seminar citta devi guntari
TRANSCRIPT
UNIVERSITAS INDONESIA
ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA TANIN DARI DAUN BELIMBING WULUH (Averrhoa bilimbi L) SERTA
AKTIVITAS INHIBISINYA TERHADAP ENZIM XANTHINE OKSIDASE
SEMINAR
CITTA DEVI GUNTARI
1006661222
FAKULTAS TEKNIK
PROGRAM STUDI TEKNOLOGI BIOPROSES
DEPOK
JANUARI 2014
HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS
Seminar ini adalah hasil karya saya sendiri, dan semua sumber baik yang dikutip maupun dirujuk telah saya nyatakan dengan
benar.
Nama : Citta Devi Guntari
NPM : 100666122
Tamda Tamgan :
Tanggal : 5 Januari 2014
ii
HALAMAN PENGESAHAN
iii
KATA PENGANTAR
Puji dan Syukur kepada Sang Triratna karena melalui perlindungannya
saya dapat menyelesaikan seminar ini dengan sebaik mungkin. Penulisan seminar
ini dilakukan dalam rangka memenuhi salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Teknik Program Studi Teknologi Bioproses pada Fakultas Teknik
Universitas Indonesia. Dalam penulisan seminar ini, saya banyak memperoleh
bantuan yang tak ternilai harganya dari berbagai pihak. Oleh karena itu, saya ingin
mengucapkan terimakasih kepada:
1. Ir. Rita Arbianti, M.Si., dan Dr. Tanian Surya Utami, S.T., M.T., selaku dosen
pembimbing yang telah menyediakan waktu, tenaga dan pikirannya untuk
mengarahkan dalam penyusunan seminar ini.
2. Segenap dosen Departemen Teknik Kimia, khususnya program studi Teknologi
Bioproses yang senantiasa mengajar dan membagikan wawasan tentang bidang
ilmu bioproses maupun hal lainnya yang bersifat lebih umum.
3. Bapak Gunawan dan Ibu Srihartini, selaku orang tua dan Prajna selaku adik
saya yang senantiasa memperhatikan dan memberikan semangat dan cintanya
kepada saya selama penyusunan seminar ini.
4. Kevin, yang senantiasa memberikan semangat dan perhatiannya selama
penyusunan seminar ini.
5. Mia Sari Setiawan selaku sahabat dan teman cerita segala kehidupan yang telah
banyak memberikan solusi kepada saya.
6. Seluruh teman dari Departemen Teknik Kimia, khususnya program studi
Teknologi Bioproses yang senantiasa membantu dan mengingatkan dalam
perkuliahan sehari – hari
Akhir kata, saya meminta maaf apabila dalam proses pembuatan seminar
ini ada kata – kata yang kurang berkenan. Semoga seminar ini memberikan
manfaat terutama bagi ilmu pengetahuan para pembaca.
Depok, 18 Desember 2013
iv
Penulis
ABSTRAK
Nama : Citta Devi Guntari
Program studi : Teknologi Bioproses
Judul :
ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA TANIN DARI DAUN BELIMBING WULUH (Averrhoa bilimbi) SERTA AKTIVITAS INHIBISINYA TERHADAP ENZIM XANTHINE OKSIDASE
Senyawa tanin merupakan salah satu jenis polifenol yang memiliki aktivitas inhibisi terhadap enzim xanthin oksidase. Enzim ini merupakan senyawa yang berperan dalam pembentukkan asam urat di dalam tubuh. Adanya overproduction asam urat menyebabkan timbulnya keadaan hiperuresemia yang mengakibatkan penyakit pirai atau encok. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk memperoleh ekstrak kasar daun belimbing wuluh kemudian mengisolasi tanin dari tanaman tersebut dengan beberapa jenis eluen dan mengetahui eluen terbaik yang digunakan untuk mengisolasi tanin, serta mengetahui kadar inhibisinya terhadap enzim xanthine oksidase untuk menurunkan kadar asam urat. Metode ekstraksi yang digunakan adalah sonikasi dengan frekuensi 42 kHz selama 50 menit menggunakan pelarut aseton 70%. Uji fitokimia dilakukan dengan penambahan FeCl3 pada ekstrak kasar. Isolasi menggunakan kromatografi lapis tipis analitik untuk mencari eluen terbaik, kemudian dilanjutkan dengan kromatografi lapis tipis preparatif untuk memperoleh tanin yang lebih murni dan kandungan tanin diuji secara kuantitatif dengan stainsy test. Nilai inhibisi diuji untuk beberapa isolat dari eluen terbaik dengan spektrofotometer.
Kata kunci: Hiperuresemia, tanin, xantin oksidase, kromatografi lapis tipis, inhibisi.
v
ABSTRACT
Name : Citta Devi Guntari
Major : Bioprocess Technology
Title :
Tannin Isolation and Identification of leaves of starfruit (Averrhoa bilimbi) and Inhibitory activities of Xanthine Oxidase Enzyme
Tannin is a polyphenol with inhibitory activity towards Xanthine Oxidase Enzyme which is a compound that plays a role in the formation of uric acid in the body. The overproduction of uric acid causes a state called hiperuresemia that leads to gout or rheumatism. The purpose of this study is to obtain a crude extract of starfruit leaves; isolate the tannin of the leaves with some type of eluent and to figure out which eluent is best used to isolate the tannin; and determine the inhibitory level of Xanthine Oxidase Enzyme to decrease uric acid rate. The extraction method used is sonication with the frequency of 42 kHz using 70% acetone solvent for 50 minutes long. Phytochemical test is performed by adding FeCl3 to the crude extract. The isolation is using analytical thin-layer chromatography to find the best eluent which is continued by preparative thin-layer chromatographyto obtain more pure tannin and the content of tannin is calculated by means of stainsy test. Inhibitory value is calculated for several isolates of the best eluent with a spectrophotometer.
Keywords: Hiperuresemia, tannin, xanthine oxidase enzyme, thin-layer chromatography, inhibition.
vi
DAFTAR ISIHALAMAN SAMPUL............................................................................................1
HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS....................................................ii
HALAMAN PENGESAHAN................................................................................iii
KATA PENGANTAR............................................................................................iv
ABSTRAK...............................................................................................................v
ABSTRACT............................................................................................................vi
DAFTAR ISI..........................................................................................................vii
DAFTAR GAMBAR............................................................................................viii
DAFTAR TABEL...................................................................................................ix
PENDAHULUAN...................................................................................................1
1.1 Latar Belakang............................................................................................1
1.2 Rumusan Masalah.......................................................................................4
1.3 Tujuan.........................................................................................................4
1.4 Batasan Penelitian.......................................................................................4
1.5 Sistematika Penulisan.................................................................................5
BAB II Tinjauan Pustaka.........................................................................................6
2.1 Asam Urat...................................................................................................6
2.2 Hiperuresemia dan artritis gout..................................................................9
2.3 Pengetahuan tentang Daun Belimbing Wuluh..........................................17
2.4 Tanin.........................................................................................................19
2.5 Metode Ekstraksi Tanin dari Daun Belimbing Wuluh.............................22
2.6 Isolasi Senyawa Tanin Dari Ekstrak Kasar Daun Belimbing Wuluh dengan Kromatografi Lapis Tipis...................................................................25
2.7 Uji Kualitatif dan Kuantitatif....................................................................27
2.8 Inhibisi Enzim Xantin Oksidase dan Metode Pengujiannya...................30
2.9 State of The Art.......................................................................................31
BAB III Metodelogi Penelitian..............................................................................33
3.1 Diagram Alir Penelitian............................................................................33
3.2 Alat dan Bahan.........................................................................................35
3.3 Lokasi Penelitian......................................................................................37
3.4 Prosedur Percobaan..................................................................................37
3.5 Variabel Penelitian....................................................................................42
vii
3.6 Data yang dikumpulkan............................................................................43
DAFTAR PUSTAKA............................................................................................44
viii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2. 1. Struktur Kimia Asam Urat...............................................................6
Gambar 2. 2. Metabolisme Purin..........................................................................7
Gambar 2. 3. Skema Metabolisme Purin...............................................................8
Gambar 2. 4. Struktur Kimia Kolkisin................................................................13
Gambar 2. 5. Struktur Kimia Probenesid............................................................16
Gambar 2. 6. Tanaman Belimbing Wuluh...........................................................17
Gambar 2. 7. Struktur Tanin...............................................................................19
Gambar 2. 8. Struktur Flavan-3,4-diol................................................................21
Gambar 2. 9. Struktur Flavan-4-ol......................................................................21
Gambar 3. 1. Diagram Alir Penelitian Isolasi Tanin dari Daun Belimbing Wuluh
............................................................................................................................. 34
viii
DAFTAR TABEL
Tabel 2. 1. Penelitian Mengenai Senyawa Tanin.............................................................32
Tabel 3. 1. Daftar alat beserta fungsinya.........................................................................35Tabel 3. 2. Daftar bahan beserta fungsinya......................................................................36
ix
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar BelakangPenyakit asam urat sudah dikenal sejak 2000 tahun yang lalu dan menjadi
salah satu penyakit tertua yang dikenal manusia. Penyakit asam urat sangat
berhubungan dengan hiperurisemia. Hiperurisemia adalah peningkatan kadar
asam urat di atas nilai normal dan dipengaruhi oleh tingginya konsumsi makanan
yang kaya akan purin seperti jeroan, kacang – kacangan, makanan hasil laut dan
makanan hasil fermentasi (Owen & Jhons, 1999).
Di Amerika jumlah penderita asam urat sekitar 8 juta orang, sedangkan di
Indonesia penelitian tentang jumlah penderita asam urat baru dilakukan untuk
daerah – daerah tertentu. Penelitian lapangan yang dilakukan oleh penduduk Kota
Denpasar Bali mendapatkan prevalensi hiperurisemia sebesar 18,2% (Wisesa dan
Suastika, 2009). Sedangkan di Salem pada bulan Februari sampai April 2009
tercatat 200 orang yang memeriksakan kadar asam uratnya dan dari hasil
pemeriksaan ditemukan sekitar 46 orang atau 23% mengalami kadar asam urat di
atas normal. Kemudian bulan Juni sampai Agustus 2009 tercatat 120 orang yang
memeriksakan kadar asam uratnya dan dari hasil pemeriksaan ditemukan 35 orang
atau 29,75% mengalami kadar asam urat di atas normal. Dari data tersebut didapat
bahwa selama kurun waktu 3 – 4 bulan ditemukan kenaikan pemeriksaan kadar
asam urat dengan hasil di atas normal sebesar 6,75% (Data terolah Puskesmas
Kecamatan Salem, 2009). Jika dilihat dari data – data diatas maka kemungkinan
masyarakat terkena penyakit asam urat semakin meningkat.
Asam urat merupakan hasil akhir dari metabolisme purin. Pada reaksi tersebut,
purin yang dikandung oleh makanan akan diubah menjadi hipoxantin, selanjutnya
akan terjadi reaksi pembentukan xantin dari hipoxantin yang dikatalis oleh enzim
Xantin Oxidase (XO). Xantin yang terbentuk akan teroksidasi menjadi asam urat
dalam reaksi yang juga dikatalisis oleh enzim xantin oxidase (Murray, et al,
2003). Jadi xantin oxidase mengkatalis reaksi hipoxantin dan xantin menjadi asam
urat (Pacher; Nivorozhkin; dan Szabo, 2006).
1
2
Dewasa ini obat sintetik yang digunakan dalam pengobatan penyakit asam
urat adalah allopurinol (Connor, 2009). Allopurinol merupakan obat medis yang
digunakan untuk menghambat enzim xantin oxidase. Obat ini bereaksi sebagai
inhibitor kompetitif terhadap substrat pada enzim tersebut (Astari, 2008).
Walaupun allopurinol merupakan obat yang efektif untuk mengobati penyakit
asam urat, tetapi tidak dapat dihindari bahwa obat sintetik ini dapat menimbulkan
efek samping yang merugikan bagi penggunanya, yaitu alergi, kulit menjadi
kemerahan, gangguan saluran cerna, depresi sumsum tulang, anemia,
trombositopenia dan radang hati (Ganiswarna, 1995). Oleh karena itu dicari suatu
senyawa dari tanaman obat yang memiliki kemampuan untuk menghambat
aktivitas xantin oxidase dan memberikan efek samping yang rendah. Senyawa
tanin dan flavonoid pada tanaman obat dapat berperan sebagai anti asam urat
dengan menghambat kerja xantin oxidase (Cos et al. 1998; Milan et al.2004).
Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Hartanto (2013) menyimpulkan
bahwa proses ekstraksi senyawa tanin pada daun putri malu dengan metode
sonikasi menghasilkan aktivitas inhibisi terhadap enzim xanthin oksidase sebesar
24,6% untuk pelarut akuades, 23,8% untuk pelarut aseton 70% dan 22,6% untuk
pelarut etanol 70%. Penelitian yang dilakukan oleh Auliawati (2013) menyatakan
bahwa ekstraksi senyawa tanin daun jambu biji dengan metode sonikasi diperoleh
aktivitas inhibisi ekstrak aseton 70%, etanol 70% dan akuades berturut turut
adalah 28,54%, 38,6% dan 58,2%. sedangkan hasil penelitian yang dilakukan oleh
Chaerunissa (2013) menyimpulkan bahwa aktivitas inhibisi enzim oleh tanin dari
daun belimbing wuluh pada ekstrak kasar etanol 70%, aseton 70% dan aquadest
dengan metode yang sama yaitu sonikasi adalah 62,84%, 37,45% dan 29,72%.
Dari ketiga hasil penelitian tersebut dapat disimpulkan bahwa aktivitas inhibisi
terbesar diperoleh dari senyawa tanin yang diekstrak dari belumbing wuluh
menggunakan pelarut etanol 70%.
Tanaman belimbing wuluh dapat dimanfaatkan dalam kehidupan sehari – hari.
Bagian yang dapat digunakan diantaranya bunga, buah, daun dan batangnya.
Bunga belimbing wuluh digunakan sebagai obat batuk dan sariawan. Buah
belimbing wuluh dapat digunakan sebagai bumbu masak, juga dapat digunakan
sebagai obat menurunkan darah tinggi, gusi berdarah, jerawat dan batuk. Secara
Universitas Indonesia
3
tradisional daun belimbing wuluh dapat digunakan sebagai obat batuk, kompres
pada sakit gondongan, obat rematik, antidiare, sedangkan batang belimbing wuluh
dapat digunakan sebagai obat sakit perut (Atang, 2009).
Berdasarkan hasil pemeriksaan kandungan kimia yang dilakukan Herlih
(1993) menunjukkan bahwa daun belimbing wuluh mengandung tanin, sulfur,
asam format, peroksida, kalsium oksalat dan kalsium sitrat. Kadar tanin yang
tinggi pada simplisia daun belimbing wuluh muda adalah 1,6% dan pada daun
belimbing wuluh tua sebesar 1,28% (Nurliana, 2006). Lidyawati (2006)
menjelaskan dalam penelitiannya bahwa kadar tanin pada daun belimbing wuluh
sebesar 26,2%. Isolasi tanin dari daun belimbing wuluh dapat dilakukan dengan
pengambilan daun belimbing wuluh sekitar 20 cm dari pucuk daun, sehingga
tanpa merusak pertumbuhan dapat diperoleh tanin dari daunnya (Amnur, 2008).
Pansera (2004) menyatakan bahwa proses yang digunakan untuk mengekstrak
tanin adalah ekstraksi superkritikal fluida. Namun, hasil yang diperoleh dari
proses ini tidak memperoleh hasil yang baik. Uji coba mengekstrak tanin dengan
ekstraksi soxhlet menggunakan beberapa pelarut diantaranya etanol, dimetil eter,
dan n-heksan, hasil percobaan yang dipantau dengan kromatografi lapis tipis
menunjukkan bahwa dimetil eter dan n-heksan tidak dapat melarutkan senyawa
tanin, sedangkan etanol dapat melarutkan senyawa tanin.
Mengingat potensi senyawa tanin dalam daun belimbing wuluh dan aktivitas
inhibisinya terhadap xanthine oxidase, maka menarik untuk dilakukan ekstraksi
senyawa tanin dari simplisia tersebut dengan metode sonikasi. Metode sonikasi
dilakukan karena dapat menghasilkan hasil ekstrak yang besar dalam waktu yang
singkat, memerlukan jumlah pelarut yang lebih sedikit dibandingkan dengan
metode lain dan kondisi operasinya pada suhu 25oC sesuai dengan sifat tanin yang
mudah untuk teroksidasi pada suhu tinggi. Kemudian dilakukan isolasi dengan
kromatografi lapis tipis kualitatif dan preparative untuk memperoleh kemurnian
senyawa tanin yang tinggi. Identifikasi senyawa tanin dilakukan dengan
spektofotometri UV-Vis
Universitas Indonesia
4
1.2 Rumusan Masalah 1. Eluen apakah yang paling baik dalam pemisahan ekstrak kasar senyawa tanin
dari daun belimbing wuluh (A. bilimbi ) dengan kromatografi lapis tipis untuk
memperoleh kadar inhibisi Xantin Oksidase dan kandungan tanin tertinggi?
2. Bagaimana pengaruh kadar tanin terhadap kadar inhibisi dalam menghambat
xanthin oksidase?
3. Jenis senyawa tanin apa yang terdapat dalam ekstrak daun belimbing wuluh
dari hasil pemisahan dengan kromatografi lapis tipis?
1.3 Tujuan1. Menentukan eluen terbaik dalam pemisahan ekstrak kasar senyawa tanin dari
daun belimbing wuluh (A. bilimbi ) dengan kromatografi lapis tipis untuk
memperoleh kadar inhibisi Xantin Oksidase dan kandungan tanin tertinggi
pada eluen – eluen tersebut.
2. Mengetahui pengaruh kadar tanin terhadap kadar inhibisi dalam menghambat
xanthin oksidase.
3. Mengetahui jenis senyawa tanin yang terdapat dalam ekstrak daun belimbing
wuluh dari hasil pemisahan dengan kromatografi lapis tipis.
1.4 Batasan Penelitian1. Metode ekstraksi yang digunakan untuk memperoleh ekstrak kasar senyawa
tanin dari daun belimbing wuluh adalah sonikasi dengan pelarut etanol 70%.
2. Ekstraksi dilakukan dengan menggunakan alat ultrasonic cleaner pada
frekuensi 42 kHz selama 50 menit.
3. Penguapan dilakukan pada suhu 60oC menggunakan rotary evaporator.
4. Daun belimbing wuluh yang digunakan adalah daun belimbing wuluh muda.
5. Metode pengujian kualitatif senyawa tanin dilakukan untuk mengidentifikasi
jenis senyawa tanin dengan menggunakan metode yang dilakukan oleh
Sa’adah (2010).
6. Isolasi senyawa tanin dari ekstrak kasar daun belimbing wuluh menggunakan
metode kromatografi lapis tipis preparatif. Eluen terbaik diidentifikasi dengan
metode kromatografi analitik, dimana variasi eluen yang digunakan adalah
toluen : etil asetat (3:1), forestall (asam asetat glasial : akuades : HCl pekat)
Universitas Indonesia
5
(30:10:3), n-butanol : asam asetat : air (4:1:5), metanol : etil asetat (4:1), etil
asetat : kloroform : asam asetat 10% (15 : 5 : 2).
7. Metode pengujian kuantitatif senyawa tanin yang digunakan adalah metode
stiansy test
8. Metode uji aktivitas inhibisi enzim yang digunakan sesuai dengan mengukur
absorbansi menggunakan spektrofotometer.
9. Penelitian dilakukan di Laboratorium Dasar Proses Kimia dan Laboratorium
Bioproses Departement Teknik Kimia, Fakultas Teknik Universitas
Indonesia, Depok, Jawa Barat, Indonesia.
1.5 Sistematika PenulisanSistematika penulisan seminar ini adalah sebagai berikut:
BAB I : PENDAHULUAN
Bab I ini berisi tentang latar belakang penelitian dan penulisan, perumusan
masalah, tujuan penelitian dan sistematika penulisan.
BAB II : TINJAUAN PUSTAKA
Bab ini berisi tentang tinjauan pustaka yang dijadikan dasar penelitian serta
ringkasan mengenai penelitian sebelumnya.
BAB III : METODOLOGI PENELITIAN
Bab ini berisi diagram alir penelitian, prosedur penelitian, teknik pengambilan
data serta teknik analisa yang akan dilakukan.
Universitas Indonesia
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Asam Urat
Asam urat adalah produk akhir atau produk buangan yang dihasilkan dari
metabolisme atau pemecahan purin yang berbentuk kristal - kristal. Asam urat
sebenarnya merupakan antioksidan dari manusia dan hewan, namun apabila dalam
jumlah berlebihan dalam darah akan mengalami pengkristalan dan dapat
menimbulkan hiperuresemia dan selanjutnya menimbulkan gout atau penyakit
asam urat (McCrudden Francis H, 2000) yang akan dijelaskan pada bagian
selanjutnya. Kadar asam urat dapat diketahui melalui hasil pemeriksaan darah.
Kadar asam urat normal dalam darah yaitu 3,6 – 8,2 mg/dl pada laki – laki dan 2,3
– 6,1 pada perempuan (E.Spicher, Jack Smith W. 1994).
2.1.1 Sifat dan struktur kimia asam uratAsam urat merupakan asam lemah dengan pKa 5,8. Asam urat cenderung
berada di cairan plasma ekstraseluler dan membentuk ion urat pada pH 7,4. Ion
urat itu sendiri mudah disaring dari plasma. Kadar asam urat di dalam darah
tergantung usia dan jenis kelamin dimana kadarnya akan meningkat dengan
bertambahnya usia dan gangguan fungsi ginjal. Di dalam mikroskop kristal asam
urat mempunyai bentuk jarum – jarum renik yang tajam, berwarna putih dan
berbau busuk dan merupakan senyawa organik semi solid yang terdiri dari
carbon, nitrogen, oxygen dan hydrogen dengan formula C5H4N4O3 seperti yang
terlihat pada gambar struktur kimia asam urat berikut.
6
Gambar 2. 1. Struktur Kimia Asam Urat
8
2.1.2 Metabolisme Asam UratPada manusia, asam urat adalah hasil akhir degradasi purin. Purin yang
menghasilkan asam urat dapat berasal dari tiga sumber yaitu dari makanan dimana
secara alamiah purin terdapat dalam tubuh kita dan dijumpai pada semua makanan
dari sel hidup yakni makanan dari tanaman seperti sayur, buah, kacang –
kacangan ataupun hewan seperti daging, jeroan dan ikan sarden. Sumber purin
lainnya yaitu melalui konversi asam nukleat jaringan menjadi nukleotida purin,
dan sintesis de novo basa purin (Sukandar, 2008). Selanjutnya purin akan
dioksidasi menjadi Hypoxanthine dan xanthine oleh enzim xanthine oxidase dan
kemudian Hypoxanthine dan xanthine juga dioksidasi oleh enzim xanthine
oxidase menjadi asam urat seperti yang ditunjukkan oleh gambar 2.2 berikut.
Metabolisme nukletida purin dengan konversi asam nukleat dimulai dari
pelepasan asam nukelat dari pencernaan asam nukleat dan nukleoprotein yang
akan diurai menjadi mononukleotida oleh enzim ribonuklease, deoksiribonuklease
dan polinuklease (Rodwell, 2003).
Selanjutnya enzim nukleotidase dan fosfatase menghidrolisis mononukleotida
menjadi nukleosida yang kemudian dapat diserap atau diurai lebih lanjut oleh
enzim fosforilase intestinal menjadi basa purin serta pirimidin. Basa purin
kemudian akan teroksidasi menjadi Hipoxantin Universitas Indonesia
Gambar 2. 2. Metabolisme Purin(Wells, DiPiro, Schwinghammer, & Hamilton, 2006)
9
Enzim xantin oxidase (XO) berperan penting dalam katabolisme atau
pemecahan purin menjadi asam urat. XO merupakan suatu komplek enzim yang
terdiri atas 1332 residu asam amino, molybdenum (HO2SMo), FAD dan Fe2S2
sebagai pusat reaksi redoks dengan bobot molekul sebesar 275000 dalton.
Enzim xantin oxidase mengkatalis oksidasi hipoxantin menjadi xantin lalu
menjadi asam urat yang berperan penting pada penyakit gout. Pada saat bereaksi
dengan xantin untuk membentuk asam urat, atom oksigen ditransfer dari
molybdenum ke xantin. Berikut adalah skema metabolisme nukleotida purin
berdasarkan penjelasan diatas.
.
Universitas Indonesia
Fosforilase di usus
Nukleotidase dan fosfatase
Polinukleotidase di usus
Nuklease di getah pankreas
Enzim proteolitik di usus
Hipoxantin Inosin
Asam urat
Xantin
Guanin
AdenosinGuanosin
Basa Purin dan Pirimidin
Nukleosida
Mononukleotida
Nukleotida
Asam nukleat
Asam nukleat (dimakan dalam bentuk nucleoprotein dan dari penghancuran sel –
sel tubuh)
Gambar 2. 3. Skema Metabolisme PurinSumber: (Wells, DiPiro, Schwinghammer, & Hamilton, 2006)
10
Dari skema di atas, proses pembentukan asam urat sebagian besar diperoleh
dari metabolisme nukleotida purin, guanosine monophosphate (GMP), inosine
monophosphate (IMP), dan adenosine monophosphate (AMP). Enzim xantin
oxidase mengkatalis hipoxantin dan guanine menjadi produk akhir asam urat.
Proses katabolisme purin menjadi asam urat yaitu, pertama – tama adenosin akan
mengalami deaminasi menjadi inosin oleh enzim adenosine deaminase.
Fosforilisis ikatan N-glikosidat inosin dan guanosin yang dikatalisis oleh enzim
purin fosforilase, akan melepas senyawa ribose-1 fosfat dan basa purin.
Hipoxantin dan guanin selanjutnya membentuk xantin yang dikatalisis oleh
masing – masing enzim xantin oksidase dan guanase. Kemudian xantin
teroksidasi menjadi asam urat dalam reaksi kedua yang dikatalisis oleh enzim
xantin oxidase (Rodwell, 2003)
Pada mamalia selain primata berderajat tinggi, asam urat akan dipecah oleh
enzim urikase dan akan membentuk produk akhir yaitu alantoin yang mempunyai
sifat sangat larut dalam air. Oleh karena manusia tidak memiliki enzim urikase,
hal ini tidak terjadi pada manusia, itulah yang menyebabkan produk akhir dari
katabolisme purin berupa asam urat (Rodwell, 2003)
Menurut Siswoyo (2005) walaupun proses sintesis dan degradasi nukleotida
purin terjadi pada semua jaringan, namun proses pembentukan asam urat terjadi di
jaringan yang memiliki banyak enzim xantin oksidase, yang terutama terjadi di
hati dan usus halus.
2.2 Hiperuresemia dan artritis gout
Hiperuresemia merupakan keadaan terjadi peningkatan kadar asam urat
darah di atas normal. Sedangkan artitris gout adalah gejala khas dari
hiperuresemia yang bersifat monoartikular atau menyerang satu sendi saja, yang
gejalanya dibarengi dengan pembengkakan, kemerahan, nyeri hebat, panas dan
gangguan gerak dari sendi yang terserang yang terjadi mendadak (akut) yang
mencapai puncaknya kurang dari 24 jam. Lokasi yang paling sering terkena pada
serangan pertama adalah sendi pangkal ibu jari kaki.
Universitas Indonesia
11
Batasan yang digunakan untuk menyatakan bahwa seseorang mengalami
hiperuresemia apabila kadar asam urat di atas 2 standar deviasi hasil laboratorium
pada keadaan normal. Dari data, didapatkan bahwa hanya 5-10% pria normal
mempunyai kadar asam urat diatas 7mg/dl dan sedikit dari pengerita gout yang
mempunyai kadar asam urat di bawah kadar tersebut (Putra, 2009).
Oleh karena itu batasan seseorang dapat dikatakan mengalami hiperuresemia
adalah kadar asam urat di atas 7mg/dl pada pria dan 6mg/dl pada perempuan
(putra, 2009). Apabila kadar asam urat tidak segera diturunkan atau dinormalkan,
maka asam – asam urat tersebut akan berkumpul dan mengkristal pada bagian –
bagian tubuh seperti persendian, tendon, dan juga jaringan – jaringan disekitarnya
(Kumar, Abas, & Fausto, 2007).
Kristal yang terbentuk tersebut disebut dengan monosodium urat. Kumpulan
dari kristalisasi urat ini disebut dengan tofi atau tofus yang apabila kadarnya
terlalu tinggi akan memacu timbulnya arthritis akut pada persendian atau
munculnya batu ginjal pada kandung kemih (Kumar, Abas,& Fausto, 2007).
2.2.1 Penyebab hiperuresemia
Hal – hal yang dapat menyebabkan peningkatan kadar asam urat atau asam urat
atau hiperuresemia yaitu pembentukan asam urat yang berlebihan, penurunan
eksresi asam urat atau dapat juga gabungan keduanya (Putra, 2009)
a. Pembentukan asam urat yang berlebihan
Produksi asam urat biasanya meningkat apabila terjadi peningkatan
konsumsi purin yang kemudian akan meningkatkan frekuensi metabolisme
purin. Konsumsi alkohol, minuman yang mengandung fruktosa, daging
dan juga makanan laut dapat menyebabkan terjadinya peningkatan kadar
asam urat dalam tubuh karena eksresinya terhambat oleh pembuangan
kadar gula yang berlebihan melalui urin.
Selain faktor konsumsi purin, terjadinya ketidaknormalan dalam sistem
enzim yang mengatur metabolism purin juga dapat menyebabkan
overproduction asam urat. Ketidaknormalan dalam sistem enzim tersebut
Universitas Indonesia
12
yaitu peningkatan aktivitas enzim phorybosylpyrophosphatese (PRPP)
synthetase, akibat peningkatan enzim PRPP adalah pembentukan
nukleotida purin sehingga terjadi peningkatan produksi asam urat. Hal
lainnya disebabkan oleh kekurangan sebagian dari enzim HPRT. Enzim
HPRT adalah enzim yang mengubah basa purin menjadi nukleotida purin
dengan bantuan PRPP dalam proses pemakaian ulang dari metabolism
purin. Kekurangan enzim HPRT menyebabkan peningkatan produksi asam
urat (Putra, 2009).
Ada dua jalur yang dapat dilalui dalam sintesis asam urat yaitu De Novo
Pathway dimana purin disintesis dari bahan non-purin dan Salvage
Pathway dimana basa purin bebas didapatkan dari pemecahan asam
nukleat dari bahan – bahan diluar seperti yang telah dijelaskan
sebelumnya.
b. Penurunan eksresi asam urat
Sekitar dua per tiga asam urat yang dihasilkan oleh tubuh tiap harinya
dieksresikan melalui urin, sedangkan sisanya akan dieliminasi melalui
saluran gastrointestinal setelah degradasi enzimatik oleh bakteri usus.
Penurunan eksresi asam urat melalui urin menjadi dibawah kecepatan
produksinya menyebabkan hiperuresemia dan peningkatan kadar
monosodium urat (sukandar, 2008).
c. Kombinasi antara peningkatan produksi dan penurunan eksresi asam
urat
Salah satu contoh dimana peningkatan produksi asam urat terjadi
bersamaan dengan menurunnya sekresi asam urat adalah saat kita
mengonsumsi alkohol (etanol). Etanol meningkatkan produksi asam urat
dengan meningkatkan produksi asam laktat. Etanol juga meningkatkan
kadar plasma hipoxantin dan xantin dengan mempercepat degradasi
nukleotida adenin serta etanol dapat menyebabkan berkurangnya sekresi
asam urat dalam tubuh dengan menyebabkan dehidrasi.
Universitas Indonesia
13
2.2.2 Pengobatan untuk Hiperuresemia
Obat yang digunakan untuk menyembuhkan gout terdiri dari dua jenis yaitu
untuk mengobati serangan akut gout dan obat yang digunakan untuk penanganan
jangka panjang penyakit gout (Brunton, Lazo,& Parker, 2005). Untuk pengobatan
jangka panjang terdapat pilihan terapi non-farmakologi yaitu melalui penjagaan
pola makan dengan mengurangi konsumsi makan yang mengandung purin dalam
jumlah besar, menghindari alkohol, dan juga menurunkan berat badan apabila
mengalami obesitas.
Untuk penanganan farmakologi gout jangka panjang, pembentukan asam urat
dari metabolisme purin dapat dikendalikan dengan menggunakan inhibitor enzim
xantin oksidase seperti allopurinol ataupun menggunakan agen – agen urikosurik
seperti probenesid atau sulfinpirazon untuk meningkatkan eksresi asam urat
melalui urin agar tidak menimbulkan hiperuresemia. Sedangkan serangan gout
akut dapat diobati dengan menggunakan NSAIDs atau Non-Steroidal Anti-
Inflammatory Drugs dosis tinggi yang digunakan untuk mengobati peradangan
atau inflmasi (Brunton, Lazo,& Parker, 2005).
2.2.2.1. Pengobatan serangan gout akut
Beberapa jenis NSAIDs dinyatakan efektif dalam mengobati serangan gout
akut dan harus digunakan dalam dosis tinggi selama 3-4 hari yang kemudian
dilanjutkan dengan penggunaan dosis yang lebih rendah selama 7-10 hari.
Beberapa NSAIDs yang telah mendapat persetujuan dari FDA untuk mengobati
serangan gout yaitu kolkisin, indomethacin, naproxen, dan sulindac. Aspirin yang
merupakan obat anti-inflamasi standar tidak dapat digunakan untuk mengobati
kasus gout, karena aspirin akan menginhibisi eksresi kristal urat pada dosis
rendah, meningkatkan resiko terjadinya gagal ginjal pada dosis yang lebih tinggi
dan bahkan menghambat kerja agen urikosurik yang lainnya.
Glucocorticoids dan corticotropin merupakan contoh agen anti-inflamasi
yang dapat bekerja dengna baik pada kasus gout. Dosis yang tinggi biasanya
digunakan pada awal yaitu sekitar 30 sampai 60mg/hari selama tiga hari dan
Universitas Indonesia
14
dikurangi secara perlahan – lahan, 10mg per hari selama 14 hari, bergantung pada
jumlah sendi yang terserang gout (Brunton, Lazo,& Parker, 2005).
Kolkisin juga merupakan salah satu contoh NSAIDs yang sering digunakan
dalam pengobatan gout akut. Kolkisin merupakan senyawa alkaloid yang diisolasi
dari tanaman krokus, Colchicum autumnale (Katzung, 2006). Ekstrak terhadap
tanaman – tanaman yang mengandung kolkisin telah dilakukan sejak abad ke-
enam. Saat ini, kolkisin termasuk dalam kategori pengobatan alternatif kedua
karena memiliki efek samping yang cukup tinggi dan berbahaya jika
dibandingkan dengan jenis – jenis pengobatan baru lainnya, terutama pada dosis
tinggi (Brunton, Lazo, &Parker, 2005). Kolkisin merupakan senyawa alkaloid
dengan rumus kimia C22H25NO6 seperti yang terlihat pada gambar berikut:
Agar efektif, kolkisin biasanya diberikan sesegera mungkin pada saat gejala
timbul karena pada perkembangan gejala berikutnya kolkisin akan kurang efektif.
biasanya, dosis awal yang diberikan adalah 1mg yang kemudian diikuti dengan
0.5mg setiap 2 – 3 jam selama serangan akut sampai nyeri sendi mereda, pasien
mengalami efek samping gastrointestinal jika dosis maksimum 6mg diberikan
(Johnstone, 2005)
Efek samping kolkisin adalah mual dan muntah, diare dan nyeri abdomen
yang terjadi pada 80% pasien. Komplikasi utama terapi dengan menggunakan
obat ini adalah dehidrasi. Efek samping lain adalah kejang, depresi nafas, hepatik
Universitas Indonesia
Gambar 2. 4. Struktur Kimia KolkisinSumber: Brunton et al, 2005
15
dan nekrosis otot, kerusakan ginjal, demam, granulositopenia, anemia aplastik,
koagulasi intravaskuler yang menyebar dan alopesia. (Johnstone, 2005)
2.2.2.2 Pengobatan Gout Kronis dengan Inhibitor Xantin OksidaseAllupurinol merupakan senyawa yang dapat menginhibisi enzim xantin
oksidase sehingga dapat mencegah pembentukan asam urat dari xantin dan
hipoxantin. Mesikpun underexrection merupakan penyebab yang lebin umum
pada hiperuresemia dibandingkan dengan overproduction, allopurinol merupakan
salah satu langkah pengobatan yang efektif (Katzung,2006). Selain mengontrol
gejala, obat ini juga melindungi fungsi ginjal (Johnstone, 2005).
Allupurinol mengalami konversi di hati menjadi metabolit aktif oksipurinol,
oksipurinol dapat menghambat enzim xantin oksidase. Mereka bekerja pada
konsentrasi rendah sebagai inhibitor non kompetitif pada konsentrasi tinggi.
Keberadaan oksipurinol sebagai hasil reaksi antara allopurinol dan xantin oksidase
memberikan efek inhibisi yang lebih besar dibandingkan dengan allopurinol itu
sendiri (Johnstone, 2005).
Dalam keadaan tanpa allopurinol, produk purin utama yang terkandung
dalam urin adalah asam urat. Dengan adanya inhibisi enzim xantin oksidase,
produk – produk tersebut akan menjadi hipoxantin, xantin dan juga asam urat,
dimana ketiga senyawa ini memiliki kelarutan yang berbeda di dalam plasma
darah sehingga terjadi peningkatan eksresi purin tanpa perlu membebani saluran
urin dengan asam urat yang berlebih. Terlepas dari konsentrasinya dalam tubuh
yang meningkat, xantin dan hipoxantin dapat dieksresikan secara efektif tanpa
terjadinya penumpukan pada jaringan (Brunton, Lazo, &Parker, 2005).
Pada pasien dengan fungsi ginjal normal, dosis awal allopurinol tidak boleh
melebihi 300mg/24 jam. Biasanya pasien diberikan dosis 100mg/hari dan dosis
selanjutnya dititrasi sesuai dengan kebutuhan. Respon terhadap allopurinol dapat
dilihat sebagai penurunan kadar asam urat dalam serum darah pada 2 hari setelah
terapi dimulai dan maksimum setelah 7-10 hari (Johnstone, 2005)
Allopurinol dapat memperpanjang durasi serangan akut atau mengakibatkan
serangan lain sehingga allopurinol hanya diberikan jika serangan akut telah Universitas Indonesia
16
mereda terlebih dahulu. Efek samping dijumpai pada 3 – 5% pasien sebagai reaksi
alergi atau hipersensitivitas. Sindrom toksisitas allopurinol dapat berupa ruam,
demam, pemburukan insufisiensi ginjal, vaskulitis dan bahkan kematian, dimana
sindrom ini lebih banyak dijumpai pada pasien lanjut usia. Banyak pasien
mengalami penurunan fungsi ginjal jika dosis alupurinol terlalu tinggi (Johnstone,
2005).
2.2.2.3 Pengobatan dengan agen – agen urikosurik
Kebanyakan pasien dengan hiperuresemia yang disebabkan oleh eksresi asam
urat yang menurun dapat diterapi dengan menggunakan obat urikosurik.
Urikosurik merupakan alternatif allopurinol yang berfungsi untuk meningkatkan
laju eksresi dari asam urat, terutama untuk pasien yang tidak tahan terhadap
allopurinol. Pada manusia, asam urat disaring, dieksresikan dan diserap kembali
oleh ginjal. Reabsorpsi merupakan faktor penting karena hanya 10% asam urat
yang disaring yang akan dieksresikan. (Brunton, Lazo, &Parker, 2005).
Tahapan pertama dari reabsorbsi asam urat adalah pengambilan cairan
tubular oleh suatu transporter yang akan menukar asam urat dengan suatu anion.
Senyawa – senyawa yang bersifat urikosurik akan melakukan inhibisi terhadap
proses transportasi asam urat dan anion. Namun karena transportasi ini bersifat
dua arah, maka inhibisi yang terjadi juga dapat berlangsung dua arah, bergantung
pada konsentrasi obat yang digunakan. Untuk mengurangi eksresinya, biasanya
digunakan dosis yang rendah. Sedangkan untuk memicu terjadinya eksrese
digunakan dosis yang tinggi (Brunton, Lazo, &Parker, 2005). Contoh obat yang
tergolong urikosurik adalah probenesid dan sulfiniprazon.
a. Probenesid
Obat ini secara kompetitif menghambat reabsorbsi asam urat pada tubulus
proksimal sehingga meningkatkan eksresi asam urat dan mengurangi konsentrasi
asam urat dalam plasma darah (Brunton, Lazo, &Parker, 2005). Probenesid
merupakan turunan dari asam benzoat yang larut dalam minyak dengan struktur
kimia sebagai berikut:
Universitas Indonesia
17
Gambar 2. 5. Struktur Kimia ProbenesidSumber: Brunton et al, 2005
Probenesid dapat terabsorbsi sepenuhnya setelah konsumsi secara oral.
Konsentrasi puncaknya dalam tubuh akan terjadi dalam 2 – 4 jam. Dalam
penerapannya dalam mengobati gout, dosis yang digunakan adalah 250 mg
sebanyak dua kali sehari. Obat ini akan meningkatkan besarnya kadar asam urat
yang dieksresikan melalui urin. Efek samping probenesid yang paling sering
dijumpai adalah gangguan saluran cerna, nyeri kepala dan reaksi alergi (Katzung,
2006)
b. Sulfiipirazon
Sulfiniprazon merupakan senyawa yang diturunkan dari phenylbutazone yang
merupakan salah satu jenis NSAIDs. Meskipun demikian, senyawa ini tidak
memiliki sifat anti-inflamasi yang tinggi, melainkan efek urikosurik yang baik
(Brunton, Lazo, &Parker 2005).
Sulfiniprazon mencegah dan mengurangi kelainan sendi dan tofi pada
penyakit gout kronik berdasarkan hambatan reabsorbsi tubular asam urat.
Sulfiniprazon kurang efektif menurunkan kadar asam urat dibandingkan dengan
allopurinol dan tidak berguna mengatasi serangan gout akut melainkan dapat
meningkatkan frekuensi serangan pada tahap awal. Dosis yang diberikan kepada
pasien penderita gout biasanya 100 – 200 mg/hari selama 2 kali sehari,
ditingkatkan sampai 400 – 800 mg/hari, kemudian dikurangi sampai dosis efektif
minimal. Efek samping yang mungkin ditimbulkan adalah gangguan saluran cerna
dan alergi.
Universitas Indonesia
18
2.3 Pengetahuan tentang Daun Belimbing WuluhBelimbing wuluh merupakan tanaman yang termasuk dari keluarga
oxalidaceae. Belimbing wuluh (A. Bilimbi L.) dikenal sebagai tanaman
pekarangan yang berbunga sepanjang tahun. Belimbing wuluh memiliki pohon
kecil dengan tinggi mencapai 10 m dengan batang yang tidak begitu besar dan
mempunyai garis tengah hanya 30 cm. belimbing wuluh ditanam sebagai pohon
buah, ada yang tumbuh secara liar dan kebanyakan berada di daerah dataran
rendah dengan ketinggian 500 meter di atas permukaan laut (Arland, 2006).
Belimbing wuluh mempunyai batang kasar berbenjol – benjol, percabangan
sedikit, arahnya condong ke atas, cabang muda berambut halus seperti beludru,
warnanya coklat muda. Daun belimbing wuluh berupa daun majemuk menyirip
ganjil dengan 21 – 45 pasang anak daun. Anak daun bertangkai pendek,
bentuknya bulat seperti telur sampai jorong, ujung runcing, pangkal membundar,
tepi rata, panjang 2 -10 cm, lebar 1 -3 cm, warnanya hijau, permukaan berwarna
hijau muda. Bunga belimbing wuluh kecil – kecil berbentuk bintang warnanya
ungu kemerahan, berkelompok, keluar dari batang atau percabangan yang besar.
Buah belimbing wuluh berbentuk bulat lonjong bersegi, panjang sekitar 4 -6 cm,
warnanya hijau kekuningan, bila sudah masak banyak mengandung air dan
rasanya asam seperti yang terlihat dari gambar 2.6 berikut.
Universitas Indonesia
Gambar 2. 6. Tanaman Belimbing WuluhSumber: Masithah, 2006
19
Klasifikasi ilmiah tanaman belimbing wuluh sebagai berikut (Dasuki, 1991):
Kingdom : Plantae (Tumbuhan)
Subkingdom : Tracheobionta (Berpembuluh)
Superdivisio : Spermatophyta (Menghasilkan biji)
Divisio : Magnoliophyta (Berbunga)
Kelas : Magnoliopsida (Berkeping dua/ dikotil)
Sub kelas : Rosidae
Ordo : Geraniales
Familia : Oxalidaceae
Genus : Averrhoa
Spesies : Averrhoa bilimbi L.
2.3.1 Manfaat Daun Belimbing Wuluh
Belimbing wuluh (A. bilimbi L) banyak ditanam sebagai pohon buah.
Tanaman asal Amerika tropis ini dapat digunakan untuk mengobatai berbagai
macam penyakit. Orang mengambil manfaat belimbing wuluh selama ini hanya
sebagai sirup, manisan atau bumbu masak, padahal secara tradisional tanaman ini
banyak digunakan untuk mengatasi berbagai penyakit seperti batuk, diabetes,
rematik, gondongan, sariawan, sakit gigi, gusi berdarah, jerawat sampai tekanan
darah tinggi, selain itu juga bisa menyembuhkan kelumpuhan, memperbaiki
fungsi pencernaan dan radang rectum (Arland, 2006).
Daun belimbing wuluh digunakan masyarakat aceh sebagai penyedap rasa
yang disebut asam sunti, selain itu mereka juga menggunakan air belimbing
wuluh yang diperoleh dari proses pembuatan asam sunti untuk mengawetkan ikan
dan daging (Abdul, 2008). Arifiyani (2007) menyatakan bahwa air daun
belimbing wuluh dapat digunakan mengobati penyakit stroke karena ekstrak daun
belimbing wuluh ini mengandung senyawa tanin, selain itu daun belimbing wuluh Universitas Indonesia
20
dapat dimanfaatkan sebagai obat sakit perut, rematik, perotitik dan obat batuk.
Daun belimbing wuluh berkhasiat untuk mengurangi rasa sakit atau nyeri dan
pembunuh kuman serta dapat menurunkan kadar gula darah (Arland, 2006). Daun
belimbing wuluh dapat melancarkan pengeluaran empedu, anti radang, dan pereda
nyeri (analgesik) (Dalimarta, 2006).
2.3.2 Kandungan Kimia Daun Belimbing Wuluh
Arland (2006) menyatakan bahwa daun belimbing wuluh mengandung
senyawa metabolit sekunder diantaranya senyawa tanin, selain itu daun belimbing
wuluh juga mengandung sulfur dan asam format. Fahrani (2009) menunjukkan
bahwa ekstrak daun belimbing wuluh mengandung flavonoid, saponin dan tanin.
Dalimatra (2006) menjelaskan bahwa di dalam daun belimbing wuluh selain tanin
juga mengandung peroksidase, kalsium oksalat dan kalium sitrat. Bahan aktif
pada daun belimbing wuluh yang dapat dimanfaatkan sebagai obat adalah tanin.
2.4 TaninTanin merupakan suatu nama deskriptif umum untuk satu grup substansi
fenolik polimer yang mampu mempresipitasi gelatin dari cairan, suatu sifat yang
dikenal sebagai astringensi. Tanin hampir ditemukan di setiap bagian dari
tanaman yaitu kulit kayu, daun, buah dan akar (Hargerman, 1998). Tanin dibentuk
dengan kondensasi turunan flavan yang ditransportasikan ke jaringan kayu dari
tanaman, tanin juga dibentuk dengan polimerisasi quinon (Anonymous, 2005).
Universitas Indonesia
Gambar 2. 7. Struktur Tanin (Robinsson, 1995)
21
Berdasarkan gambar yang terlihat di atas, secara strukturan tanin merupakan
suatu senyawa fenol yang memiliki berat molekul besar yang terdiri dari gugus
hidroksi dan beberapa gugus seperti karboksil untuk membentuk kompleks kuat
yang efektif dengan protein dan beberapa makromolekul (Horvart, 1981). Sebagai
salah satu tipe dari senyawa metabolit sekunder, tanin mempunyai karakteristik
sebagai berikut (Giner-Chavez, 2011):
- Senyawa oligopolimer dengan satuan struktur yang bermacam – macam
dengan gugus fenol bebas.
- Berat molekul antara 500 – 20000
- Larut dalam air, dengan pengecualian beberapa struktur yang mempunyai
berat molekul besar
- Mampu berkaitan dengan protein dan terbentuk kompleks tanin protein
yang larut dan tidak larut.
Secara kimia terdapat dua jenis tanin yang tersebar tidak merata dalam dunia
tumbuhan yaitu tanin terkondensasi (Proantosianidin) dan tanin terhidrolisis
(Hydrolizable tannin) (Harborne, 1987). Kedua golongan tanin menunjukkan
reaksi yang berbeda dalam larutan garam Fe (III). Tanin terkondensasi
menghasilkan warna hijau kehitaman sedangkan tanin terhidrolisis memberikan
warna biru kehitaman (Etherington, 2002).
2.4.1 Tanin Terkondensasi
Tanin terkondensasi secara biosintesis dapat dianggap terbentuk dengan cara
kondensasi katekin tunggal (galokatekin) yang membentuk senyawa dimer dan
kemudian oligopolimer yang lebih tinggi. Proantosianidin merupakan nama lain
dari tanin terkondensasi karena jika direaksikan dengan asam panas, beberapa
ikatan karbon penghubung akan terputus menjadi monomer antosianidin
(Harborne, 1987).
Proantosianidin didefinisikan sebagai oligo atau polimer flavonoid (flavan-3-
ol atau flavan-3-4-diol), dimana ikatan C-C tidak mudah untuk dihidrolisis
(Etherington, 2002) seperti yang terlihat pada gambar 2.8 dan 2.9 di bawah.
Proantosianidin lebih banyak terdistribusi daripada tanin terhidrolisis. Universitas Indonesia
22
Proantosianidin dapat dideteksi langsung dalam jaringan tumbuhan hijau dengan
mencelupkan ke dalam HCl 2M mendidih selama setengah jam. Bila terbentuk
warna merah, maka ini merupakan bukti adanya senyawa tersebut (Harborne,
1987).
2.4.2 Tanin Terhidrolisis
Tanin terhidrolisis merupakan molekul dengan poliol (umumnya D-glikosa)
sebagai pusatnya. Tanin terhidrolisis terbentuk dari proses pecahnya karbohidrat
dan asam fenolik oleh asam lemah atau basa lemah (Hagerman, 2008). Gugus
hidroksi pada karbohidrat sebagian atau seluruhnya teresterifikasi dengan gugus
karboksil pada asam gallat (gallotanin) atau asam ellagat (ellaginatin). Tanin
terhidrolisis biasanya sedikit terdapat dalam tanaman (Giner-Chavez, 2001).
2.4.2.1 Gallotanin
Gallotanin terbentuk dari asam gallat dan gula, biasanya glukosa. Sifat fisik
dari gallotanin berupa polimer amorf, berwarna putih kekuningan, mempunyai
bau spesifik, dapat larut dalam air, gliserol dan sangat larut dalam alkohol dan
aseton. Gallotanin tidak larut dalam benzene, kloroform, eter, petroleum eter,
karbon disulfida dan karbon tetraklorida (Gohen, 1976).
Sifat kimia dari gallotanin adalah berwarna coklat apabila terkena cahaya,
dengan albumin, tepung, gelatin, alkaloid dan garam metalik memberikan
endapan yang tidak larut, sedangkan dengan FeCl3 memberikan warna biru
kehitaman. Pada suhu 215oC akan terdekomposisi menjadi piragalol dan CO2
(Tyler, 1947). Universitas Indonesia
Gambar 2. 8. Struktur Flavan-3,4-diol (Hagermen, 1998)
Gambar 2. 9. Struktur Flavan-4-ol (Hagerman, 1998)
23
Asam gallat (3,4,5 trihidroksibenzoat) merupakan senyawa turunan dari
aromatik karboksilat dengan berat molekul 170.12 mempunyai titik didih 200oC,
titik leleh 110oC, sedikit larut dalam air panas, alkohol, etil asetat dan gliserol.
2.4.2.2 Ellagitanin
Ellagitanin terbentuk dari dua molekul asam gallat melalui reaksi oksidasi
(Fiesel, 1961). Hidrolisis dengan asam kuat akan menghasilkan asam ellagat.
Asam ellagat memberikan reaksi warna spesifik dengan adanya asam nitrit
(HNO2). Reaksi ini merupakan metode yang penting dalam penentuan ellagitanin
(Bate, 1972).
Dalam penentuan ellagitanin diperlukan reaksi warna dengan asam nitrat
dalam lingkungan nitrogen, dimana akan memberikan warna merah yang lama
kelamaan berubah menjadi biru. Bila ada udara di lingkungannya maka lama
kelamaan akan berubah menjadi kuning (Bate, 1972).
Assam ellagat meleleh pada 360oC, tidak larut dalam eter, sedikit larut dalam
air dan larut dalam alkali/basa dengan warna kuning yang kuat. (Fieser, 1961).
2.4.3 Tanin dan Efek Inhibisi enzim Xanthin Oksidase
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan oleh Owen dan Johns (1999),
Analisis kinetika inhibisi dengan plot Lineweaver-Burks menunjukkan bahwa
ekstrak tanaman yang mengandung senyawa tanin dan fenol lainnya memiliki
aktivitas inhibisi enzim xanthin oksidase dengan mengikat enzim bebas ataupun
kompleks enzim substrat (Owen&Johns, 1999). Dari penelitian yang dilakukan,
disimpulkan bahwa kandungan tanin dan senyawa fenolik lainnya pada suatu
tanaman memiliki peranan penting dalam inhibisi enzim xanthin oksidase.
2.5 Metode Ekstraksi Tanin dari Daun Belimbing WuluhEkstraksi merupakan suatu proses selektif yang dilakukan untuk mengambil
zat – zat yang terkandung dalam suatu campuran dengan menggunakan pelarut
yang sesuai. Metode pemisahan ini bekerja berdasarkan prinsip kelarutan, yaitu
pelarut polar akan melaurtkan zat polar dan sebaliknya (Khopkar, 2002). Proses
ini merupakan langkah awal penting dalam penelitian tanaman obat, karena
Universitas Indonesia
24
preparasi ekstrak kasar tanaman merupakan titik awal untuk isolasi dan pemurnian
komponen kimia yang terdapat pada tanaman. Pemisahan zat dari suatu campuran
relatif mudah dilakukan jika zat tersebut larut dalam pelarut yang digunakan,
sedangkan zat lain yang tidak diinginkan tidak ikut larut. Dengan demikian, hasil
ekstraksi yang diperoleh bergantung pada kandungan ekstrak yang terdapat dalam
sampel dan jenis pelarut yang digunakan (Khopkar, 2002). Untuk mendapatkan
tanin dari suatu tanaman, kita dapat menggunakan beberapa metode ekstraksi,
seperti maserasi, perkolasi, soxhlet, metode microwave, dan sonikasi.
Salah satu prosedur klasik untuk memperoleh kandungan senyawa organik
dari jaringan tumbuhan ialah maserasi. Metode maserasi digunakan untuk
mengekstrak komponen, baik yang tidak tahan panas maupun yang tahan panas.
Metode ini dilakukan hanya dengan merendam sampel dalam suatu pelarut
dengan lama waktu tertentu, biasanya selama 24 jam tanpa menggunakan
pemanasan. Kelebihan metode maserasi adalah metodenya yang sederhana, tidak
menggunakan peralatan rumit, relatif murah, serta dapat menghindari kerusakan
komponen senyawa yang tidak tahan panas. Kelemahan dari metode ini adalah
membutuhkan waktu yang lama dan penggunaan pelarut yang tidak efisien
(Meloan, 1999). Perendaman bahan dalam pelarut dapat meningkatkan
permeabilitas dinding sel dalam tiga tahapan yaitu masuknya pelarut dalam
dinding sel tanaman dan membengkakan sel, kemudian senyawa yang terdapat
dalam dinding sel akan terlepas dan masuk ke dalam pelarut, diikuti oleh difusi
senyawa yang terekstraksi oleh pelarut keluar dari dinding sel tanaman (Supriadi,
2008). Umumnya pelarut ditambahkan sekurang kurangnya sampai seluruh
sampel dapat terendam.
Dari metode – metode tersebut, metode sonikasi merupakan yang paling
sederhana dan cepat sehingga lebih cocok digunakan untuk pengujian dasar yang
dilakukan pada penelitian ini.
Berdasarkan fasa yang terlibat terdapat dua jenis ekstraksi, yaitu ekstraksi
cair – cair dan ekstraksi padat – cair. Proses ekstraksi padat cair sangat
dipengaruhi oleh waktu ekstraksi, suhu yang digunakan, pengadukan dan
Universitas Indonesia
25
banyaknya pelarut yang digunakan (Harborne, 1996). Perlakuan pendahuluan
untuk bahan padat dapat dilakukan dengan berbagai cara diantaranya dengan
pengeringan bahan baku sampai kadar air tertentu dan penggilingan untuk
mempermudah proses ekstraksi dengan memperbesar kontak antara bahan dan
pelarut (Harborne, 1996).
Pemilihan pelarut merupakan faktor yang sangat berpengaruh dalam
ekstraksi. Pelarut yang digunakan dalam ekstraksi harus dapat menarik komponen
aktif dari campuran. Hal – hal yang harus diperhatikan dalam pemilihan pelarut
adalah selektivitas, sifat pelarut, kemampuan untuk mengekstraksi, tidak bersifat
racun, mudah diuapkan dan harganya relatif murah (Gamse, 2002).
Umumnya tanin dapat diekstrak dari bagian – bagian tumbuhan tertentu
dengan menggunakan pelarut (Deny, 2007). Pelarut yang umum adalah aseton,
etanol maupun metanol dan secara komersial tanin dapat diekstraksi dengan
menggunakan pelarut air. Pengekstraksi tanin yang baik adalah campuran air
dengan pelarut organik misalnya metanol, etanol dan aseton berair (7:3) yang
mengandung asam askorbat. Penambahan asam askorbat dalam pelarut aseton
adalah untuk meminimumkan oksidasi tanin selama ekstraksi. Hal ini disebabkan
oksidator akan bereaksi terlebih dahulu dengan asam askorbat yang lebih mudah
teroksidasi (Abdurrohman, 2007).
Metode ekstraksi sonikasi memanfaatkan gelombang ultrasonik dengan
frekuensi rendah 20 – 40 kHz yang dapat mempercepat waktu kontak antara
sampel dan pelarut meskipun pada suhu ruang. Hal ini menyebabkan proses
perpindahan massa senyawa bioaktif dari dalam sel tanaman ke pelarut menjadi
lebih cepat. Sonikasi mengandalkan energi gelombang yang menyebabkan proses
kavitasi, yaitu proses pembentukan gelembung – gelembung kecil akibat adanya
transmisi gelombang ultrasonik untuk membantu difusi pelarut ke dalam dinding
sel tanaman (Ashley et al, 2001).
Pada sonikator, gelombang ultrasonik digunakan untuk membuat gelembung
kavitasi (cavitation bubbles) pada material larutan. Ketika gelembung pecah dekat
dengan dinding sel maka akan terbentuk gelombang kejut dan pancaran cairan
Universitas Indonesia
26
(liquid jets) yang akan membuat dinding sel pecah. Pecahnya dinding sel akan
membuat komponen di dalam sel keluar bercampur dengan larutan. Cara ekstraksi
ini biasanya lebih cepat dan lebih efisien dibandingkan dengan cara – cara
ekstraksi terdahulu (Cinta & Crovotto, 2005).
Faktor yang mempengaruhi proses ekstraksi sonikasi menurut Mandal et al,
2007 adalah:
Sifat pelarut dan volume
Pelarut harus memiliki selektivitas yang tinggi terhadap analit
dibandingkan komponen lain yang tidak diinginkan. Volume pelarut
harus cukup untuk memungkinkan matrik tanaman tercelup di dalam
pelarut selama waktu iradiasi. Biasanya volume optimum yang
digunakan adalah dengan rasio 10:1 (ml/mg) hingga 20:1 (ml/mg)
Waktu ekstraksi
Secara umum dengan meningkatnya waktu ekstraksi, jumlah analit
yang dapat diekstrak juga semakin meningkat meskipun degradasi
dari kualitas ekstrak mungkin terjadi. Biasanya waktu 15 – 20 menit
cukup untuk melakukan ekstraksi.
Kekuatan matriks
Material yang akan diekstrak biasanya memiliki ukuran yang berkisar
antara 100 µm – 2mm. bubuk halus dapat meningkatkan ekstraksi
karena adanya luas permukaan kontak yang lebih besar dan dapat
meningkatkan penetrasi gelombang mikro.
Temperature
Temperature yang meningkat dapat meningkatkan efisiensi ekstraksi.
Temperature yang berbeda dapat dihasilkan pada pelarut yang
berbeda.
2.6 Isolasi Senyawa Tanin Dari Ekstrak Kasar Daun Belimbing Wuluh
dengan Kromatografi Lapis Tipis
Kromatografi merupakan salah satu metode pemisahan yang didasarkan pada
distribusi differensial komponen – komponen yang dipisahkan antara 2 fase, yaitu
Universitas Indonesia
27
fase diam dengan permukaan yang luas dan fase gerak yang berupa zat cair yang
mengalir sepanjang fase diam. Komponen – komponen hasil pemisahan keluar
dari kolom pada waktu yang berbeda. Komponen yang tertahan lebih kuat di
dalam kolom akan keluar dari kolom dengan waktu yang lebih lama dibandingkan
komponen yang tidak tertahan dengan kuat atau bahkan tidak ditahan kolom sama
sekali (Sastrohamidjojo, 2007).
Kromatografi lapis tipis merupakan cara analisis cepat yang memerlukan
bahan yang sangat sedikit, baik penyerap maupun cuplikannya. KLT dapat
digunakan untuk memisahkan senyawa – senyawa yang sifatnya hidrofobik
seperti lipida – lipida dan hidrokarbon yang sukar dikerjakan dengan kromatografi
kertas. KLT juga dapat berguna untuk mencari eluen untuk kromatografi kolom,
analisis fraksi yang diperoleh dari kromatografi kolom, identifikasi senyawa
secara kromatografi dan isolasi senyawa murni skala kecil. Pelarut yang dipilih
untuk pengembang disesuaikan dengan sifat kelarutan senyawa yang dianalisis.
Bahan lapisan tipis seperti silica gel adalah senyawa yang tidak bereaksi dengan
pereaksi – pereaksi yang lebih reaktif seperti asam sulfat (Anonymous, 2008).
Identifikasi dari senyawa – senyawa yang terpisah pada lapisan tipis dapat
menggunakan harga Rf, meskipun harga Rf dalam lapisan tipis kurang tepat bila
dibandingkan pada kertas. Seperti halnya pada kertas, harga Rf pada lapisan tipis
didefinisikan sebagai berikut (Sastrohamidjojo, 2007):
Harga Rf = Jarak yang ditempuh senyawaJarak yangditempuh pelarut
Kromatografi lapis tipis dapat digunakan untuk tujuan kualitatif dan
preparatif. KLT kualitatif digunakan untuk menganalisis senyawa – senyawa
organik dalam jumlah kecil, menentukan pelarut yang tepat untuk pemisahan
dengan KLT preparative atau kromatografi kolom dan juga untuk
mengidentifikasi komponen penyusun campuran melalui perbandingan dengan
senyawa yang diketahui strukturnya.
Sedangkan KLT preparatif digunakan untuk memisahkan campuran senyawa
dari sampel dalam jumlah yang besar berdasarkan fraksinya, yang selanjutnya Universitas Indonesia
(2.1)
28
fraksi – fraksi tersebut dikumpulkan dan digunakan untuk analisis berikutnya
(Townshend, 1995).
Eluen yang dipilih disesuaikan dengan sifat kelarutan dan kepolaran senyawa
yang akan diisolasi. Plat yang digunakan pada kromatografi lapis tipis berbahan
silika gel karena bahan tersebut tidak bereaksi dengan pereaksi – pereaksi yang
lebih reaktif seperti asam sulfat (Anonymous, 2008).
Yuliani (2003) memisahkan senyawa tanin dari 3 daun jambu biji yang
berbeda dengan eluen toluen : etil asetat (3:1) menghasilkan 9 bercak dengan
harga Rf mulai dari 0,23 – 0,94. Ekstrak kedua juga menghasilkan 9 bercak
dengan harga Rf mulai dari 0,13 – 0,94 dan ekstrak ketiga hanya memberikan 5
bercak dengan harga Rf mulai dari 0,16 – 0,59. Penelitian yang dilakukan oleh
Nuraini (2002) adalah memisahkan senyawa tanin dengan menggunakan eluen
asam asetat glasial : air : asam klorida (30 : 10 : 3) menghasilkan harga R f 0,7.
Sedangkan Olivina (2005) mengelusi senyawa tanin dengan menggunakan eluen
etil asetat : metanol : asam asetat (6 : 14 :1) menghasilkan 2 bercak warna merah
muda dan jingga pada Rf 0,39 dan 0,53, serta Lidyawati (2006) mengelusi
senyawa tanin dengan eluen metanol : etil asetat (4:1).
Eluen – eluen yang telah digunakan pada penelitian – penelitian sebelumnya
yang telah dijelaskan diatas akan digunakan pada penelitian ini untuk diseleksi
eluen mana yang paling baik untuk mengisolasi senyawa tanin.
2.7 Uji Kualitatif dan Kuantitatif 2.7.1 Uji Fitokimia
Uji fitokimia senyawa tanin dapat dilakukan dengan menggunakan FeCl3,
senyawa ini digunakan untuk menentukan apakah sampel mengandung gugus
fenol. Adanya gugus fenol ditunjukan dengan warna hijau kehitaman atau biru tua
setelah ditambahkan FeCl3. Tanin sendiri merupakan senyawa polifenol. Hal ini
diperkuat dengan penelitian yang dilakukan oleh Harborne (1987) yang
mendeteksi senyawa fenol sederhana yaitu menambahkan ekstrak dengan larutan
FeCl3 1% dalam air yang menimbulkan warna hijau kehitaman. Terbentuknya
Universitas Indonesia
29
warna hijau kehitaman karena tanin akan membentuk senyawa kompleks dengan
ion Fe3+.
Uji fitokimia dengan menggunakan larutan formalin 3% dan HCl 1 N
merupakan uji awal untuk membedakan antara tanin katekol (tanin terkondensasi)
dan tanin galat (tanin terhidrolisis). Tanin katekol ditunjukkan dengan adanya
endapan merah muda jika ekstrak ditambah dengan formalin 1% dan HCl 1 N.
Tanin merupakan senyawa fenol sehingga dapat berkondensasi dengan
formaldehid. Hasil kondensasi tanin dengan formaldehid ditambahkan dengan
asam panas yaitu asam klorida (HCl), maka beberapa ikatan karbon – karbon
penghubung satuan terputus dan akan dibebaskan monomer antosianidin. Jika
dalam suatu sampel mengandung senyawa proantosianidin atau tanin katekol akan
terbentuk warna merah jika direaksikan dengan HCl (Harborne, 1987).
2.7.2 Uji Kuantitatif
2.7.2.1 Metode Lowenthal-Procter
Prinsip penentuan kadar tanin dengan metode Lowenthal-Proceter
berdasarkan jumlah gugus fenol pada tanin. Tanin termasuk golongan senyawa
yang memiliki gugus fenol, sehingga jumlah gugus fenol ini mewakili jumlah
tanin secara keseluruhan. Titrasi dengan kalium permanganat, gugus fenol akan
teroksidasi. Jumlah gugus fenol berbanding lurus dengan jumlah kalium
permanganat yang diperlukan untuk titrasi. Sebagai indikator redoks digunakan
larutan indigokarmin dan warna yang dihasilkan adalah kuning emas. Penentuan
kadar tanin dilakukan dengan menggunakan persamaan berikut (Sudarmadji,
1997):
Perhitungan: 1 ml KMnO4 0,1 N = 0.00416 gram tanin.
kadar tanin=(50 A−50 B ) x 0.00416
Sx100 %
dimana (A-B) adalah banyaknya KMnO4 yang diperlukan untuk titrasi (A
merupakan senyawa tanin dan B merupakan senyawa non tanin) serta S adalah
berat sampel. Universitas Indonesia
(2.2)
30
2.7.2.2 Metode Spektrofotometer UV-Vis
Spektroskopi UV-Vis merupakan suatu metode identifikasi gugus fungsi
dari sampel. Spektrum yang diabsorbsi oleh suatu senyawa adalah sejumlah sinar
yang diserap oleh suatu senyawa pada panjang gelombang tertentu.
Spektrofotometer UV-Vis dapat digunakan untuk mengidentifikasi jenis
senyawa tanin. Kedudukan gugus hidroksi fenol bebas pada inti tanin dapat
ditentukan dengan menambahkan pereaksi geser ke dalam larutan cuplikan dan
mengalami pergeseran puncak serapan yang terjadi. Metode ini secara tidak
langsung juga berguna untuk menentukan kedudukan gula atau metal yang terikat
pada salah satu gugus hidroksi fenol. Pereaksi geser yang biasa digunakan adalah
NaOMe/NaOH, NaOAc, H3BO3, AlCl3, dan HCl (Markham, 1988).
Penetapan kadar tanin dengan spektrofotometri ditetapkan oleh Price and
Butler untuk daun sorgum, metode ini didasarkan atas reaksi pembentukan warna
yaitu reduksi ion ferri menjadi ferro oleh senyawa tanin dan polifenolik lainnya,
diikuti dengan pembentukan kompleks ferrisianida dan ion ferro. Warna yang
terbentuk diukur absorbansinya dengan menggunakan spektofotometer pada
panjang gelombang 720 nm (Muhtadi, 1999).
Sumartha (2000) mengukur kadar tanin pada buah salak dengan
spektofotometer yaitu pada air ditambahkan sodium tungstat, asam posfomolibdat
dan asam posforat. Campuran direflux selama 2 jam dan didinginkan sampai 25oC
dan larutkan sampai 1L dengan air. Air ditambahkan sodium karbonat anhidrat,
dilarutkan pada suhu 70 – 80oC dan didingikan satu malam. Larutan standar
dibuat dengan melarutkan asam tanat dalam air. Siapkan larutan baru untuk setiap
determinasi (1 mL = 0.1 mg tanat). Larutan ditambahkan dengan reagen Folin-
Denis dan larutan Na2CO3 dan setelah 30 menit diukur dengan panjang gelombang
760 nm terhadap blank yang disesuaikan pada absorbansi 0. Penentuan kadar
tanin dapat dilakukan dengan kalkulasi berikut:
tanin sebagai asam tanat= mg asam tanat x pelarutan x100ml sampel diukur xberat sampel x100
Universitas Indonesia
(2.3)
31
2.7.2.3 Metode Stiansy Test
Metode kuantitaif untuk menentukan kadar tanin salah satunya adalah
Stiansy Test. Reaksi yang terjadi didasarkan pada kereaktifan struktur flavonoid
dari tanin terkondensasi terhadap formaldehida. Hasil reaksi ini akan membentuk
endapan, sehingga secara kuantitatif dapat diketahui adanya tanin terkondensasi
(Giner, 1997). Kadar tanin dapat diketahui dengan metode Stainsy test, yaitu
sebanyak 0.5 gram sampel tanin dilarutkan dalam 175 ml aquadest, ditambahkan
28.5 ml HCl dan disimpan selama 5 jam. Endapan yang terbentuk dibilas dengan
akuades, endapan dikeringkan dalam oven dan didinginkan dalam desikator
kemudian ditimbang. Kadar tanin terkondensasi dihitung berdasarkan gravimetric
(Linggawati, 2002).
2.8 Inhibisi Enzim Xantin Oksidase dan Metode Pengujiannya
Inhibitor dari enzim xantin oksidase dapat berupa senyawa apapun yang
memiliki sifat inhibisi terhadap enzim xantin oksidase. Dengan adanya inhibitor
ini, proses pembentukan asam urat dari xantin dan hipoxantin dapat dikurangi
frekuensinya sehingga dapat digunakan sebagai pengobatan terhadap
hiperuresemia yang menyebabkan gout. Beberapa contoh inhibitor terhadap enzim
xantin okisdase yang telah ditemukan adalah allopurinol, oksipurinol, flavonoid,
dan febuxostat, dimana allopurinol dan oksipurinol merupakan obat kimia sintetis
yang telah dijelaskan pada bagian sebelumnya dan mempunyai berbagai efek
samping.
Inhibisi terhadap enzim xantin oksidase dapat dikategorikan menjadi dua
jenis berdasarkan strukturnya yaitu analog dengan purin atau tidak. Mode inihibisi
dari masing – masing inhibitor juga berbeda yaitu dapat menginhibisi secara
kompetitif ataupun non-kompetitif atau non-specific binding, misalnya oleh
senyawa tanin (Owen & John, 1999).
Untuk mengukur tingkat inhibisi dari suatu inhibitor, dapat digunakan istilah
persen inhibisi dan juga nilai IC50. Semakin rendah nilai IC50 suatu inhibitor, maka
semakin besar potensi senyawa tersebut sebagai suatu inhibitor. Nilai IC50
Universitas Indonesia
32
menunjukkan besarnya konsentrasi senyawa inhibitor yang dibutuhkan untuk
mendapatkan 50% inhibisi.
Pengujian terhadap aktivitas inhibisi enzim xantin oksidase pada umumnya
dilakukan dengan mengukur penurunan absorbansi pada dua buah larutan sampel,
yaitu yang ditambahkan ekstrak inhibitor dan yang tidak. Dengan mengukur
perbedaan nilai penurunan absorbansi dari larutan standar allopurinol, kita dapat
mengetahui persen inhibisi ekstrak tanaman yang digunakan.
2.9 State of The ArtBerbagai penelitian telah dilakukan sebelumnya untuk menemukan tanaman
dengan kandungan senyawa tanin tertinggi dan yang berpotensi sebagai inhibitor
enzim xanthin oksidase. Tanin dapat diekstraksi dengan menggunakan beberapa
metode yaitu metode maserasi, perkolasi, soxhlet dan sonikasi.
Metode ekstraksi maserasi adalah jenis metode ekstraksi tanpa pemanasan
dengan merendam sampel dengan pelarut selama 48 jam, kelemahan dari metode
maserasi adalah waktu yang dibutuhkan untuk mengekstrak senyawa target sangat
lama dan memungkinkan tanaman yang akan diekstrak terpapar udara sehingga
senyawa tanin teroksidasi, selain itu metode maserasi membutuhkan pelarut yang
cukup banyak. Sedangkan metode ekstraksi soxhlet dengan memanaskan pelarut
sampai semua senyawa target terekstrak secara kontinyu, kelemahan dari metode
ini adalah senyawa tanin dapat teroksidasi pada suhu di atas 98oC, sedangkan
soxhlet menggunakan pemanasan dengan suhu di atas 100oC. Dibandingkan
dengan metode lain, metode sonikasi dapat mengekstrak senyawa tanin dalam
waktu yang lebih cepat dan membutuhkan pelarut yang sedikit. Suhu yang
digunakan pada metode ini adalah suhu ruang yaitu 25oC sehingga tanin tidak
rusak atau mengalami oksidasi, tetapi hasil ekstraksi yang diperoleh belum
mengandung senyawa tanin yang murni, karena masih terdapat beberapa senyawa
kimia lain yang dapat mengganggu proses inhibisi enzim xanthine oxidase, maka
dalam penelitian ini akan dilakukan kombinasi metode ekstraksi sonikasi dan
isolasi senyawa tanin.
Universitas Indonesia
33
Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Lestari (2012) yang
mengekstraksi tanin dengan metode maserasi untuk menghambat aktivitas enzim
xanthin oksidase dari tanaman sidaguri diperoleh yield ekstrak sebesar 0,67%
dengan menggunakan pelarut etanol. Sa’adah (2010) melakukan ekstraksi
senyawa tanin dengan metode ekstraksi maserasi dari tanaman belimbing wuluh
menghasilkan yield ekstrak sebesar 10,78%. Kemudian Marnoto, et al (2012)
mengekstraksi tanin yang dimanfaatkan sebagai bahan pewarna alami dari
tanaman putri malu menggunakan metode soxhlet menghasilkan yield ekstrak
sebesar 4,4% menggunakan pelarut etanol. Berikut adalah tabel state of the art
dari penelitian ini.
Tabel 2. 1. Penelitian Mengenai Senyawa Tanin
Tanaman Sumber Senyawa Tanin
Pemanfaatan
MetodeInhibitor enzim xanthin oksidase
Pengawet alami
Sidaguri (Lestari, 2012) Maserasi
Daun Belimbing Wuluh(Sa’adah,
2010)Maserasi
(Chaerunissa, 2013)
Sonikasi
Daun Putri Malu
(Marnoto et al, 2012)
Soxhletasi
(Hartanto,2
013)Sonikasi
Daun Jambu Biji (Auliawati, 2013) Sonikasi
Universitas Indonesia
BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
Untuk melakukan ekstraksi terhadap daun belimbing wuluh (Averrhoa
bilimbi L) dan juga metode analisa lainnya, terdapat metodologi peneletian
tertentu yang harus diikuti agar hasil yang didapat sesuai dengan yang diharapkan.
Oleh karena itu, dalam bab ini akan dijelaskan mengenai beberapa bagian dari
metodologi penelitian, yang terdiri dari prosedur penelitian, alat dan bahan yang
dibutuhkan, pengumpulan data, variabel – variabel yang ada, serta teknik analisis
yang digunakan.
3.1 Diagram Alir PenelitianProsedur penelitian yang akan dilakukan terdiri dari beberapa langkah dasar
berikut ini:
34
35
PENGUMPULAN BAHAN TANAMAN DAN PREPARASI AWAL
Daun dikeringkan menggunakan oven Daun dipulverasi dengan High Speed Multifunctional Pulverizing selama 2
menit
EKSTRAKSI TANAMAN
Ekstraksi dilakukan dengan metode sonikasi menggunakan pelarut Aseton 70% (7:3) dengan perbandingan massa daun per volume pelarut 1:10
dilanjutkan dengan filtrasi vakum dengan corong buchner dan pemekatan filtrate dengan rotary evaporator pada suhu 50oC
ANALISIS KUALITATIF TANINUji kualitatif tanin ini bertujuan untuk mengidentifikasi jenis senyawa tanin
yang terdapat dalam daun belumbing wuluh
UJI INHIBISI XANTIN OKSIDASEAnalisis aktivitas enzim xantin oksidase oleh senyawa tanin dilakukan
dengan metode Owen&Johns
ANALISIS KUANTITATIF SENYAWA TANINAnalisis kuantitatif tanin dilakukan dengan metode stainsy test
ISOLASI TANIN Eluen terbaik yang diperoleh dari metode sebelumnya digunakan untuk
mengisolasi tanin. Tanin diisolasi dengan menggunakan metode kromatografi lapis tipis preparatif
PENCARIAN ELUEN TERBAIK SENYAWA TANIN Pencarian eluen terbaik untuk senyawa tanin dilakukan dengan kromatogradi
lapis tipis analitik.
Gambar 3. 1. Diagram Alir Penelitian Isolasi Tanin dari Daun Belimbing Wuluh
36
3.2 Alat dan Bahan
Untuk melakukan penelitian ini, alat dan bahan yang dibutuhkan adalah
sebagai berikut:
3.2.1 AlatAlat – alat yang dibutuhkan untuk percobaan ini adalah sebagai berikut:
Tabel 3. 1. Daftar alat beserta fungsinya
No. ALAT FUNGSI
1 Timbangan digital Untuk menimbang bahan – bahan penelitian
2 Beaker glass Sebagai wadah bahan – bahan penelitian
3 Botol sampel Sebagai wadah bahan – bahan penelitian
4 Pipet tetes Untuk mengambil larutan dalam volume besar
5 Kertas saring Untuk menyaring sampel
6 Mikropipet Untuk mengambil larutan dalam volume kecil
7 Kaca arloji Sebagai wadah untuk penimbangan massa
sampel
8 Rottary evaporator Untuk menguapkan sampel hasil ekstraksi
9 High speed multifunction
pulverizing machine
Untuk menghaluskan sampel daun belimbing
wuluh menjadi serbuk daun
10 Oven Untuk mengeringkan sampel pada uji tanin
11 Desikator Untuk mendinginkan sampel
12 Ultrasonic cleaner Untuk mengekstraksi sampel
13 Pengaduk kaca Untuk mengaduk larutan agar tercampur secara
homogeny
14 Corong buncher Untuk memfiltrasi sampel
15 Spektrofotometer UV-Vis Untuk mengukur nilai absorbansi sampel
16 pH meter Untuk mengukur pH larutan uji
17 Kuvet Sebagai wadah sampel pada spektofotometer
18 Tabung reaksi Sebagai wadah untuk uji kualitatif
19 Plat KLT silika G60 F254 Sebagai alat untuk isolasi senyawa tanin
20 Chamber KLT Sebagai alat untuk isolasi senyawa tanin
Universitas Indonesia
37
21 Centrifuge Sebagai alat untuk isolasi senyawa tanin
3.2.2 BahanBahan – bahan yang dibutuhkan untuk percobaan ini adalah sebagai berikut:
Tabel 3. 2. Daftar bahan beserta fungsinya
No. BAHAN FUNGSI
1 Daun Belimbing wuluh muda Sebagai sumber senyawa tanin
2 Aseton Pelarut dan eluen
3 Akuades Pelarut
4 Asam askorbat Mencegah terjadinya oksidasi tanin
5 Kloroform Eluen
6 Etil asetat Eluen
7 FeCl3 1% Sebagai reagen dalam stainsy test
8 HCl 0.28 N Digunakan dalam stainsy test
9 HCl pekat Eluen
10 NaoH Pelarut xantin dan pengatur pH xantin
11 FeCl3 Indikator senyawa tanin
12 HCl Pengasam, pengatur pH xantin dan buffer
13 Xantin (SIGMA) Substrat reaksi pembentukan asam urat
14 Xantin oksidase Senyawa pembentuk asam urat
15 Formaldehid 37% Reagen tanin pada stainsy test
16 Allupurinol 300 mg Larutan standar dalam uji aktivitas enzim xantin
oksidase
17 Buffer fosfat Sebagai buffer untuk mengatur pH larutan
18 KH2PO4 Bahan untuk membuat buffer fosfat
19 K2HPO4 Bahan untuk membuat buffer fosfat
20 Toluene Eluen
21 Ferri sulfat Sebagai pendeteksi dalam isolasi senyawa tanin
22 Asam asetat glasial Eluen
23 Asam asetat Eluen
24 n-butanol Eluen
Universitas Indonesia
38
25 Metanol Eluen
3.3 Lokasi PenelitianPenelitian ini akan dilakukan di Laboratorium Dasar Proses Kimia dan
Laboratorium Bioproses Departemen Teknik Kimia, Fakultas Teknik, Universitas
Indonesia, Depok, Jawa Barat, Indonesia.
3.4 Prosedur Percobaan
3.4.1 Pengumpulan Bahan Tanaman dan Preparasi Awal Daun Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L)
Mengumpulkan daun – daun belimbing wuluh yang masih muda dari
pekarangan rumah. Setelah daun didapatkan, dilakukan beberapa preparasi yaitu:
1. Mencuci daun dengan air mengalir hingga bersih
2. Mengeringkan daun yang telah dicuci dengan menggunakan oven pada
suhu 60oC selama 5 jam.
3. Mempulverasi daun yang sudah kering tersebut dengan High speed
Multifunction Pulverizing Machine selama dua menit sehingga menjadi
serbuk daun halus
4. Menyimpan serbuk daun halus dalam wadah yang kering dan tertutup
rapat hingga dilakukan proses ekstraksi.
3.4.2 Ekstraksi Daun Belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L)1. Serbuk daun yang telah disiapkan sebelumnya ditimbang sebanyak 25
gram menggunakan kaca arloji dan timbangan digital.
2. Menyiapkan pelarut etanol 70% sebanyak 250 mL dalam beaker glass agar
perbandingan antara massa daun dengan volume pelarut adalah 1:10
(Rachmawati, 2006).
3. Mencampurkan serbuk daun yang telah disiapkan ke dalam beaker glass
yang telah berisi pelarut sebanyak 250 mL dan dimasukkan ke dalam
Ultrasonic cleaner
4. Ultrasonic cleaner diatur agar beroperasi pada frekuensi 42 kHz selama 50
menit pada suhu ruang.
Universitas Indonesia
39
5. Menyaring larutan ekstrak yang didapat dengan pompa vakum dan corong
buncher.
6. Mengeringkan ekstrak yang telah disaring dengan Rotary Evaporator pada
suhu 50oC hingga terbentuk pasta.
3.4.3 Analisis Kualitatif untuk Identifikasi Jenis Senyawa Tanin dari Daun
Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L)
Analisis kualitatif dilakukan dengan metode yang dilakukan oleh Sa’adah
(2010).
1. Ekstrak pekat hasil ekstraksi dimasukkan ke dalam 2 tabung reaksi masing
– masing sebanyak 0,5 gram.
2. Ekstrak pada tabung pertama ditambahkan 1 – 2 mL akuades dan 1 – 2
tetes FeCl3 1%.
3. Kemudian mengamati hasil, apabila perubahan warna menunjukkan warna
hijau kecoklatan atau biru kehitaman menandakan bahwa terdapat tanin
jenis gallotonin atau asam galat yang merupakan tanin terhidrolisis.
4. Ekstrak pada tabung kedua ditambahkan beberapa tetes formaldehid 3% :
asam klorida 1 N (2:1) dan dipanaskan sampai suhu 90oC.
5. Jika terbentuk endapan merah muda menunjukkan bahwa terdapat jenis
tanin proantosianidin atau katekol yang merupakan tanin terkondensasi.
3.4.4 Pencarian Eluen Terbaik untuk Senyawa Tanin menggunakan Kromatografi Lapis Tipis Analitik (KLT Analitik)
1. Menyiapkan plat silika G 60 F254 yang telah diaktifkan dengan pemanasan
dalam oven pada suhu 100oC selama 10 menit. Masing – masing plat
mempunyai ukuran 1 x 10 cm.
2. Menyiapkan ekstrak tanin hasil dari metode sebelumnya kemudian
ditotolkan pada jarak 1 cm dari tepi bawah plat dengan pipa kapiler
kemudian dikeringkan.
3. Mengelusi plat yang telah ditotolkan ekstrak tanin dengan fasa gerak
toluen : etil asetat (3:1) dengan pendeteksi ferri sulfat (Yuliani, 2003),
forestall (asam asetat glasial : akuades : HCl pekat) (30:10:3) (Nuraini,
2002), etil asetat : metanol : asam asetat (6:14:1) dengan pendeteksi
Universitas Indonesia
40
aluminium klorida 5% (Olivina, 2005), n-butanol : asam asetat : air (4:1:5)
(Sudarwanti, 2004), metanol : etil asetat (4:1) dengan pendeteksi AlCl3 1%
(Lidyawati, 2006), etil asetat : kloroform : asam asetat 10% (15 : 5 : 2).
4. Menghentikan elusi setelah gerakan larutan eluen sampai kepada garis
batas.
5. Mengukur harga Rf dari masing – masing noda yang terbentuk,
selanjutnya dengan memperhatikan bentuk noda pada berbagai larutan
eluen ditentukan perbandingan larutan eluen yang paling baik untuk
keperluan preparatif. Noda yang terbentuk diperiksa dengan lampu UV-
Vis pada panjang gelombang 254 nm dan 366 nm.
3.4.5 Isolasi Senyawa Tanin dari Ekstrak Kasar Daun Belimbing Wuluh
sesuai dengan Eluen Terbaik dengan KLT preparatif
1. Menyiapkan plat G 60 F254 dengan ukuran 10 x 20 cm.
2. Melarutkan ekstrak pekat hasil ekstraksi dengan aseton – air, kemudian
ditotolkan sepanjang plat pada jarak 1 cm dari garis bawah dan 1 cm dari
garis tepi.
3. Mengelusi plat yang telah ditotolkan dengan larutan menggunakan dua
eluen yang memberikan pemisahan terbaik dari KLT analitik.
4. Menghentikan elusi setelah gerakan larutan elusi telah sampai pada garis
batas.
5. Mengukur nilai Rf dari noda yang terbentuk
6. Memeriksa noda – noda yang terbentuk di bawah sinar UV pada panjang
gelombang 254 nm dan 366 nm. Senyawa tanin diduga mempunyai nilai
Rf 0,61 – 0,62.
7. Mengerok noda – noda hasil KLT preparatif pada plat yang mendekati
harga Rf tanin dan melarutkannya di dalam pelarut aseton : air (7:3)
8. Mensetrifuge untuk mengendapkan silika yang terikut lalu dihasilkan
supernatant
9. Supernatant dipekatkan dengan gas N2 atau desikator vakum.
10. Kemudian dihasilkan isolat pekat.
3.4.6 Analisis Kuantitatif Senyawa Tanin
Universitas Indonesia
41
Kandungan tanin dalam ekstrak daun belimbing wuluh yang didapatkan diuji
dengan metode stiansy test sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh
Linggawati (2002). Tahapan analisisnya sebagai berikut:
1. Melarutkan 1 gram isolat sampel dalam 175 ml akuadest
2. Menambahkan 28.5 ml HCl 0.28 N dan 1 ml formaldehid 37% ke dalam
larutan nomor 1
3. Mengaduk campuran larutan selama lima menit dan menyimpannya
selama 5 jam.
4. Menyaring campuran larutan tersebut
5. Membilas endapan yang terbentuk dengan akuades
6. Mengeringkan endapan dalam oven dan mendinginkannya dalam desikator
untuk selanjutnya ditimbang dengan neraca dan diukur kandungan
taninnya melalui persamaan berikut:
Kadar tanin (% bb )=BE sebelum pemanasan−BE setelah pemanasan
BE sebelum pemanasanx100 %
Dimana BE adalah berat endapan isolat daun belimbing wuluh.
3.4.5 Uji Inhibisi Xantin Oksidase
Aktivitas enzim xantin oksidase dari ekstrak kemudian diuji menggunakan
xantin sebagai substrat melalui pengukuran spektrofotometri sesuai prosedur
pengukuran kontinyu yang dilakukan oleh Owens and Johns (1999) dengan
penginkubasian larutan sebagai modifikasinya. Tahapan untuk pengujian inhibisi
ini dibagi menjadi dua bagian, yaitu tahapan preparasi dan tahapan analisis kadar
inhibisinya.
3.4.5.1 Tahapan Preparasi
Tahapan preparasi bahan adalah tahapan untuk membuat berbagai macam
larutan uji. Pada tahapan ini, ada berbagai prosedur yang dilakukan untuk
membuat larutan uji, yaitu:
1. Pembuatan larutan Xantin 0,15 mM
Universitas Indonesia
(3.1)
42
Melarutkan 0,002 g xantin dalam beberapa tetes NaOH 1M yang
kemudian diencerkan dengan akuades hingga 100 mL. pH kemudian diatur
hingga 7,5 dengan menggunakan HCL dan NaOH
2. Pembuatan Buffer Fosfat 50 mM
Mencampurkan 0,2 g KH2PO4 dengan 0,6 g K2HPO4 dan dilarutkan dengan
100 mL akuades. pH buffer kemudian diatur hingga 7,5 dengan
menambahkan HCl dan KOH.
3. Pembuatan larutan Xantin oksidase 0,2 U/mL
Mencampurkan 0,006 mL larutan Xantin oksidase dengan 0,01 mL larutan 50
mM buffer fosfat dingin sehingga menghasilkan 0,105 mL Xantin Oksidase
0,2 U/mL.
4. Pembuatan Larutan Isolat Dengan konsentrasi 0.4 mg/mL
Mencampurkan 2 mg isolat yang akan diuji dengan 5 mL larutan 50 mM
buffer fosfat.
3.4.5.2 Tahapan Analisis
Tahapan analisis merupakan tahapan inti pada penelitian ini karena pada
tahapan ini dilakukan pengujian dari isolat daun belimbing wuluh dari dua eluen
terbaik dan allupurinol sebagai kontrol dari ekstrak kasar ini.Tujuan dari tahapan
ini adalah untuk mengetahui eluen mana yang paling baik dalam menghinbisi
Xantin oksidase serta benda apa yang terbaik untuk menghambat Xantin oksidase.
Tahapan analisis yang dilakukan adalah sebagai berikut:
1. Membuat larutan dasar yang dibutuhkan. Larutan dasar yang dibutuhkan
adalah: 0,75 mL ekstrak tanaman atau allupurinol (0,4 mg/ml larutan 50
mM buffer fosfat, pH 7,5), 1 mL larutan 50 mM Buffer Fosfat pH 7,5, 0,1
mL larutan xantin 15 mM, dan 0,1 mL larutan xantin oksidase 0,2 U/mL.
2. Mencampurkan 0,1 mL larutan xantin 15 mM ke dalam 1 mL larutan 50
mM Buffer Fosfat pH 7,5, dan 0,1 mL larutan xantin oksidase 0,2 U/mL
yang bertindak sebagai larutan blanko. Universitas Indonesia
43
3. Mencampurkan 0,75 mL isolat (0,4 mg/ml larutan 50 mM buffer fosfat,
pH 7,5), 0,10 mL larutan xantin 15 mM, 1 mL larutan 50 mM Buffer
Fosfat pH 7,5 , dan 0,105 mL larutan xantin oksidase 0,2 U/mL yang
bertindak sebagai larutan ekstrak yang bertindak sebagai inhibitor.
4. Mencampurkan 0,75 mL allupurinol 300 mg (0,4 mg/ml larutan 50 mM
buffer fosfat, pH 7,5), 0,10 mL larutan xantin 15 mM, 1 mL larutan 50
mM Buffer Fosfat pH 7,5 , dan 0,1 mL larutan xantin oksidase 0,2 U/mL
yang bertindak sebagai larutan ekstrak yang bertindak sebagai inhibitor.
5. Menginkubasikan larutan tersebut selama 10 menit pada suhu 25oC
sebelum direaksikan.
6. Mereaksikan larutan tersebut ke dalam kuvet dan mengukur perubahan
nilai absorbansi dari ke empat larutan pada panjang gelombang 295 nm
(menunjukkan terbentuknya asam urat) setiap 30 detik selama 10 menit.
Pada saat mengukur perubahan nilai absorbansinya, larutan yang berisi
buffer yang berfungsi sebagai larutan blanko dimasukkan bersamaan
dengan larutan uji ke dalam Spektofotometer UV-Vis
7. Menghitung nilai aktivitas inhibisi Xantin oksidase diekspresikan dalam
persen inhibisi sesuai dengan persamaan: (1-A/B)*100% dimana A adalah
perubahan absorbansi tanpa ekstrak tanaman (blanko) dan B adalah
perubahan absorbansi dengan ekstrak tanaman.
%inhibisi= A−BA
x 100 %
3.5 Variabel Penelitian
Pada penelitian ini, variabel – variabel yang digunakan terbagi menjadi dua,
yaitu variabel bebas dan variabel terikat. Variabel bebas dari penelitian ini
diantaranya adalah jenis eluen yang digunakan untuk mengisolasi, yaitu toluen :
etil asetat (3:1), forestall (asam asetat glasial : akuades : HCl pekat) (30:10:3), n-
butanol : asam asetat : air (4:1:5), metanol : etil asetat (4:1), etil asetat :
kloroform : asam asetat 10% (15 : 5 : 2). Sedangkan, variabel terikat yang
dipengaruhi oleh variasi – variasi di atas adalah yield tanin yang didapatkan dari
isolat daun belimbing wuluh
Universitas Indonesia
(3.2)
44
3.6 Data yang dikumpulkan
Data yang dikumpulkan pada percobaan ini berupa data persen aktivitas
inhibisi enzim xanthin oksidase dan juga nilai konsentrasi senyawa tanin dalam
daun belimbing wuluh yang dapat diperoleh dari isolasi dengan kromatografi lapis
tipis preparative dengan menggunakan eluen terbaik hasil kromatografi lapis tipis
analitik.
Universitas Indonesia
45
DAFTAR PUSTAKA
Arland. 2006. Belimbing Wuluh. Jakarta: BPPT.
Auliawati, Yenni. 2013. Ekstraksi Tanin dari Daun Jambu Biji (Psidium guajava)
sebagai Inhibitor Enzim Xanthin Oksidase untuk Menurunkan Kadar Asam
Urat. [Skripsi]. Depok: Universitas Indonesia.
Bate, S. 1972. Detection And Determinant of Ellagitannin:Phytochemistry And
International Journal Of Plant Biochemistry Vol II. England: Pragaman
Press.
Brunton, L. L., Lazo, J. S., & Parker, K. L. 2005. Goodman & Gilman’s The
Pharmacological Basis of Therapeutics, 11th Edition. San Diego: Goodman
& Gilman’s
Chaerunissa, A. L. 2013. Ekstraksi Kasar Tanin dari Daun Belimbing Wuluh
sebagai Inhibitor Enzim Xantin Oksidase. [Skripsi]. Depok: Universitas
Indonesia.
Dalimatra S. 2006. Resep Tumbuhan Obat untuk Asam Urat. Bogor: Penebar
Swadaya.
Deny, Wiryawan. 2007. Pemanfaatan Tanin Sebagai Perekat. Jakarta: PT.
Erlangga.
Hagerman, A.E, M.E. Rice and N.T. Richard 1998. Mechanisme of Protein
Precipitation of Two Tannins, Pentagalloyl Glucose and Apichatecin16 (4-
8) Cathechin (Procyanidin). Journal of Agri Food Chem. Vol 46.
Hakim L. 2005. Inhibisi formula ekstrak sidaguri (Sida rhombifolia L) dan seledri
(Apium graveolens) pada enzim xantin oksidase seta efek anti inflamasi
[Skripsi]. Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Universitas Indonesia
46
Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia. Padmawinata K, Soediro I, Penerjemah;
Niksolihin S, editor. Bandung: ITB. Terjemahan dari Phytochemical
Methode.
Hartanto, Andrian. 2013. Ekstraksi Senyawa Tanin dari Daun Putri Malu (Mimosa
pudica) dan Aktivitas Inhibisinya terhadap Enzim Xanthine Oxidase.
[Skripsi]. Depok: Universitas Indonesia.
Hidayat R. 2007. Kinetika inhibisi flavonoid dalam sidaguri (Sida rhombifolia)
terhadap aktivitas enzim xantin oksidase [tesis]. Bogor: Institut Pertanian
Bogor.
Johnstone A. 2005. Gout; the disease and non-drug treatment. Hospital Pharm.
12:391 – 393.
Katzung, B. G. 2006. Basic and Clinical Pharmacology 10th Edition. San
Fransisco: The Mc. Graw-Hills Companies, Inc.
Kumar, V., Abbas, A., & Fausto, N. 2007. Robbins and Cotran’s Pathologic
Basis of Disease Seventh Edition. Saunders
Linggawati, A. 2002. Pemanfaatan Tanin dari Kulit Kayu Bakau sebagai
Pengganti Gugus Fenol pada Resin Fenol Formaldehid. Prosiding Seminar
Nasional Teknik Kimia 2011.
Muhtadi, Setiawan. 1999. Penetapan Kadar Tanin dengan Spektrofotometri.
Bandung: ITB.
Owen, P. L., & Johns T. 1999. Xanthine oksidase inhibitory activity of
northeastern North America plant remedies for used for gout. Journal of
Ethnopharmacology, 64: 149 – 160
Robinson, T. 1995. Kandungan Senyawa Organik Tumbuhan Tinggi (Prof. Dr.
Kosasih Padmawinata, Penerjemah). Bandung: ITB Press.
Sa’dah, Lailis. 2010. Isolasi dan Identifikasi senyawa tanin dari daun belimbing
wuluh. [skripsi]. Malang: Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim.
Universitas Indonesia
47
Tyler, C.B. 1947. Organic Chemistry for Students of Agriculture. London 2nd
Allan.
Umamaheswari et al.. 2007. Xanthine oxidase inhibitory activity of some indian
medical plant. J Ethnopharmacol Communication 109:547-551.
Ummah., KM 2010.Ekstraksi dan pengujian aktivitas antibakteri senyawa tanin
pada daun belimbing wuluh (kajian variasi pelarut). [Skripsi]. Malang:
Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim.
Universitas Indonesia