L-102-5

Sil-Best Destain KitSil-Best Destain Kit は、銀染色後のタンパク質からの銀の除去が可能で、タンパク質の質量分析などのアプリケーションに適用が可能です。また、過剰な銀染色を改善しますので、貴重なサンプルを有効に活用できます。

特　長 ● 銀染色後のタンパク質から銀を除去することで、質量分析の前処理に適応可能● SDS-PAGE 後の過剰な銀染色を改善

適用例 ■ 質量分析（MS）への応用例

① ② ③kDa

1057550

3530

25

15

10 A

B

電気泳動像（Sil-Best Stain One 染色）

泳動ゲル：SDS-15% ポリアクリルアミドゲルサンプル：① 分子量マーカー　　　　　② Cytochrome C（分子量 12,000）　　　　　③ Albumin（分子量 67,000）　　　　　濃度 1 μg /μL のサンプルを　　　　　各レーン 10 μL アプライ銀染色　：Sil-Best Stain One

バンドBのMSスペクトルデータバンドAのMSスペクトルデータ

プロトコール概要

1. SDS-PAGE　　↓2. 銀染色（Sil-Best Stain One）　　↓3. ゲルの切り出し　　↓4. 脱色（Sil-Best Destain Kit）　　↓

5. 脱水　　↓6. 還元アルキル化　　↓7. トリプシン消化　　↓8. ペプチド抽出　　↓

9. ZipTip®（メルク株式会社メルクミリポア事業本部）精製

　　↓10. ESI-MS

データご提供：京都大学大学院 農学研究科 応用生命科学専攻　植田 充美 教授 / 森坂 裕信 研究員

実施例 1 ■ 適正な銀染色像と脱色した像の比較

条件泳動ゲル：SDS-12％ポリアクリルアミドゲルサンプル：大腸菌抽出タンパク質銀染色 ：Sil-Best Stain One

過剰な銀染色像

適正な銀染色像

脱色操作（トータル時間 55 分）

脱色した像

この例のように過剰な銀染色を改善できますので、貴重なサンプルが有効に活用できます。また、脱色後時間が経過してもほとんど像の変化はありません。

実施例 2 ■ 二次元電気泳動ゲルの脱色例

条件：一次元目：Immobiline pH3-10（GEヘルスケア）二次元目：SDS-12%ポリアクリルアミドゲル（ラージゲル）サンプル ：HL-60細胞抽出タンパク質銀染色 ：Sil-Best Stain One

脱色

過剰な銀染色像 脱色した像

注）実施例 1、2 の過剰な銀染色像は敢えて現像時間を大幅に延長し、バックグランドを上げています。通常 Sil-Best Stain One を用いると、低バックグランドの鮮明な染色が出来ます。

他社比較

脱色操作（トータル時間 87 分）

脱色操作（トータル時間 55 分）

条件泳動ゲル：SDS-12％ポリアクリルアミドゲルサンプル：大腸菌抽出タンパク質銀染色 ：Sil-Best Stain One

Sil-Best Destain Kit で脱色 A社製品で脱色

この例では脱色操作時間も短く、鮮明な脱色像が得られています。

注）過剰な銀染色像は敢えて現像時間を大幅に延長し、バックグランドを上げています。通常 Sil-Best Stain One を用いると、低バックグランドの鮮明な染色が出来ます。

プロトコール ■ プロトコール 1（銀染色後のバンドから銀を除去する場合）

<試薬調製方法>脱色液 1：キットA液 10 μL + キットB液 10 μL + 精製水 180 μL

<脱色操作>

100 μL の脱色液 1を加え、脱色されるまで（10 分程度）振とう

脱色液を除去 → 精製水 500 μLを加え、15 分振とうし、除去（× 3回）

必要に応じて処理（プロテアーゼ処理など）を行い、MSなどのアプリケーションへ

タンパク質が検出されたゲルを切り出し、エッペンドルフチューブなどに移す

②脱色

③洗浄

④アプリケーション

①ゲルの切り出し

■ プロトコール 2（過剰な染色像からの最適化：ミニゲル 10 cm × 10 cm × 1 mm）

<試薬調製方法>ゲルサイズやトレイサイズにより、試薬の調製量は変わります。ゲルが十分浸る量を調製してください。

注）少しだけバックグランドを下げたい場合は、A液、B液の量を減らしてください。

脱色液 2：キットA液 200 μL + キットB液 200 μL + 精製水 50 mL停止液 ：酢酸 10 mL + 精製水 90 mL

<脱色操作>

トレイに脱色液 2をゲルが十分浸る程度加え、振とうさせ約 5～ 60 分脱色注）過剰な脱色が行われないように、最適と思われる状態より少し手前で脱色を停止

トレイから脱色液 2を除去し、停止液に15分浸す

トレイから停止液を除去し、100 mL 以上の精製水で 5～ 10 分程度洗浄

トレイに精製水を100 mL 加え、過剰に染色されたゲルを破損しないように浸す→ 5分穏やかに振とうし、精製水を除去 → もう一度繰り返す

②脱色

③脱色停止

④洗浄

①洗浄

ご注意　試験・研究用以外には使用しないでください。

ナカライテスク株式会社〒 604-0855　京都市中京区二条通烏丸西入東玉屋町 498

■販売取扱店

1811

Web site https://www.nacalai.co.jp/

0 1 2 0 - 4 8 9 - 5 5 2価格 ・納期のご照会製品に関する技術的なご照会 https://www.nacalai.co.jp/ss/Contact/

TEL:075-211-2703

試　 薬 は こ こ に

キット内容 試薬名 容量 数量A 液 5 mL 1B 液 5 mL 1

使用回数 ① 銀染色後のバンドから銀を除去する場合 ： 500 ～ 1,000 サンプル分② 過剰な染色像を最適化する場合 ： ミニゲル（10 cm × 10 cm × 1 mm）約 25 回分

価格表

製品名 規格 貯法 製品番号 容量 価格Sil-Best Destain Kit SP 冷蔵 07983-30 1 kit 7,500

関連製品

アクリルアミド / ビス混合液使用方法概略：使用するゲルのアクリルアミド％濃度により、関連製品を混合し、ゲルを作成参考として実施例で使用した 12％ゲルの作成割合を示します。他の濃度のゲル、濃縮ゲル作成の場合、40％アクリルアミド / ビス混合液を使用の場合は、製品添付文書を参考にしてください。

12% ゲル作製

液名 製品番号作製ゲル量

（10 mL）（20 mL）（30 mL）精製水 － 3.4 6.8 10.230（w/v）% アクリルアミド / ビス混合液 06144 or 06141 4.0 8.0 12.0 分離ゲル調製用緩衝液 30651 2.5 5.0 7.5 10（w/v）% ペルオキソ二硫酸アンモニウム溶液 02634 0.1 0.2 0.3N,N,N',N'- テトラメチルエチレンジアミン 33401 0.006 0.012 0.018

関連製品価格表

製品名 毒劇物 規格 貯法 製品番号 容量 価格Sil-Best Stain One － SP 冷蔵 06865-81 1 set 11,000Sil-Best Stain-Neo for Protein and Nucleic Acid/PAGE － SP 冷蔵 05773-11 1 set 14,00030(w/v)%-Acrylamide/Bis Mixed Solution(37.5:1) 劇 SP 冷蔵 06144-05 500 mL 10,50030(w/v)%-Acrylamide/Bis Mixed Solution(29:1) 劇 SP 冷蔵 06141-35 500 mL 10,50040(w/v)%-Acrylamide/Bis Mixed Solution(37.5:1) 劇 SP 冷蔵 06121-95 500 mL 13,50040(w/v)%-Acrylamide/Bis Mixed Solution(29:1) 劇 SP 冷蔵 06119-45 500 mL 13,500Separating Gel Buffer Solution(4x) for SDS-PAGE － SP 室温 30651-05 500 mL 8,00010(w/v)%-Ammonium Peroxodisulfate Solution － SP 冷凍 02634-34 10 mL 3,800

N, N, N', N'-Tetramethylethylenediamine － SP 室温33401-72 25 g 1,90033401-14 100 g 4,70033401-85 500 g 15,600

Pre-stained Protein Markers(Broad Range) for SDS-PAGE － SP 冷凍 02525-35 500 μL 16,500Pre-stained Protein Markers(High Range) for SDS-PAGE － SP 冷凍 26039-75 500 μL 16,500

Pre-stained Protein Markers(Low Range) for SDS-PAGE － SP 冷凍28944-74 5 X 100 μL 17,00028941-75 500 μL 16,500

※記載の内容は、'18 年 11 月現在の情報に基づいております。※研究者の皆様のご所属などは、データご提供時の情報に基づいております。※価格に消費税は含まれておりません。