseropozitivninaE. canis, B. burgdorferi i R. rickettsii i onih koji subili seronegativni na sva triuzročnika(Scorpioisar.,2008).Ispitivanjekojejesprovedenonapsimaprirodnoinficiranim uzročnicima koji se prenose krpeljima nije ustanovilo postojanjeznačajne razlike u hematološkim vrednostima i promenama proteina serumaizmeđu pasa sa i bez kliničkih simptoma oboljenja (de Capraiis i sar., 2011).U našem istraživanju, analiziranjem vrednosti parametara koji su najčešće


228

promenjenikodbolestikojiseprenose ispitivanimuzročnicima,ustanovljeno jepostojanjestatističkiznačajnerazlikeukoncentracijialbuminaizmeđupasakojisu bili seropozitivni i seronegativni na E. canis, kao i u vrednostiAST izmeđupasakojisubiliseropozitivniiseronegativninaR. conorii.Uobaslučajaseradiovrednostimaparametarakojisuureferentnomopsegu,tekliničkiznačajovakvihnalaza ne postoji.

U prethodnim radovima je objavljena i diskutovana seroprevalencija zavećinuuzročnikakoji seprenosekrpeljima (Savić i sar,2012;Potkonjak i sar.,2014a; Potkonjak i sar., 2014b), ali je u ovom radu ustanovljeno da ukupnaseroprevalencijanajednogilivišeispitivanihpatogenaiznosi74,14%.Uslučajuinfekcijeodređenimuzročnicima,npr.B. burgdorferi,unajvećembrojuslučajevasenerazvijajukliničkisimptomikodpasa,madaeksperimentalnakoinfekcijasadrugimuzročnicimakojiseprenosekrpeljimamožedapovećaučestalostpojavekliničkihsimptoma iupornost infekcije (Straubinger isar.,1997;Thomas isar.,2001).UuslovimaprirodneinfekcijeopisanajekoinfekcijapsasaB. canis vogeli, E. canis i A. platys (AlIzziisar.,2013).Kadajeupitanjuinfekcijasavećimbrojemuzročnika,kliničkaslikamožedabudenepredvidivaispecifičnikliničkisimptomiilihematološkiporemećajisenemogupripisatisamojednomuzročniku.PrirodnakoinfekcijapasasaLeishmania infantum i E. canis,zatimkoinfekcijasaL. infantum, E. canis i Dirofilaria immitis ikoinfekcijasaE. canis i D. immitis jeopisanakodpasauItaliji(DeTommasiisar.,2013).Ispitivanjesprovedenona54psaizazilauItalijijeutvrdilodasupsinajčešćebiliinficirani(u23,6%slučajeva)saA. platys i B. vogeli,potomu8,8%slučajevasaE. canis i B. vogeli,u5,9%slučajevasaA. platys i Hepatozoon canisiu2,9%slučajevasaA. platys i Bartonella spp.(deCaprariisisar.,2011).ZnatnomanjastopakoinfekcijeutvrđenajeuMađarskoj.Odukupnopregledanih1305uzorakakrvitokom2011.i2012.godine,kodosampasa je ustanovljeno postojanje koinfekcija, od kojih je sedam bilo inficiranosa dva uzročnika (A. phagocytophilum i D. immitis, A. phagocytophilum i B. burgdorferi),dokjekodjednogpsaustanovljenaseropozitivnostnatriuzročnika(A. phagocytophilum,B. burgdorferi i D. immitis)(Farkasisar.,2014).Uispitivanjusprovedenom na psima koji se koriste kao eksperimentalne životinje, a nisuporeklom iz istraživačkih ustanova, ukupna seroprevalencija na jednog ili višeuzročnikaiznosila je71%(Scorpioisar.,2008),štojesličnorezultatimanašegistraživanja.

Postojanjeaktivneinfekcijenijepotvrđenokodispitivanepopulacijepasa.Uvećinislučajevainfekcijeuzročnicimakojiseprenosekrpeljima,doserokonverzijedolazinakon1do3nedelje.Seroreaktivnostsugerišedajepostojalaizloženostuzročnicima,štonekorelirauveksabolešćukojeuzročnici izazivaju.Uslučajuendemskih područja veliki broj pasamože biti seropozitivan na uzročnike kojiseprenosekrpeljima.Ovo istraživanje,sprovedenokaoretrospektivnaanaliza,namećeodređenibrojpitanjakojaseuistovrememogusmatratiiograničenjimaovog istraživanja, kao i daljim pravcima istraživanja. Na prvom mestu, to jeponavljanje serološke dijagnostike u cilju definisanja specifične reaktivnosti na


229

uzročnike i menjanja titra antitela. Zatim, uvođenje PCR kako bi se uzročnicidirektno dokazali. Takođe, serijska uzorkovanja krvi i drugih uzoraka (buffy coat,aspiratkostnesrži) injihovamorfološka imolekularnadijagnostikauciljupraćenja delovanja uzročnika, naročito u slučaju perzistentnih infekcija. I nakraju,odznačajajeipovećanjebrojapasaobuhvaćenihistraživanjem,kakobisepoboljšalavalidnoststatističkihanaliza.

Ovoistraživanjesprovedenonalovačkimpsimajepokazalodaje74,14%pasa bilo inficirano sa jednim ili više uzročnika koji se prenose krpeljima. Naosnovu toga, može se zaključiti da u ispitivanoj populaciji pasa nije postojaoadekvatnitretmanektoantiparaziticima.Upodručjimagdesubolestipasakojeseprenosekrpeljimaendemske,kliničaritrebadaimajuuvidumogućnostkoinfekcijesa većim brojem uzročnika. Budući da hipertermija predstavlja nespecifičansimptom oboljenja koja se prenose krpeljima, registrovanje hipertermije, kaostatistički i klinički značajnog simptoma u našem istraživanju, pokazuje da jeneophodnorazlogepojaveovogsimptomadodatnorasvetlitidaljimdijagnostičkimpostupkom. Atipičnost većine kliničkih simptoma, hematoloških i biohemijskihnalazauispitivanojpopulacijilovačkihpasanaglašavaznačajholističkogpristupatokomdijagnostičkogprocesa.

NAPOMENA / ACKNOWLEDGMENT:RadjerealizovankaodeoprojektaTR31084kojifinansiraMinistarstvoprosveteinaukeRepublikeSrbijeiprojekta114-451-1892/2011finansiranogodPokrajinskogsekretarijatazanaukuitehnološkirazvojAPVojvodine.This work is realised as a part of the project TR 31084 funded by Ministry of Education, Science and Technological Devel-opment of the Republic of Serbia and project 114-451-1892/2011 funded by Provincial Secretariat for Science and Techno-logical Development of AP Vojvodina.

1. AlIzziS,MartinDS,ChanRYY,LeuteneggerCM.Babesiacanisvogeli,Ehrlichiacanis,andAna-plasmaplatysinfectioninadog.VetClinPathol2013;42(4):471–5.

2. BoswoodA.Disturbancesofcardiacrhythm.InDunnJK,editor.Textbookofsmallanimalmedi-cine,WBSaundersLondon,2000:225–32.

3. DeCaprariisD,Dantas-TorresF,CapelliG,MenckeN,StanneckD,BreitschwerdtEB,OtrantoD.Evolutionofclinical,haematologicalandbiochemicalfindingsinyoungdogsnaturallyin-fectedbyvector-bornepathogens.VetMicrobiol2011;149:206–12.

4. DeTommasiAS,OtrantoD,Dantas-TorresF,CapelliG,BritschwerdtEB.Arevector-bornepatho-genco-infectionscomplicatingtheclinicalpresentationindogs.Parasites&Vectors2013;6:97–101.

5. DunnJK.Feverandhypothermia. InDunnJK, editor.Textbookof small animalmedicine,WBSaundersLondon,2000:28–39.

6. ESCCAP:Controlofvector-bornediseasesindogsandcats,ESCCAPGuideline05SecondEdi-tion,October2012,http://www.esccap.org/page/G5+Control+of+VectorBorne+Diseas-es+in+Dogs+and+Cats/29/#.VFNY8vnF98E

Literatura / References

Zaključak / Conclusion


230

7. FarkasR,GyurkovszkyM,LukacsZ,AladicsB,SolymosiN.Seroprevalenceofsomevector-borneinfectionsofdogsinHungary.VectorBorneZoonoticDis2014;14(4):256–60.

8. LatimerKS,TvedtenH.LeukocyteDisorders. InWillardMD,TvedtenH,TurnwaldGH,editors.Smallanimalclinicaldiagnosisbylaboratorymethods.WBSaundersPhiladelphia,1999:52–75.

9. ManzilloF,CappielloS.,OlivaG.Tick-transmitteddiseasesindogs:clinicopathologicalfindings.Parassitologia2006;48(1–2):135–6.

10. OtrantoD,Dantas-TorresF,BreitschwerdtEB.Managingcaninevector-bornediseasesofzoonot-icconcern:parttwo.TrendsParsitol2009;25:228–35.

11. PotkonjakA,SavićS,SpasojevićKosićLj,VračarV,KudusR,SuvajdžićLj,RadišićN.Seroprev-alenceofCanineMonocyticEhrlichiosisinhuntingdogsintheautonomousprovinceofVojvodina,Serbia.ArchVetMed2014b;7(1):11-8.

12. PotkonjakA,SavićS,SpasojevićKosićLj,VračarV,NovakovN,BursaćA,StevančevićO,Sto-janacN.NalazantitelanauzročnikeRikettsiaconorii iBabesiacaniskodlovačkipasauVojvodini.Zbornikradova25.SavetovanjaveterinaraSrbije,Zlatibor,Srbija,11.–14.Septembar,2014a:327–32.

13. SambriV,MarangoniA,StorniE,CavriniF,MoroniA,SparacinoM,CeveniniR.Tickbornezoo-nosis:selectedclinicalanddiagnosticaspects.Parassitologia2004;46(1-2):109–13.

14.SavićS,VidićB,GrgićŽ,JurišićA,ĆurčićV,RužićM,LolićZ.VektorskezoonozepasauVojvod-ini.Arhvetmed2012;1(5):77-87.

15. Savić-JevđenićS,VidićB,GrgićŽ,JurišićA,LakoB.LymeBoreliosisinhuntingdogs.BookofProceedingsVIInternationalConferenceonTicksandTick-bornePathogens,BuenosAi-res,Argentina,September21-26,2008:317.

16.ScorpioDG,WachtmanLM,TuninRS,BaratNC,GaryuJW,DumlerJS.Retrospectiveclinicalandmolecularanalysisofconditionedlaboratorydogs(Canisfamiliaris)withserologicalreactionstoEhrlichiacanis,Borreliaburgdorferi,andRickettsiaconorii.JAmAssocLabAnimSci2008:47(5):23–8.

17.ShawSE,DayMJ,BirtlesRJ,BreitschwerdtEB.Tickborneinfectiousdiseasesofdogs.TrendsParasitol2001;17:74–80.

18. StraubigerRK,StraubingerAF,HarterL,JacobsonRH,ChangYF,SummersBA,ErbHN,AppelMJ.Borreliaburgdorferimigratesintojointcapsulesandcausesanupregulationofinter-leukin8insynovialmembranesofdogsexperimentallyinfectedwithticks.InfectImmun1997;65:1273–85.

19. ThomasV,AnguitaJ,BartholdSW,FikrigE.CoinfectionwithBorreliaburgdorferiandtheagentofhumangranulocyticehrlichiosisaltersmurineimmuneresponses,pathogenburden,andseverityofLymearthritis.InfectImmun2001;69:3359–71.

20. WernerLL,TurnwaldGH.Immunologicandplasmaproteindisorders.InWillardMD,TvedtenH,TurnwaldGH,editors.Smallanimalclinicaldiagnosisbylaboratorymethods.WBSaun-dersPhiladelphia,1999:248–65.

RETROSPECTIVE ANALYSIS OF CLINICAL AND LABORATORY FINDINGS IN HUNTING DOGS WITH SEROLOGIC REACTIONS TO TICK-BORNE PATHOGENS

(Anaplasma phagocytophilum, Borrelia burgdorferi, Babesia canis, Ehrlichia canis, Ricketsia conorii)

Spasojević Kosić Ljubica, Savić Sara, Potkonjak A., Vračar V.

Seroprevalenceoftick-borneinfectionsinendemicareascouldbehigh.Inthisstudy,

ENGLISH


231

weinvestigatedtheseroprevalenceoftick-bornepathogens(Anaplasma phagocytophilum, Borrelia burgdorferi, Babesia canis, Ehrlichia canis, Rickettsia conorii)inhuntingdogs,nat-urallyinfectedwithoneormorepathogens.Serologicaltestresultsoftheinvestigatedan-imalswerecomparedtothosefromclinicalexamination,aswellasfromhaematologicalandbiochemicalanalyses.Atotalof74.14%dogswereseropositive(R.conorii 44.83%, B. canis 32.76%, B. burgdorferi 25.86%, E. canis 13.79%, A. phagocytophilum 8.47%), with25.86%ofdogsseropositivetotwopathogens,15.52%seropositivetothreepathogens,and1.72%ofdogsseropositivetofourpathogens.Amongallregisteredclinicalsigns,on-lypyrexia(p<0.05)andarrhythmia(p<0.05) weresignificant inseropositivedogs.Therewasnosignificantdifferencebetweenseropositiveandseronegativedogsregardingthemajorityofhaematologicalandbiochemicalparameters.Statisticallysignificantdifferencewasregisteredforparticularhaematological(numberofredbloodcellsandseroreactivityto B. burgdorferi)andbiochemicalparameters(albuminconcentrationandseroreactivitytoE. canis,andASTandseroreactivitytoR. conorii)butthesevalueswerenotclinicallysig-nificant.Thehighexposuretotick-bornepathogenssuggeststhatectoparasiticprofilactictreatmentisnotadequateinexaminedpopulationofhuntingdogs.Clinicalfindingofpyrex-ianeedtobefurtherinvestigatedandexplainedetiologically,whichmeansthatmoleculardiagnosisshouldbeusedinordertoidentifylargernumberofpathogensbecauseofthepossibilityofco-infection.

Keywords:huntingdogs,ticks,infectivediseases,clinicopathologicalfindings,serology

РЕТРОСПЕКТИВНЫЙ АНАЛИЗ РЕЗУЛЬТАТОВ КЛИНИЧЕСКИХ И ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ У ОХОТНИЧЬИХ СОБАК С

СЕРОЛОГИЧЕСКИМИ РЕАКЦИЯМИ НА ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ПЕРЕНОСЧИКАМИ КОТОРЫХ ЯВЛЯЮТСЯ КЛЕЩИ (Anaplasma phagocytophilum,

Borrelia burgdorferi, Babesia canis, Ehrlichia canis, Rickettsia conorii)

Спасоевич Косич Любица, Савич Сара, Потконяк А., Врачар В.

Вэндемичныхрайонахвысокасеропревалентностьквозбудителямзаболеваний,переносчикамикоторыхявляютсяклещи.Вданнойработенаматериалепопуляции58охотничьихсобакисследоваласьсеропревалентностьквозбудителямзаболеваний,переносчиками которых являются клещи (Anaplasma phagocytophilum, Borrelia burgdorferi, Babesia canis, Ehrlichia canis, Rickettsia conorii)вусловияхзараженияоднимилинесколькимивозбудителями.Результатысерологическихреакцийсопоставлялисьс результатами, полученными при клиническом обследовании, гематологическимии биохимическими анализами крови. Общая серопревалентность к одному илинескольким исследованнымвозбудителям составила74,14% (R.conorii 44,83%,B.canis32,76%,B.burgdorferi25,86%,E.canis13,79%,A.phagocytophilum8,47%),приэтом25,86%собакимели серопозитивнуюреакциюнадвух возбудителей, 15,52%собакнатрехвозбудителей,a1,72%собакначетырехвозбудителей.Вчислевсехклинических симптомов статистическое значение имело повышение температурытела (p<0,05) и аритмия (p<0,05) у собак, имевших серопозитивную реакцию наисследуемых возбудителей. По большинству гематологических и биохимическихпараметров не было отмечено статистически значимого различия в их значенияхсредисобак,имевшихсеропозитивнуюисеронегативнуюреакциюнаисследуемых

РУССКИЙ


232

возбудителей. Статистически значимое различие установлено по отдельнымгематологическим(количествоэритроцитовисерореактивностьнаB.burgdorferi)ибиохимическимпараметрам(концентрацияальбуминаисерореактивностьнаE.CanisиактивностьАСТисерореактивностьнаR.conorii)неимелоклиническогозначения.Высокаястепеньпоражениявозбудителями,переносимымиклещами,указываетнанеудовлетворительнуюпрофилактикузараженияэктопаразитамиуохотничьихсобак.Показателиповышеннойтемпературытелауохотничьихсобакнеобходимоуточнитьв процессе этиологической диагностики, при этом следует использовать методыпрямойдиагностики,которыемогутдоказатьналичиенесколькихвозбудителейпривозможнойсочетаннойинфекции.

Ключевые слова: охотничьи собаки, клещи, инфекционные заболевания,клиническиеипатологическиерезультаты,серологическиереакции.


retrospektivna analiza kliniČkih i laboratorijskih … · uzorci krvi su analizirani aparatom za...

Documents