sintesis de fosfolipdosmedicina.udea.edu.co/emd/metabolismo/lipidos/lip-labcol-2010-2.pdfe...
TRANSCRIPT
Laboratorio
Natalia Regina Mesa Herrera
Bact. MSc. Dr.rer.nat
Endocrinología y Metabolismo
Facultad de Medicina
U de A
1. Determinar el colesterol total y el colesterol
HDL con:
- El metodo de Liebermann Buchard para
colesterol total
- Precipitacion diferencial con polianiones
para colesterol HDL
Objetivos
2. Correlacionar con un resumen del dueño de
la muestra:
Incluir: Edad, sexo,profesion, regimen de vida, presion arterial,
e informacion adicional del laboratorio clinico.
Objetivos
•Mayor parte de la molécula hidrófoba
•Molécula más rígida que los lípidos
complejos
•Estabilizador de membrana
•Importante sobre todo en homeotermos
•Síntesis de otros esteroides
COLESTEROL
Hay problemas con el metabolismo en humanos
ya que se absorbe pero no se elimina fácilmente
Los transportadores de colesterol pueden
depositarlo en las arterias y disminuir su
elasticidad y grosor Aterosclerosis. Hasta un
50% de las muertes en países desarrollados
están relacionadas con este problema.
COLESTEROL
1. Reactivos para colesterol:
- Ácido sulfúrico concentrado
- Ácido p-tolueno sulfónico
- Ácido acético glacial
- Anhidrido acético
Materiales
2. Solución patrón de colesterol
3. Solución de ácido fosfotungstico con Mg2
4. Fotocolorímetro (560 µ)
5. Centrífugas clínicas
6. Baño María 37 ºC
7. Tubos
Materiales
1. Muestra 1:
Pool de suero o plasma
2. Muestra 2:
sobrenadante del suero
precipitado de todas las lipoprotéinas menos
las HDL.
Cuantificación de COL-HDL
1. Quilomicrones y lipoprotienas:
ácido fosfotungstico con Mg2
2. Centrifugación
3. Reacción de color:
Liebermann Burchard
Fundamento 1
1. Mezclar ácido fosfotungstico con Mg2 (0,12ml)
2. Mezclar
3. Dejar reposar 10 min a TºC
4. Centrifugar 30 min 5000rpm
5. Separar el sobrenadante
Procedimiento
1. Ácido p-tolueno sulfónico
2. Ácido acético glacial
Color verde parduzco intenso
COLESTEROL
Fundamento 2
Preparación de tubos
Tubos Blanco Estandar COL. en HDL COL total
Agua destilada 0.1 ml 0 0 0
Est COL 200 mg/dl
0 0.1 ml 0 0
Sobrenadante 0 0 0.1 ml 0
Suero Sanguineo
0 0 0.1 ml
Reactivo de color
5ml 5ml 5ml 5ml
1. Mezclar
2. Dejar reposar 10 min a 37ºC
3. Mezclar
4. Calibrar fotocolorímetro con sln blanco (560µ)
5. Aplicación de la ley de Lambert Beer
6. Calcular la concentración de HDL y COL total
Procedimiento
Absorbancia Colesterol x 200 mg/dl
Absorbancia estandar
Formula
Índice Arterogénico:
Colesterol total
Colesterol en HDKL