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LEVERA Lebensmittelversorgung und Analytik BMBFProgramm „Forschung für die zivile Sicherheit“ Themenfeld Sicherung der Lebenmittel und Lebensmittelwarenketten“

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LEVERALebensmittelversorgung und Analytik

BMBF‐Programm „Forschung für die zivile Sicherheit“Themenfeld „Sicherung der Lebenmittel und „ g

Lebensmittelwarenketten“

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Forschungsverbund LEVERAJustus‐Liebig‐Universität, Fachbereich VeterinärmedizinInstitut für Tierärztliche NahrungsmittelkundeProfessur für MilchwissenschaftenProfessur für Milchwissenschaften

Ludwig‐Maximilians‐Universität, Tiermedizinische FakultätVeterinärwissenschaftliches DepartmentpLehrstuhl für Hygiene und Technologie der Milch

Technische Universität MünchenDepartment ChemieLehrstuhl für Analytische Chemie

hR‐Biopharm AGDarmstadt

Milchprüfring Bayern e.V. Milchindustrieverband e.V.

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LEVERAZi l St t iZiele – Strategie

Schnelle und einfache Multianalytik vonKrankheitserregern und Toxinen in Lebensmitteln

auf der Basis immunchemischer und molek larbiologischer Detektion

Arbeitsprogramm

molekularbiologischer Detektion

• Immunreagenzien für Mikroorganismen/Toxine

• Instrumenteller Multianalyt-Chip (MCR3)y p ( )

• Non-instrumenteller (Multi-)-Schnelltest (Dipstick, lateral-flow)

• Lateral-flow PCR (Dipstick, lateral-flow)

• Immunchemische Isolierung/Aufkonzentrierung (MAS)

• Validierung/Referenzanalysen/Anwendungsstudien

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Microarray‐Chiptechnologie (MCR3) Monolithische IAC‐Reinigung

Antikörperp

On‐site Schnelltest‐Diagnostik Dipstick‐PCR

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Lebensmittelversorgung und Analytik

LEVERA – Teilvorhaben 1P l kl l A ikö d E bli IPolyklonale Antikörper und Etablierung von Immuntests

Professur für MilchwissenschaftenFachbereich VeterinärmedizinJustus Liebig UniversitätJustus‐Liebig‐UniversitätLudwigstrasse 21, 35390 Gießen

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Identifizierung und Charakterisierung Enterobacteriaceae‐Isolate unterschiedlicher Herkunft

Gattungen Anzahl der Isolate Herkunft

Klebsiella 78 Milch, Käse, Säuglingsnahrung, Salat 

Escherichia 205 Milch Käse Säuglingsnahrung Salat FleischEscherichia 205 Milch, Käse, Säuglingsnahrung, Salat , Fleisch

Yersinia 4 Klinische Isolate

Cronobacter 270 Säuglingsnahrung, Nudeln, Salat, Produktionsumfeld

Citrobacter 29 Milch, Käse, Säuglingsnahrung, Salat , Fleisch

Proteus 10 Käse, Hackfleisch

Salmonella 25 Fleisch, Milch

Serratia 16 Käse, Säuglingsnahrung

P 33 Kä Sä li hPantoea 33 Käse, Säuglingsnahrung

Enterobacter 75 Säuglingsnahrung, Käse, Produktionsumfeld

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Identifizierung und Charakterisierung von Cronobacter spp IsolatenIdentifizierung und Charakterisierung von Cronobacter spp.‐Isolaten unterschiedlicher Herkunft

Verwendete Isolate und Referenzstämme

• 259 Cronobacter‐Isolate unterschiedlicher Herkunft• Säuglingsnahrung (aus Deutschland und Indonesien)• Sonstige Milchtrockenerzeugnisse

Verwendete Isolate und Referenzstämme

• Sonstige Milchtrockenerzeugnisse• Trockenteigwaren• Müsli• Fertigsalateg• Wasser• Produktionsumfeld (Säuglingsnahrung)

• 10 Referenzstämme• 10 Referenzstämme C. sakazakii ATCC 29544, DSM 4485; C. malonaticus DSM 18702; C. turicensis DSM 18703; C. muytjensii DSM 21870; C. dublinensis subsp. dublinensis DSM 18705; C. dublinensis subsp. lausannensis DSM 18706; C. dublinensis subsp. lactaridi DSM 18707 C di ti LMG 26250 C i li NCTC 952918707; C. condimenti LMG 26250; C. universalis NCTC 9529

• 5 Klinische Isolate(Laboratorium für Mikrobiologie, BCCM/LMG, Universität Gent, Belgien)  Cronos=Kronos=Saturn 

devouring his sonFrancisco de Goya,c. 1819‐1823Museo del Prado, Madrid

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Identifizierung und Charakterisierung von Cronobacter spp Isolaten

Identifizierung und Speziesdifferenzierung der Isolate

Identifizierung und Charakterisierung von Cronobacter spp.‐Isolaten unterschiedlicher Herkunft

Alle Isolate (n=259) als Cronobacter spp. identifiziert 

Spezies Anzahl der Isolate Biotyp Anzahl der IsolateSpezies Anzahl der Isolate Biotyp Anzahl der Isolate

C. sakazakii 213 128

1039628

8a13*

2525

C. malonaticus 36 59

2610

Typisches Wachstum 

C. turicensis 9 16 9

C. muytjensii 1 15 1

von Cronobacter spp. auf CASO‐Agar, Druggan‐Forsythe‐Iversen (DFI)‐Agar, 

Enterobacter sakazakii‐Isolation‐Agar (ESIA)

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Identifizierung und Charakterisierung von Cronobacter spp IsolatenIdentifizierung und Charakterisierung von Cronobacter spp.‐Isolaten unterschiedlicher Herkunft

C. muytjensiiC t i iC. turicensisC. malonaticusC. sakazakii

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Identifizierung und Charakterisierung von Cronobacter spp IsolatenIdentifizierung und Charakterisierung von Cronobacter spp.‐Isolaten unterschiedlicher Herkunft

Serotypisierung mittels Multiplex PolymerasekettenreaktionSerotypisierung mittels Multiplex PolymerasekettenreaktionAmplifizierung der O‐Antigen‐Gene O1 bis O7

Serotyp Anzahl  Isoliert ausypder Isolate

O1 15 Säuglingsnahrung,Reduktionskost

O3O7

O1Reduktionskost

O2 19 Säuglingsnahrung, Umweltproben, Milchpulver

O1

O2

O‐Antigen‐Gene der C. sakazakii‐IsolateO3 7 Säuglingsnahrung

O4 10 Säuglingsnahrung

O5 ‐

O6 ‐

O7 7 SäuglingsnahrungO7 7 Säuglingsnahrung,Salat

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Präparation der Immunogene

Keimzahlbestimmung20 ml LB‐Bouillon

Präparation der ImmunogeneYersinia spp., Cronobacter spp., Campylobacter spp., Enterobacteriaceae (Klebsiella spp.)

Referenzstamm / Isolat

Keimzahlbestimmung auf CASO‐Agar im Doppelansatzbei 37°C für 24h

20 ml LB Bouillon bei 37°C für 24h

1 ml1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml

10‐1 10‐2 10‐3 10‐4 10‐5 10‐6 10‐7

je 9 ml Ringerlösung

Waschen mit 5 ml sterilem PBS‐Puffer (Zentrifugieren bei 4000 × g,  4°C, für 10 min)

Inaktivierunginkubator

Inaktivierte Bakteriensuspension (1 ml Immunogen, ca. 108‐109 KbE)

KontrollausstrichKontrollausstrich auf CASO Agar (100 µl)bei 37°C für 24 h 

Immunisierung

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C b tCronobacter spp.

Optimierung und Standardisierung der Testdauer

1.2

• Beschichtung: Anti‐

Optimierung und Standardisierung der Testdauer

1Test 1 (180 Minuten)

Test 2 (80 Minuten)

Beschichtung: AntiCronobacter pAk 1:6000

• Antigen: Immunogene• Markierte Anti‐

0.6

0.8xt

inkt

ion

Cronobacter‐pAk 1:3000• Streptavidin‐Peroxidase

1:50.000

0.4

Ex

0

0.2kein wesentlicher Unterschied zwischen inaktivierten und lebenden 

1.00E+04 1.00E+05 1.00E+06 1.00E+07 1.00E+08 1.00E+09Keimzahl [KbE/ml]

Keimen in Bezug auf Reaktivität des Testsystems

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C b tCronobacter spp.

Screening Reaktivität mit verschiedenen   C. sakazakii‐Serotypen von ‐Isolaten

1.4

g yp

1

1.2

0.6

0.8

Extin

ktio

n

0.2

0.4

0O1 O2 O3 O4 O7

Serotyp

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Enterobacteriaceae (Klebsiella spp )Enterobacteriaceae (Klebsiella spp.)

Verwendete Stämme

Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae DSM 30104 Typstamm, Serotyp O9 

Kl b i ll i b DSM 16358 T S O3Klebsiella pneumoniae subsp. ozaenae DSM 16358 Typstamm, Serotyp O3

Klebsiella oxytoca DSM 5175 Typstamm, Serotyp O3

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E t b t i (Kl b i ll )Enterobacteriaceae (Klebsiella spp.)

Titerkontrolle

35

Indirekte ELISA‐ Testanordnung

25

30Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae DSM 30104

Klebsiella pneumoniae subsp. ozaenae DSM 16358

20

000)

Klebsiella oxytoca DSM 5175

10

15

Titer (x10

5

0Woche 0 Woche 4 Woche 8 Woche 12 Woche 17

Immunisierungsdauer

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E t b t i (Kl b i ll )Enterobacteriaceae (Klebsiella spp.)

Screening

Stamm‐ bzw. Isolatbezeichnung positiv negativ

Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae 26 0

g

p p p

Klebsiella pneumoniae subsp. ozaenae 4 0

Klebsiella oxytoca 20 0Escherichia coli DSM 5802 Yersinia enterocolitica DSM 4780 0 8Escherichia coli DSM 5802, Yersinia enterocolitica DSM 4780, Cronobacter sakazakii DSM 4485, Salmonella typhimurium ATCC 19585, Citrobacter freundii DSM 30039, Proteus mirabilis DSM 788, Shigella sonnei

0 8

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Isolierung und Charakterisierung von Staphylococcus aureus Enterotoxin H

Phänotypische und Molekularbiologische Identifizierung und Charakterisierung der 

Isolierung und Charakterisierung von Staphylococcus aureus‐Enterotoxin H

S. aureus‐Isolate

Herkunft Anzahl Proben Anzahl Isolate

Käseproben  21 72

Viertelgemelksproben 31 Betriebe, 137 Tiere 168

Mastitisuntersuchung 6 6Mastitisuntersuchung 6 6

Schafmilch 1 1

Teigwaren 3 3

Klinische Isolate 8 8

Referenz‐ und Kontrollstämme

19Kontrollstämme

Sonstige Isolate aus Lebensmitteln

4 4

Gesamt 281

Untersuchung der Isolate auf Enterotoxinbildungsvermögen

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Isolierung und Charakterisierung von Staphylococcus aureus Enterotoxin H

Untersuchung auf Enterotoxinbildungsvermögen mittels

Isolierung und Charakterisierung von Staphylococcus aureus‐Enterotoxin H

Untersuchung auf Enterotoxinbildungsvermögen mittels Polymerasekettenreaktion sea bis seu

16 S. aureus‐Isolate positiv für das seh‐Gen (375 bp)1     2    3    4    5    6    7    8   9   101     2    3    4    5    6    7    8   9   10

375 bp

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Herstellung von pAk zum Nachweis pathogener Keime 

Antikörper gegen

Yersinia spp.

Campylobacter sppCampylobacter spp.

S. aureus

B.  cereus

C. perfringens

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Teilvorhaben 2

Hybridomaentwicklung und Anwendung monoklonaler Antikörper (mAk)

Lehrstuhl für Hygiene und Technologie der Milch, Tierärztliche FakultätLudwig-Maximilians-Universität München

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Arbeitsschwerpunkte

Herstellung von monoklonalen Antikörpernzum Nachweiszum Nachweis

von

Bakteriellen Proteinen Bakterien Sporenp

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Bacillus cereus: Enterotoxine

• Enterotoxine: Dreikomponentenproteine: Nhe, Hbl

• Ziel: Herstellung von Antikörpern zum Nachweis der Hbl-

Hbl‐BPDB‐ID: 2NRJ

Bildung

• Stand: Nachweis der Toxin-komponenten Hbl-L1 und Hbl-B mittels Immunoblot

Immunoblot

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Bacillus cereus: Cereulid

• Emetisches Toxin

• Ziel: Herstellung von Antikörpern zum Nachweis in• Ziel: Herstellung von Antikörpern zum Nachweis in Lebensmitteln

• S Ü f S• Stand: Überprüfung verschiedener B. cereus Stämme mit

Zellkulturtest und Produktion von Cereulid zur

AntikörperherstellungAntikörperherstellung

Cereulid

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Staphylokokkenenterotoxine (SE)

• Ziel: Herstellung von Antikörpern gegen SEH zum Nachweis in Lebensmitteln

SEHPDB ID: 1ENF

• Stand: SEH wurde rekombinant exprimiert und gereinigt

Aminosäurensequenz-Vergleich der von Holden et al 2004 publizierten SEH-Sequenz (Zeile 1) mitAminosäurensequenz Vergleich der von Holden et al., 2004 publizierten SEH Sequenz (Zeile 1) mit den generierten E. coli Klonen A2 (DSM 25693) und E1 (DSM 19045) (entsprechend Zeilen 2.-5.).

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Clostridium perfringens

•• Ziel: Herstellung von Antikörpern gegen Clostridium perfringens-Sporen zum Nachweis in Lebensmitteln

• Stand: Die Bedingungen zur Sporenbildung wurden optimiert, Sporen konnten in ausreichender Menge und Reinheit gewonnen werdenausreichender Menge und Reinheit gewonnen werden

a b cc dd

Mikroskopische Bilder der Sporenanreicherung verschieder C. perfringens Stämme nach der N d Z t if ti DSM 11786 b 1C 7B d 8C (A l ti ti i htb )Nycodenz-Zentrifugation. a: DSM 11786, b: 1C, c: 7B, d: 8C (Agglutination sichtbar)

MHI 995 + 2F8

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Yersinia enterocolitica

• Ziel: Herstellung von Antikörpern gegen Yersinien zum Nachweis in Lebensmitteln

MHI DSM Keim andere Bezeichnung Serovar Biovar Herkunft Isoliert aus

Ziel: Herstellung von Antikörpern gegen Yersinien zum Nachweis in Lebensmitteln• Stand: Auswahl verschiedener Yersinen-Spezies zur Antikörperherstellung

MHI Nr. Keim andere Bezeichnung Serovar Biovar Herkunft Isoliert aus

21113 11502 Yersinia enterocoliticasubsp. enterocolitica O:3 4 Deutschland

21120 9676 Yersinia enterocoliticasubsp enterocolitica

CIP 81.41; WDCM 00039 O:3 4 Schweden Mesenterial-

lymphknotensubsp. enterocolitica 00039 lymphknoten

21116 27689 Yersinia enterocoliticasubsp. enterocolitica

ATCC 23715; NCTC 10598; WDCM 00160 O:8 1 humane

Blutprobe

21118 4780 Yersinia enterocoliticasubsp enterocolitica

ATCC 9610; WDCM 00038 O:8 1

rotz-ähnliche Infektion des subsp. enterocolitica 00038 Gesichtes

21112 11067 Yersinia enterocoliticasubsp. enterocolitica

ATCC 55075; DSM 11067 O:9 Canada

21114 11503 Yersinia enterocolitica O 9 3 D t hl d21114 11503 subsp. enterocolitica O:9 3 Deutschland

21117 28012 Yersinia enterocoliticasubsp. enterocolitica O:9 2 Belgien Mensch (?)

21119 9499 Yersinia enterocoliticasubsp enterocolitica

CIP 81.42; NCTC 11174 O:9 2 Belgien humane

Stuhlprobesubsp. enterocolitica 11174 g Stuhlprobe

21115 11504 Yersinia enterocoliticasubsp. enterocolitica O:5,27 2

21121 13030 Yersinia enterocoliticasubsp. palearctica O:3,4 Deutschland humane

Stuhlprobe

MHI 995 + 2F8

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Cronobacter spp.• Ziel: Herstellung von Antikörpern gegen Cronobacter spp. zum Nachweis g p g g pp

in Lebensmitteln• Stand: Eine breite Palette an monoklonalen Antikörpern unterschiedlicher

Reaktivität wurde generiert Cronobacter sakazakii: Immunogen C.s. prot I C.s. prot II C.s. prot. III C.s. prot II*

E‐Nr MHI Serotyp mAk1A11;1C3; 1C4 mAk 1A4 mAk 2D10 mAk 2D12 mAk 2F2 mAk 2F8 mAk 3C11 mAk 4F9 mAk 2C8 mAk 2G11

975 O1 ++ neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. + + 21000 O1 ´++ neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. +  + 21001 O1 Imm1 ´++ neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. +  + 21008 O1 ´++ neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. + +21008 O1 ++ neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. +  + 21011 O1 ´++ neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. +  + 21012 O1 ´++ neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. +  + 

821 21038 O1 ++ neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. +  + 655 21028 O1 ´++ neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. +  + 789 21030 O1 ´++ neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. +  + 823 21039 O1 ´++ neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. +  + 824 21040 O1 Imm1 neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. +  + 601 21090 O1 +  neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. +  + 785 21029 O2 Imm 2 neg. + + + + + + + + + 

977 O2 Imm2 neg. + + + + + neg. neg. + + 767 21098 O2 neg. +  +  +  +  +  neg. neg. +  + 

995 O2 neg. + + + + + neg. neg. +  + 604 21027 O2 neg. + + + + + neg. neg. +  + 796 21032 O2 neg. + + + + + + + +  + 901 21041 O2 neg. + + + + + + + +  + 886 21035 O2 neg. + + + + + neg. neg. +  + 786 21037 O2 neg. + + + + + neg. neg. +  + 

MHI 21042/Es 5 O2 neg. + + + + + neg. neg. +  + 

982 O3 neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. +  + 990 O3 neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. +  + 

535 21036 O3 neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. +  + 21002 O6 neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. +  + 992 O6 neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. +  + 986 O6 neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. +  + 

MHI 995 + 2F8

987 O6 neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. +  + 981 O7 neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. + + 

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Technische Universität MünchenDepartment ChemieLehrstuhl für Analytische Chemie

Teilvorhaben 3: Schnellkonzentrierung und Multiplex‐Mikroarray‐Analyse von Mikroorganismen und ToxinenAnalyse von Mikroorganismen und Toxinen

li hi fil iUse efficient and fast concentration  methods 

d h i f f id i • Monolithic Immunofiltration• Immunomagnetic Filtration

to reduce the time factor for rapid separation and filtration enrichment of bacteria and 

microbial toxins

Rapid multiplex analysis method for pathogenic microorganisms and 

their toxins in food• MCR3 System

28

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Epoxy based monolithic columnsEpoxy based monolithic columnsAdvantages:• Immunofiltration of large volumes in short timeg• Analyte enrichment depends on the selective affinity ligands• Enhanced mass transport• Low pressure drop• Shape and size is easily adjusted

Coating with DIAPEG

Hydrolyzed monoliths with GOTPS coating

56°C, overnight

Activation with DSC

RT, 4h

Immobilization of antibody Antibody, ‐NH2

RT, overnight

29Ott, S. PhD thesis titled ‘Combination of monolithic immune filtration and antibody microarrays for rapid quantification of microorganisms in milk’, Technische Universitaet Munchen, 2012.

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Immunomagnetic filtrationImmunomagnetic filtration

Magnetic nanoparticles coated with silica

labeled target cells

Permanent0

20

u/g sa

mpl

e)

Ms

Magnetic immunofiltrationPermanent magnet

10 nm-40 0 40

-20

M (e

m

H (kOe)

Enriched target cells

Non‐labeled cells

H (kOe)

MCR3 analysis

30

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Cronobacter turicensisCronobacter turicensisMCR3Initial procedure

Steps Volume  Flow rate

Sample injection 600 µLStop‐flow with 0.5 µl/s and 30 s of interaction 

time; 12 loopsWashing step 2000 µL 100 µl/s

Biotin labeled detection antibody 600 µLStop‐flow with 2 µl/s and 5 s of interaction 

time; 12 loopsWashing step 2000 µL 20 µL/sWashing step 2000 µL 20 µL/s

HRP‐labeled streptavidin 600 µL 20 µL/s, continuous flow

Washing step 2000 µL 100 µl/s

Chemiluminescence substrateChemiluminescence substrateLuminol and peroxide

200 µL each 20 µL/s

Picture with CCD‐camera ‐ 60s

hi i h hi b ff1500 µL 500 µl/s

Washing step with washing bufferµ µ /

3 x 1000µL 68 µL/sAssay duration 36 min

31

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Cronobacter turicensisCronobacter turicensisMCR3

10000100008000

(+)

4000

6000

8000

ensi

ty (a

. u.)

4000

6000

8000

ensi

ty (a

. u.)

4000

6000

ensi

ty (a

. u.)

(+)

108

5 300

2000

Inte

Antibody flow (L/s)0.1 0.5 5

0

2000

Inte

Sample flow (L/s)5 30 60

0

2000

Inte

Sample interaction time (s)

(‐)

Antibody Interaction time (s)Antibody flow (L/s)Sample flow (L/s) Sample interaction time (s) Antibody Interaction time (s)

10000

C 8 06 ll/4000

6000

8000

sity

(a. u

.)

IC50= 8.4 106 cell/mLLOD= 4.2 105 cell/mL

m=50

2000

4000

Inte

ns

32

10-3 103 104 105 106 107 108 109

Cell concentration (g/mL)(cell/mL)

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LEVERA

Teilvorhaben 4: Erforschung und Bereitstellung von Methoden zurProbenvorbereitung und zum immunologischen/molekularbiologischen Pathogennachweis

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Arbeitsschwerpunkte

Multiplex‐PCRder relevanten

Keime

Molekularbiologie

MöglichkeitPoint‐of‐Care

EinsatzMolekularbiologie

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Point-of-Care PCR Nachweis: Campylobacter

Palm PCR Portable Cycler Nachweis:Lateral‐Flow Streifen

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Point-of-Care PCR Nachweis: Multiplex-Nachweis

CampylobacterS. aureusListeria monocytogenes

Außerdem bereits Singleplex von

Yersinia Clostridium

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Point-of-Care PCR Nachweis: Sondenhybridisierung

Staphylococcus aureusNachweis

Yersinia enterocoliticaNachweis

S. aureus Yersinia

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Arbeitsschwerpunkte

Universeller Lateral‐Flow Streifen

Proben‐aufarbeitung

A iköAntikörperKeim‐/Toxin‐Microarray

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Arbeitsschwerpunkte

Antikörper

Kontrolle lateral flowKontrolle

Parameter 1Parameter 2Parameter 3Parameter 4

Erweiterung des Analytspektrums ‐ Etablierung von UniversalteststreifenErweiterung des Analytspektrums Etablierung von Universalteststreifen 

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Probenaufarbeitung: Anreicherung von Zielanalyten

Beads Säulen

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Probenaufarbeitung: Anreicherung von Zielanalyten

Nächste Schritte/Technologieplattformen:

Antikörper kovalent an Sepharose koppeln (NHS, BrCn)

Ferromagnetische Beads

Immunaffinitätssäulen (Sepharose)

Monolithische SäulenMonolithische Säulen

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Keim-/Toxin-Microarray

S d i h F t

Keime/Toxine

Sandwich‐Format

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LEVERAd b hOutput – Anwendungsbereiche

L b itt l i h h it• Lebensmittelsicherheit• Urproduktion

• Lebensmittelindustrie

L b itt lüb h• Lebensmittelüberwachung

• Importkontrolle

• Klinische Diagnostik

• Abwehr biologischer Gefahren

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LEVERALEVERA2013 ‐20162013 ‐2016

Fö d BMBFFörderung: BMBFProjektträger: VDIProjektträger: VDI