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Sistema LC/MS Agilent 6490 Triplo Quadrupolo com tecnologia iFunnelDesempenho quantitativo ultra sensível
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O novo sistema LC/MS 6490 triplo quadrupolo com tecnologia iFunnel – desempenho quantitativo sem comparação
O sistema iFunnel
Figura 1. Componentes da tecnologia iFunnel da Agilent: Agilent Jet Stream, capilar de amostragem de seis furos e funil de íons de estágio duplo
Desempenho quantitativo sem comparações para as análises mais exigentesSistema LC/MS Agilent 6490 Triplo Quadrupolo incorpora a tecnologia iFunnel, dando novos níveis de sensibilidade às analises quantitativas mais exigentes em aplicações farma-cêuticas, clínicas, ambientais e de segurança alimentar. O poder quantitativo do 6490 é aprimorado por uma variação dinâmica linear estendida.
O 6490 Triplo Quadrupolo permite:
• Aumento de 10 X na sensibilidade
• Até seis ordens variação dinâmica linear
• Alto desempenho e sólida operação
• Sensibilidade de zeptomol para as aplicações mais exigentes
O 6490 triplo quadrupolo tem um design compacto de ban-cada, alcançado através do uso de cela de colisão curva. A cela recentemente projetada também ajuda na identificação de ruído de fundo, melhorando o valor geral sinal-ruído do sistema. A eletrônica de alta frequência permite taxas de varredura mais velozes para janelas mais estreitas de isola-mento de massas.
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A tecnologia iFunnel com vaso capilar de seis furos recolhe seis vezes mais gás carregado de íons que um vaso capilar de furo individual, e o tempo de residência mais curto dos íons no vaso capilar de seis furos permite ganhos ainda maiores na intensidade do sinal. Ao comparar o 6490 Triplo Quadru-polo com o 6460 Triplo Quadrupolo (Figura 2), o 6490 Triplo Quadrupolo com tecnologia iFunnel demonstra um ganho de sete vezes na intensidade do sinal para massas de até 900 m/z e um ganho de até cinco vezes para massas maiores.
Os aumentos na intensidade do sinal são ainda mais pronun-ciados para íons negativos como se mostra na Figura 3. O ganho médio na intensidade do sinal foi de 10 vezes ao longo de toda a variação de massas do 6490 Triplo Quadrupolo.
Tecnologia avançada iFunnel
O LC/MS 6490 Triplo Quadrupolo alcança sua sen-sibilidade usando a tecnologia iFunnel, uma com-binação de três inovações fundamentais:
• Tecnologia Jet Stream da Agilent: um pulverizador micro usinado rodeia as gotículas do ESI com um recobrimento de gás super aquecido, para dessolvatar e concentrar íons perto da entrada MS, e assim obter amostras mais eficazes
• Capilar de amostragem de seis furos: 6 furos indepen-dentes, e paralelos, permitem que uma fração muito maior de íons formados na pena da pulverização de ESI ingresse na óptica de íons do espectrômetro de massa
• Exclusivo funil de íons de estágio duplo: remoção eficiente de grandes volumes de gás e transferência de íons à óptica Q1.
Um diagrama desta tecnologia se mostra na Figura 1.
200 400 600 800 1000 1200 1400
1222
922 622
322
118
m/z
5x
5x
7x
7x
7x
6490
6460
200 400 600 800 1000 1200 1400
m/z
10x
14x
11x
10x
7x
113
302 1034
6490
6460
Figura 2. Intensidades de sinal para padrões de calibragem em modo ESI positivo do 6490 (acima, verde) e 6460 (abaixo, preto).
Figura 3. Intensidades de íons para íons de calibragem negativo do 6490 (acima, verde) e o 6460 (preto, abaixo).
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Sensibilidade de zeptomol e variação dinâmica linear sem comparaçõesO 6490 Triplo Quadrupolo com tecnologia iFunnel apresenta uma sensibilidade pioneira. O primeiro exemplo de sensibili-dade de subatomol se mostra na Figura 4 para uma injeção de 200 zepto-4,5 mols de verapamil em coluna.
O 6490 Triplo Quadrupolo apresenta novos níveis de sensibilidade e também uma variação dinâmica linear sem comparações. É o primeiro sistema LC/MS triplo quadrupolo a oferecer seis ordens de variação dinâmica linear como se mostra na Figura 5. O excelente fator de correlação (valor R2 = 0,997) descreve a ampla variação de resposta linear.
Acquisition Time (min) 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9
x101
4.2
4.3
4.4
4.5
Resp
onse
Concentration (ng/mL) 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
x106
0
1
2
3
4
5
6
7
Resp
onse
Linear fitR2 = 0.9976
Figura 4. Cromatograma de íons de verapamil (transição MRM 455.3 → 164.9) para 100 atogramas (200 zeptomoles) injetados em coluna usando um 6490 Triplo Quadrupolo SRM (azul). O sinal vermelho mostra uma injeção em branco.
Figura 5. Resposta linear de verapamil a partir de 100 atogramas até 100 picogramas injetadas em-coluna.
Resp
osta
Resp
osta
Tempo de aquisição (minutos)
Ajuste linearR2 = 0.9976
Concentração (ng/ml)
4,5
4,4
4,20,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7
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Tipicamente, são usados procedimentos de extração de fase sólida (SPE), e de extração líquido-líquido, para concentrar o elemento analisado e para eliminar os efeitos de matriz. A extrema sensibilidade do 6490 elimina a necessidade do SPE e LLE, permitindo a análise direta do plasma pulverizado após uma diluição de 4 vezes em água. O método de diluir-disparar utilizando o instrumento 6490 possui uma sensibilidade mais do que adequada para o nível de calibragem mais baixo a 5 pg/ml, como se mostra na Figura 6. Isto representa somente 2,5 fentogramas injetados em-coluna, com um limite inferior de detecção de só 1 fentograma.
Melhoras significativas de desempenho para a determinação de drogas em plasmaO rendimento do 6490 Triplo Quadrupolo para a determinação de drogas em plasma mostra melhoras significativas do desempenho. A Figura 6 mostra fluticasona, um esteróide sintético da família de drogas dos glicocorticóides, usados para o tratamento de condições alérgicas.
Quando usada como inalador nasal ou spray, a medicação vai diretamente para o revestimento epitelial do nariz, e muito pouco é absorvido no resto do organismo. Devido a seus níveis sistêmicos baixos, um ensaio LC/MS de alta sensi-bilidade é necessário para determinar as concentrações de fluticasona no plasma humano.
Acquisition Time [min] 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 2 2.2 2.4
4.2
4.3
4.4
4.5
4.6
4.7
4.8
4.9
5
5.1
5.2
5.3
x101
Abun
danc
e
Figura 6. Cromatograma de íons de propionato de fluticasona (transição MRM 501.2 → 293.1) de 2.5 fentogra-mas injetados em-coluna usando o instrumento 6490.
Abun
dânc
ia
Tempo de aquisição [min]
5,3
5,2
5,1
4,9
4,8
4,7
4,6
4,5
4,4
4,3
4,2
0,8 1,2 1,4 1,6 1,8 2,2 2,4
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Extraordinária solidez de ensaios de amostras em matrizes biológicas complexas A sensibilidade é importante – a robustez é crítica. A Figura 7 mostra a robustez do 6490 para 3000 injeções de verapamil (20 fentogramas) em plasma de proteína precipitada para mais se seis dias de operação contínua. Os dados mostram uma resposta pico coerente com um desvio padrão relativo para a área pico de menos de 6%. Normalmente, a estabi-lidade da área pico em plasma se mostra para quantidades de picogramas injetadas em-coluna, porém o exemplo é em níveis que são cem vezes menores ou mais.
0
300
600
900
1200
1500
500 1,000 1,500 2,000 2,500 3,000
# Injeções
Resp
osta
Área RSD < 5.9%
Figura 7. A resposta pico do 6490 Triplo Quadrupolo para 3000 injeções consecutivas de verapamil em plasma (20 fentogramas injetados em-coluna).
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7
Tempo de aquisição (minutos)12.5 13 13.5 14 14.5 15 15.5
28 amol em-coluna
Quantificador 476.2 → 734.3
Abun
dânc
ia
Quantificação de peptídeos superior com a tecnologia iFunnelA quantificação de peptídeos também se beneficia do impacto da tecnologia iFunnel. Por exemplo, um peptídeo de nove resíduos (IEDIVTSEK) mostra uma linearidade excelente na Figura 8 para o padrão de nível mais baixo. O volume injetado numa coluna i.d. de 2 mm padrão na Figura 8 foi somente 28 atomoles. A forte intensidade do sinal e baixo ruído permitiu um limite de detecção notável de aproximadamente 1 atomol numa coluna padrão de 2 mm. A resposta foi linear durante a variação da calibragem no estudo de 28 até 2,830 atomoles e o coeficiente de correlação de 0,997 confirmou um bom ajuste linear.
Figura 8. Cromatograma de íons extraído usando a transição de 476.2 para 734.3 m/z para 28 atomoles de peptídeo injetados em-coluna com um sistema convencional LC/MS a 400 µl/min.
Colunas padrão oferecem uma precisão maior de método e rendimento total comparado com os sistemas nanoLC. Os métodos de LC convencionais são preferíveis quando milhares de amostras de plasma devem ser analisadas em estudos rigorosos de validação do biomarcador. Para obter resultados ultra sensíveis a partir de amostras limitadas, o HPLC-Chip/MS com 6490 Triplo Quadrupolo oferece uma alternativa forte ao LC/MS de nanofluxo para a quantificação de peptídeos.
O novo espectrômetro de massas 6490 Triplo Quadrupolo com tecnologia iFunnel redefine a sensibilidade, solidez e variação dinâmica para as aplicações quantitativas mais exigentes. A eficiência aprimorada de amostragem de íons é alcançada com a combinação do Agilent Jet Stream, vaso capilar de seis furos e o funil de íons de estágio duplo.
12,5 13,5 14,5 15,5
476,2 734,3
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Para uso de investigação somente. As informações, descrições e especificações nesta publicação estão sujeitas a mudanças sem aviso prévio.
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© Agilent Technologies, Inc. 2010Publicado nos EUA, em 30.08.105990-6301PTBR
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